全 文 ：白芍 °≤指纹图谱相似度的分析
张克荣 3 o毕开顺
k沈阳药科大学 o辽宁 沈阳 ttsstyl
白芍为毛茛科芍药 Παεονια λαχττιφλορα °¤¯¯q的干燥根 ∀药
材主产浙江 !安徽 !四川等地 o此外 o河南 !贵州 !山东等地也
有栽培≈t ∀其味苦 !酸 o微寒 o归肝 !脾经 ∀具有平肝止痛 o养
血调经 o敛阴止汗之功能≈u ∀据报道 o白芍根主要含有芍药
苷 !芍药内酯苷 !羟基芍药苷 !苯甲酰芍药苷和苯甲酰羟基芍
药苷等苷类成分 ∀目前 o多用芍药苷这单一成分作为白芍的
质控指标 o难于全面的控制白芍的内在质量 o不能对其真伪
优劣做出判断 ∀本实验通过用 °2°≤ 方法建立白芍的指
纹图谱 o并将聚类分析和相似度分析的数据分析技术应用于
白芍的指纹图谱 o考察了白芍药材与产地及炮制之间的数据
关系 o为全面控制白芍的质量提供了方法 ∀
1 仪器与试药
日本岛津公司 ≤ p ts⁄液相色谱仪 o≥°⁄p ts 检测
器 o≤ p y数据理机 ∀甲醇 !乙腈为色谱纯 o双蒸水 o其他试
剂均为分析纯 ∀
白芍药材均由沈阳药科大学孙启时教授进行鉴定 o来源
见表 t ∀
表 t 白芍药材来源
² 产地 ² 产地
t 中国药品生物制品检定所tl tx 杭州
u 中国药品生物制品检定所ul ty 河南
v 安徽 ´ tz 亳州 ´
w 安徽 µ t{ 亳州 µ
x 安徽 ¶ t| 亳州 ¶
y 兰州 us 贵州
z 徐州 ut 山东曹县
{ 上海 uu 四川中江
| 长春 uv 兰州
ts 山东菏泽 uw 徐州
tt 内蒙 ux 杭州
tu 浙江 uy 亳州 t
tv 大连 uz 亳州 u
tw 湖南 u{ 上海
注 }²uv ∗ u{ 为炮制品炒白芍 ~tl批号 s|sx2|{sx ~ul批号 s|sx2
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2 实验方法和结果
2 q1 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品适量 o用
≈收稿日期 ussv2st2ts
≈通讯作者 3 张克荣 o ר¯ }ksuwl uv{wvztt2vvyv o ∞2°¤¬¯}
½®µussuzy ¶¬±¤q¦²°
甲醇配制成 s qux °ª#°pt的溶液 ∀
2 q2 供试品溶液的制备
2 q2 q1 提取方法的考察 本实验对甲醇 !|x h 乙醇索氏提
取 o甲醇 !|x h乙醇 !丙酮2水kzΒvl回流提取 o对提取溶剂 !提
取方法进行了考察 ∀结果表明 o乙醇回流提取后所得色谱峰
的峰数为最多 ∀后又对 xs h ozx h o|x h 乙醇回流提取进行
试验 o发现三者之间峰数无显著性变化 o本实验采用 xs h乙
醇作为提取溶剂进行回流提取 ∀
2 q2 q2 样品溶液的制备 精密称取白芍粉末 t qs ªo加入
xs h乙醇 ts °回流提取 v次 o每次 u «o滤过 o合并各滤液 o
旋转蒸发回收溶剂 o残渣用甲醇溶解并定容置 ts °量瓶
中 o摇匀 ∀再精密量取 s qx °置 x °量瓶中 o用流动相稀释
至刻度 o摇匀 o微孔滤膜过滤 o取续滤液备用 ∀
2 q3 检测波长的选择 取样品溶液 o分别在 uts ouvs ouxw o
u{u ±°处检测 ∀结果表明 ouxw ou{u ±°处各色谱峰之间分离
度好 o但峰数少 ~uts ±°检测 o峰数与 uvs ±°检测基本一致 o
但基线不稳定 o不能准确积分 ~以 uvs ±°检测 o峰数多 o基线
平稳 o故选之 ∀
2 q4 色谱条件 ¼³¨µ¶¬¯ ≤t{柱kw qy °° ≅ uss °° ox Λ°l o大
连依利特科学仪器有限公司生产 ~流动相为乙腈2水ktuΒ{{ o
