全 文 ：马兜铃内酰胺 Œ对肾小管上皮细胞的损伤作用
李 彪t o李晓玫t 3 o张翠英u o王 璇u o蔡少青u
kt q北京大学 第一医院肾内科 o北京 tsssvw ~ u q北京大学 药学院 o北京 tsssv{l
≈摘要  目的 }了解马兜铃内酰胺 Œk„2Œl是否导致肾小管上皮细胞损伤 ∀方法 }以体外细胞培养的人类近端肾
小管上皮细胞系k‹Ž2ul为研究对象 o以马兜铃酸 Œk„„2Œl为阳性对照 o采用 ⁄‹释放试验检测 „2Œ的直接细胞损伤作
用 ~用相差显微镜 !电子显微镜观察细胞形态变化 o用流式细胞仪分析细胞 ⁄‘„含量以及细胞膜磷脂酰丝氨酸k°≥l表
达水平 o以了解细胞凋亡情况 ~采用 ∞Œ≥„法检测细胞培养上清液中细胞外基质成分纤连蛋白kƒ‘l 以及促纤维化细
胞因子转化生长因子 Βtk׊ƒ Βtl的分泌水平 ∀结果 }„2Œku qx ∗ us °ª#ptl具有浓度依赖的直接细胞损伤作用 ~细胞
形态 !⁄‘„含量及 °≥表达水平分析表明 o„2Œ在上述浓度范围内能够导致 ‹Ž2u细胞凋亡 o并能够导致 ‹Ž2u细胞分
泌 ׊ƒ Βt及 ƒ‘∀与 „„2Œ的作用进行比较发现 }在相同浓度情况下 o„2Œ的直接细胞毒作用强于 „„2Œo但其导致细胞
凋亡 !׊ƒ Βt及 ƒ‘分泌的能力弱于 „„2Œ∀结论 }马兜铃酸的代谢产物 „2Œ能够造成肾小管上皮细胞的损伤 o作用与
„„2Œ相似 ∀尽管其致损伤作用较 „„2Œ弱 o但仍有可能是含马兜铃酸中药导致肾脏损伤及其纤维化过程的毒性成分之
一 ∀
≈关键词  马兜铃内酰胺 Œ~马兜铃酸 Œ~肾小管上皮细胞 ~细胞凋亡 ~纤维化
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlst2ssz{2sy
us世纪 |s年代初 o比利时学者报道了应用含中
药广防己的减肥药可导致以进展性肾小管间质损害
为特征的慢性肾功能不全 o并称之为中草药肾病
k≤«¬±¨ ¶¨ ‹ µ¨¥ ‘¨³«µ²³¤·«¼o≤‹‘l≈t  ∀此后许多国内
外学者相继报告了类似的临床病例 o并发现致病相
关的中药还包括关木通以及含有这些草药成分的多
种中成药≈u2w  ∀目前的研究表明 o所谓的 ≤‹‘实际
上可能是由马兜铃属k¤µ¬¶·²¯²¦«¬¤l植物药物中所含
的马兜铃酸k¤µ¬¶·²¯²¦«¬¦¤¦¬§o„„l所致≈u ox  ∀由于马
兜铃酸 Œk„„2Œl在药物中含量较高 o一般认为导致肾
脏损害的主要毒性成分可能为 „„2Œ≈y  ∀然而 o马兜
铃内酰胺k¤µ¬¶·²¯²¯¤¦·¤° o„l是 „„在人体内的主要
代谢产物 o已有报道发现 o用 „„ 给动物灌胃后 o其
尿和粪便中均可检测到马兜铃内酰胺 Œk„2Œl o人口
服 „„后尿中也可测到 „2Œ≈z  ∀药物成分研究表明 o
„也是许多马兜铃属植物中的独立成分 o提示 „
是否具有毒性作用值得关注 ∀目前 o关于 „的毒性
作用及其对肾脏损害的影响尚缺乏研究资料 o因此 o
≈收稿日期  ussv2ts2s{
≈通讯作者  3 李晓玫 oר¯ }kstslyyxxttuu2uv{{ o∞2°¤¬¯}¬¬¤²°¨ ¬¯
ƒ °¨ §°¤¬¯q¦²° q¦±
