全 文 ：wu1s{ h o„µªµ¤¬¶¨§·²tty1|x h ¤±§ts{1|y h oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼1 „©·¨µtus °¬± ²©µ¨³¨µ©∏¶¬²±o·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²© Š¯∏§¨¦µ¨¤¶¨§¥¼ tw1xx h
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≈责任编辑 方文贤 
栀子苷阻抑脑缺血损伤级联反应的作用环节探讨
朱晓磊 3 o张 娜 o李澎涛 o蒋玉凤 o徐 雅
k北京中医药大学 基础医学院 o北京 tsssu|l
≈摘要  目的 }观察持久性局灶性脑缺血损伤大鼠脑组织 בƒ2ΑoŒ2tΒ及血浆 √• ƒ !血清 ‘≥∞含量的变化 o探
讨栀子苷阻抑脑缺血损伤级联反应的作用环节 ∀方法 }成年雄性 ≥⁄大鼠 o随机分成假手术对照组 !模型组 !栀子苷
组 !三七总皂苷组 ∀使用血管腔内尼龙线栓塞术造成大鼠持久性大脑中动脉栓塞k°≤„’l o制作缺血 tu ouw «的局
灶性脑缺血模型 o应用放射免疫法k•Œ„l检测脑组织匀浆 בƒ2Α和 Œ2tΒ含量与血清 ‘≥∞含量 o应用酶联吸附免疫
法k∞Œ≥„l检测血浆 √ • ƒ含量 ∀结果 }缺血 tu «与缺血 uw «o伴随脑组织 בƒ2ΑoŒ2tΒ含量升高 o血浆 √• ƒ !血清 ‘≥∞
含量呈现同步的升高 ∀栀子苷可以明显阻抑缺血 tu «和 uw «脑组织 בƒ2Α和 Œ2tΒ含量升高 o还可阻抑缺血 tu «
和 uw «血浆 √ • ƒ含量的升高 o但对缺血 tu «和 uw «血清 ‘≥∞含量无明显影响 ∀结论 }栀子苷可阻抑脑缺血损伤后
致炎因子 בƒ2Α和 Œ2tΒ及血浆 √ • ƒ的表达 o显示出其抗缺血后血管内皮细胞损伤 !在炎症病理环节阻抑脑缺血损
伤级联反应的作用 ∀
≈关键词  בƒ2Α~Œ2tΒ~√• ƒ ~‘≥∞~栀子苷 ~脑缺血
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswltt2tsyx2sw
≈收稿日期  ussw2st2sz
≈基金项目  国家重点基础研究发展规划项目 k|zvl课题
kŠt|||sxxwswl
≈通讯作者  3 朱晓磊 o ר¯ }kstslywu{yt|s o ∞2°¤¬¯}½¨ ³«¼µ|xuz
ƒ tyv q¦²°
近年来 o在对脑缺血损伤病理生理机制的研究
中 o/脑缺血损伤级联反应0≈t 这一概念倍受重视 ∀
级联反应中大量细胞毒性成分诱导的氧自由基和其
他介质导致了致炎性细胞因子的产生 o由此导致了
炎症反应 o炎症是级联反应导致细胞损伤的重要病
理环节 ∀其中肿瘤坏死因子2Αkבƒ2Αl !白细胞介素
2tΒkŒ2tΒl等致炎性细胞因子参与了这一过程并起
到重要作用 o拮抗 בƒ2ΑoŒ2tΒ的作用有可能减轻脑
损伤的程度 o缓解神经系统症状≈u  ∀清开灵在临床
治疗缺血性中风的实践中取得了良好的疗效 o而栀
子苷是清开灵复方中栀子的有效成分 o本实验以线
栓法复制大鼠 ≤„’模型 o检测给予栀子苷治疗后 o
脑缺血 tu ouw «大鼠脑组织中 בƒ2ΑoŒ2tΒ的含量
以及血浆中内皮细胞凝血因子 ¬相关抗原k血管性
假血友病因子 o√• ƒl及血清中神经元特异性烯醇化
酶k‘≥∞l的含量 o探讨栀子苷阻抑脑缺血损伤级联
反应的作用环节 o为中药复方制剂的优化提供实验
研究依据 ∀
1 材料与方法
111 动物与分组 健康雄性清洁级 ≥⁄大鼠 o体重
