全 文 ：附子生物碱提取影响因素的实验探讨
梁春妹 3 o严汝庆
k广西贺州市人民医院 药剂科 o广西 贺州 xwu{ssl
≈摘要 目的 }探讨附子生物碱提取的影响因素 o确定适宜的提取条件 ∀方法 }以药典法测定提取物收率 o以
分光光度法测定生物碱含量 o采用单因素试验法 o对可能影响附子生物碱提取的因素分别进行考察 ∀结果 }提取溶
剂以 {x h乙醇为宜 o采用药材中粉作为提取原料 o加 ts倍量的提取溶剂提取 u次 o每次 t qzx «∀以此条件制得的提
取物收率为 t qut h o生物碱含量为 s qvv h ∀结论 }单因素试验所确定的提取条件稳定可行 ∀
≈关键词 附子 ~生物碱 ~提取
≈中图分类号 u{v ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswlsv2suuu2sv
附子是常用的中药 o具有回阳救逆 !补火助阳之
功 ∀在许多经方如四逆汤 !附子汤 !参附汤 !真武汤
等中均有应用 ∀其主要有效成分为生物碱类 o其中
有乌头碱 !次乌头碱 !新乌头碱等 ∀临床上附子大多
使用炮制品熟附片 !黑附片 !黄附片等 o主要是因为
生附子毒性较大 o经炮制加工后其中酯型生物碱被
部分除去或水解 o而毒性低的乌头原碱含量则增加 ∀
本笔以临床上常用的黑附片为药材样品 o对其提取
生物碱的工艺中常见的影响因素进行实验探讨 ∀
1 材料 !仪器
1 q1 材料
黑附片k贺州市药材公司 o经严汝庆鉴定为毛茛
科植物乌头 Αχονιτυµ χαρµιχηαιλι ⁄¨ ¥¬q的子根的炮制
加工品l o乌头碱对照品k中国药品生物制品检定
所l ∀其余试剂为市售分析纯 ∀
1 q2 仪器
∂ p zxt 型分光光度计k上海第三分析仪器
厂l ~³¶p u≤型精密酸度计k上海雷磁仪器厂l ∀
2 方法
2 q1 样品中生物碱的含量测定≈t
2 q1 q1 乌头碱对照品溶液配制 精密称取乌头碱
y °ªo置 ux °量瓶中 o加 s qst °²¯#pt盐酸溶液 o并
添加至刻度 o摇匀 o即得 s quw ª#pt的乌头碱对照品
溶液 ∀
2 q1 q2 ³ 缓冲溶液k³ v qsxl 精密称取无水乙
≈收稿日期 ussu2su2ts
≈通讯作者 3梁春妹
酸钠 s qv ªo加适量水溶解 o加冰醋酸 tt qu °o再加
水至 t sss °∀混匀 ∀用 ³计测定该溶液的 ³值
为 v qsx ∀
2 q1 q3 s .t h溴甲酚绿溶液 精密称取溴甲酚绿
uss °ªo用 s qsx °²¯#pt ¤溶液 v qx °研磨 o加
水溶解至 uss °o滤过 o以氯仿除去脂溶性杂质 ∀
2 q1 q4 标准曲线制备 精密量取乌头碱标准溶液
0 os qu os qw os qy os q{ ot qs ot qu °o分别置干燥分液漏
斗中 o加乙酸钠缓冲液x qs°与溴甲酚绿指示液
u qs °o加蒸馏水使总体积达到 ts qs °o摇匀 ∀再
精密加入氯仿 ts qs °o充分振摇 v °¬±o静置 t «
后 o分取氯仿层 o用干燥滤纸过滤 o弃去初滤液 o收集
续滤液至已放入 s qx ª无水硫酸钠的试管中 o放置
s qx «∀用 zxt型紫外分光光度计 o于 wty ±°处测定
吸收度 ∀回归方程 }Α s .ssv tuΧp s .svx y{ , ρ
s q||{ x ∀乌头碱含量在 w{ ∗ u{{ Λª具有良好的线
性关系 ∀
2 q1 q5 样品测定方法 取各样品溶液 ts °o置分
液滤斗中 o用浓氨水调 ³ ts ∗ tt ∀用氯仿萃取 x次
k每次 ts °l o收集氯仿液 o水浴蒸干 ∀残渣用 s qst
°²¯#pt ≤¯ 溶解并定容于 ts °量瓶中 o混匀 ∀取
此样品供试液 u °o按标准曲线方法操作 o测定总
生物碱含量 ∀
2 q2 样品提取物收率的测定
参照药典法≈u o取各样品溶液 ts °o置已恒重
的蒸发皿中水浴蒸干 otsx ε 下干燥 v «o取出置干
