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用胶原诱导性关节炎探讨中药治疗类风湿性关节炎的方法学研究



全 文 :用胶原诱导性关节炎探讨
中药治疗类风湿性关节炎的方法学研究
吕爱平 3 o吴 萍 o鞠大宏 o贾宏伟 o李 梢 o徐世杰 o赵 宁 o肖 诚 o
吴 皓 o滕静茹 o李 艳 o王少君 o周桂琴 o张 浩 o王安民
k中国中医研究院 基础理论研究所 o北京 tsszssl
类风湿性关节炎 kµ«¨ ∏°¤·²¬§¤µ·«µ¬·¬¶o• „l是一种以关节
病变为主的全身性疾病 o对人体健康危害极大 o目前在国内
外仍属于病因不明 o难以治疗和预防的一种疾患 ∀据估算 o
我国 • „患者约有近千万 ∀中医药在长期的临床实践中积
累了治疗 • „的经验 o因此 o积极探索中医药治疗 • „的作用
机制和建立中医药治疗 • „ 药效学评价体系是当前中医药
治疗 • „研究中的重要课题 ∀现代药理学研究已经形成了
一系列药效评价方法体系和指标体系 o中药的药效评价都应
该充分采用这些方法和指标体系 ∀由于中药的多途径 !多靶
点 !多层次和多成分的作用特点 o在利用现有药效评价方法
和指标体系过程中应该注意整合和比较 ∀
自 t|{w年以来 o笔者课题组一直从事 • „发病机理及中
药治疗 • „药效学研究 o先后承担了多项国家级课题 o在中
医药治疗 • „药效评价方法学研究方面做了一些工作 ∀
1 中医药治疗 • „药效研究用动物模型
动物模型是药效学评价的实验对象 ∀选择合适的动物
模型是评价中医药治疗 • „的药效学的重要内容 ∀鉴于 • „
是一种具有较强基础研究的疾病 o同时已建立了多种相关动
物模型用于基础研究和应用研究 o因此 o从已有动物模型中
寻找合适的动物模型成为首要任务 ∀根据 • „ 发病特点和
免疫病理学特点 o胶原诱导性关节炎动物模型k¦²¯ ¤¯ª¨ ±2¬±2
§∏¦¨§¤µ·«µ¬·¬¶o≤Œ„l被认为是中医药治疗 • „ 药效学研究用
的较理想动物模型 ∀
1 q1 ≤Œ„动物模型 ≤Œ„是一种用同源或异源性 ŒŒ型胶原
k≤ŒŒl免疫动物而引发的一种慢性 !多发性关节炎 o因为其发
病与  ‹≤ 相关 o性别相关 !关节病变 !≤ŒŒ自身免疫以及治疗
与人类 • „相似 o是一种比较理想的人类 • „模型≈t2tt  o被认
为是最适合于研究人类 • „的动物模型 o因此本实验室采用
≤Œ„动物模型进行 • „的药效方法学研究 ∀
1 q2 ≤Œ„动物模型的证候特点 从对 • „的中 !西医诊断标
准上比较 o可以发现中医证候观察除了普遍的神色形态 !舌
≈收稿日期  ussv2st2uu
≈基金项目  国家科技部国家重点科技项目k攻关l计划k||2
|u|2sw2swl ~国家自然科学基金kv|{zs|xul
≈通讯作者  3吕爱平 oר¯ }kstslywsyzytt o∞2¤°¬¯ }¯¤³ƒ­½­·q¦²°
脉等之外 o尤其注重疼痛的性质及其对外环境的反应k如寒 !
