全 文 ：沈钰明, 戴灵豪, 伍义行, 俞晓平, 张永勇, 浙江省生物计量
及检验检疫技术重点实验室 中国计量学院生命科学学院药
学系 浙江省杭州市 310018
赵昱, 浙江大学药学院 浙江省杭州市 310053
沈钰明, 主要从事肝脏药理的研究.
国家自然科学基金资助项目, No. 30701049
作者贡献分布: 本论文由伍义行设计与撰写; 研究过程具体操作
由沈钰明、戴灵豪及张永勇完成; 俞晓平与赵昱提供技术指导
和平台支持.
通讯作者: 伍义行, 教授, 医学博士, 310018, 浙江省杭州市下
沙高教园区学源街258号, 中国计量学院生命科学学院药学系.
yihangwu@126.com
电话: 0571-86835702 传真: 0571-86914449
收稿日期: 2014-03-13 修回日期: 2014-04-14
接受日期: 2014-04-24 在线出版日期: 2014-06-18
Effect of Laggera alata extract
against hepatitis B virus
infection in vitro
Yu-Ming Shen, Ling-Hao Dai, Yi-Hang Wu,
Xiao-Ping Yu, Yong-Yong Zhang, Yu Zhao
Yu-Ming Shen, Ling-Hao Dai, Yi-Hang Wu, Xiao-Ping
Yu, Yong-Yong Zhang, Zhejiang Provincial Key Labora-
tory of Biometrology and Inspection & Quarantine, Depart-
ment of Pharmacy, College of Life Sciences, Jiliang Univer-
sity of China, Hangzhou 310018, Zhejiang Province, China
Yu Zhao, College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang
University, Hangzhou 310053, Zhejiang Province, China
Supported by: National Natural Science Foundation of
China, No. 30701049
Correspondence to: Yi-Hang Wu, Professor, Department
of Pharmacy, College of Life Sciences, Jiliang University of
China, 258 Xueyuan Street, Xiasha Higher Education Zone,
Hangzhou 310018, Zhejiang Province,
China. yihangwu@126.com
Received: 2014-03-13 Revised: 2014-04-14
Accepted: 2014-04-24 Published online: 2014-06-18
Abstract
AIM: To assess the effect of Laggera alata (L. alata)
extract against hepatitis B virus (HBV) infection
in vitro.
METHODS: Effect of L. alata extract against HBV
infection was studied using the D-galactosamine
(D-GalN)-induced HL-7702 hepatocyte damage
model and HBV-transfected HepG2.2.15 cells.
Cytotoxicity induced by L. alata extract and
hepatocyte viability were detected using MTT

wcjd@wjgnet.com
世界华人消化杂志 2014年6月18日; 22(17): 2421-2426
ISSN 1009-3079 (print) ISSN 2219-2859 (online)
研究快报 RAPID COMMUNICATION
六棱菊提取物体外抗乙型肝炎的作用
沈钰明, 戴灵豪, 伍义行, 俞晓平, 张永勇, 赵 昱
®
■背景资料
慢性乙型肝炎危
害严重, 至今尚无
根治的药物和手
段. 六棱菊作为治
疗炎症性疾病的
良药, 在民间和中
医实践中应用广
泛, 开展其现代化
研究具有重要的
意义.
assay. The levels of hepatitis B surface antigen
(HBsAg) and hepatitis B e antigen (HBeAg)
were determined by enzyme immunoassay.
HBV DNA level was measured by quantitative
fluorescence PCR.
RESULTS: Hepatocyteprotective assay using the
D-GalN-induced hepatocyte damage model in-
dicated that L. alata extract markedly improved
HL-7702 hepatocyte viability at 25-100 µg/mL
and produced a maximum protection of 45.66%
at 100 µg/mL. HBsAg and HBeAg levels were
assayed after hepG2.2.15 cells were incubated
with L. alata extract for 3 d. The results showed
that L. alata extract significantly inhibited HB-
sAg expression at 10-100 µg/mL and produced
a maximum inhibition of 45.92% at 100 µg/mL,
while it markedly repressed the expression rate
of HBeAg by 50.5% at 100 µg/mL. In addition,
HBsAg, HBeAg and HBV DNA levels were
measured after the cells were treated with L.
alata extract for 6 d. At 10-100 µg/mL and 25-100
µg/mL, L. alata extract significantly inhibited the
expression of HBsAg and HBeAg, respectively.
