全 文 :areaofinfarction,thecontentofNO,theactivityofNOSandthepositivecelnumberofNFκΒ.Conclusion:Theiridoidglycosideof
CoficinalismayhavetherapeuticalefectoncerebralinfarctionthroughregulatingthecontentofNOandNFκΒ.
[Keywords] Cornusoficinalis;iridoidglycoside;photochemistry;cerebralinfarction;nitricoxide;nuclearfactorkappaB
[责任编辑 方文贤]
[收稿日期] 20050110
[基金项目] 安徽教育厅自然科学基金项目 (2005kj160)
[通讯作者] 宁康健,Tel:(0550)6733113,Fax:(0550)6733165,
Email:nkj210@sohu.com
黄芪对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响
宁康健,阮祥春,吕锦芳,程郁昕
(安徽科技学院,安徽 凤阳 233100)
[摘要] 目的:研究黄芪水煎剂(HQD)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响。方法:取18~22g昆明小鼠100
只,随机分10组,每组10只。分别为对照组,灌服不同剂量黄芪水煎剂组,同剂量不同给药途径组,黄芪与地塞米
松并用组。各处理组每天给药1次,连续6d。结果:在不同剂量灌服给药组中,高、中、低剂量试验组吞噬百分率和
吞噬指数均高于对照组(P<001),其中以高剂量组效果最好;在不同给药途径组中,吞噬百分率以腹腔注射的效
果优于皮下注射和灌服(P<001),但各组间的吞噬指数差异不明显(P>005);在黄芪与地塞米松并用组中,黄芪
能明显对抗地塞米松的免疫抑制作用(P<001)。结论:黄芪不同剂量、不同给药途径给药对小鼠腹腔巨噬细胞吞
噬能力均有不同程度的增强作用,并能对抗地塞米松对其抑制作用。
[关键词] 黄芪;小鼠;腹腔巨噬细胞;吞噬能力
[中图分类号]R2855 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2005)21167003
黄芪为豆科多年生草本植物蒙古黄芪或膜荚黄
芪的根。中医认为其性甘,微温,归脾、肺经,具有补
气升阳、益卫固表、托毒生肌、利水退肿之功效[1]。
临床上主要治疗脾虚证、汗证、脾肺气虚证、气血两
虚证、疮疡、水肿等。近年来的研究发现黄芪含有多
种生物活性成分,如多糖、蛋白、生物碱、氨基酸、黄
酮类、苷类等[2],一些活性成分有促进抗体生成,诱
导干扰素产生和促进免疫反应的作用,其中以黄芪
多糖(APS)的研究为多。本试验利用生黄芪制成黄
芪水煎剂,通过不同剂量、同剂量不同给药途径及黄
芪与地塞米松并用对比试验就黄芪对免疫效果的影
响作进一步的研究。
1 材料
11 动物 昆明种健康小鼠,体重 18~22g,雌雄
各半,由河南医科大学试验动物中心提供,合格证号
为豫医试动准字第 410117号。
12 仪器 756型分光光度计(上海第三分析仪器
厂);TDLSO-2B台式离心机(上海安亭科学仪器
厂);生物显微镜(SL-BL-S-2);显微摄影(日本
奥林巴斯显微摄影,CH30-313N附自动摄影)等。
13 药物与试剂 生黄芪购于凤阳药材公司,经安
徽科技学院中药实验室周宗运副教授鉴定为蒙古黄
芪 Astragalusmembranaceus(Fish)Begvarmongholicus
(Beg)Hsiao的干燥根片。地塞米松磷酸钠注射液
(天津药业,批号020042),瑞氏染液由基础医学实验
室提供。
黄芪水煎剂制备:称取黄芪 400g,清洗后加入
适量水浸泡30min,第1次煎90min,第2次60min,
第3次30min,合并3次滤液,用20%的氢氧化钠溶
液调节pH为70,将滤液浓缩后离心10min(4000r
·min-1),取上清液定量至含生药1g·mL-1的黄芪水
煎剂,装瓶消毒备用[3]。
黄芪多糖的测定[4]:取在 100℃干燥至恒重的
无水葡萄糖 01g,精密称定,置 100mL容量瓶中,
加水溶解并稀释至刻度,摇匀即得对照品。精密量
取本品 50mL(如有沉淀,需先加热溶解,放冷)置
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中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol30,Issue 21
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250mL容量瓶中加入30%硫酸锌液5mL在水中加
热5min后,在振摇下立即加亚铁氰化钾40%试液5
mL,冷却后加水至刻度,摇匀、滤过。弃去初液,取
续滤液25mL,置500mL容量瓶中加水至刻度,摇匀
即得供试品。精密量取对照品与供试品溶液各 2
mL分别置于 10mL容量瓶中各加入 2%苯酚溶液