热l !变化趋势k晨重 !夜重等l之类特点 ∀证候赖以确立的基
本要素即为症状和体征 o因此有人提出症状的证候属性及量
化方式在于 }症状出现的频率 ~症状持续时间 ~症状的性质程
度 ~症状与外界刺激的关系 ∀对 ≤Œ„ 模型的研究结果表
明≈tu  }≠ ≤Œ„大鼠免疫 z §后 o分别受寒 !热刺激而引起疼痛
加重或减轻的表现不明显 ∀提示 ≤Œ„ 的病变具有一定局限
性 o但不能据此区分为不同的证候 ∀  病变初起局部的急性
炎症反应上 ≤Œ„有类似于热证的表现 o但疼痛未体现出/ 遇
热辄加 !遇冷辄舒0的特点 o且肛温变化不明显 o因此尚不足
以判断 ≤Œ„模型属于何种证候 o具有何种证候演变规律 ∀ ≈
有研究者认为由造模动物收集到的毛色 !体重 !食量 !拱背 !
反应迟钝 !活动度改变等症状 !体征 o绝大多数不携带证的信
息 o亦即对证没有特异的诊断意义≈tv  o提示干预措施相同的
单纯/病0的动物模型中 o/证0含量可以基本忽略 o或难以辨
识 ∀作为单纯的疾病模型 o≤Œ„的证候特征不够明显 ∀
1 q3 ≤Œ„动物模型的中医证候可转换性 本研究中单纯
≤Œ„大鼠的证候特征不够明确 o但并不意味着 ≤Œ„大鼠不存
在证候得以表现的生物学基础 o以及不能否定这种潜质在特
定条件下可以得到反映 ∀有关研究表明≈tw  o寒湿因素等可
以导致 ≤Œ„鼠的发病率增高 o在诱发出多种肾虚状态后的
≤Œ„鼠 o表现为免疫系统 !内分泌 !骨代谢和关节等多方面不
同的改变 ∀在 ≤Œ„鼠的诱导阶段 o给予人工风寒湿与风湿热
环境等复合影响 o可分别诱发出 • „的风寒湿痹与风湿热痹
模型 o并且以上不同的刺激因素会引起 ≤Œ„鼠免疫与内分泌
的不同改变 o提示 ≤Œ„大鼠具有随着不同干预措施的影响 o
而表现为不同证候的免疫 !内分泌 !病理学基础 ∀而单纯
≤Œ„模型 o随着复加干预措施的不同 o可转化为或各种肾虚 !
或风寒湿 !或风湿热等多种不同的证候 o其前提可能也在于
≤Œ„模型本身的证候特点不明显 ∀也正因为如此 o≤Œ„ 动物
模型在某些证候干预因素作用下 o具备证候的潜质 o即具有
证候的可转换特性 ∀
通过证病结合研究方法和途径的研究表明≈w ott otw otx  o在
单纯 ≤Œ„模型的基础上 o随复加于 ≤Œ„ 大鼠干预措施的不
同 o可以将单纯 ≤Œ„模型转化为各种肾虚 !或风寒湿 !或风湿
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第 u|卷第 y期
ussw年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ y∏±¨ oussw
热等多种不同证候 o从而为中医药治疗 • „证病相关药效研
究规范提供了有效的证病动物模型 o为中药复方药效学研究
的规范化提供科学依据 o为开发出符合中药复方研究规范 !
