全 文 ：降脂宁水提取剂对高脂血症大鼠
肝细胞基因表达的影响
关建红t o梁爱华u o冯前进t o胡姗姗t
kt q山西中医学院 o山西 太原 s qvssuw ~u q山西大学 o山西 太原 svsssyl
≈摘要  目的 }研究降脂宁水煎剂对高脂血症大鼠肝脏 ⁄• 基因表达的影响 ∀方法 }雄性 • ¬¶·¤µ大鼠 o高脂
饲料喂养造成高脂血症模型 o降脂宁水煎剂kuss h lt qw ª#®ªp t灌胃给药 o每天 t次 o连续 tx §∀取其肝组织采用斑
点探针杂交法检测 ⁄• °• ‘„ o以 ⁄• °• ‘„与 Β2¤¦·¬± °• ‘„比值表示 ⁄• 基因表达水平 ∀结果 }各组动
物肝 ⁄• 基因表达水平依次为正常组ktss ? t|l h o高脂血症组kv| ? twl h o两组比较有明显差异k Π s qsxl o降
脂宁组kts{ ? {l h o与高脂血症组比较 o差异非常显著k Π s qstl ∀结论 }高脂饲喂大鼠可显著抑制其肝脏 ⁄•
基因的表达 o而降脂宁水煎剂可显著上调高脂血症大鼠肝脏的 ⁄• 基因表达水平 ∀这一结果提示降脂宁对于预
防和治疗心脑血管疾病可能有重要的研究和开发价值 ∀
≈关键词  降脂宁 ~肝细胞 ~低密度脂蛋白受体基因
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussulsw2svy|2sv
我们以往研究显示 o降脂宁水煎剂对鹌鹑 !小鼠
和大鼠均表现显著调脂作用≈t  ∀肝细胞 ⁄2• 在
血脂代谢 o特别是胆固醇代谢过程中发挥重要作用 o
而 ⁄• 的数量和活性在分子水平受基因表达的调
控≈u  ∀高脂膳食k高脂负荷l可下行抑制肝脏 ⁄•
基因转录 o使其表达下降 o⁄2• 数量减少≈v  ∀为
了进一步了解降脂宁的调脂作用 o我们观察了其水
煎剂对高脂血症大鼠肝脏 ⁄• 基因表达的影响 ∀
1 材料和方法
1 q1 动物分组及处理 • ¬¶·¤µ大鼠 o雄性 o体重
uss ∗ vss ªk购自山西医科大学实验动物中心l ∀实
验时将动物随机分为正常 !高脂血症模型 !高脂 n降
脂宁和高脂 n相关药物组共 w组 ∀各组动物处理方
法同文献≈v  o实验终了 o每组随机抽取 x只大鼠剖
取肝脏右叶组织 o液氮冻存供 ⁄• °• ‘„ 测定
用 ∀
1 q2 试剂和材料 ×µ¬½²¯ • ‘„ 提取试剂盒购自
ŠŒ…≤ ’公司 o凝胶 ⁄‘„回收试剂盒 !°Š∞2× 质粒
载体 !°≤ • 产物纯化试剂盒购自 °µ²° ª¨¤公司 !°≤ •
地高辛探针合成试剂盒k°≤ • ⁄ŒŠ ³µ²¥¨ ≥¼±·«¨¶¬¶
Ž¬·l !地高辛核酸检测试剂盒 ! ≤≥°⁄ • 购自
≈收稿日期  usst2sx2uw
≈基金项目  山西省科委攻关资助项目ksttsvzl
≈通讯作者  电话 }ksvxtluuzutyv
…²¨ «µ¬±ª¨µ¤±±«¨¬°公司 !„  ∂ 逆转录酶 !⁄‘¤¶¨¯
k• ‘¤¶¨ ƒµ¨ l¨ o§‘װפ´ ⁄‘„聚合酶购自宝生物大
连有限公司 o°≤ • 引物由宝生物大连有限公司合成 ∀
尼龙膜 ‘¼·µ¤±2°¯ ∏¶为 ≥¦«¯ ¬¨¦«¨µ i ≥¦«∏¨¯¯ 公司产
品 ∀ ∞q¦²¯¬⁄‹ x¤由本实验室保存 ∀
1 q3 探针制备 为制备 ⁄受体基因与 Β2¤¦·¬±基
因探针 o本研究根据已报道大鼠 ⁄受体基因与
¤¦·¬±基因序列设计引物 ∀提取正常大鼠总 • ‘„ o甲
醛凝胶变性电泳表示 • ‘„ 完整性好 ∀反转录出
¦⁄‘„第一链 o利用引物 t和引物 w对 ⁄受体基