≈基金项目  中国教育部教育振兴行动计划k|{x项目l专项基金
本文以 „„2Œ作为参照物 o观察比较了马兜铃内酰胺
Œk¤µ¬¶·²¯²¯¤¦·¤° Œo„2Œl对肾小管上皮细胞的损伤作
用 o以期进一步认识此类中草药导致肾损害的药物
毒性机理 ∀
1 材料与方法
1 .1 实验材料
马兜铃酸 Œ及马兜铃内酰胺 Œ由北京大学药学
院的作者自植物中提取纯化而得 o溶解于二甲基亚
砜k⁄≥’ o美国 ƒ¯ ∏®¤公司l中 o储液浓度为 x ª#pt o
于 w ε 保存 ∀细胞培养液 ⁄∞ 购自美国 ŠŒ…Œ≤’
公司 ∀转化生长因子 Βtk׊ƒ Βtl酶联免疫检测板购
自深圳晶美公司 ∀纤连蛋白kƒ‘l及 ƒ‘抗体均购自
美国 ≤‹∞Œ≤’‘公司 ∀辣根过氧化物酶标记的羊抗
兔 ŒªŠ第二抗体购自中山生物技术有限公司 ∀碘化
吡啶k°Œl及 ×µ¬·²±÷ p tss购自美国 ≥¬ª°¤公司 ∀ „±2
±¨ ¬¬±p ∂ 凋亡检测试剂盒购自北京宝赛生物技术有
限公司 ∀其他常用试剂均购自国内生物试剂公司 ∀
1 .2 细胞培养
人类近端肾小管上皮细胞系k‹Ž2ul≈{ 购自美国
„×≤≤公司 o采用含 ts h胎牛血清的 ⁄∞ 培养基
培养 o培养条件为 x h二氧化碳 !vz ε 恒温孵箱 ∀细
胞生长至 |x h 融合后 o换用含 s qsx h 胎牛血清的
⁄∞ 培养液 o继续培养 uw «o使细胞处于相对生长
#{z#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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静止状态后 o按下述不同实验所述浓度加相应刺激
物 „2Œ或 „„2Œo分别刺激 w{ «∀
1 .3 ⁄‹释放率试验
t ≅ ts{#pt细胞转种于 uw孔板中 o在正常培养
液中生长 w{ «o换用含 s qsx h胎牛血清的 ⁄∞ 培
养液继续生长 uw «o分别加入 u qx ∗ us °ª#pt的 „2
Œ或 „„2Œ刺激 w{ «后 o吸取细胞培养上清液 o用含
s qt h ×µ¬·²±÷2tss的细胞裂解液裂解贴壁生长的细
胞 o以生化分析仪分别测定细胞培养上清液及细胞
裂解液中 ⁄‹的含量 o计算 ⁄‹ 释放率 ∀
⁄‹释放率k h l €上清液 ⁄‹ 含量Πk上清液 ⁄‹ 含量 n
裂解液 ⁄‹含量l ≅ tss h
各组样品每次测定复孔 o取均值 ∀
1 .4 细胞形态观察
以未刺激的细胞作为对照 o对 „2Œ或 „„2Œ刺激
后的细胞采用相差显微镜观察细胞形态并照相 ∀离
心收集细胞培养上清液中漂浮的细胞以及胰蛋白酶
Π∞⁄ׄ消化收获的贴壁细胞后 o用适量 w ε 预冷的
°…≥洗 u次 o经 u h多聚甲醛固定 ts «以上 o包埋切
片 o以透射电子显微镜观察细胞超微结构并照相 ∀
1 .5 细胞 ⁄‘„含量测定
用胰蛋白酶Π∞⁄ׄ消化并获取各组 t ≅ ts|#pt
细胞 o用含 t °°²¯#pt ∞⁄ׄ的 °…≥洗 t次 o以 zs h
乙醇 !w ε 固定 tw «以上 ~离心去除固定液后 o°…≥
洗 t次 o加入 u ª#pt • ‘¤¶¨„在 vz ε 下温育 vs °¬±o