燥器中放冷 vs °¬±o称重 ∀按下式计算提取物收率
k h l }收率k h l ≈k Ωu p Ωt)/ Ω ≅ tss h ∀式中 o
#uuu#
第 u|卷第 v期
ussw年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ v
¤µ¦«oussw
Ωu为带提取物的蒸发皿重 oΩt 为蒸发皿重 oΩ为
ts °样品液相当的药材重 ∀
2 q3 各因素对附子生物碱提取的影响
2 q3 q1 提取溶剂 取药材粗粉 o以水 !³ v ∗ w盐酸
溶液 !yx h乙醇 !zx h乙醇 !{x h乙醇 !|x h乙醇等作
为提取溶剂 o分别加 ts 倍药材量溶剂加热回流 u
次 o每次 v «∀合并提取液 o浓缩或回收乙醇后浓缩
至一定的容积 o各取 ts °分别测定提取物收率与
总生物碱的含量 o比较不同溶剂的提取效率 ∀
2 q3 q2 粉碎度 将黑附片药材分别加工成饮片 !最
粗粉 !粗粉 !中粉 !细粉 o分别取适量 o加 ts倍量 {x h
乙醇加热回流提取 u次 o每次 v «∀合并提取液 o回
收乙醇并浓缩成一定的容积 ∀各取 ts °分别测定
测定提取物收率与总生物碱的含量 ∀
2 q3 q3 溶剂用量与提取次数 取药材中粉适量 o分
别以 y o{ ots otu倍药材量 {x h乙醇加热回流提取 u
次或 v次 o每次 v «∀合并 u次或 v次的提取液 o回
收乙醇并浓缩至一定的容积 o各取 ts °u份 o分别
测定提取物收率与总生物碱的含量 ∀
2 q3 q4 提取时间 取药材中粉适量 o以 ts 倍量
{x h乙醇加热回流提取 u次 o各样品每次的提取时
间分别为 s qx os qzx ot ot qux ot qx ot qzx ou ou qux ou qx o
u qzx ov «∀合并 u次提取液 o回收乙醇并浓缩至一
定容积 ∀各取 ts °u份 o分别测定提取物收率与
总生物碱的含量 ∀
2 q4 提取物乌头碱限量检查
取提取物 uwu °ªk相当于黑顺片生药量 us ªl o
置具塞锥形瓶中 o按5中国药典6usss 年版一部第
txs页附子≈检查 项下方法操作 o检查提取物中乌
头碱限量 ∀
3 结果与讨论
3 q1 提取溶剂的影响
水 !稀盐酸溶液 !不同浓度的乙醇对附子生物碱
提取的影响见表 t ∀
表 t 提取溶剂对附子生物碱提取的影响k ν vl
提取溶剂 提取物收率r h 生物碱含量r h
水 x qtt ? s qu{ s qtv ? s qsx
³ v ∗ w盐酸溶液 v q|u ? s qt| s qu| ? s qsv
yx h乙醇 u qtx ? s qs{ s quv ? s qsv
zx h乙醇 t qzv ? s qts s quy ? s qsy
{x h乙醇 t qty ? s qsx s qvt ? s qsu
|x h乙醇 s q{y ? s qsy s quz ? s qsx
结果表明 o以 {x h乙醇为提取溶剂提取附子总
生物碱时 o生物碱的得率最高 ∀可能是由于生物碱
的脂溶性较大 o采用高浓度的乙醇较易提取出来 ∀
而过高的乙醇浓度k如 |x h l o可能由于不易渗透到
药材内部 o从而影响了提取率 ∀
3 q2 粉碎度的影响
不同粉碎度的附子药材 o用 {x h乙醇提取生物
碱的结果见表 u ∀
表 u 药材粉碎度对附子生物碱提取的影响k ν vl
药材粉碎度 提取物收率r h 生物碱含量r h
饮片 s qzx ? s qsw s quu ? s qsv
最粗粉 s q{| ? s qsy s quy ? s qsy
粗粉 t qty ? s qsw s qu| ? s qtu
中粉 t qtz ? s qsz s qvv ? s qs{
细粉 t qt{ ? s qs| s qvt ? s qs|
一般而言 o随着药材粉碎度的增大 o药材与提取
溶剂的接触面积增加 o提取物收率与生物碱的得率
也随着提高 ∀结合大生产 o采用粗粉作为附子生物