治疗 • „的某一主要证型的疗效好的新药奠定良好的基础 ∀
2 中医药治疗 • „的药效作用机制比较研究
中医药治疗 • „ 药效方法学研究的首要任务是对经过
临床验证的有效方剂或药物在整体动物模型上进行多指标
的药效学观察 o在联系中医药理论的基础上 o制订中医药治
疗 • „的药效方法学 ∀本课题组曾对多种传统古方和经验
方进行了药效学评价研究 ∀在此基础上 o重点收集了对 • „
具有较好临床治疗效果 !同时又代表不同中医治疗法则的中
药制剂 ) 宣发膜原方k中医和法代表l !益肾蠲痹丸k中医补
法代表l !清络饮r温络饮k中医清法和温法代表l !雷公藤制
剂k中医免疫抑制剂代表l o选用 ≤Œ„ 动物模型 o对所选中药
复方进行系统而深入的药效学筛选 ∀
2 q1 宣发膜原方r达原饮 宣发膜原法本为吴又可创立的
治疗温病大法 o本实验室通过对痹证k• „l的中医发病理论
的学习和探讨 o受5温疫论6中伏邪发病的启示 o从病因 !病
位 !发病角度分析 o认为邪伏膜原致痹是痹证发病机理之一 o
可以用宣发膜原法对痹证进行治疗≈ty otz  ∀本试验以 ≤Œ„ 作
为 • „的动物模型 o以宣发膜原法代表方达原饮的加减方用
于 ≤Œ„的治疗 o已获得了一定的实验结果 o一定程度上说明
宣发膜原法具有免疫调节作用 ∀
实验结果表明≈t{2ut  o宣发膜原法可以降低大鼠 ≤Œ„发病
率 o推迟 ≤Œ„发病时间 o并降低发病和减轻关节炎程度 ∀抑
制 ≤Œ„关节滑膜组织的炎细胞浸润 !血管增生和血管翳的形
成 o减少滑膜组织增生 o缓解关节肿胀 o减轻关节软骨和骨的
损伤 ~能够抑制滑膜细胞的增生 o减少 „型滑膜细胞在滑膜
组织中的比例 o减少滑膜细胞中粗面内质网 !高尔基体 !线粒
体 !小泡和中间丝的含量 o影响滑膜细胞的分泌功能 ~可以减
少 ≤Œ„动物血清中肿瘤坏死因子2Αk·∏°²µ±¨ ¦µ²¶¬¶©¤¦·²µ2Αo
בƒ2Αl的含量 o增加干扰素2Χk¬±·¨µ©¨µ²±2ΧoŒƒ‘2Χl的含量 o调
节 ≤Œ„动物的免疫功能 ~可以降低动物血清中抗 µ型胶原免
疫球蛋白 Š k¬°°∏±²ª¯²¥∏¯¬± Š oŒªŠl抗体的含量 o其 ŒªŠ亚型
ŒªŠt oŒªŠu¤oŒªŠu¥也有不同程度的降低 o提示宣发膜原法具
有免疫抑制作用 ~降低 ŒªŠu¤n u¥rŒªŠt比值 o提示在免疫抑
制的同时 o具有免疫调节作用 o即能使关节炎动物以 ׫t型
为主的免疫反应转为 ׫u型免疫反应 o从而达到阻止 µ型胶
原免疫对关节的破坏作用 ∀
宣发膜原法可以显著减轻 ≤Œ„小鼠踝关节肿胀 o减少滑
膜细胞增生 o明显缓解滑膜组织充血水肿 o显著减少浸润的
炎细胞数量和血管翳 o明显减轻软骨及骨的破坏 ~降低血清
中 בƒ2ΑoŒƒ‘2Χ及白细胞介素 yk¬±·¨µ¯¨ ∏®¬±2y oŒ2yl水平 o升高
血清中白细胞介素 tsk¬±·¨µ¯¨ ∏®¬±2ts oŒ2tsl水平 o说明宣发膜
原法可以调节 ׫tr׫u 免疫平衡网络 o调节细胞因子的水
平 o减少关节局部滑膜炎和软骨的破坏 o并抑制滑膜细胞对
蛋白酶类的分泌来减轻关节损伤及软骨的破坏 ~而且宣发膜
原法可以降低 ≤Œ„小鼠血清中异常增高的抗 ≤ŒŒ抗体 o可以
降低血中 ≤⁄wn淋巴细胞 o升高 ≤⁄{n淋巴细胞 o使得 ≤⁄wr
≤⁄{比值降低 o表明其可以在一定程度上抑制机体免疫反
应 ~另外 o宣发膜原法可以通过降低 × 细胞增殖功能来调节
细胞免疫 o降低 …细胞水平调节体液免疫来减少关节的损
伤 ~而且宣发膜原法可以通过对小肠 °¨ ¼¨ µ−¶³¤·¦«中 ≤⁄wn