At 100 µg/mL, L. alata extract inhibited the ex-
pression rates of HBsAg and HBeAg by 84.31%
and 88.45%, respectively. In addition, L. alata ex-
tract showed significant inhibition on HBV DNA
replication at 100 µg/mL.
CONCLUSION: L. alata extract have potent anti-
HBV and hepatocyteprotective effects in vitro.
The anti-hepatitis B effect of L. alata extract is
likely based on their active components dicaf-
feoylquinic acids.
© 2014 Baishideng Publishing Group Inc. All rights
reserved.
Key Words: L. alata extract; Hepatitis B; Hepato-
cyte protective; Antiviral effect
Shen YM, Dai LH, Wu YH, Yu XP, Zhang YY, Zhao
Y. Effect of Laggera alata extract against hepatitis B
virus infection in vitro. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi
2014; 22(17): 2421-2426 URL: http://www.wjgnet.
com/1009-3079/22/2421.asp DOI: http://dx.doi.
org/10.11569/wcjd.v22.i17.2421
■同行评议者
杨江华 , 副教授 ,
皖南医学院弋矶
山医院感染科
2014-06-18|Volume 22|Issue 17|WCJD|www.wjgnet.com
2422 ISSN 1009-3079 (print) ISSN 2219-2859 (online) 世界华人消化杂志 2014年6月18日 第22卷 第17期
■研发前沿
深入开展中药现
代化研究是抗肝
炎创新药物研制
的重要途径之一,
而在六棱菊的现
代 化 研 究 中 , 尚
未见其提取物直
接抗HBV作用研
究的报道.
摘要
目的: 探讨六棱菊(Laggera alata , L. alata )提取
物对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感
染影响.
方法: 采用D-氨基半乳糖(D-galactosamine,
D-GalN)致人源HL-7702肝细胞损伤模型, 研究
六棱菊提取物对类似乙型肝炎引起的肝细胞
损伤的影响; 采用HBV基因转染的HepG2.2.15
细胞模型, 评价六棱菊提取物的体外抗HBV
作用. 通过MTT法检测细胞毒性和细胞活力;
通过ELISA和荧光定量PCR法分别检测乙型
肝炎表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,
HBsAg)/乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,
HBeAg)和HBV DNA水平.
结果: 六棱菊提取物在25-100 µg/mL浓度时,
对D-GalN致肝细胞损伤均具有显著保护作用,
而在100 µg/mL浓度时展示了其最高保护率为
45.66%. 六棱菊提取物作用HepG2.2.15细胞3
d, 在10-100 µg/mL浓度下对HBsAg有显著抑制
作用, 其最高抑制率为45.92%; 在100 µg/mL下
能显著抑制HBeAg分泌, 其抑制率为50.5%. 六
棱菊提取物作用HepG2.2.15细胞6 d, 在10-100
µg/mL浓度下对HBsAg有显著抑制作用, 其最
高抑制率为84.31%; 在25-100 µg/mL浓度下能
显著抑制HBeAg分泌, 最高抑制率为88.45%;
同时, 在100 µg/mL时对HBV DNA复制有显著
抑制作用.
结论: 六棱菊提取物具有较强的体外抗肝细
胞损伤作用和抗HBV作用, 其抗乙型肝炎作
用可能与所含咖啡酰奎宁酸类活性成分有关.
© 2014年版权归百世登出版集团有限公司所有.
关键词: 六棱菊提取物; 乙型肝炎; 抗肝细胞损伤作
用; 抗病毒作用
核心提示: 六棱菊提取物具有较强的体外抗肝细
胞损伤作用和抗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus)
作用, 其抗乙型肝炎作用可能与所含咖啡酰奎宁
酸类活性成分有关.