再加入 t ª#pt的 °Œ室温孵育 us °¬±o加入适量 °…≥
后于流式细胞仪kƒ„≤≥≤¤¯¬¥∏µo≤∞±˜∞≥× 软件 o美
国 …⁄公司l获取 tx sss个细胞进行检测 o分析 ŠsΠ
Št期峰前 ⁄‘„含量占细胞总 ⁄‘„ 含量的百分比 o
即亚二倍体含量k h l ∀
1 .6 细胞膜磷脂酰丝氨酸k°≥l表达检测
按试剂盒操作要求进行 o简要过程如下 }胰蛋白
酶消化获取各组 t ≅ ts|#pt细胞 o用 w ε 预冷的 °…≥
洗涤 u次 ot sss µ#°¬±pt离心 o弃上清 o用结合缓冲液
悬浮细胞 o分别加入 „±±¨ ¬¬± p ∂ p ƒŒ×≤ 和 °Œ混匀 o
避光 w ε 反应 vs °¬±o再加入适量结合缓冲液 o立即
于流式细胞仪kƒ„≤≥≤¤¯¬¥∏µo≤∞±˜∞≥× 软件 o美国
…⁄公司l获取 us sss个细胞进行分析 ∀ „±±¨ ¬¬± p ∂
和 °Œ均阴性者为正常细胞 o均阳性或 °Œ单阳者性为
坏死的细胞 o„±±¨ ¬¬± p ∂ 单阳性者为凋亡细胞 ∀结
果以凋亡细胞占全部细胞的百分比表示 ∀
1 .7 纤连蛋白kƒ‘l测定
采用间接竞争抑制 ∞Œ≥„法检测 ∀留取各组细
胞培养上清液为标本 o用 uss Λª#pt ƒ‘标准品包被
酶联板 ow ε 过夜 ~t h牛血清白蛋白于 vz ε 封闭 t
«~加入样品和抗 ƒ‘第一抗体 ovz ε 孵育 vs °¬±~加
入辣根过氧化物酶标记的第二抗体 ovz ε 孵育 vs
°¬±~再加入邻苯二胺2双氧水于室温下显色 ts °¬±ou
°²¯#pt硫酸终止反应 ~在酶标仪k美国 …⁄公司l读
取 w|y ±°处 Α值 ~根据标准曲线计算样本 ƒ‘含量 o
用相应样品细胞蛋白含量k…µ¤§©²µ§法l校正 ƒ‘测定
的结果 ∀各组样品每次测定复孔 o取均值 ∀结果表
达单位为 °ª#pt ∀
1 .8 转化生长因子 Βtk׊ƒ Βtl测定
采用双抗体夹心 ∞Œ≥„法检测 ∀留取各组细胞
培养上清液为标本 o按照试剂盒操作要求进行 o简要
过程如下 }用试剂盒提供的酸碱处理待测标本k激活
׊ƒ Βtl o激活后的标本加入已经包被抗人 ׊ƒ Βt单
克隆抗体的酶标板上 ovz ε 孵育 u «o洗板后加入生
物素化抗体工作液 ovz ε 孵育 u «o其后加入酶结合
物工作液 ovz ε 孵育 vs °¬±o室温避光显色 ts ∗ tx
°¬±o加入终止液后 o酶标仪读取 wxs ±°的 Α值 ∀根
据标准曲线计算标本 ׊ƒ Βt含量 o以相应样品细胞
中蛋白含量k…µ¤§©²µ§法l校正结果 ∀各组样品每次
测定复孔 o取均值 ∀结果表达单位为 °ª#pt ∀
1 .9 统计学处理
各组实验分别重复 w ∗ y次 o结果以 ξ ? σ表示 o
用 ≥°≥≥ ts qs 软件分析 o组间样本的比较采用 τ检
验 oΠ s qsx表示差异有显著的统计学意义 ∀
2 结果
2 .1 „2Œ及 „„2Œ导致 ‹Ž2u细胞释放⁄‹增高k见
图 tl
图 t „2Œ与 „„2Œ诱导 ‹Žu细胞释放 ⁄‹ k ν € wl
3 与对照组相比 Π s qsx 与 „„2Œ组相比 Π s qsx