05mL,98%浓硫酸5mL,摇匀,置水中加热15min,
放冷。用水稀释至刻度,摇匀。用分光光度计法,在
490nm波长处分别测定吸光度。计算得出所制的
黄芪水煎剂中黄芪多糖的含量为216%。
鸡红细胞悬液制备:抽取鸡血于烧杯中,立即用
毛刷搅拌出纤维蛋白,慢慢倒入离心管中,加入生理
盐水摇匀,以1500r·min-1离心10min,反复洗涤3
次,按红细胞压积用无菌生理盐水配制成 2%鸡红
细胞生理盐水悬液,4℃冰箱保存备用[5]。
鲜牛肉汤的制备:称取新鲜牛肉 100g,加水适
量煮沸,浓缩成100mL,装瓶备用。
标本制备[6]:抹片、固定、瑞氏染色。
2 方法
取小鼠100只随机分成10组,每组10只,雌雄
各半。
21 不同剂量的黄芪水煎剂对小鼠腹腔巨噬细胞
吞噬能力的影响 试验分为 4组,黄芪组小鼠分别
灌服25,20,15g·kg-1·d-1黄芪水煎剂,对照组灌服
等量生理盐水,连续6d。第7天分别腹腔注射鲜牛
肉汤1mL/只,24h后再腹腔注射2%鸡红细胞生理
盐水悬液05mL/只,20min后处死小鼠,取腹腔炎
性渗出液抹片,瑞氏染色,镜检。计算吞噬百分率和
吞噬指数[7]。
吞噬百分率=具有吞噬活性的吞噬细胞/50个吞噬细胞
吞噬指数=具有吞噬活性的吞噬细胞吞噬鸡红细胞数/50
个吞噬细胞中具有吞噬活性的吞噬细胞
22 不同给药途径对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力
的影响 试验分为3组,分别腹腔注射、皮下注射、
灌服20g·kg-1·d-1黄芪水煎剂,连续6d,处理方法
同21。
23 黄芪与地塞米松并用对小鼠腹腔巨噬细胞吞
噬能力的影响 试验分为 3组,分别给小鼠灌服黄
芪(20g·kg-1·d-1)+地塞米松(5mg·kg-1·d-1),生
理盐水(等量),生理盐水 +地塞米松(5mg·kg-1·
d-1),连续6d,处理方法同21。
24 数据处理 数据用珋x±s表示,F检验,检验
显著或极显著,再采用多重比较LSR法。
3 结果
31 不同剂量黄芪水煎剂对小鼠腹腔巨噬细胞吞
噬能力的影响 小鼠灌服不同剂量的黄芪水煎剂
后,吞噬百分率试验组均较对照组有明显的提高
(P<001),其中以高剂量组的吞噬百分率最高,优
于中、低剂量组(P<001);吞噬指数试验组与对照
组比较有明显的提高(P<001),但试验组组间比
较无明显差异(P>005)(表1)。
表1 灌服不同剂量黄芪水煎剂对小鼠腹腔巨噬
细胞吞噬能力的影响(珋x±s,n=10)
组别
剂量
/g·kg-1·d-1
吞噬百分率 吞噬指数
黄芪组 25 58.33±3.191) 2.98±0.141)
20 48.03±2.741,2) 2.90±0.111)
15 46.62±2.9511,2) 2.93±0.191)
对照组 - 31.67±2.822) 0.65±0.17
注:与对照组比1)P<0.01,与高剂量组比2)P<0.01
32 不同给药途径对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力
的影响 黄芪水煎剂腹腔注射与皮下注射和灌服比
较,小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率明显提高,差异
极显著(P<001),而灌服和皮下注射组间比较差
异不显著(P>005);吞噬指数各组间比较差异不
显著(P>005)(表2)。
表2 黄芪不同给药途径对小鼠腹腔巨嗜
细胞吞噬能力的影响(珋x±s,n=10)
组别 吞噬百分率 吞噬指数
腹腔注射组 59.36±2.18 3.02±0.13
皮下注射组 50.64±2.371) 2.96±0.14
灌服组 48.03±2.741) 2.90±0.11
注:与腹腔注射组比1)P<001
33 黄芪与地塞米松并用对小鼠腹腔巨噬细胞吞
噬能力的影响 小鼠灌服地塞米松后吞噬百分率明
显降低,与生理盐水组比较差异极显著(P<001)。
说明地塞米松能明显抑制小鼠免疫能力。但黄芪与
地塞米松并用后吞噬百分率明显提高,说明黄芪对
地塞米松的免疫抑制有明显的对抗作用;黄芪与地
塞米松并用后吞噬指数明显高于生理盐水+地塞米
松组和生理盐水组(P<001)(表3)。
4 讨论
试验结果表明灌服 25g·kg-1·d-1剂量效果优
于灌服20g·kg-1·d-1与15g·kg-1·d-1;同剂量的黄
芪水煎剂(20g·kg-1·d-1)不同给药途径以腹腔注
射给药效果优于皮下注射和灌服;灌服地塞米松能
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表3 黄芪与地塞米松并用对小鼠腹腔巨噬
细胞吞噬能力的影响(珋x±s,n=10)
组别 吞噬百分率 吞噬指数
黄芪+地塞米松 49.31±2.141,2) 2.94±0.261,2)
生理盐水 31.67±2.82 0.65±0.17
生理盐水+地塞米松 24.15±1.921) 0.45±0.18
注:与生理盐水组比1)P<001;与生理盐水 +地塞米松组比
2)P<001