kvvs ? usl ªo购自北京维通利华实验动物公司 ∀将
缺血造模成功的 yw只大鼠分为缺血 tu «和缺血 uw
«两大组 ∀每大组又随机分为模型组 !栀子苷组和
三七总皂苷组 o后者为阳性对照药 o另设假手术对照
组 ∀其中 o模型组为 tu只动物 o余组每组均为 ts只
动物 ∀
112 动物模型制作 参照 ²±ª¤≈v 法 o用 ts h的水
#xyst#
第 u|卷第 tt期
ussw年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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‘²√¨ °¥¨µoussw
合氯醛ks1ssv x °#ªptl腹腔注射麻醉大鼠 ∀手术
显微镜下暴露左侧颈外动脉 o结扎颈外动脉远心端 o
游离颈外动脉并在其残端起始部做楔形切口 o由此
插入钓鱼线k直径 s1ux °° o头端加热呈直径约 s1v
°°的圆球形l o使之由颈外动脉通过分叉部进入颈
内动脉 o至大脑中动脉的起点 o阻断大脑中动脉的血
液供应 ∀假手术对照组不插入钓鱼线 o其他步骤同
手术组 ∀选取模型成功的动物按不同缺血时间取
材 o该模型成功的标志为大鼠苏醒后出现同侧
‹²µ±¨ µ征和对侧以前肢为重的偏瘫 ∀
113 药品及试剂 三七总皂苷k血栓通l注射液为
内蒙古甘旗卡制药厂生产 o批号 usssswu|tu o三七总
皂苷 vx ª#pt ∀栀子苷注射液由课题组制备 o栀子
苷 ux ª#pt ∀ בƒ2Α和 Œ2tΒ放射免疫试剂盒购自
解放军总医院东亚免疫技术研究所 ∀√• ƒ ∞Œ≥„ 试
剂盒 o购自上海太阳生物技术公司 ∀ ‘≥∞放射免疫
试剂盒购自北京北方生物技术研究所 ∀
114 给药方式及途径 腹腔注射给药 ∀除假手术
对照组外 o其余各组造模前 t «均预防性给药 t次 ∀
栀子苷组给药 s1szx °ª#ªpt ∀三七总皂苷 s1sux °ª
#ªpt ∀上述给药均用生理盐水稀释至 s1| °#ªpt o
间隔 w «第 u次给药 ∀缺血 uw «各组与第 u次给药
时间间隔 tu «再给药 t次 ∀模型组腹腔注射生理
盐水 s1| °#ªpt ∀
115 בƒ2ΑoŒ2tΒo√• ƒ o‘≥∞测定 各组动物按不同
缺血时间点麻醉 o颈动脉插管取血 o用少量肝素钠粉
末抗凝 ov xssµ#°¬±pt离心tx °¬±o取血浆检测 √• ƒ含
量 ∀然后腹腔切口暴露下腔静脉 o用注射器缓慢抽取
静脉血 v °并注入到试管中 o室温静置 us °¬±ov xss
µ#°¬±pt离心 ts °¬±o取血清检测 ‘≥∞含量 ∀断头处
死动物 o在冰盘上迅速取出缺血侧k左侧l大脑的纹状
体和皮层组织 o称重后加入冰生理盐水ku1x °#ªptl
于冰浴中匀浆 o匀浆液于 w ε 离心机中 v xss µ#°¬±pt
离心 tx °¬±o取上清液检测 בƒ2Α和 Œ2tΒ含量 ∀检
测过程严格按照试剂盒说明书操作 ∀
116 统计学处理 各组实验数据用kcξ ? σl表示 o组
间显著性检验采用 τ检验 ∀
2 结果
脑缺血后 o脑组织 בƒ2Α与 Œ2tΒ含量 !血浆
√• ƒ与血清 ‘≥∞含量变化以及用药对它们的干预
效应如表 t ou所示 ∀
表 t 缺血 tu «脑匀浆 בƒ2ΑoŒ2tΒ和血浆 √ • ƒ o血清 ‘≥∞含量kcξ ? σl
组别 ν בƒ2Αr±ª#°pt Œ2tΒr±ª#°pt √ • ƒr h ‘≥∞r±ª#°pt
假手术对照组 ts t1yvv ? s1ts| s1syt ? s1sty u1x{s ? s1wv| s1{|| ? s1uz|