沈钰明, 戴灵豪, 伍义行, 俞晓平, 张永勇, 赵昱. 六棱菊提取物体外
抗乙型肝炎的作用. 世界华人消化杂志 2014; 22(17): 2421-2426
URL: http://www.wjgnet.com/1009-3079/22/2421.asp DOI:
http://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v22.i17.2421
0 引言
药用植物六棱菊(Laggera alata , L. alata)具有清热
解毒、抗菌消炎等功效, 长期广泛应用于民间
和中医实践中, 疗效甚著[1]. 以“六棱菊”为主
要成分的复方制剂在临床上治疗感冒、扁桃体
炎、腮腺炎、急性呼吸道感染等取得了显著疗
效, 具有重要的研发价值. 近年来六棱菊属植物
研究备受关注, 有关该植物化学成分研究已有
报道[2-7]. 在前期对六棱菊药效部位及其抗炎药
理作用进行深入研究的基础上[8-11], 本文进一步
采用D-氨基半乳糖(D-galactosamine, D-GalN)致
人源HL-7702肝细胞损伤模型和乙型肝炎病毒
(hepatitis B virus, HBV)基因转染的HepG2.2.15
细胞模型研究了六棱菊提取物的体外抗乙型肝
炎作用.
1 材料和方法
1.1 材料 水飞蓟宾(陕西森弗生物技术有限公司
产品); D-GalN(武汉祥和精细化工有限公司产
品); 拉米夫定(武汉远城医药有限公司); RPMI
1640培养基、DMEM培养基和胎牛血清(美国
GIBCOTM产品); 乙型肝炎e抗原(hepatitis B e
antigen, HBeAg)、乙型肝炎表面抗原(hepatitis B
virus surface antigen, HBsAg)ELISA检测试剂盒
和PCR HBV DNA荧光定量试剂盒(上海科华生
物工程股份有限公司); G418(美国Sigma-Aldrich
公司产品); 胰酶, MTT(上海生工生物工程技术
服务有限公司); 正常人源HL-7702肝细胞株(购
自中科院上海细胞库); 转染HBV基因细胞株
HepG2.2.15细胞(浙江大学医学院附属第一医院
提供).
1.2 方法
1.2.1 六棱菊提取物的制备: 按本课题组前期报
道的方法制备[10], 六棱菊提取物的总酚含量为
56.5 g GAE/100 g提取物; 其主要成分二咖啡酰
奎尼酸类化合物的含量为53.0%.
1.2.2 HL-7702肝细胞和HepG2.2.15细胞的培养:
正常人源HL-7702肝细胞采用含10%胎牛血清
的RPMI 1640培养液, 置于含5%CO2的培养箱中,
37 ℃下进行培养. 转染HBV基因的HepG2.2.15
细胞采用含10%胎牛血清和280 µg/mL G418的
DMEM培养液, 置于含5%CO2的培养箱中, 37 ℃
下进行培养.
1.2.3 对H L-7702肝细胞正常生长的影响: 以
MTT法测定样品对HL-7702肝细胞生长的影响.
将HL-7702肝细胞用胰蛋白酶-EDTA消化并稀
释成1×105/mL, 接种200 µL于96孔板中培养. 待
细胞贴壁后弃去培养基, 加入200 µL用培养基稀
2014-06-18|Volume 22|Issue 17|WCJD|www.wjgnet.com
沈钰明, 等. 六棱菊提取物体外抗乙型肝炎作用 2423
■相关报道
本课题组系统研
究了六棱菊治疗
肝炎的潜力, 已发
表了多篇有关其
抗炎和保肝作用
的论文, 其他课题
组只报道过该植
物化学成分研究.
释成不同浓度的样品, 每个浓度设4个平行, 同
时设溶剂对照. 继续培养48 h后弃掉培养基, 每
孔分别加入200 µL PBS和20 µL MTT(5 mg/mL)
溶液. 再培养4 h后弃上清, 每孔加入150 µL
DMSO振荡10 min. 在酶标仪上检测570 nm波长
处的吸光度. 根据A 570值判断样品本身对细胞的
毒性, 以决定试验样品的浓度.
1.2.4 对D-GalN致HL-7702肝细胞损伤的影响:
将HL-7702肝细胞用胰蛋白酶-EDTA消化并稀
释成1×105/mL, 接种200 µL于96孔板中培养. 待
细胞贴壁后弃去培养基, 加入200 µL用培养基稀
释成不同浓度的样品, 每个浓度设4个平行, 同
时设模型对照、阳性对照和溶剂对照. 培养40 h
后, 试验孔与模型孔换上含80 mmol/mL D-GalN
的新鲜培养基, 确保试验样品浓度不变. 又培养8
h后弃培养基, 每孔分别加入200 µL PBS和20 µL
MTT(5 mg/mL)溶液. 再培养4 h后弃去上清, 每
孔加入150 µL DMSO振荡10 min. 在酶标仪上检
测570 nm波长处的吸光度.
