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红景天提取物对初老大鼠海马中神经生长因子和脑源性神经营养因子含量影响



全 文 :红景天提取物对初老大鼠海马中
神经生长因子和脑源性神经营养因子含量影响
金沈锐t 3 o秦旭华u
kt q成都中医药大学 基础医学院 生物化学与分子生物学教研室 o四川 成都 ytsszx ~
u q成都中医药大学 药学院 中药教研室 o四川 成都 ytsszxl
红景天为景天科红景天属植物 o自古以来红景天作为强
壮良药在藏汉民间广泛使用 o关于红景天的现代研究始于 us
世纪 zs年代 o前苏联学者将红景天定为 / 适应原0样物质 o并
报告具有抗缺氧 !抗疲劳 !抗辐射等药理作用 ∀近年来 o随着
对红景天研究的不断深入 o发现它对多种因素所致的记忆障
碍有对抗作用 o可促进记忆改善≈t2v  o但对其改善记忆的机制
涉及不多 ∀本研究通过 ∞Œ≥„方法来测定初老大鼠海马内神
经生长因子k‘Šƒl !脑源性神经营养因子k…⁄‘ƒl含量在给予
红景天 wx §后的变化 o从神经营养因子的角度来探讨红景天
改善记忆力的作用机理 ∀
1 材料与方法
1 q1 药物与试剂 红景天浸膏粉的制备 o采用红景天根茎破
碎 !烘干 !粉碎kws目l后 o用 ts倍量 zs h的乙醇在 {s ε 水浴
中回流浸提 vs °¬±o重复 v 次 o合并提取液 o用筛绢kwss目l过
滤 o减压蒸馏乙醇 ot xss µ#°¬±p t离心 ts °¬±o抽滤 o滤液浓缩
干燥后得红景天浸膏粉 ∀实验时用蒸馏水将红景天浸膏粉配
制为不同浓度的混悬液予动物灌胃使用 ~‘Šƒ ∞°¤¬和 …⁄‘ƒ
∞°¤¬免疫分析试剂盒为美国 °µ²° ª¨¤公司产品 ∀
1 q2 动物 us ∗ uu月龄 ≥⁄大鼠 o雄性 o体重 wxs ∗ yss ªo由
成都中医药大学实验动物中心提供 ∀
1 q3 仪器 美国 ׫¨µ°²¤¥¶¼¶·¨°¶∏¯·¬¶®¤± Žv全自动酶标
仪 ~׫¨µ°²¤¥¶¼¶·¨°¶ • ¨¯ º¯¤¶«wŽu 全自动洗板机 ∀
1 q4 方法
1 q4 q1 分组 取初老大鼠 vs只按体重分层随机分为 v组 o
每组 ts只 o分别设为初老空白对照组 !红景天高 !低剂量组 ∀
1 q4 q2 给药 红景天高剂量组按每日人用量的 tw倍 o即每
日用 s qvy ª# ®ªp t剂量予大鼠灌胃 ~红景天低剂量组按每日人
用量的 v qx倍 o即每日用 s qs| ª#®ªp t剂量予大鼠灌胃 ~初老空
白对照组予等量生理盐水灌胃 ~连续灌胃给药 wx §∀
1 q4 q3 取材 于末次给药 t «后 o用 u h 的戊巴比妥将大鼠
深度麻醉后 o经主动脉插管 o用 uxs °生理盐水快速灌注后 o
断头取出大鼠脑组织 o挑出大脑内海马条带 o置于预冷的生理
盐水中 o制备海马组织匀浆 o将组织匀浆 v sss µ#°¬±p t离心
后 o取上清液备用 ∀
≈收稿日期  ussv2tu2sw
≈通讯作者  3金沈锐 oר¯ }ksu{l{{sxx{|w o ∞2°¤¬¯}­¬±¶«¨ ±µƒ ¶²2
«∏q¦²°
1 q4 q4 测定 采用酶联免疫吸附实验k简称 ∞Œ≥„l双抗体夹
心法测 ‘Šƒ和 …⁄‘ƒ含量 o具体操作按测试盒说明书进行 ∀
1 q4 q5 统计学方法 用 ≥°≥≥统计软件进行 τ检验 ∀
2 结果 实验结果见表 t ∀
表 t 红景天对大鼠海马 ‘Šƒ和
…⁄‘ƒ含量的影响k ξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
rª#®ªpt
‘Šƒ
r±ª#pt
…⁄‘ƒ
r±ª#pt
空白对照组 xx qus ? tx qsy ttw qs{ ? ut qux