如图 t所示 o与对照组及 ⁄≥’组相比 o„2Œ及
„„2Œ作用 w{ «均对细胞有直接损伤作用 o在 u qx °ª
#pt时 o„2Œ刺激 ‹Ž2u细胞释放 ⁄‹ 达对照组的
ku qs ? s qyyl倍k Ё s qsxl o而 „„2Œ仅为对照组的
#|z#
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kt qvt ? s qwyl倍k Π  s qsxl ~此后在 x ∗ us °ª#pt
内 o随浓度的增加 o二者刺激的 ⁄‹ 释放率逐渐增
高 o„2Œ在各浓度的刺激作用均较 „„2Œ更强 o在浓
度 ts °ª#pt时 o二者作用有显著差异k Π s qsxl ∀
至 us °ª#pt时 o„2Œ刺激 ‹Ž2u细胞释放 ⁄‹达对
照组的ku q{ ? t qtvl倍k Π s qsxl o而 „„2Œ仅为对照
组的kt q|w ? s quvl倍k Π s qstl ∀预实验中尚观察
到当 „2Œ或 „„2Œ为 ws °ª#pt或 {s °ª#pt以上浓
度时 o可导致细胞大量死亡k结果未显示l ∀
2 .2 „2Œ及 „„2Œ导致 ‹Ž2u细胞凋亡
2 .2 .1 细胞形态变化
相差显微镜下可见正常的 ‹Ž2u细胞为多角形 o
胞体扁平 o核染色质疏松 o„2Œkx °ª#ptl及 „„2Œ
ku qx °ª#ptl刺激 w{ «后 o有较多的细胞胞体缩小 !
变圆 o以至于脱落 o漂浮于细胞培养上清液中 o残留
的贴壁生长细胞 o其细胞形态由多角型转变为梭型 ∀
透射电子显微镜可见部分细胞胞体缩小 o细胞核与
细胞浆的比例增大 o细胞核形态多样 o核膜内陷 o核
染色质固缩 !成块状聚集于核膜下 o甚至形成帽状结
构 o呈现典型的细胞凋亡形态k见图 ul ∀
图 u 相差显微镜与电子显微镜观察细胞形态
„ q正常 ‹Ž2u细胞 …q⁄≥’刺激组 ≤ q„„Œ刺激组 ⁄q„Œ刺激组 ∞q„„Œ刺激组电镜 ƒ q„Œ刺激组电镜
2 .2 .2 ⁄‘„含量变化
由图 v可见 o⁄≥’组细胞亚二倍体含量与对照
组相比无明显差异 ∀ „2Œkx °ª#ptl及 „„2Œku qx °ª
#ptl刺激细胞 w{ «后 o细胞亚二倍体含量均显著高
于对照组k Π s qsxl ∀在 u qx °ª#pt的相同浓度下 o
„2Œ组的细胞亚二倍体含量略高于对照组 o但未达
到统计学差异k Π€ s qsxvl ~然而 o即使 „2Œ组kx °ª#
ptl在浓度高于 „„2Œ组ku qx °ª#ptl一倍的情况
下 o其作用后的细胞亚二倍体含量仍显著低于 „„2Œ
组k Π s qsxl o表明 „2Œ诱导 ‹Ž2u细胞凋亡的能力
较 „„2Œ减弱 ∀因此 o在此后的实验中 „2Œ的实验浓
度选择为 x °ª#pt ∀
2 .2 .3 ‹Ž2u细胞表达 °≥的变化
如图 w所示 o基础状态下 o‹Ž2u细胞可以表达
较低水平的 °≥ ∀与对照组相比 o„2Œkx °ª#ptl与
„„2Œku qx °ª#ptl作用 w{ «o均能诱导 ‹Ž2u细胞表
达 °≥显著增加k Π  s qstl ∀其中 o„2Œ在浓度较
高的情况下能够诱导细胞表达 °≥达 kz qvx ?
