全 文 ：Εφφεχτσ οφ ΛβΓπ ον τηειντραχελλυλαρ φρεε χαλχιυµ
χονχεντρατιον οφ χαρδιοµψοχψτεσινδυχεδ βψ ηψποξια ανδ ΚΧλ
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(t1 ∆επαρτµεντ οφ Χαρδιλολγψ, Τηε Φιρστ Αφφιλιατεδ Ηοσπιταλ, Νανϕινγ Μεδιχαλ Υνιϖερσιτψ, Νανϕινγ utssu| , Χηινα ;
u1 Σηανγηαι Ινστιτυτε οφ Οργανιχ Χηεµιστρψ, Χηινεσε Αχαδεµψ οφ Σχιενχεσ , Σηανγηαι usssvu , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ¼³²¬¬¤r≤¯ ¬±∏µ¼ °²§¨¯¬±·«¨ ¦∏¯·∏µ¨§±¨ ²±¤·¤¯ µ¤·¦¤µ§¬²°¼²¦¼·¨¶k≤ ¶l º¤¶ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §·²¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨
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≈责任编辑 方文贤
葛根素对大鼠急性脑缺血损伤 ¶³zs表达的影响
潘洪平 3 o莫祥兰 o杨嘉珍 o李吕力 o黄振录 o叶 劲 o黄 进
k广西壮族自治区人民医院 o广西 南宁 xvssutl
≈摘要 目的 }探讨葛根素对大鼠急性脑缺血损伤 ¶³zs表达的影响 ∀方法 }采用闭夹大脑中动脉造成局部
脑缺血模型 o对脑组织用免疫组化 ≥°法作 ¶³zs染色 o观察其 ¶³zs表达情况 ∀结果 }葛根素干预组 ¶³zs表达强
度显著强于单纯缺血组k Π s1stl ∀结论 }葛根素有上调大鼠急性脑缺血损伤时 ¶³zs表达的作用 ∀
≈关键词 葛根素注射液 ~急性脑缺血 ~¶³zs
≈中图分类号 u{x1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlsz2sxv{2sv
≈收稿日期 ussw2s{2uy
≈基金项目 广西壮族自治区卫生厅医药卫生科研课题
kusstszul
≈通讯作者 3 潘洪平 oר¯ }kszztlu|u{{wu o∞2°¤¬¯}³«³t|y{
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葛根素是从豆科植物野葛 Πυεραρια λοβατα
( • ¬¯¯§l «º¬的干燥根中提纯分离得到的 {2Β2 ∆2葡
萄吡喃糖2wχ oz2二羟基异黄酮 o具有扩张冠状动脉和
脑血管 o增加心 !脑血流量和降低心肌氧耗量 o调节
血管内皮细胞功能 o抗动脉粥样硬化 o抗氧化 !清除
自由基和抑制缺血再灌注损伤≈t !明显改善急性血
瘀模型大鼠的血液流变性≈u 等作用 o对急性心肌缺
血和脑缺血缺氧均有保护作用 ∀目前临床上广泛用
于治疗高血压 !冠心病心绞痛 !心肌梗死 !视网膜动
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第 vs卷第 z期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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静脉阻塞 !突发性耳聋和糖尿病≈v 等 ∀最近研究认
为葛根素及热休克蛋白 zsk¶³zsl对神经细胞均有
保护作用 o但其作用机制仍处于研究阶段 ∀本实验
进一步研究葛根素对大鼠急性脑缺血损伤时 ¶³zs