v°w调 ³ v qsl ~流速 s q{ °#°¬±2t ~检测波长 uvs ±° ~柱
温为室温 ∀
2 q5 系统适用性试验 理论塔板数以芍药苷计算不得低于
x sss o该峰与相邻色谱峰的分离度不得低于 t qu ∀
2 q6 精密度试验 精密称取 t{号样品 o按供试品溶液制备
方法制备供试品 o连续进样 x次 o记录指纹图谱 ∀结果表明 o
各色谱峰的相对保留时间和其相对峰面积比值基本一致
k ≥⁄为 s qv h ∗ u q{ h l o符合指纹图谱要求≈v ∀
精密称取 t{号样品 x份 o按供试品溶液制备方法制备
供试品 o记录指纹图谱 ∀结果表明 o各色谱峰的相对保留时
间和其相对峰面积比值基本一致k ≥⁄为 t qu h ∗ w qv h l o符
合指纹图谱要求 ∀
2 q7 样品稳定性考察 精密称取 t{号样品 o按供试品溶液
制备方法制备供试品 o分别在 s ou ow o{ oty ouw «o记录指纹图
谱 ∀结果表明 o各色谱峰的相对保留时间和其相对峰面积比
值基本一致k ≥⁄为 s q{ h ∗ v qu h l o符合指纹图谱要求 ∀
2 q8 白芍的指纹图谱 测定了 u{个白芍样品 o共获得 ut
个色谱峰 ∀典型色谱图 ² t{见图 t ∀tu号峰为芍药内酯
苷 otw号峰为芍药苷 oz号峰为氧化芍药苷 ous号峰为苯甲
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第 u|卷第 w期
ussw年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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³µ¬¯oussw
酸 ∀其中 tw号峰芍药苷为白芍主要指标成分 o将其作为内
参比峰 ∀以其色谱峰对内参比峰的相对保留时间定性 o按下
式计算各色谱峰相对于其内参比峰的峰面积比 Ξ ∀
Αιϕ/ Αισ
Ξ ) ) ) ) ) ) ) ) )
Ωι
其中 }Αιϕ为第 ι个样品第ϕ个组分的峰面积 oΑισ为第 ι个
样品的参比峰面积 oΩι为样品重kªl ∀
图 t 白芍样品色谱指纹图谱
2 q9 白芍样品相似度分析 指纹图谱反映的是样品整体的
特征 o进行指纹图谱比较 o可以反映样品之间的亲疏程度 o但
是单纯的直观比较指纹图谱的峰的多少和峰的大小 o只是定
性比较 o而且又带有个人的主观性 ∀相似度可以定量的描述
指纹图谱 o本研究用相似度分析对样品进行了比较 o可以定
量的 !客观的对样品进行评价 ∀首先对 u{个白芍样品进行
聚类分析 o采用离差平方和k • ¤µ§. ¶l法 o利用欧氏距离k∞∏2
¦¯¬§¨¤±l作为样品的聚类依据 o以峰面积为样品谱图的特征
值 o将样品分为 v类 ∀分类结果见表 u ∀
结合生药学鉴定结果 o并参考中国药品生物制品检定所
的标准药材 o从 u{个白芍药材中选取 ts个有代表性的合格
药材k²t otz oz o{ ott ot{ oux ous out oul o取各样品中 ut个色
谱峰峰面积的平均值作为共有模式 o然后计算样品与共有模
式之间的相似度 o来判断样品质量 ∀本研究以夹角余弦 !相
关系数和欧氏距离作为测度≈w o分别计算各样品的相似度 o
结果见表 v ∀
表 u 聚类分析结果
类别 ²
´ tw ou{ otz ot ouw oz ot{ ot| oux o| ott ow oty ou otx ous ouu out
µ ts ouv ov oy otv o{ otu
¶ uz ouy ox
由表 v可见 o相似度在 s q|s ∗ t qss可归为一类 o为优质