图 v „2Œ与 „„2Œ刺激 ‹Ž2u
细胞表达亚二倍体含量改变k ν € xl
k„„2Œqu qx °ª#pt ~ „2Œt qu qx °ª#pt ~ „2Œu qx °ª#ptl
3 与对照组相比 Π s qsx f 与 „„2Œ组相比 Π s qsx
图 w „2Œ与 „„2Œ诱导 ‹Ž2u细胞 °≥ k ν € wl
k„„2Œqu qx °ª#pt ~ „2Œqx °ª#ptl
3 与对照组相 Π s qsx f 与 „„2Œ组相比 Π s qsx
s q|wl h k Π s qstl o而 „„2Œ虽浓度较低但能够诱导
#s{#
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细胞表达 °≥高达ktu q{ ? u qu|l h k Π s qstl o二者
作用差异十分显著k Π s qstl o提示 „2Œ诱导细胞
表达 °≥的能力弱于 „„2Œ∀
2 .3 „2Œ及 „„2Œ导致 ‹Ž2u细胞分泌 ׊ƒ Βt
如图 x所示 o⁄≥’组与对照组均可有基础状态
的 ׊ƒ Βt 分泌 o两组间无明显差异 ∀与对照组相
比 ou qx ∗ us °ª#pt的 „2Œ或 „„2Œ作用 w{ «均能够
显著地刺激 ‹Ž2u细胞分泌 ׊ƒ Βt o随刺激剂量增高
其作用略有增强 ∀在 u qx °ª#pt时 o„2Œ刺激 ׊ƒ
Βt分泌量为kv qzz ? s q{wl °ª#ptk Ё s qsxl o „„2Œ
则为kv q|z ? s qzyl °ª#ptk Π s qsxl o二者差异不
显著 ~而在 us °ª#pt时 o„2Œ刺激 ׊ƒ Βt分泌量为
kw quv ? s qwzl°ª#pt k Π s qstl o而„„2Œ则高达
kx qxv ? s q|sl °ª#ptk Π s qstl o虽未达统计学差
异 o仍提示高浓度下 „„2Œ的效力可能略强于 „2Œ∀
图 x „2Œ与 „„2Œ诱导 ‹Ž2u细胞分泌 ׊ƒ Βtk ν € wl
3 与对照组相比 Π s qsx
2 .4 „2Œ及 „„2Œ导致 ‹Ž2u细胞 ƒ‘分泌增加
由图 y可见 o⁄≥’组与对照组均可有基础状态
的 ƒ‘分泌 o两组间无明显差异 ∀与对照组相比 ou qx
∗ us °ª#pt的 „2Œ或 „„2Œ作用 w{ «均能够显著地
刺激 ‹Ž2u 细胞分泌 ƒ‘∀ u qx °ª#pt „2Œ刺激
ƒ‘的分泌量为对照组的kt qvy ? s qs|l倍k Π 
s qstl o明显低于同等浓度的 „„2Œ的作用k Π 
s qsxl ~于 ts °ª#pt时 „2Œ作用最强 oƒ‘的分泌量
可达对照组的ku qs{ ? s qysl倍k Π s qsxl o与相同浓
度 „„2Œ的作用强度相似 ~此后随浓度增加 o„2Œ刺
激 ƒ‘的分泌量不再增加并呈下降趋势 ∀u qx °ª#
pt „„2Œ刺激的 ƒ‘分泌量为对照组的ku qvy ? s qxsl
倍k Π s qstl o但随浓度增加其刺激的 ƒ‘分泌量无
明显变化 ∀
图 y „2Œ与 „„2Œ诱导 ‹Ž2u细胞分泌 ƒ‘k ν € yl
3 与对照组相比 Π s qsx f 与 „„2Œ组相比 Π s qsx
3 讨论
既往研究表明≈z o|  „2Œ可能是临床上患者出现
远期肾损害的重要化学物质之一 ∀本研究以人类近
端肾小管上皮细胞系 ‹Ž2u细胞为研究对象 o证实了
外源性 „2Œ与 „„2Œ同样具有直接细胞损害作用 o其
作用具有浓度依赖性 o在同等浓度情况下 o„2Œ的致
细胞损伤作用较 „„2Œ更强 ∀这一结果为确认 „p Œ
的致肾损伤毒性作用提供了直接证据 o但其作用是
否与形成 ⁄‘„加合物相关尚有待证实 ∀