因进行 °≤ • 扩增 o虽然得到几条扩增带 o但不能确
定那一条为正确产物 o因此在两个引物的内侧又设
计了一对引物k引物 u和引物 vl o以第 t轮 °≤ • 产
物为模板 o用引物 u和引物 v进行所谓巢居式 °≤ •
扩增 ∀图 t为 °≤ • 扩增的琼脂糖胶电泳分析 o在泳
道 t的 wzz ¥³处有一明显扩增产物 o且大小与预计
的吻合 ∀用低熔点琼脂糖凝胶电泳回收该 wzz ¥³
片段 o纯化后连接于克隆载体 ³Š∞2× 中 o得到重
组质粒 ³Š∞‘2×2⁄• o该质粒用 „³¤Œ和 ≥¤¦¬双酶
切分析 o表明 wzz ¥³片段得以克隆 ∀图 u 泳道 t ∗
v o第 t条泳带为 ³Š∞2× 载体 o第 u条泳带为切出
的片段 o由于 „³¤Œ和 ≥¤¦Œ位于载体的多克隆位点
的两端 o二者相距约 {s ¥³o因此切出的片段在原来
扩增的片段上又多了 {s 碱基 ∀
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∂ ²¯ quz o‘²qw
„³µqoussu
以大鼠 ¦⁄‘„ 第 t 链为模板 o利用 ¤¦·¬±t 与
¤¦·¬±u对 Β2¤¦·¬±基因进行扩增 ∀琼脂糖凝胶电泳分
析表明 vw{ ¥³处有一特异扩增产物k图 t o泳道 vl o
且大小与预计的吻合 o将该产物纯化后克隆于 ³
Š∞2× 载体中 o得到重组质粒 ³ Š∞2×2„¦·¬±∀质
粒酶切分析表明 vw{ ¥³片段克隆成功k图 v o泳道 u
∗ wl ∀重组质粒 ³ Š∞2×2⁄• 和 ³ Š∞2×2„¦·¬±
序列分析表明这两个质粒中的外源 ⁄‘„ 片段确实
是 ⁄受体基因和 Β2¤¦·¬±基因 ¦⁄‘„ 片段 o其序
列与 ¨¨等报道≈w 的序列完全吻合 ∀
图 t ⁄受体基因与 Β2¤¦·¬±基因
片段的扩增k  }tss ¥³⁄‘„分子量标记l
图 u 重组质粒 ³ Š∞2×2⁄• 酶切分析
k  }tss ¥³⁄‘„分子量标记l
图 v 重组质粒 ³ Š∞2×2„¦·¬±k  }tss ¥³⁄‘„分子量标记l
以上述克隆 ³ Š∞2×2⁄• 和 ³ Š∞2×2
„¦·¬±为模板 o利用 …²¨ «µ¬±ª¨µ ¤±±«¨¬° 公司的
°≤ • 地高辛探针合成试剂盒对 ⁄• 和 „¦·¬±基因
片段进行标记 o琼脂糖凝胶电泳检测标记效果 ∀由
于在扩增过程中掺入分子量较大的地高辛 o因此扩
增产物比普通 °≤ • 扩增时要大一些 o如克隆的 ⁄
受体基因片段为 wzz ¥³o在标记扩增时该片段的位
置与标准 ⁄‘„ 分子量相比在大约 yxs ¥³处k结果
未显示l ∀
1 q4 ⁄• °• ‘„水平测定 参照文献≈w 进行 ∀
1 q5 杂交结果分析 ÷ 光片上的杂交信号强度用
˜ ·¯µ¤2∂¬²¯ ·¨公司的 Š⁄≥2{ sss 凝胶成像分析系统
进行分析 ∀测量阳性呈色强度和面积 o两者乘积即
为表达的相对强度 ∀分别记录各样品 ⁄• 与 Β2
¤¦·¬±表达的相对强度 o并计算 ⁄• 与 Β2¤¦·¬±表达
量的比值 ∀实验数据用 ξ ? σ表示 o样本均数差异
显著性通过 ¬±¬·¤¥¯¨软件用 τ检验测试 ∀
2 结果
提取各样品的总 • ‘„ 并通过电泳分析其完整
性 ∀以标记的 ⁄• 和 Β2¤¦·¬±探针分别与载有 us
个总 • ‘„样品的尼龙膜作斑点杂交 ∀点样前测各
样品的总 • ‘„的浓度 o尽量使每个样品含 • ‘„ 量
相等 ∀杂交结果见图 w ∀
图 w 降脂宁对高脂血症大鼠
肝 ⁄受体 °• ‘„表达水平的影响