蛋白表达的影响 o探讨其保护神经元的作用机制 ∀
1 材料和方法
111 药物试剂 葛根素注射液ku °Βtss °ªl为广
东燕塘生物化学药业有限公司产品 o批号 sttuttt ~
s1| h ¤≤¯ 由本院制剂室提供 o批号 svsvuyst ~ts h
水合氯醛溶液由本院制剂室提供 o批号 sus{uz ~
¶³zsktΒtssl试剂及免疫组化试剂盒均购于福州迈
新生物技术有限公司 ∀
112 动物 •¬¶·¤µ大鼠 o体重 txs ∗ uss ªo雌雄各
半 o购于广西壮族自治区药品检验所 o许可证号 }
≥≤÷桂 ussv2ssst ∀
113 仪器 ¯ ¼°³∏¶
≅ xs显微镜 o¨¬¦¤石蜡切片
机 ∀
114 方法 tu只大鼠随机分成单纯缺血组和葛根
素干预组 o每组 y只 ∀参考文献≈w 方法 o首先对大
鼠行 ts h水合氯醛麻醉k¬³ovxs °ª#®ªptl后 o以电
钻等器械小心撬开颅骨 o暴露并闭夹大脑中动脉造
成局部特定区域急性脑缺血模型 o每组大鼠进行左
右侧自身对照 o以闭夹大脑中动脉侧为缺血侧 o另一
侧不闭夹作为正常对照 ∀葛根素干预组在缺血前
vs °¬±按 vs °ª#®ªpt行腹腔内注射葛根素注射液 o
单纯缺血组则按同样方法注射相同容量的不含葛根
素的注射用水 ∀所有标本均取材于有代表性的相关
区域 o经 w h中性甲醛固定 o常规脱水 o石蜡包埋 o∞
染色及 ¶³zs染色 ∀ ¶³zs染色用免疫组化 ≥°法 o
具体步骤参照福州迈新生物技术有限公司试剂使用
说明书中介绍的方法 ∀用 °
≥代替一抗作阴性对
照 ∀免疫组化染色结果判断 }细胞质和r或细胞核中
出现棕黄色颗粒者为阳性细胞 o用北航医学图像分
析管理系统 ≤ ≥中的病理图像分析软件分析切
片 ¶³zs阳性强度 ∀每张切片随机采集 w幅图k ≅
wssl o测其平均灰度 o取平均值 ∀灰度值越大 o阳性
强度越弱 ∀
115 统计方法 实验数据输入计算机处理 o以 cξ ?
σ表示 o采用 ≥°≥≥统计软件对实验结果进行方差分
析及组间差异比较 ∀
2 结果
单纯缺血组及葛根素干预组的对照组 ¶³zs呈
阴性或弱阳性表达 o阳性表达细胞为锥体细胞k图
tl o在实验组中表达增强 o锥体细胞及颗粒细胞均表
达 o葛根素干预组表达强度较单纯缺血组强k图 u o
图 vl ∀各组灰度值如表 t ∀
表 t 单纯缺血组及葛根素干预组各病例神经细胞
¶³zs表达情况kcξ ? σ, ν yl
组别 剂量r °ª#®ªpt ¶³zs灰度值
单纯缺血对照组 txz q|t ? x qtv
单纯缺血实验组 tu| qwu ? z qsxtl
葛根素干预对照组 vs txz qw{ ? w qvx
葛根素干预实验组 vs tww qst ? u quyu ovl
注 }与单纯缺血对照组比tl Π s1st ~与葛根素干预对照组比
ul Π s1st ~与单纯缺血实验组比vl Π s1st
图 t 葛根素干预对照组 ≥° ≅ wss
¶³zs染色部分神经元细胞质弱阳性
图 u 葛根素干预实验组 ≥° ≅ wss
¶³zs染色神经元细胞质强阳性
图 v 单纯缺血实验组 ≥° ≅ wss
¶³zs染色神经元细胞质阳性
3 讨论
脑缺血所致的神经元损伤其生理病理过程复
杂 ∀由于脑缺血 o使神经细胞缺氧 o神经元对缺氧十
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第 vs卷第 z期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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分敏感 ∀缺氧使细胞线粒体氧化磷酸化受抑制 o
×°生成减少 o钙泵等功能低下 o从而致细胞内
≤¤u n等物质积蓄 o氧自由基等活性氧类物质增多 o使
细胞损伤 ∀
自 t||y年 ≥¤·²等≈x 首次在细胞水平测出热休
克蛋白的表达以来 o人们对其结构和功能进行了深