肾小管上皮细胞凋亡是肾间质纤维化发生机制
中的重要环节之一≈ts2tu  ∀以往已有学者在猪的近端
肾小管上皮细胞系 ≤°Žt中观察到外源性 „„2Œ在
一定浓度范围内可致细胞凋亡≈tv  o在本研究中也证
实了这一现象 ∀与此同时 o还发现 „2Œ也可以引起
‹Ž2u细胞凋亡 o表现为刺激后细胞亚二倍体含量增
多 !细胞超微结构出现凋亡征象和细胞膜磷脂酰丝
氨酸表达增加 o但其作用较 „„2Œ的作用弱 ∀这些结
果表明尽管 „„2Œ在体内大部分代谢为 „2Œo但其仍
可继续对肾小管上皮细胞产生病理性影响 o所导致
的细胞凋亡增加可能使细胞大量缺失 o从而形成病
理所见的肾小管裸基底膜特征≈w otw  o加之肾小管上皮
再生能力减退≈tx  o最终将导致肾小管萎缩 ∀
肾间质纤维化的发生主要与细胞外基质k∞≤l
的合成增加和降解减少有关 o׊ƒ Β是重要的促 ∞≤
合成的细胞因子之一≈ty  ∀本所以往的研究曾发现 o
在含马兜铃酸中药相关肾病患者的肾组织中 o在急
性病变阶段就可发现 ׊ƒ Βo结缔组织生长因子k≤×2
Šƒl和 ∞≤ 成分的表达增加≈tz  o国内其他学者也曾
报告外源性 „„2Œ可导致肾小管上皮细胞和肾间质
成纤维细胞中 ׊ƒ Β和 ∞≤ 成分的 °• ‘„ 表达增
加≈t{  o均提示此类药物可能通过刺激促纤维化细胞
因子表达增高而上调 ∞≤ 的合成 ∀在本研究不仅
在体外证实了 „„2Œ确实可刺激 ׊ƒ Β和 ƒ‘的蛋白
表达增加 o而且发现 „2Œ也具有与 „„2Œ相同的作
用 o在一定浓度条件下可刺激 ׊ƒ Β的分泌 o并能促
进 ∞≤ 成分 ƒ‘的合成 o只是在同等浓度情况下其
作用较 „„2Œ稍弱 ∀≥¦«°¨ ¬¶¨µ等曾用伤寒菌株 ׄtss
检测 „„2Œ与 „2Œ致突变的能力 o发现 „2Œ的致突
变能力仅为 „„2Œ的一半左右≈t|  o这与本研究中观察
到的 „2Œ在导致细胞凋亡和促进纤维化作用较 „„2
Œ弱的结果相一致 o表明 „„2Œ经机体代谢后形成的
„2Œ综合毒性作用有所减轻 ∀但是 o由于 „2Œ仍有
#t{#
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较强的致肾小管损伤能力 o以及其在体内可能长期
持续存在≈z  o故 „2Œ单独或与其他因素协同作用仍
可能介导了患者停药后肾脏损伤的持续性进展 ∀
总之 o本研究表明 o作为 „„2Œ在人体内的主要
代谢产物以及少量存在于马兜铃属植物中的 „2Œo
仍具有同 „„2Œ相似的肾脏毒性 o虽然其致肾脏损伤
的能力弱于 „„2Œo但由于其持续存在 o它可能部分介
导了肾脏损伤的持续性 ∀至于 „„2Œ与 „2Œ在体内
作用的差别以及 ⁄‘„ 加合物与肾间质纤维化的关
系 o值得进一步研究 ∀
≈参考文献 
≈t  ∂¤±«¨µº ª¨«¨ ° o⁄¨ ³¬¨µµ¨∏¬  o׬¨¯¨ °¤¤±¶≤ o ετ αλq•¤³¬§¯¼ ³µ²2
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小管间质肾病肾间质纤维化中的作用 q中华肾脏病杂志 o
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皮细胞转分化的研究 q中华肾脏病杂志 oussv ot| }y q
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≈责任编辑 古云侠 
黄芩苷对局灶性脑缺血
大鼠脑组织基因表达谱的影响
王 忠t 3 o应 康u 3 o张占军v o刘建勋t o
张小燕w o徐 立t o魏翠娥t o黄 燕u o王永炎x
kt q中国中医研究院 西苑医院 o北京 tsss|t ~