„ q利用 ⁄• 探针的杂交结果 …q利用 Β2¤¦·¬±探针的杂交结果
‘q正常组 ‹ q对照组 ´ q相关中药组 µ q降脂宁组
从图 w „ 可以看出 o高胆固醇组大鼠肝脏的
⁄受体 °• ‘„表达水平明显下降 o而高胆固醇组
大鼠在给降脂宁之后 o其肝脏的 ⁄受体 °• ‘„
表达水平又明显提高 o说明降脂宁有诱导大鼠肝
⁄受体 °• ‘„表达的作用 ∀同时 o实验结果还表
明 o相关药物组也具有诱导大鼠肝 ⁄• °• ‘„ 表
达的作用 ∀Β2¤¦·¬±作为一种结构蛋白 o各组织中表
达量一致 o在此 o我们用其作为内参照 ∀在图 w …各
组中的作为内参照的 Β2¤¦·¬±的表达量无明显变化 ∀
将斑点杂交结果做光密度扫描处理 o结果见表
t和图 x ∀ × 检验测验表明 o正常组与高胆固醇组的
⁄受体 °• ‘„表达水平有明显差异k Π s qsxl o
高胆固醇组与降脂宁组的 ⁄受体 °• ‘„ 表达水
平有显著差异k Π s qstl ∀
表 t 降脂宁对高脂血症大鼠肝 ⁄• 基因表达的影响k ξ ? σl
组别 组织样品数 ⁄• °• ‘„rΒ2¤¦·¬± °• ‘„r h
正常组 x tss ? t|
高血脂组 x v| ? tw tl
高脂 n降脂宁组 x ts{ ? { ul
高脂 n相关药物组 x z{ ? { vl
注 }与正常组比 tl Π s .sx 与高血脂组比 u) Π s .st v) Π
 s qsx
3 讨论
大量研究证明≈x ∗ {  o⁄• 基因表达及其转录
水平的调控对于细胞固醇分子的平衡发挥重要作
用 o而对于 ⁄• 基因转录 o生命细胞在基因水平则
存在一种极为精巧的固醇反馈抑制性调控机制≈|  }
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∂ ²¯ quz o‘²qw
„³µqoussu
图 x 降脂宁水煎剂对高脂血症大鼠 ⁄• 基因表达的影响
‘q正常组 ‹ q高胆固醇组 ´ q相关中药组 µ q降脂宁组
当细胞处于高胆固醇负荷时 o可下行抑制 ⁄• 基
因的转录 o使其表达下降 o⁄• 数目减少≈ts  ∀反
之亦然 ∀进一步的研究发现这一机制与在 ⁄• 基
因启动子 xχ区域存在的固醇调节单位 Œk¶·¨µ²¯ µ¨ª∏2
¤¯·²µ¼ ¨¯¨° ±¨·Œo≥• ∞2Œl有关≈tt  ∀ ≥• ∞2Œ作为一个
顺式作用调节元件 o对于由胆固醇介导的 ⁄• 基
因表达反馈抑制是需要的≈tu otv  ∀当细胞固醇缺乏
时 o≥• ∞2Œ作为一个条件性增强子 o促进 ⁄• 基因
表达 o相反 o则抑制 ⁄• 基因表达 ∀由于基因水平
这一调控机制的存在 o使细胞能够保持胆固醇的精
巧平衡 ∀本研究利用斑点杂交法观察降脂宁对高脂
血症大鼠肝细胞 ⁄• 基因表达的影响 ∀研究结果
表明 o高胆固醇大鼠肝细胞 ⁄• °• ‘„ 表达水平
与正常组相比明显降低 o而当高胆固醇组大鼠给降
脂宁和相关药物后 o其肝细胞的 ⁄• °• ‘„ 表达
水平又明显提高 ∀值得说明的是 o利用斑点杂交法
作为定量分析 ⁄• °• ‘„ 表达的准确度不高 o仅
说明降脂宁的降脂作用可能与肝细胞 ⁄• °• ‘„
的表达水平的提高有关 ∀更为准确的定量分析有待
通过 ‘²µ·«¨µ± ¥¯²·o• ¶¨·¨µ± ¥¯²·及定量 °≤ • 等方法
进一步研究 ∀
≈参考文献 
≈t  关建红 q降脂宁调脂及抗粥样硬化的实验研究 q中药药理
与临床 ousst otzkwl }u| q