1.2.5 对HepG2.2.15细胞生长的影响: 以MTT
法测定样品对HepG2.2.15细胞生长的影响. 将
HepG2.2.15细胞用胰蛋白酶-EDTA消化并稀释
成1×105/mL, 接种200 µL于96孔板中培养. 待
细胞贴壁后倾去培养基, 加入用培养基稀释成
不同浓度的样品, 每孔200 µL, 每个浓度设4个
平行, 同时设阳性和溶剂对照. 培养6 d后弃掉培
养基, 每孔分别加入200 µL PBS和20 µL MTT(5
mg/mL)溶液. 再培养4 h后弃去上清, 每孔加入
150 µL DMSO振荡10 min. 用酶标仪检测570 nm
波长处的吸光度.
1.2.6 体外抗H B V作用: 以转染H B V基因的
HepG2.2.15细胞为模型, 通过被测样品对细胞
培养上清中的HBsAg、HBeAg、HBV DNA
的抑制情况 , 来评价样品的抗H B V作用 . 将
HepG2.2.15细胞用胰蛋白酶-EDTA消化并稀释
成1×105/mL, 接种200 µL于96孔板中培养. 待
细胞贴壁后倾去培养基, 加入用培养基稀释成
不同浓度的样品, 每孔200 µL, 每个浓度设3个
平行, 同时设阳性和溶剂对照. 每3 d换含无毒浓
度样品的培养基, 将换出的同一样品同一浓度
的培养基等体积混匀, 作为待测样品. 在加药后
第3天和第6天分别提取培养上清, 用ELISA试剂
测定培养基中HBsAg和HBeAg浓度, 以P/N表示;
用HBV DNA定量PCR试剂测定培养基中HBV
DNA浓度.
统计学处理 实验数据以mean±SD表示,
采用单因素方差分析(A N O VA)和t 检验统计,
P <0.05为差异有统计学意义.
2 结果
2.1 六棱菊提取物对HL-7702和HepG2.2.15细胞
的毒性作用 采用MTT方法研究六棱菊提取物
对HL-7702肝细胞和HepG2.2.15细胞的毒性, 结
果表明: 六棱菊提取物在1-100 µg/mL浓度下对
HL-7702肝细胞和HepG2.2.15细胞生长均无显
著影响(表1, 2).
2.2 六棱菊提取物对D-GalN致HL-7702肝细胞损
伤的保护作用 如表3所示, D-GalN损伤组与溶剂
组比较具有显著性差异(P <0.01); 六棱菊提取物
在25-100 µg/mL浓度时, 对D-GalN致肝细胞损伤
有显著的保护作用(P <0.05, P <0.01), 最高保护率
为45.66%; 阳性对照水飞蓟膑显示了相对较弱
2014-06-18|Volume 22|Issue 17|WCJD|www.wjgnet.com
表 1 六棱菊提取物对HL-7702肝细胞的毒性作用 (mean
± SD, n = 4)
分组 浓度 (µg/mL) A 570值 细胞存活率(%)
溶剂 - 1.299±0.051 100.00
水飞蓟膑 100 1.256±0.072 96.69
50 1.271±0.054 97.84
25 1.282±0.052 98.69
10 1.289±0.045 99.23
1 1.295±0.063 99.69
六棱菊
提取物
100 1.275±0.055 98.15
50 1.287±0.038 99.08
25 1.291±0.053 99.38
10 1.297±0.062 99.85
1 1.298±0.049 99.92
表 2 六棱菊提取物对HepG2.2.15细胞的毒性作用 (mean
± SD, n = 4)
分组 浓度 (µg/mL) A 570值 细胞存活率(%)
溶剂 - 0.944±0.047 100.00
拉米夫定 100 0.921±0.099 97.56
50 0.925±0.089 97.99
25 0.934±0.101 98.94
10 0.939±0.087 99.47
1 0.942±0.078 99.79
六棱菊
提取物
100 0.931±0.075 98.62
50 0.933±0.097 98.83
25 0.940±0.091 99.58
10 0.941±0.088 99.68
1 0.944±0.071 100.00
2424 ISSN 1009-3079 (print) ISSN 2219-2859 (online) 世界华人消化杂志 2014年6月18日 第22卷 第17期
■创新盘点
采用HBV基因转
染的HepG2.2.15
细 胞 模 型 和
D - G a l N 致 人 源
HL-7702肝细胞
损伤模型研究六
棱菊提取物体外
抗乙型肝炎作用.