和 ≤⁄{n × 细胞分布数量以及分泌型免疫球蛋白k ¬¨¦¨µ·¬²±
¬°°∏±²ª¯²¥∏¯¬± „ o¶Œª„l的调节对黏膜免疫功能产生一定的影
响 ∀
2 q2 益肾蠲痹丸 益肾蠲痹丸是老中医朱良春主任医师根
据数十年的临床实践而总结出来的治疗/痹0的有效处方 o具
有温阳 !益肾 !壮督 !搜风剔邪 !蠲痹通络的作用 o以及调节机
体免疫机能 !调整骨质代谢的功效 ∀方中侧重运用虫类搜风
之品 o以达到抗炎 !消肿 !止痛之功 o是经卫生部批准为临床
治疗 • „的国家三类新药 ∀
实验结果表明≈y  }给动物灌服益肾蠲痹丸水溶液 t个月
后 o在其关节的滑膜组织中淋巴细胞浸润明显减少 o炎症减
轻 o胶原纤维沉着局限于滑膜细胞下 ∀关节软骨细胞缺损部
位可见软骨细胞增生 !修复 ∀而且 o益肾蠲痹丸可以显著降
低脾脏印片及血涂片的酸性磷酸酶和 Α2醋酸萘酯酶阳性细
胞 o而滑膜组织中的琥珀酸脱氢酶和细胞色素酶的结果无明
显变化 o并可以减少关节滑膜组织中抗 ŒŒ型胶原抗体或抗
原抗体复合物 ∀
2 q3 清络饮r温络饮 根据王永炎院士的学术思想 o认为
• „是/新病入络0的代表病证 o病变核心在于/病络0 ∀对 • „
首次提出/外邪入络 o邪伏肢节脉络0的发病学特点 !/毒损肢
节脉络 o络道亢变 o络脉虚滞0的病因病机特点 !/ 散寒清热
k强调分证论治l o截毒防变k强调早期治疗l o通畅络脉k强调
矫正病理l0的治则治法特点等新观点 ~剖析了 • „ 证候 !方
剂偏性的内在关联 o确立了从不同偏性证治方剂的作用探讨
• „分证论治机理的研究思路 ∀
清络饮 !温络饮是在长期临床实践基础上总结出的 !针
对 • „的两种基本证候进行分证论治的代表方剂 ∀其中清
络饮是以寒性药物为主组成的 !针对 • „ 湿热阻络证的方
剂 ~温络饮是以热性药物为主组成的 !针对 • „ 寒湿阻络证
的方剂 ∀温络饮可散寒除湿 o通络开痹 ~清络饮可清热除湿 !
通络开痹阻 o两首方剂并贯彻了针对 • „/ 毒损肢节络脉 o络
道亢变 o络脉虚滞0的主要病机 ∀
实验结果表明≈uu  }清络饮 !温络饮两方均可明显改善
≤Œ„免疫侧 !继发侧疼痛 !踝关节肿胀 o降低关节炎指数 ~抗
炎 !减少滑膜毛细血管新生 !防止滑膜血管翳的形成 !抗血管
翳损伤 o改善软骨破坏 ~并具有减少溶酶体 o保护细胞核结
构 o减少基质纤维 o减轻软骨细胞纤维化变性的作用 ~两方均
可降低 ≤Œ„ 血清 בƒ2ΑoŒ2y水平 o并调节其分泌节律 ~纠正
≤Œ„大鼠 ‹°„轴功能紊乱 !调节下丘脑2垂体2肾上腺轴k«¼2
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中 国 中 药 杂 志
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³²·«¤¯¤°¬2³¬·∏¬·¤µ¼2¤§µ¨±¤¯ o‹°„l2免疫系统k以 ׫tr׫u细胞因
子为效应机制l功能 ~两方均可显著减少 ≤Œ„ 大鼠滑膜局部
病灶内基质金属蛋白酶 vk°¤·µ¬¬ ° ·¨¤¯ ²¯³µ²·¨¬±¤¶¨v o °vl°•2
‘„的合成 o调节滑膜  °vr组织基质金属蛋白酶抑制2tk·¬¶2
¶∏¨ ¬±«¬¥¬·²µ²© °¤·µ¬¬ ° ·¨¤¯ ²¯³µ²·¨¬±¤¶¨¶2t o׌°2tl平衡 ∀
另外 o清络饮和温络饮在治疗 • „ 作用上也有不同之
处 ∀清络饮在改善踝关节肿胀 !改善 ≤Œ„ 继发侧病理变化 !