≈u  …µ²∏¶±  ≥ o Š²¯§¶·¨¬± q „ • ¦¨¨³·²µ2° §¨¬¤·¨§ °¤·«º¤¼ ©²µ
‹²° ²¨¶·¤¶¬¶q≥¦¬¨±¦¨ ot|{y ouvu }vw q
≈v  姜位仓 o蔡海红 o范东明 o等 q高胆固醇血症大鼠 ⁄受体与
¤³²„ °• ‘„的水平变化及苯甲酸雌二醇对其影响 q中国病理
生理杂志 ot||x ottk|l }uvw q
≈w  ¨¨≠ o  ²«¯ µ¨ • „ o≥¦«¤©¨µ… o ·¨¤¯ q‘∏¦¯ ²¨·¬¨§≥¨´ ∏¨ ±¦¨
²©·«¨ • ¤·²º ⁄¨ ±¶¬·¼ ¬³²³µ²·¨¬± • ¦¨¨³·²µ¦⁄‘„ q ‘∏¦¯ ¬¨¦
„¦¬§ • ¶¨ot|{| otzkvl }tux| q
≈x  ≤«¤¬·„ o…¬¨µ°¤± ∞ o „ ¥¯¨µ¶q²º ⁄¨ ±¶¬·¼ ¬³²³µ²·¨¬± ∂ 2¨
¦¨³·²µ„¦·¬√¬·¼¬± ≤∏¯·∏µ¨§ ‹∏°¤± ≥®¬± ƒ¬¥µ²¥¯¤¶·¶ ¦¨«¤±¬¶° ²©
Œ±¶∏¯¬± Œ±§∏¦¨§≥·¬°∏¯¤·¬²± q ≤ ¬¯± Œ±√ ¶¨·ot|z| oyw }tvs| q
≈y  刘信聚 o王明定 q饱和及不饱和脂肪酸对金黄地鼠 ⁄受体
影响的研究 q中国病理生理杂志 ot||w otskwl }v{v q
≈z  姜江全 o誉海江 o范东明 o等 q高胆因醇血症大鼠 ⁄受体与
¤³²2Œ±• ‘„的水平变化及苯甲酸雌二醇对其影响 o中国病理
生理杂志 ot||x ottkvl }uvw q
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µ¤±ª¨ ° ±¨·¶¬± ¤ ≥¬±ª¯¨ Œ±·µ²± ×µ∏±¦¤·¨ ≥·¨µ²¯ • ª¨∏¯¤·²µ¼ ∞¯ 2¨
° ±¨2t …¬±§¬±ª °µ²·¨¬±2u ¤±§ °µ²§∏¦¨ ≥·¨µ²¯µ¨¶¬¶·¤±·°«¨ ±²·¼³¨
¬± ׫µ¨¨ ≤¨¯¯ ¬±¨ ¶2µ²¯¨ ²© Œ±·µ²±¶¬± °µ²·¨¬± ∞√²«·¬²±q …¬²¯
≤«¨ ° ot||x ouzs }tutxu q
≈tt  • ²¥¨µ·≥  ¤®¤µo ° ·¨¨µ ∞ ¬³¶®¼ o ¨ ±±¬©¨µ „ ≤∏·«¥¨µ·q
≥·¨µ²¯2¬±§¨ ³¨ ±§¨ ±·o≥·¨µ²¯ • ¶¨³²±¶¨ ∞¯¨° ±¨·2§¨ ³¨ ±§¨ ±·o • ³¨∏2
¤¯·¬²± ²©²º ⁄¨ ±¶¬·¼ ¬³²³µ²·¨¬± • ¦¨¨³·²µŠ ±¨¨ ∞¬³µ¨¶¶¬²± q
¬³¬§ • ¶¨¨¤µ¦«ot||{ otywz q
≈tu  …µ²º±  ≥ o Š²¯§ ¶·¨¬±   q„ • ¦¨¨³·²µ2° §¨¬¤·¨§ °¤·«º¤¼
ƒ²µ«²° ²¨¶·¤¶¬¶q≥¦¬¨±¦¨ ot|{y ovuvu }vw q
≈tv  ≥°¬·« • × ƒ ’¶¥²µ±¨ oŒ Š²¯§¶·¨¬± o ·¨¤¯ qŒ±§¨ ±·¬© ≤¤·¬²± ²©
„±¦¯ ²¨·¬§¨¶• ¶¨³²±¶¬¥¯¨©²µ∞±«¤±¦¨µ„¦·¬√¬·¼ ²©≥·¨µ²¯ • ³¨∏¯¤·²2
µ¼ ∞¯¨° ±¨·¬± ²º ⁄¨ ±¶¬·¼ ¬³²³µ²·¨¬± Š ±¨¨ q  …¬²¯ ≤«¨ ° o
t||s ouxy }uvsy q
Ινφλυενχε οφ τηε Ωατερψ Εξτραχτ οφ ϑιανγζηινινγ ∆εχοχτιον ον τηε Γενετιχ