u q联合基因集团 上海研究院 o上海 usss{x ~v q北京中医药大学 临床医学院 o北京 tsss{y ~
w q北京师范大学 生命科学院 o北京 tss{zx ~x q中国中医研究院 o北京 tsszssl
≈摘要  目的 }研究黄芩苷对局灶性脑缺血大鼠脑组织基因表达谱的影响 o探索黄芩苷治疗脑缺血的药理作用
机制 ∀方法 }分别从假手术组 !局灶性脑缺血组 !黄芩苷治疗组 ≥⁄大鼠的脑组织中抽提总 • ‘„ o≤¼v o≤¼x荧光标记 o反
转录分别合成 ¦⁄‘„探针后 o与含有 w s|y条大鼠基因的 …¬²≥·¤µ基因表达谱芯片杂交 o„¬²± Š¨ ±¨ ³¬¬wsss…扫描仪扫描 o
Š¨ ±¨ °¬¬°µ²v qs软件分析表达信号 ∀结果 }大鼠局灶性脑缺血组差异表达的基因有 utt条 o其中 tu条基因上调 ot||条
基因下调 ∀黄芩苷治疗后差异表达的基因有 tzz条 o其中有 {|条基因上调 o而 {{条基因下调 ∀进一步分析发现 ot个
在模型组下调的基因经黄芩苷治疗后上调 ov个在模型组上调的基因经黄芩苷治疗后下调 ov个在模型组上调的基因
经黄芩苷治疗后表达进一步增强 ∀结论 }在基因组水平上黄芩苷可能通过多基因 o多途径调节大鼠脑缺血基因表达
谱而发挥药理作用 ∀
≈关键词  黄芩苷 ~基因表达谱 ~局灶性脑缺血 ~¦⁄‘„微矩阵
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlst2ss{v2sw
缺血性脑血管病严重危害人类健康 o由于脑供
血不足 o神经功能受到严重影响 ∀缺血性脑损伤机
制相当复杂 ∀无论哪种情况 o脑缺血时 o由于缺氧 o
„×°生成减少 o³‹值降低 o细胞内 ≤¤un增加 o谷氨酸
释放 o花生四烯酸增加 o导致细胞合成的基因激活 o
自由基合成酶增加 o白细胞聚集 o涉及信号传导 !基
质变化 !细胞因子等多个方面 o分子机制十分复杂 ∀
黄芩苷k≤ut ‹t{ ’ttl是临床常用药物清开灵注射液的
≈收稿日期  ussv2s|2ts
≈基金项目  国家 |zv重点基础研究发展规划项目2方剂关键科
学问题的基础研究kŠt|||sxxwl ~国家中医药管理局 /缺血脑病多因
子调控与修复及与排毒关系的实验研究0kusss2…22tyl
≈通讯作者  3 王忠 o应康 oר¯ }kstslyu{zxx||2yttw o ∞2°¤¬¯}
½«²±º ƒ ¶¬±¤q¦²°
主要成分 ∀本实验应用基因芯片对局灶性脑缺血大
鼠脑组织与假手术组鼠脑组织及黄芩苷治疗组基因
表达的差异进行比较研究 o发现黄芩苷在一定程度
上能逆转局灶性脑缺血中部分基因表达谱 o现报告
如下 ∀
1 实验材料与方法
1 .1 动物分组及药物 ≥⁄雄性大鼠 vs只k北京维
通利华实验动物有限公司 o合格证号 ≥≤÷Žp tt p ss
p ss{{l体重kuws ? uslªo随机分为 v组 }假手术组 !
模型组k局灶性脑缺血l与黄芩苷治疗组 ∀给药前禁
食 tu «∀黄芩苷k中国药品生物制品检定所提供l用
t h羧甲基纤维素钠配置ktss °ª#®ªptl o其他组给予
同体积的 t h羧甲基纤维素钠 ∀
1 .2 局灶性脑缺血模型的建立 按 פ°∏µ¤方法≈t  o
本实验室加以改进建立局灶性脑缺血动物模型 o≥⁄
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第 u|卷第 t期
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中 国 中 药 杂 志
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