模型组 tt t1{uv ? s1txyul s1tvy ? s1sv|ul y1|zs ? t1x|zul v1u|t ? s1z{{ul
栀子苷组 ts t1xvu ? s1tztwl s1s|{ ? s1svuvl x1utv ? t1z{{vl v1sxt ? s1xys
三七总皂苷组 ts t1x{| ? s1tvvwl s1s|t ? s1sutwl w1svv ? t1wsuwl u1xwv ? s1wyuvl
注 }与假手术组比较tl Π s1sx oul Π s1st ~与模型组比较vl Π s1sx owl Π s1stk表 u同l
表 u 缺血 uw «脑匀浆 בƒ2ΑoŒ2tΒ和血浆 √• ƒ o血清 ‘≥∞含量kcξ ? σ)
组别 ν בƒ2Αr±ª#°pt Œ2tΒr±ª#°pt √ • ƒr h ‘≥∞r±ª#°pt
假手术对照组 ts t1yuu ? s1tt| s1syv ? s1stz v1tws ? s1|xx s1{|| ? s1uvu
模型组 tu t1{uy ? s1tvvul s1ttt ? s1suzul z1{yv ? t1ywsul v1zvw ? s1st{ul
栀子苷组 ts t1v|| ? s1vttwl s1s{v ? s1suuvl y1uxs ? t1xwvvl v1sxw ? s1y|t
三七总皂苷组 | t1ww| ? s1tyuwl s1syy ? s1stzwl z1uv{ ? t1v|x w1wyz ? s1z|v
211 脑缺血的炎症因子表达及内皮细胞 !神经元损
伤反应 脑缺血 tu «和 uw «o脑组织 בƒ2Α与 Œ2tΒ
含量 !血浆 √• ƒ 与血清 ‘≥∞含量呈同步性显著升
高 o与缺血 tu «和 uw «假手术组差异极显著k Π
s1stl ∀
212 栀子苷抗脑缺血损伤的作用 栀子苷可以显
著阻抑缺血 tu «和 uw «脑组织 בƒ2Α的增高 o与模
型组比较差异极显著k Π s1stl ∀还可以阻抑脑组
织Œ2tΒ与血浆 √• ƒ 的增加 o与模型组比较差异显
著k Π s1sxl ∀但栀子苷对缺血 tu «和缺血 uw «血
清 ‘≥∞含量没有显著影响 o与相应时段模型组比较
差异不显著k Ё s1sxl ∀
三七总皂苷可以显著阻抑缺血 tu «和 uw «脑
组织 בƒ2Α与 Œ2tΒ的增高 o与模型组比较差异极显
著k Π s1stl ∀还可以阻抑脑缺血 tu «血浆 √• ƒ与
血清 ‘≥∞含量的增高 o与缺血 tu «模型组比较差异
显著k分别为 Π s1st与 Π s1sxl o但对缺血 uw «
时段血浆 √• ƒ含量与血清 ‘≥∞含量没有显著影响 o
与缺血 uw «模型组比较差异不显著k Ё s1sxl ∀
3 讨论
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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肿瘤坏死因子2Αkבƒ2Αl可由感染 !缺血和损伤
诱导 o在脑免疫和炎症活动中起重要作用 ∀¬∏等以
大鼠 ≤„’ 模型研究发现 o损伤后 t «内即可检测
到 בƒ2Α°• ‘„ o持续至 x §时仍维持于高水平≈w  ∀
脑内小胶质细胞 !星形胶质细胞和神经元可能是脑
缺血后脑内 בƒ2Α的细胞来源≈x  ∀目前多数研究支
持脑缺血后 בƒ2Α的表达具有神经毒性作用 ∀在脑
缺血损伤后 oבƒ2Α可诱导 Œ2tΒ等多种细胞因子释
放并激活多形核白细胞k°‘l o促进白细胞2内皮细
胞黏附 o加重炎性反应≈y  ~בƒ2Α还可破坏血脑屏
障 o加重外周白细胞浸润及脑水肿≈z  o进一步加重了