Εξπρεσσιον οφ Ηεπατοχψτε Λ∆ΛΡ οφ Ηψπερλιπιδεµιχ Ρατσ
Š˜„‘¬¤±2«²±ªt oŒ„‘Š „¬2«∏¤u oƒ∞‘Š ±¬¤±2­¬±t o ‹ ˜ ≥«¤±2¶«¤±t
kt q≥«¤±¬¬≤²¯¯¨ ª¨ ²© × ≤  o פ¬¼∏¤± svssuw o≥«¤±¬¬o≤«¬±¤~
u q≥«¤±¬¬˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o פ¬¼∏¤± svsssy o≥«¤±¬¬o≤«¬±¤~l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε:ײ¶·∏§¼·«¨ ¬±©¯∏¨ ±¦¨ ²©¬¤±ª½«¬±¬±ª§¨¦²¦·¬²± ²±·«¨ ª¨ ±¨ ·¬¦ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©¬√ µ¨⁄• ²©·«¨ µ¤·¶¶∏©2
k下转第 vst页l
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不同种植密度和施肥水平对盾叶薯蓣试管苗产
量的影响见表 u ∀从表 u可见 o试管苗在高施肥水
平条件下不论高密度还是低密度种植产量明显较
低 ∀说明试管苗属于不耐肥的作物 o而在中等肥力
条件下稀植产量明显较高 o达 xys ®ª#kyyz °ulp t o
这与在生长过程中观察到的植株生长发育情况是吻
合的 o即该种处理条件下 o由于田间通风透光性较
好 o植株生生旺盛 o茎杆粗壮 o叶色深绿 o叶片较大较
厚 ∀虽然从试验结果的总趋势来看 o稀植有利于生
长 o且产量较高 o在低肥力水平条件下出表现出这种
趋势 o即稀植的 w|y ®ª#kyyz °ulp t比密植的 wxs ®ª
#kyyz °ulp t高出 wy ®ª#kyyz °ulp t o但由于肥力较
低 o在生长过程中营养生长明显不足 o因此 o产量比
中等肥力要低得多 ∀上述结果表明 o试管苗在中等
肥力条件下采用相对稀植的方式有利于高产 ∀
表 u 不同种植密度和施肥水平
对产量和薯蓣皂甘含量的影响
施肥标
准代码
密 度
r¦°
小区产量
r®ª
折合亩产
r®ª
„ vs ≅ tx v q|s vtu
x qux w qx{ wus vyy
x qux wus
ux ≅ tx x q{s x qxv wyw wwu
… vs ≅ tx z qyx ytu
y qvx z qss xs{ xys
v qux uys
ux ≅ tx x qxs w qv{ wws vxs
≤ vs ≅ tx w qyx vzu
z qzx y qus yus w|y
x qtx wtu
ux ≅ tx y qts x qyv w{{ wxs
2 q2 不同栽培条件对皂素含量的影响 ∀
从表 v可以看出 o从总体上看种植密度和施肥
水平对皂苷的含量和熔点影响不大 o但在高施肥水
平下皂苷含量相对较低 o从另一个角度也证明了薯
蓣的不耐肥特性 ∀皂苷含量测定结果表明 o育成的
试管苗皂苷含量在 u h以上 ∀在适宜的栽培条件下
皂苷含量可达 u qv{ h ∀
表 v 不同栽培条件对皂素含量的影响
施肥水
平代码
密度
r¦°
皂素含量
r h
熔点
r ε
„ vs ≅ tx u qtz usx ∗ us|
ux ≅ tx u qsy usw ∗ us{
… vs ≅ tx u qv{ usx ∗ us|
ux ≅ tx u qu| usw ∗ us{