碱的提取原料较为适宜 ∀
3 q3 溶剂用量与提取次数的影响
溶剂用量与提取次数对药材提取率的影响相互
关联 ∀一般而言 o提取 u次或 v次可完成 |s h以上
的提取率 ∀因此 o本实验主要考察了提取 u次或 v
次时溶剂的用量对附子提取效率的影响 ∀结果见表
v ∀
表 v 溶剂用量与提取次数
对附子生物碱提取的影响k ν vl
溶剂用量r次
k药材量倍数l
提取物收率r h
提取 u次 提取 v次
生物碱含量r h
提取 u次 提取 v次
y s q|t ? s qs{ t qtx ? s qsx s qux ? s qsw s qvs ? s qsu
{ t qs{ ? s qtu t qty ? s qtt s quz ? s qs{ s qvt ? s qsx
ts t qt{ ? s qs| t qus ? s qtv s qvu ? s qsw s qvu ? s qsz
tu t qt| ? s qsz t qt{ ? s qtw s qvs ? s qsy s qvv ? s qts
结果表明 o提取 u次每次用量为药材量 ts倍以
上时 o与提取 v次每次用为药材量 y倍的提取物收
率及生物碱含量均较相近k两者均为 Π s qsxl o考
虑到提取次数太多会使工艺时间延长 o耗能增加 o且
v次每次 y倍量与 u次每次 ts倍量的溶剂用量总量
接近 ∀因此 o认为选择提取 u次每次 ts倍量较为适
宜 ∀
3 q4 提取时间的影响
一般来说 o提取时间越长 o提取收率越高 ∀但当
提取时间到一定的长度时 o提取物收率与生物碱的
提取得率均不会再增加 ∀为找出附子总生物碱适宜
的提取时间 o本实验从 s qx«至 v«每隔 tx °¬±
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第 u|卷第 v期
ussw年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ v
¤µ¦«oussw
ks qux «l取一个时间点进行考察 ∀结果见表 w ∀
表 w 提取时间对附子生物碱提取的影响k ν ul
提取时间r« 提取物收率r h 生物碱含量r h
s qxs s q{z s quv
s qzx s q|u s qux
t qss t qst s qu{
t qux t qs{ s qu|
t qxs t qtx s qvt
t qzx t qt| s qvw
u qss t qus s qvv
u qux t qt| s qvv
u qxs t qut s qvx
u qzx t qus s qvu
v qss t qt{ s qvw
结果表明 o当每次提取时间 ∴t qzx «时 o提取物
收率与生物碱得率不再随提取时间的延长而增加 ∀
因此 o确定附子生物碱每次提取时间为 t qzx «∀
3 q5 提取物中乌头碱限量检查
结果表明 o供试品色谱中 o在与对照品色谱相应
的位置上不出现的斑点 ∀可知本实验所制备的提取
物生物碱中乌头碱含量符合药典规定 ∀
4 讨论及小结
生附子是毒性较大的中药 o临床上使用有严格
规定 ∀本实验所用的药材为黑附片经炮制后毒性降
低 o因为其中的乌头碱含量下降 ∀另外 o由于本实验
采用极性较大的溶剂提取 o且提取时间较长 o一定程
度上也使乌头碱水解 ∀本实验采用药典乌头碱限量
检查法对提取物中乌头碱进行了检查 o结果发现乌
头碱在提取物中含量甚微 o基本上不能被检出 ∀表
明本实验所得的提取物的乌头碱基本被水解成乌头
原碱 o因此毒性较低 !安全性较大 ∀
综合 w个因素的实验结果可以看出 o本实验所
选择的考察因素对附子生物碱的提取均有较大的影
响 ∀通过本单因素试验 o可确定附子k黑附片l生物
碱的的提取条件为 }取附子药材中粉适量 o加 ts倍
药材量的{x h 乙醇作为提取溶剂提取u次 o每次
t qzx «∀以此提取条件提取附子生物碱 v批 o提取
物收率为kt qut ? s qsxl h o生物碱得率为ks qvv ?