脑缺血损伤 ∀Œ2tΒ也是缺血性脑损伤中起关键作
用的一种致炎因子 ∀在持久性大脑中动脉阻塞时 o
Œ2tΒ蛋白在缺血 w «后开始表达 o在 v ∗ x §达到高
峰≈{ o|  ∀Œ2tΒ蛋白的表达主要见于内皮细胞和小胶
质细胞 o并且在缺血侧与非缺血侧脑区皆有表
达≈ts  ∀Œ2t能够加重 בƒ对内皮细胞的损害作用 o
促进炎症细胞在缺血脑区聚集 o加重了中枢神经系
统炎症反应≈tt  ∀脑损伤时 oŒ2t和 בƒ不仅能调节
在体和离体神经元的凋亡 o还能介导神经元的缺
失≈tu  ∀将 Œ2tΒ注射入侧脑室可扩大脑缺血时梗死
灶体积 o而使用 Œ2tΒ单克隆抗体或 Œ2t受体拮抗
剂可使缺血后梗死灶体积缩小并能减少梗死灶周边
神经元的死亡数量≈tv  ∀将 בƒ2Α注入正常大鼠及
局灶性脑缺血的大鼠的中枢神经系统时都能引起神
经元缺失 o通过使用 בƒ 结合蛋白或拮抗剂中和
בƒ2Α活性能够减轻缺血性损伤≈tw  ∀本实验结果显
示 o脑缺血后脑组织匀浆 בƒ2ΑoŒ2tΒ含量均显著增
加 o表现了显著的炎症反应特征 ∀
√²± • ¬¯¯ ¥¨µ¤±§因子k√• ƒlk血管性血友病因子l
是一种大分子血浆糖蛋白 o广泛存在于全身血管的
内皮细胞及内皮下基质 ∀各种病变引起内皮细胞损
伤导致其中的 √• ƒ释放入血是血浆 √• ƒ含量升高
的主要原因 o血浆中 √• ƒ的含量可以反映脑血管内
皮细胞损害的程度≈tx oty  ∀
神经元特异性烯醇化酶k‘≥∞l主要存在于中枢
神经系统的神经元和神经内分泌细胞内k占 || h l ∀
血清 ‘≥∞水平与大脑中动脉阻塞k≤„’lu «再灌
注不同时间点大鼠的脑梗塞灶体积呈正相关 o提示
血清 ‘≥∞的水平可能与脑损伤的范围有关 o血清
‘≥∞可以作为脑缺血r再灌注后神经元损害程度的
标志物≈tz  ∀
本实验显示 o脑缺血后血浆 √• ƒ !血清 ‘≥∞的
含量呈显著升高的过程 o提示大鼠在造模后出现了
内皮细胞与神经元损伤 ∀
栀子苷是栀子中的有效成分 o药理学研究证明
栀子具有解热 !抗菌抗病毒 !抗炎 !镇痛 !镇静 !降温
等方面的药理作用 o‹¤¼¤¶«¬≈t{ 等的实验研究结果表
明 o栀子果实提取物有促进内皮细胞增殖与修复的
作用 ∀本实验发现 o栀子苷可以阻抑缺血 tu «和 uw
«大鼠脑组织中 בƒ2Α和 Œ2tΒ含量增加 o还可以减
少缺血 tu «和 uw «血浆 √• ƒ 含量 o但对缺血 tu «
和 uw «血清 ‘≥∞含量的影响不显著 ∀栀子苷对炎
性细胞因子 בƒ2Α和 Œ2tΒ表达有明显的抑制作用 o
与三七总皂苷的作用趋势相似k既往研究表明三七
总皂苷可通过多个环节减轻脑缺血损伤 o对神经元
起到保护作用 ∀临床实践也证明其对脑缺血及脑出
血后遗症有确切疗效≈t| l o但栀子苷对缺血 tu «与
uw «血浆 √• ƒ含量的增加都有阻抑作用 o说明栀子
苷具有良好的抑制炎症反应 !保护脑血管内皮细胞
从而拮抗脑缺血损伤级联反应的作用 ∀
脑缺血后血管内皮细胞与神经元损伤的复杂过
程中 o具有随缺血时段变化的不同损伤机制 o这是损
伤级联反应的特征表现 ∀而栀子苷对缺血 tu «和
uw «血清 ‘≥∞含量的影响不显著 o这种现象暗示了
当前任何一种药物所针对的单一环节作用对于脑缺
血损伤的治疗都是局限的 o必须在多个环节上进行
干预才能从根本上阻断脑缺血后的神经元持续损
伤 o中药复方的多环节用药具有显著优势 ∀
≈参考文献 
≈t  廖维靖 oƒµ¤±® • ¬¨ª¤±§ ˜¯µ¬¦« ⁄¬µ±¤ª¯1 脑缺血损伤的病理生理机
制2损伤级联反应 1 国外医学#脑血管疾病分册 ot||{ oykwl }