≤ vs ≅ tx u quv usx ∗ us{
ux ≅ tx u quy usw ∗ us{
3 小结
结果表明薯蓣试管苗明显表现出其野生特性
) ) ) 不耐肥特性 ∀在中等肥力条件下可以获得较理
想的产量 ∀从种植密度来看 o薯蓣试管苗不宜密植 o
特别是在低肥力时更不宜密植 ∀在适宜的栽培条件
下 o薯蓣试管苗的皂苷含量可达 u qv{ h o说明选育
是成功的 o这对进一步建立优质薯蓣生产基地 !缓解
薯蓣资源供求矛盾 !减轻对自然资源的破坏以及提
高山区农民的经济收益等都将产生积极作用 ∀
≈参考文献 
≈t  王志安 q诱导盾叶薯蓣四倍体的研究初报 q中国中药杂志 o
t||x ouskyl }vvz
≈u  丁志遵 o唐世蓉 o秦慧贞 o等 o甾体激素药源植物 q北京 }科学出
版社 ot|{v q
≈责任编辑 王康正 
k上接第 u|t页l
©¨ µ¨§©µ²° «¼³¨ µ¯¬³¨ °¬¤q Μετηοδ : ¤¥²µ¤·²µ¼ ¤±¬°¤¯¶º µ¨¨ °¤¯¨ º¬¶·¨µµ¤·¶º¬·««¼³¨ µ¯¬³¨ °¬¤µ¨¶∏¯·¬±ª©µ²° «¬ª«©¤·©¨ §¨¬±ªq°µ¨2
¶¦µ¬³·¬²± º¤¶·«¨ §²∏¦«¨ ²©¶·²°¤¦« º¬·«¬¤±ª½«¬±¬±ª§¨¦²¦·¬²± kuss h l º¬·«¤§²¶¤ª¨ ²©t qw ª#®ªp t o©²µtx ¶∏¦¦¨¶¶¬√¨§¤¼¶q ײ·¤¯
• ‘„ º¤¶ ¬¨·µ¤¦·¨§©µ²° ·«¨ ¬¯√ µ¨·¬¶¶∏¨ ²©·µ¨¤·¨§µ¤·¶¤±§⁄• °• ‘„ º¤¶§¨·¨¦·¨§¥¼ ⁄²·¥¯²·¥¼¥µ¬§¬½¤·¬²± q∞¬³µ¨¶¶¬²±¯¨ √¨¯¶²©
⁄• °• ‘„ º¤¶ ¶¨·¬°¤·¨§¥¼ ¤µ¤·¬²²©⁄• °• ‘„ ¤±§Β2¤¦·¬± °• ‘„ qΡεσυλτ : × «¨ §¬©©¨ µ¨±¦¨ ¥¨·º¨¨ ± ¬¨³µ¨¶¶¬²±¯¨ √¨¯¶²©⁄2
• °• ‘„ ©²µ±²µ°¤¯ ªµ²∏³¤±§·«²¶¨ ©²µ«¼³¨ µ¯¬³¨ °¬¤ªµ²∏³ktss h ? t| h √¶v| h ? tw h lº¤¶¶¬ª±¬©¬¦¤±·k°  s qsxl ~¤±§·«¨ §¬©2
©¨ µ¨±¦¨ ¥¨·º¨¨ ± §¨¦²¦·¬²± ªµ²∏³kts{ ? { h l ¤±§«¼³¨ µ¯¬³¬°¬¤ªµ²∏³ º¤¶¤¯¶² «¬ª«¯¼ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·k°  s qstl q Χονχλυσιον : ‹¬ª«©¤·
©¨ §¨¬±ªµ¨§∏¦¨¶·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ¬¯√ µ¨⁄• °• ‘„ º«¬¯¨ ·«¨ §¨¦²¦·¬²± ¦¤± ªµ¨¤·¯¼ ¬±¦µ¨¤¶¨ ¬·q ׫¨ ¶·∏§¼ ¤±§ §¨ √¨¯²³° ±¨·²©
¬¤±ª½«¬±¬±ª¤µ¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¬± ³µ¨√ ±¨·¬±ª¤±§¦∏µ¬±ª¦¤§¬²¦¨µ¨¥µ¤¯ §¬¶¨¤¶¨¶q
[ Κεψ ωορδσ] ¬¤±ª½«¬±¬±ª~«¨ ³¤·²¦¼·¨ ~⁄• °• ‘„
≈责任编辑 方文贤 
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