对抗肾上腺伤害性刺激等方面优于温络饮 ~而温络饮具有
/补骨生髓0样作用 o清络饮不明显 ∀提示不同偏性的清络
饮 !温络饮矫正 ≤Œ„局部特异性病变的作用 o可能是通过对
≤Œ„的局部病变 !整体状态进行不同途径 !不同形式的调节
来实现的 ∀而且 o‹°„轴可能是温络饮的直接作用环节 o体
现在 }温络饮对 ≤Œ„ 大鼠 ‹°„轴有关激素的分泌有明显影
响 o温络饮可下调 yΒss otuΒss osΒss v个时间段中 ≤Œ„ 血中
的 „≤׋ !皮质醇水平 ∀清络饮则可下调 yΒss时 ≤Œ„异常增
高的皮质醇水平 o同时提高 ≤Œ„大鼠 t{Βss时血浆皮质醇分
泌水平 o使 ≤Œ„皮质醇 !促肾上腺皮质激素k¤§µ¨±²¨ ²µ·¬¦²·µ²³¬¦
«²µ°²±¨ o„≤׋l分泌的量及其节律接近正常 o可能是直接抑
制 ≤Œ„的炎性细胞因子分泌水平 o通过反馈机制改善 ≤Œ„的
肾上腺病变 o矫正 ≤Œ„模型 ‹°„轴的紊乱 ∀同时 o温络饮抑
制  °v°• ‘„在滑膜组织中的表达 o但对滑膜 ׌°2t水平
无明显影响 ~而清络饮在抑制滑膜  °v°• ‘„表达的同时 o
可上调滑膜 ׌°2t水平 ∀
2 q4 雷公藤制剂 雷公藤是公认的治疗 • „疗效确切的单
味中药 o以祛风除湿 o舒筋活血通络 o消肿止痛为主 ∀味辛
苦 o性凉k或寒l o入肝 !脾二经 o行十一经络 ∀功能 }清热解毒
杀虫 o祛风除湿 o舒筋活血通络 o消肿止痛 ∀用于治疗风湿痹
痛 o白虎历节 o跌打损伤 o疔疮疖肿 o皮肤瘙痒等症 ∀临床应
用以精制品k分离提取物l为主 o其中雷公藤多甙片最为常
用 ∀
实验结果表明≈t|  o雷公藤多甙片可以降低动物 ≤Œ„ 发
病率 o推迟 ≤Œ„ 发病时间 o并降低发病和减轻关节炎程度 ∀
抑制 ≤Œ„关节滑膜组织的炎细胞浸润 !血管增生和血管翳的
形成 o减少滑膜组织增生 o缓解关节肿胀 o减轻关节软骨和骨
的损伤 ~能够抑制滑膜细胞的增生 o减少 „型滑膜细胞在滑
膜组织中的比例 o减少滑膜细胞中粗面内质网 !高尔基体 !线
粒体 !小泡和中间丝的含量 o影响滑膜细胞的分泌功能 ~可以
减少 ≤Œ„ 动物血清中 בƒ2Α和 Œ2y水平的含量 o增加 Œƒ‘2Χ
和 Œ2ts的含量 o调节 ≤Œ„ 动物的免疫功能 ~纠正 ≤Œ„ 大鼠
‹°„轴功能紊乱 !调节 ‹°„轴2免疫系统k以 ׫tr׫u细胞因
子为效应机制l功能 ~降低动物血清中抗 µ型胶原 ŒªŠ抗体
的含量 ~可以降低血中 ≤⁄wn 淋巴细胞 o升高 ≤⁄{n 淋巴细
胞 o使得 ≤⁄wr≤⁄{比值降低 o表明其可以在一定程度上抑制
机体免疫反应 ~另外 o雷公藤多苷可以通过降低 × 细胞功能
来调节细胞免疫 o降低 …细胞水平调节体液免疫来减少关节
的损伤 ∀
研究结果表明 ox个治疗 • „的中药制剂的药效学研究 o
对于在 • „发病过程中病理损伤 !免疫抑制 !免疫耐受 !黏膜
免疫及抗炎等环节的指标有了一定结果 o为初步建立一个能
明确体现 • „中免疫抑制 !免疫耐受 !黏膜免疫及抗炎等关
键环节的指标体系 o提供了一套系统规范的中药治疗 • „的
药效学研究方法奠定了基础 ∀
3 中医药治疗 • „药效方法学建议