入研究 o其中热休克蛋白 zs是生物进化过程中最为
保守的一族蛋白 o在应激刺激下 o¶³zs表达增加 o
被列为可塑性相关基因之一 ∀业已证明 o¶³zs具
有/分子伴娘0k°²¯ ¦¨∏¯¤µ¦«¤³¨µ²±¨ ¶l的功能 ∀所谓分
子伴娘系统就是一个大的圆柱形复合体 o其中间的
空腔能为蛋白的折叠提供一个隔离的环境 ∀ ¶³zs
可易化变性蛋白的修复 o帮助新合成的多肽键的生
理折叠与伸展 o是为聚集与解聚提供在细胞内来回
穿梭的一分子之伴 ∀ ¶³zs可与未折叠的多肽链的
疏水片断结合与释放 o结合可使未折叠的多肽链更
加稳定 o而控制释放可使折叠更顺利 ∀ ¶³zs还与
×°有高亲和性 o它与变性蛋白多肽结合后 o借助
×°水解释放出能量来解开多肽链的错误折叠 o且
有可能使其再次成熟为细胞内的正常蛋白 o从而使
细胞的功能和结构得到恢复 ∀ ¶³zs的存在对于核
糖体装配后复位是必不可少的 o并且可改善新生核
糖体和蛋白的合成 o加速细胞恢复 o同时 ¶³zs也可
与细胞骨架蛋白相结合 o保护细胞骨架的结构 o防止
蛋白发生变性 o故控制细胞内 ¶³zs的水平可作为
临床上脑保护的新方法 ∀因此 o诱导 ¶³zs的表达
增加可能是内源性脑保护机制之一≈y ∀
有研究认为葛根素在机体缺血再灌注时抑制细
胞内 ≤¤u n的聚集 o减轻细胞损伤 o对损伤的神经细
胞有保护作用 o这与葛根素通过上调
≤¯ u蛋白的
表达 o下调
¤¬蛋白的表达抑制神经细胞凋亡而发
挥神经保护作用相关≈z o{ ∀本研究显示葛根素可减
轻缺血性大鼠脑细胞的损伤 o提高其 ¶³zs蛋白表
达水平 ∀葛根素对神经细胞损伤的保护作用很可能
通过诱导细胞表达 ¶³zs而实现的 ∀
≈参考文献
≈t 潘洪平 q葛根总黄酮和葛根素的药理研究进展 q广西医学 o
ussv ouxktsl }t|wt q
≈u 潘洪平 o杨嘉珍 o李吕力 o等 q葛根素注射液对急性血瘀模型
大鼠血液流变性改善作用的实验研究 q中国中药杂志 oussv o
u{ktul }ttz{ q
≈v 潘洪平 q葛根 !牛磺酸及其复方制剂降血糖作用的研究进展 q
中成药 oussu ouwkvl }uut q
≈w 张均田 q现代药理实验方法学 q北京 }北京医科大学中国协和
医科大学联合出版社 ot||{ qtuwt q
≈x ≥¤·² o≥¤¬·² o ¤·¶∏®¬o ετ αλq ¶³zs ¬¶ ¶¨¶¨±·¬¤¯ ·²·«¨ ±¨ ∏µ²2
³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨¦·²©«¨¤·¶«²¦®q Βραιν Ρεσot||y ozws }ttz q
≈y 陈 君 q热休克蛋白 zs家族的功能和在神经保护中的作用 q
国外医学#麻醉学与复苏分册 oussv ouwkvl }txw q
≈z 曹建忠 o刘书山 o杨光田 q鼠急性全脑缺血再灌注后葛根素对
海马 ≤t区
¦t2u o
¤¬表达的影响 q中国药理学通报 oussv ot|
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( Πεοπλε. σ Ηοσπιταλ οφ Γυανγξι Αυτονοµουσ Ρεγιον , Ναννινγ xvssut , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨¦·²©³∏¨µ¤µ¬± ²±·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ¶³k«¨ ¤·¶«²¦®³µ²·¨¬±lzs ¬±·«¨ µ¤·¶º¬·«¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬±∏µ¼
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