的保护作用, 在50-100 µg/mL浓度时, 对D-GalN
致肝细胞损伤有显著的保护作用(P <0.05), 最高
保护率为30.15%. 结果表明六棱菊提取物具有
较强的抗D-GalN损伤肝细胞的作用.
2.3 六棱菊提取物体外抗HBV作用 六棱菊提取
物作用于HepG2.2.15细胞3 d后其结果如表4所
示, 在浓度为100、50和25 µg/mL时, 对HBsAg
和HBeAg均有抑制作用, 且其抑制作用随药物
浓度的增加而增强. 与溶剂对照组比较, 六棱菊
提取物在100、50、25和10 µg/mL时, 对HBsAg
分泌有显著抑制作用(P <0.05, P <0.01), 其抑制
率分别为45.92%、40.89%、34.03%和10.72%.
同时, 六棱菊提取物在100 µg/mL下能显著抑制
HBeAg分泌(P <0.05), 其抑制率为50.5%. 而阳性
对照拉米夫定显示了相似的影响, 但在相同浓
度下其抑制作用弱于试验药物六棱菊提取物.
六棱菊提取物作用于HepG2.2.15细胞6 d
后其结果如表5所示, 六棱菊提取物在浓度为
100、50和25 µg/mL时, 对HBsAg和HBeAg均有
抑制作用, 且抑制作用随药物浓度的增加而增
强. 与溶剂对照组相比, 六棱菊提取物在100、
50、25和10 µg/mL时, 对HBsAg分泌具有显
著抑制作用(P <0.05, P <0.01), 其抑制率分别为
84.31%、71.49%、58.98%和12.41%. 同时, 六棱
菊提取物在100、50和25 µg/mL时, 显著抑制了
HBeAg的分泌水平(P <0.05, P <0.01), 其抑制率分
别为88.45%、67.38%和51.76%. 更为重要的是,
六棱菊提取物在100 µg/mL时对HBV DNA复制
有显著抑制作用(P <0.05). 而阳性对照拉米夫定
显示了相似的影响, 但对HBsAg和HBeAg的抑
制作用弱于试验药物. 综合作用3和6 d的结果,
说明六棱菊提取物具有较强的体外抗HBV作用.
3 讨论
乙型肝炎是由HBV引起的一种危害极大的世界
性流行的传染病, 据统计目前全世界约有3.5亿
HBV携带者, 而中国是HBV高感染地区, HBV携
带者占总人口比例高达10%-15%, 其中慢性乙
型肝炎患者约3000万例, 每年约有35万例死于
慢性乙型肝炎相关疾病[12]. HBV主要通过血液
和性接触传播, 母婴垂直传播也很常见. 成人感
染HBV多表现为无症状感染或急性肝炎, 约有
15%-20%患者转为慢性携带者和慢性患者, 部
分慢性乙型肝炎患者进一步转化为肝硬化和原
发性肝细胞性肝癌. 虽然目前HBV基因工程亚
单位疫苗可控制感染流行, 但大量已感染HBV
的携带者和慢性患者依然存在. 1990年起我国
开展的新生儿疫苗接种显著降低了儿童慢性乙
型肝炎感染率, 但并未遏止乙型肝炎发病率的
上升趋势, 乙型肝炎及其相关疾病仍是中国乃
至全球的重要公共卫生问题之一[13]. 尽管国内外
研制的一些抗乙型肝炎药物(如a-干扰素和核苷
类似物)可一定程度抑制病毒复制、控制病情发
展, 但其疗效距离清除病毒感染、治愈绝大多
数乙型肝炎患者及病毒携带者的目标尚有很长
的距离[14]. 因此, 在目前生物药物和化学药物无
重大突破的情况下, 深入开展中药现代化研究,
研制安全有效的抗乙型肝炎创新药物具有重大
意义.