通过对比分析上述中药制剂的中医理论 !现代免疫学 !
免疫病理学和细胞学等方面的研究 o笔者对中医药治疗 • „
的药效方法学提出以下建议 }≠ 动物模型 }实验动物宜采用
•¬¶·¤µ大鼠 o⁄…„rt小鼠 ~动物模型应采用国际公认的 ŒŒ型
胶原诱导性关节炎 ∀  药效指标选择 }采用能够明确体现
• „中免疫抑制 !免疫耐受 !黏膜免疫及抗炎等关键环节的指
标体系 o包括疼痛 !肿胀 !病理损伤k包括半定量计分l !超微
结构改变 !血清细胞因子k代表 ׫t和 ׫u型细胞因子 o如 Œ2
y oבƒ2ΑoŒƒ‘2ΧoŒ2ts等l ! ° !黏膜免疫k³¨ ¼¨ µj¶³¤·¦«中淋
巴细胞组成 oŒª„ 的分泌l !整体免疫k× o…淋巴细胞免疫功
能l等方面 ∀
≈参考文献 
≈t  ≤²²® „ ⁄o •²º¯ ¼¨  o •¬±¨ ¶… ⁄o ετ αλq„±·¬¥²§¬¨¶·²·«¨ ¦²¯ ¤¯2
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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≈责任编辑 古云侠 
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中医药信息杂志 ousst okzl }tt q
≈t{  贾红伟 o吕爱平 o徐世杰 o等 q宣发膜原法对胶原诱导性关节炎
大鼠免疫功能的实验研究 q中国中医药信息杂志 oussu okxl }
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≈t|  贾红伟 o吕爱平 o赵 宁 o等 q宣发膜原法和雷公藤制剂对大鼠
胶原诱导性关节炎影响的对比研究 q中国实验方剂学杂志 o
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≈us  吕爱平 o刘振丽 o张枢明 o等 q宣发膜原法对免疫性关节炎k痹
证l小鼠免疫功能的影响 q中国中西医结合杂志 ot||z otzkttl }
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≈ut  赵 宁 o贾红伟 o吴 萍 o等 q从黏膜免疫角度探讨中医药治疗
类风湿性关节炎的作用机理 q中国中医基础医学杂志 oussu o{
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≈uu  李 梢 o吕爱平 o贾宏伟 q寒热方剂对胶原性关节炎大鼠的治
疗作用及对滑膜细胞超微结构的影响 q中国中医药信息杂志 o
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≈责任编辑 古云侠 
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第 u|卷第 y期
ussw年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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