红景天组 s qvy |t qxs ? t| qwutl tus qxy ? vy qys
红景天组 s qs| yu qut ? ty qws ttu qzu ? vs qyx
注 }与空白对照组比较 tlΠ s qst
3 讨论
当前 o我国人民生活水平不断提高 o人口寿命延长 o一些
老年性疾病也呈上升之势 o如老年性痴呆等 o带来了大量社会
问题 ∀因而 o研究和开发具有预防和改善记忆障碍的药物具
有重要意义 ∀
大脑内神经生长因子k‘Šƒl !脑源性神经营养因子k…⁄2
‘ƒl作为人类最早发现并进行了深入研究的神经营养因子 o在
神经系统发育 !损伤 !修复及正常功能维系过程中起着十分重
要的作用 ∀ ‘Šƒ o…⁄‘ƒ的作用广泛复杂 o近年来许多动物实
验研究表明 o‘Šƒ水平的升高能够促进神经递质如乙酰胆碱
的合成 o并对胆碱能神经元起营养作用 o具有防治脑老化的功
效 ∀给予外源性 ‘Šƒ 可明显改善动物的学习记忆能力≈w  ∀
…⁄‘ƒ也参与了长时程记忆的形成过程 o并对维持学习记忆的
能力发挥重要的作用≈x  ∀目前 o国外已将 ‘Šƒ试用于老年性
痴呆和顽固性癫痫的治疗 ∀由于外源性 ‘Šƒ 等制品不能直
接通过血脑屏障 o需进行脑内灌注给予 o这就造成了 ‘Šƒ 等
制品在使用上的困难和局限性 ∀
海马是一个与学习记忆功能密切相关的结构 o位于新皮
层尾端边缘之下 o是长时程记忆形成的决定性纽带≈y  ∀海马
内 ‘Šƒ o…⁄‘ƒ水平与学习记忆功能的关系是密切相关的 ∀
因而 o我们认为海马内 ‘Šƒ o…⁄‘ƒ水平的变化可以用来从一
个侧面去阐释红景天改善记忆的机理 ∀同时 o实验时选用全
雄性 ≥⁄大鼠进行 o利于排除雌性大鼠性周期对海马内 ‘Šƒ o
…⁄‘ƒ水平的影响 ∀本研究结果提示 }红景天提取物可能具有
一定提高记忆力的功效 o其升高初老大鼠海马内 ‘Šƒ的作用
#s{w#
第 u|卷第 x期
ussw年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ x
¤¼oussw
可能是其改善记忆的机理之一 ∀
≈参考文献 
≈t  谢桂琴 o孙秀兰 o田苏平 o等 q红景天素对实验性老年性痴呆大
鼠防治作用的研究 q中国行为医学科学 oussv otuktl }t{ q
≈u  刘志伟 o吴谋成 o陈 平 q菱叶红景天对小鼠记忆影响及耐缺氧
实验 q营养学报 oussv ouxktl }tst q
≈v  游冬青 o邹鲁峰 o陈 杞 o等 q红景天复方对小鼠学习记忆影响
及抗缺氧实验 q时珍国医国药 ousss ottkxl }v|u q
≈w  徐晓虹 o章子贵 o吴馥梅 q神经生长因子改善衰老性记忆障碍及
突触机制的探讨 q药学学报 ousss ovxktsl }zu| q
≈x  ‹¤¯¯o׫²°¤¶Žo∞√ µ¨¬·…q•¤³¬§¤±§¶¨¯¨ ¦·¬√¨¬±§∏¦·¬²±²©…⁄‘ƒ
¬¨³µ¨¶¶¬²± ¬± ·«¨ «¬³³²¦¤°³∏¶§∏µ¬±ª ¦²±·¨¬·∏¤¯ ¯¨ ¤µ±¬±ªq Νατ Νευ2
ροσχι , usss ovkyl }xvv q
≈y  陈宜张 q分子神经生物学 q北京 }人民军医出版社 ot||x qvxv q
≈责任编辑 方文贤 
猪苓龙葵水提物的抗肿瘤药效
陈汝盛t o厉将斌u 3 o郭晓健u o张志宏u o郭应禄u o陈晓光v
kt q浙江省磐安县人民医院玉山分院 o磐安 vuuvsu ~
u q北京大学 第一医院 泌尿外科 o北京大学 泌尿外科研究所 o北京 tsssvw ~
v q中国协和医科大学 中国医学科学院 药物研究所 o北京 tssssxl
某些中药方剂≈t 用于治疗泌尿系肿瘤如膀胱癌 !前列腺