品 ~s qzs ∗ s q{|归为一般品 ~劣质品相似度低于 s qzs o与聚
类分析的分类结果一致 ∀并且本实验结果显示 o采用 v种不
同测度的相似度检验白芍的指纹图谱 o趋势是一致的 o得到
了 v种不同测度之间的相互认证 ∀用该法分析未知样品时 o
只需测得该样品的色谱指纹图谱 o计算未知样品与共有模式
间的相似度 o即可对样品进行鉴定 !分类和评价 ∀
表 v 相似度分析结果
² 夹角余弦
相关
系数
欧氏
距离 ²
夹角
余弦
相关
系数
欧氏
距离
t s q|z s q|{ s q|z tx s q|| s q|| s q||
u s q|{ s q|{ s q|{ ty s q|z s q|{ s q|z
v s q{t s qz{ s q{x tz s q|x s q|y s q|z
w s q|| s q|| s q|| t{ t qss t qss t qss
x s qw{ s qv{ s quz t| s q|y s q|y s q|z
y s q{u s q{s s q{x us s q|{ s q|| s q|z
z t qss t qss t qss ut s q|s s q|s s q|s
{ s qzw s qzs s qz{ uu s q|s s q|s s q|t
| s q|| s q|| s q|| uv s q{z s q{z s q{|
ts s qz| s qzy s q{u uw s q|z s q|z s q|z
tt s q|| s q|| s q|{ ux s q|z s q|z s q|z
tu s q{x s q{v s q{z uy s qyw s qx{ s qyv
tv s q{w s q{u s q{z uz s qx{ s qxs s qxy
tw s q|z s q|z s q|{ u{ s q|y s q|z s q|{
3 讨论
3 q1 本实验过程中 o选择了多种流动相系统 }≠ 甲醇2水
kv°w调至不同 ³l ~ 甲醇2乙腈2水kv°w调至不同 ³l ~
≈乙腈2水kv°w调至不同 ³l ~…乙腈2水2四氢呋喃kv°w
调至不同 ³l ∀结果表明 }流动相以乙腈2水kv°w 调至 ³
v qsl系统为最佳 o各色谱峰分离度较好 o保留时间适中 ∀
3 q2 白芍中芍药苷的含量最高 o因此 o建立白芍指纹图谱
时 o发现供试品的浓度对指纹图谱中特征峰数目影响较大 o
必须具有相当的浓度 o才能检测到指纹图谱中峰面积小的特
征峰 o否则就只能观察到几个主要峰 o失去指纹图谱的意义 ∀
3 q3 目前 o中药材的鉴别和分类很大程度上还依赖于经验
和表观分析 o也缺乏从分析数据中获取评价依据的统一 !使
用的方法 o采用本文的方法 o可以快速获得不同样品间的相
似性 o进而利用聚类分析等方法对样品进行归类和鉴别 ∀另
外 o在已建立标准指纹图谱的基础上 o可用相似度评价待测
样品与用合格药材建立的共有模式指纹图谱之间的相似程
度 o在一定程度上反映了所测样品与合格样品的偏离程度 o
但是中药质量的评价仍需用代表临床药效的药理实验验证 ∀
因此 o如果结合白芍的药效物质基础和药理学研究 o白芍的
质量控制会更加完善和科学 ∀
≈参考文献
≈t 江苏新医学院 q中药大辞典 q第一卷 q上海 }上海人民出版社 o
t|zz qzsz q
≈u 中国药典 q一部 qusss qz{ q
≈v 屠鹏飞 q高效液相法制定中药材和中药注射剂特征指纹图谱的
探讨 q中成药 ousss ouukzl }xty q
≈w 王 玺 o王文宇 o张克荣 o等 q中药 °≤指纹图谱相似性研究的
探讨 q沈阳药科大学学报 oussv ouskxl }vy
≈责任编辑 李 禾
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