HBV是一种较为严格的嗜肝DNA病毒, 其
感染有高度的种属和组织特异性, 由于病毒黏
附以及DNA转录和复制对宿主有严格的要求,
HBV只感染人类和类人猿, 建立常规的细胞及
动物模型比较困难 , 大大限制了H B V感染机
制研究和抗HBV药物的发展. HepG2.2.15细胞
是将含有H B V基因组的重组载体质粒转染肝
癌HepG2细胞, 经G418筛选得到的克隆, 该细
胞能在体外长期培养, 并能稳定分泌HBsAg、
HBeAg及Dane颗粒, 可检测到细胞内DNA和
RNA(包括细胞内cccDNA), 能很好地模拟HBV
感染肝细胞的过程, 将该细胞培养上清静脉注
射黑猩猩可致典型肝炎[15,16]. HepG2.2.15细胞是
目前抗乙型肝炎药物药效评价最常用的细胞模
2014-06-18|Volume 22|Issue 17|WCJD|www.wjgnet.com
表 3 六棱菊提取物对D-GalN致HL-7702肝细胞损伤的
保护作用 (mean ± SD, n = 4)
分组 浓度(µg/mL) A 570值 保护率(%)
溶剂对照 - 1.242±0.043b -
D-GalN对照 - 0.655±0.056 -
水飞蓟
膑-D-GalN
100 0.832±0.039a 30.15
50 0.789±0.047a 22.83
25 0.732±0.056 13.12
10 0.711±0.038 9.54
1 0.687±0.057 5.45
六棱菊提取
物- D-GalN
100 0.923±0.041b 45.66
50 0.874±0.054a 37.31
25 0.781±0.044a 21.46
10 0.741±0.057 14.65
1 0.706±0.045 8.69
aP<0.05, bP<0.01 vs D-GalN对照组. 保护率(%) = (试验组A 570
均值-D-GalN组A 570均值)/(溶剂组A 570均值-D-GalN组A 570均
值)×100%. D-GalN: D-氨基半乳糖.
沈钰明, 等. 六棱菊提取物体外抗乙型肝炎作用 2425
型[17]. 本文通过运用HepG2.2.15细胞研究六棱菊
提取物对HBV基因表达(HBV DNA、HBV抗原
表达)的影响, 从而评价其抗HBV作用. 结果表
明: 六棱菊提取物具有较强的体外抗HBV作用.
在肝炎治疗中, 抗病毒药、免疫增强剂及保
肝药都很重要, 除了抗病毒治疗外, 保肝药物对
减少肝细胞破坏、延缓慢性肝病的发展具有十
分重要的意义. Keppler等[18]于1968年首次应用
D-Ga1N制备大鼠肝损伤模型, 认为其肝脏病理
和生理改变与人类病毒性肝炎相似, 经反复多
次给药, D-GalN还能够诱发动物产生慢性肝损
伤甚至癌变. 对于D-Ga1N的损伤作用机制, 过去
大都认为D-GalN是一种肝细胞磷酸尿嘧啶核苷
干扰剂, 能竞争性捕捉UTP生成二磷酸尿苷半乳
糖(UTP-galactose), 使磷酸尿苷耗竭, 导致物质
代谢障碍, 引起肝细胞变性、花丝[19]. 随着研究
的深入, 人们发现自由基和脂质过氧化反应在
D-GalN引起的肝损伤中起着十分重要的作用[20].
鉴于D-Ga1N诱发的肝损伤与人类乙型肝炎等病
毒性肝炎引起肝损伤非常相似, 且D-GalN诱导
的肝损伤模型已成为目前最常用的保肝药物评
价模型之一. 因此, 本研究采用 D-GalN引起正常
人源HL-7702肝细胞损伤模型探讨了六棱菊提
取物的体外抗肝细胞损伤作用, 结果表明六棱
■应用要点
为六棱菊的现代
化研究及开发利
用打下了基础, 同
时也为其民间应
用和中医临床用
药提供了部分科
学依据.