癌等 o有一定疗效 ∀猪苓和龙葵是常用药 o具有利尿通淋解
毒之功效 o在作者的临床观察中发现 o长期应用该两种药物
为主的中药方剂配合手术切除或放化疗等 o具有一定的症状
和生化指标改善作用 o并可能有助于延长生存期 ∀为进一步
证实其抗肿瘤作用 o为临床应用提供实验依据 o对其水提取
物进行了药效学研究 ∀
1 材料
1 q1 药物 猪苓龙葵水提物粉末 o处方猪苓 us ª!龙葵 vs ªo
每 tu ª药粉相当于 tss ª生药 o由中国医学科学院药物研究
所提供 o在阴凉干燥处保存 ∀体内实验时用 s qx h羧甲基纤
维素钠k≤ ≤l配成混悬液 o供灌胃使用 o现用现配 ∀环磷酰
胺k≤×÷l o用生理盐水配成所需浓度 ∀
1 q2 实验试剂 • °Œtyws培养基 o胰酶 o均为 ŠŒ…≤’产品 ~
小牛血清 o杭州四季青公司产品 ~醋酸 o三氯乙酸 o乙醇均为
分析纯 ∀
1 q3 肿瘤细胞株 小鼠肝癌 ‹uu和小鼠 ¨º¬¶肺癌体内瘤株
由中国医学科学院药物研究所药理室传代保存 ∀前列腺癌
°≤2v o⁄˜2twx oו „°2≤u和膀胱癌 ∞细胞株则由北京大学
泌尿外科研究所传代保存 ∀
1 q4 动物 昆明种小鼠 !≤xz小鼠由中国医学科学院实验
动物所繁育场提供 o并于中国医学科学院药物研究所二级动
物房饲养 ∀
2 方法
≈收稿日期  ussw2st2tx
≈通讯作者  3厉将斌 oר¯ }kstslyytzxzts oƒ¤¬}kstslyytzxzts o
∞2°¤¬¯ }¯­¥||| ƒ ut¦±q¦²°
2 q1 体外细胞实验用药物药液 实验药物粉末当用于体外
细胞实验时 o则按以下处理步骤制成保存液 }≠ 取 xs °ª药
粉溶于 x °重蒸馏水中 ~ 密封后于 vz ε 恒温摇床中震摇
u «~≈ 随即以 tu sss µ#°¬±p t离心 tx °¬±~…取上清液用 s quu
Λ°滤膜过滤后分装于各冻存管中 o密封贮存于 p us ε o以
此作为保存液 ∀每临用时 o置于室温下复温 us °¬±后使用 ∀
2 q2 体外细胞增殖抑制实验 用 ≥• …法≈u2w 计算药物对细
胞生长的抑制率 o并求出药物的半数生长抑制浓度kŠŒxsl ∀
2 q3 体内肿瘤生长抑制实验 选用昆明种k或 ≤xzl雄性小
鼠 xs只 ot{ ∗ uu ª∀将接种后 z §的相应瘤株k‹uu o¨º¬¶肺
癌l荷瘤小鼠颈椎脱臼处死 o在无菌条件下取出腹水 o用生理
盐水 tΒv稀释 o于腋窝皮下接种瘤液 s qu °∀接种后 uw «o
将动物随机分为 x组 o每组 ts只 ∀设空白对照组 o环磷酰胺
阳性对照组 o水提物粉末分别相当于生药 t qy ov qu oy qw ª#
®ªpt的高中低 v个不同剂量治疗组 ∀阴性对照组给予等体
积 s qx h ≤  ≤ o环磷酰胺腹腔注射 t次 ys °ª#®ªp t ∀水提物
灌胃给药 o每日 t次 o连续给药 x §o停药 t次 o再连续给药 w
§∀末次给药后 uw «o颈椎脱臼处死动物 o分别称体重 !瘤重 o
计算肿瘤抑制率 o进行疗效评价 ∀
肿瘤生长抑制率k h l € k对照组平均瘤重 p治疗组平均
瘤重lr对照组平均瘤重 ≅ tss h
2 q4 统计学处理 计数资料采用非配对学生氏 τ检验 ∀
3 结果
3 q1 体内肿瘤生长抑制作用
3 q1 q1 对小鼠肝癌 ‹uu的抑制作用 水提物灌胃给药能在相
当程度上起到抑制小鼠肝癌 ‹uu生长的作用 o并有较好的剂
量效应关系k表 tl ∀
3 q1 q2 对小鼠 ¨º¬¶肺癌的抑制作用 水提物灌胃给药能
#t{w#
第 u|卷第 x期
ussw年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ x
¤¼oussw