降低小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率,说明地塞米松
能明显抑制小鼠的免疫能力,但黄芪与地塞米松并
用后吞噬百分率、吞噬指数明显增加,说明黄芪对地
塞米松的免疫抑制作用有明显的对抗作用。
黄芪提高机体免疫机能与黄芪提高细胞免疫功
能有关[8,9],黄芪多糖(APS)能显著促进 B细胞增值
分化和浆细胞抗体合成,激活巨噬细胞的吞噬活性,
增强机体的非特异性免疫功能,可能是小鼠腹腔内
巨噬细胞吞噬功能增强的原因。
在不同给药途径中,以腹腔注射给药效果为最
佳,但在实际应用中,以口服较为方便,更适用于临
床应用。
[参考文献]
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技术出版社,1992.254.
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1995.107.
[6] 黄泰康.常用中药成分与药理手册.北京:中国医药科技出版
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[7] 甘肃农业大学.兽医微生物学实验指导.北京:中国农业出版
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[8] DLBurg,TLFeidbush.LateEventsinBcelactivation,expression
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讯,1988,5(3):64.
EfectsofHuangqionphagocyticactivityofperitonealmacrophageofmice
NINGKangjian,RUANXiangchun,LUJinfang,CHENGYuxin
(AnhuiScienceTechnologyColege,Fengyang233100,China)
[Abstract] Objective:TostudytheefectsofHuangqidecoction(HQD)onphagocyticactivityofperitonealmacrophageofmice.
Method:OnehundredKunmingmice,whoseweightvariedfrom18gto22g,wereselectedanddividedinto10groupsrandomlyincluding
contrastgroup,groupsconductedatdiferentdosesofHQDbyig,groupsconductedinvariouswaysoftakingmedicine,andgroupsconducted
withcomparativetreatcombiningHuangqiandDexamethasone.Miceineverygroupweretakenmedicineonetimedailyfor6days.Result:A
mongthegroupstreatedatdiferentdosesofHQD,phagocyticrateandphagocyticindexofmice,whichweretakenHQDbyigathigh,mid
dle,andlowdoses,weresignificantlyhigher(P<001)thanthatofmiceincontrastgroup,atthesametimetheefectingroupwithhigh
dosewasthebest.Amongthegroupstreatedinvariouswaysoftakingmedicine,phagocyticrateoftheipgroupwassignificantlybeter(P<
001)thanthatofthescgroupandthatoftheiggrouprespectively,buttherewasnotsignificantdiference(P>005)ofphagocyticindex
amongthem.AmongthegroupscombiningHuangqiandDexamethasone,HuangqicouldantagonizetheimmunosuppressiveefectofDexam
ethasoneobviously(P<001).Conclusion:HQDatdiferentdosesandwithvariouswaysoftakingmedicinecouldimprovephagocyticactiv
ityofperitonealmacrophageofmiceatdiferentdegree,andcouldantagonizetheimmunosuppressiveefectofDexamethasone.
[Keywords] Huangqi;mice;peritonealmacrophage;phagocyticactivity
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