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外医学#脑血管疾病分册 ousss o{kvl }tvy1
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≈tz  白 鹰 o聂志余 o王卓尔 1 大鼠脑缺血再灌注后血清 ‘≥∞变化
和脑病理形态学改变的研究 1 大连大学学报 ousst ouukul }{u1
≈t{  ‹¤¼¤¶«¬× oŽ¤­¬× oפ®¨ ¥¤¼¤¶«¬ o ετ αλ1 ¶·¬°∏¯¤±·¶©µ²° ª¤µ§¨±¬¤¨
©µ∏¦·∏¶©²µ¦∏¯·∏µ¨§ ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ¦¨¯¯ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²±1 Χηεµ Πηαρµ Βυλλ
( Τοκψο) ot||u owskwl }|wu1
≈t|  姜开余 o钱曾年 1 三七总皂甙对沙土鼠脑缺血损伤的作用 1
中成药 ot||x otzkzl }vu1
Προτεχτιϖε εφφεχτ οφ ϕασµινοιδιν ον χασχαδε οφ δαµαγε οφ χερεβραλισχηεµια ιν ρατσ
‹˜ ÷¬¤²2¯ ¬¨o‹„‘Š ‘¤oŒ °¨ ±ª2·¤²oŒ„‘Š ≠∏2©¨ ±ªo ÷˜ ≠¤
( Σχηοολ οφ Πρεχλινιχαλ Μεδιχινε , Βειϕινγ Υνιϖερσιτψ οφ Χηινεσε Μεδιχινε , Βειϕινγ tsssu| , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¶·∏§¼·«¨ ³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨¦·²©­¤¶°¬±²¬§¬± ²± ¦¤¶¦¤§¨ ²©§¤°¤ª¨ ²© ¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤1 Μετηοδ : ׫¨ µ¤·¶
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¥¼ ±¨½¼° 2¨¯¬±®¨ §¬°°∏±²¤§¶²µ§¨±·¤¶¶¤¼k∞Œ≥„l1 Ρεσυλτ : „©·¨µtu «¤±§uw «²©¬¶¦«¨ °¬¤o·«¨ ¦²±·¨±·¶²© בƒ2Α¤±§Œ2tΒ ¤±§√• ƒ ¤¶
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«²©¬¶¦«¨ °¬¤ º¤¶±²·¶¬ª±¬©¬¦¤±·1 Χονχλυσιον : ¤¶°¬±²¬§¬± «¤§ª²²§ ©¨©¨¦·²± µ¨³µ¨¶¶¬±ª·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© בƒ2Α¤±§Œ2tΒ ¤¶º¨¯¯ ¤¶√• ƒ
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≈责任编辑 方文贤 
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第 u|卷第 tt期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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