s qsul h o表明所确定的提取条件稳定可行 ∀
≈参考文献
≈t 陈其华 o范丽霞 q中成药中乌头总碱的酸性染料比色测定法 q中
国中药杂志 ot||t otyk{l }wzy q
≈u 中国药典 q一部 qusss q附录 }yv q
Στυδψ ον εξπεριµενταλφαχτορσφορ εξτραχτιον οφ αλκαλοιδσ
φροµ Αχονιτυµ χαρµιχηαιλι
≤«∏±2° ¬¨o ≠∏2 ¬´±ª
( Πηαρµαχευτιχαλ ∆επαρτµεντ , Πεοπλε. σ Ηοσπιταλ οφ Ηεζηου , Ηεζηου xwu{ss , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ §¨·¨µ°¬±¨ ·«¨ ¶∏¬·¤¥¯¨¦²±§¬·¬²±¶©²µ ¬¨·µ¤¦·¬±ª¤¯®¤¯²¬§¤¯¶©µ²° Αχονιτυµ χαρµιχηαιλι qΜετηοδ : ¶¬±ª° ·¨«2
²§¶¬± ≤«¬±¨ ¶¨ °«¤µ°¤¦²³¨¬¤©²µ§¨·¨µ°¬±¬±ª¼¬¨ §¯¶²© ¬¨·µ¤¦·¬²±oº«¬¦«¬±¦¯∏§¨ ¶³¨¦·µ²° ·¨µ¼ ¤±§¶¬±ª¯ 2¨©¤¦·²µ·¨¶·¶oº¨¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨§√¤√¬²∏¶
©¤¦·²µ¶·«¤·º²∏¯§¤©©¨¦··«¨ ¬¨·µ¤¦·¬²± ²©¤¯®¤¯²¬§¶©µ²° ¦²±¬·¬qΡεσυλτ : ׫¨ ¶∏¬·¤¥¯¨ ¬¨·µ¤¦·¤±·º¤¶{x h ·¨«¤±²¯ o¶·¤µ·¬±ª°¤·¨µ¬¤¯ º¤¶° §¨¬2
∏°2¶¬½¨ ³²º§¨µ²©¤¦²±¬·¬ots·¬° ¶¨²©·«¨ √²¯∏°¨²©·«¨ ¶²¯√ ±¨·º¤¶∏¶¨§¬± ¬¨·µ¤¦·¬²±©²µ·º¬¦¨ t qzx « ¤¨¦«·¬°¨q׫¨ ¬¨·µ¤¦·¬²± ¼¬¨ §¯º¤¶t q
ut h oº¬·«¤¦²±·¨±·²©s qvv h ¤¯®¤¯²¬§¶qΧονχλυσιον : ∞¬·µ¤¦·¬²± ¦²±§¬·¬²±¶§¨·¨µ°¬±¨ §º¬·«¶¬±ª¯¨©¤¦·²µ·¨¶·º¤¶¦²±¶¬¶·¨±·¤±§©¨¤¶¬¥¯¨q
[ Κεψ ωορδσ] Αχονιτυµ χαρµιχηαιλι ~¤¯®¤¯²¬§¶~ ¬¨·µ¤¦·¬²±
≈责任编辑 刘
#wuu#
第 u|卷第 v期
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