2014-06-18|Volume 22|Issue 17|WCJD|www.wjgnet.com

表 4 六棱菊提取物作用3 d后对HBsAg和HBeAg表达的影响 (mean ± SD, n = 3)
试验药物 浓度(µg/mL)
HBsAg HBeAg
A 570值 抑制率(%) A 570值 抑制率(%)
溶剂对照 - 1.200±0.033 - 0.893±0.079 -
拉米夫定 100 0.794±0.147b 33.81 0.729±0.045a 18.36
50 0.945±0.064b 21.20 0.793±0.027 11.20
25 1.096±0.013b 8.69 0.849±0.107 4.96
10 1.153±0.123 3.89 0.964±0.059 -
1 1.229±0.079 - 0.916±0.104 -
六棱菊提取物 100 0.649±0.066b 45.92 0.442±0.057a 50.50
50 0.709±0.016b 40.89 0.764±0.007 14.48
25 0.792±0.051 34.03 0.867±0.080 2.95
10 1.071±0.052a 10.72 0.999±0.066 -
1 1.306±0.034a - 0.922±0.143 -
aP<0.05, bP<0.01 vs 溶剂对照组(DMSO含量<0.1%). 抑制率(%) = (对照组平均A值-实验组平均A值)/(对
照组平均A值)×100%. HBeAg: 乙型肝炎e抗原; HBsAg: 乙型肝炎表面抗原.

表 5 六棱菊提取物作用6 d对HBsAg、HBeAg、HBV DNA的影响 (mean ± SD, n = 3)
试验药物 浓度 (µg/mL)
HBsAg HBeAg
log (HBV DNA)
A 570值 抑制率(%) A 570值 抑制率(%)
溶剂对照 - 2.497±0.009 - 2.360±0.088 - 5.137±0.032
拉米夫定 100 1.728±0.173b 30.60 1.921±0.145a 18.24 4.923±0.127a
50 1.905±0.095b 23.48 2.002±0.175a 14.79 5.078±0.048
25 2.150±0.091b 13.67 2.084±0.126a 11.32 5.081±0.036
10 2.175±0.142a 12.66 2.244±0.102 4.52 5.228±0.024
1 2.475±0.142 0.61 2.387±0.169 - 5.281±0.149
六棱菊提取物 100 0.391±0.018b 84.31 0.271±0.054b 88.45 4.951±0.106a
50 0.710±0.021b 71.49 0.767±0.094b 67.38 5.070±0.037
25 1.021±0.071b 58.98 1.133±0.123b 51.76 5.140±0.050
10 2.181±0.073a 12.41 2.261±0.049 3.81 5.412±0.123
1 2.478±0.029 0.48 2.345±0.025 0.21 5.388±0.108
aP<0.05, bP<0.01 vs 溶剂对照组(DMSO含量<0.1%). 抑制率(%) = (对照组平均A值-实验组平均A值)/(对照组平均A
值)×100%. HBeAg: 乙型肝炎e抗原; HBsAg: 乙型肝炎表面抗原.
2426 ISSN 1009-3079 (print) ISSN 2219-2859 (online) 世界华人消化杂志 2014年6月18日 第22卷 第17期
菊提取物具有较强的抗D-GalN损伤肝细胞的作
用, 其作用强于阳性对照水飞蓟宾.
菊科六棱菊属(Laggera genus )约有20余种,
主要分布在非洲热带及亚洲东南部. 国内仅有
六棱菊(L. alata )和齿翼六棱菊(L. pterodonta )两
个种药用, 别名臭灵丹, 主产长江流域以南地
区, 资源丰富. 六棱菊和齿翼六棱菊民间广泛应
用于炎症性疾病的治疗, 取得了显著疗效[1]. 在
前期研究中, 通过活性跟踪分离纯化了六棱菊
提取物, 并对其主要成分类型进行了量化分析;
抗炎药理研究证明了该提取物的药效物质基础
主要是酚酸类尤其是咖啡酰奎宁酸类成分[8-10].
在此基础上 [1-4]. 本研究采用H B V基因转染的
HepG2.2.15细胞模型和D-GalN致人源HL-7702
肝细胞损伤模型, 进一步探讨并证明了六棱菊
提取物具有较强的抗乙型肝炎作用, 提示六棱
菊提取物的抗乙型肝炎作用可能与咖啡酰奎宁
酸类成分有关[11]. 总之, 该研究为六棱菊的现代
化研究及开发利用打下了基础.
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编辑 郭鹏 电编 鲁亚静
■同行评价
本文设计合理, 方
法可靠, 具有一定
创新性, 对六棱菊
的开发应用具有
重要意义.
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