全 文 ：研究 1 上海中医药杂志 ot||| ovvkyl }ww1
≈z  吴 畏 o阳崇德 o刘才平 1 地龙药理作用的研究新进展 1 中药
药理与临床 oussu ot{kul }w{1
≈{  王身艳 o秦明珠 o李 飞 o等 1 蜂房补肾壮阳活性部位研究 1 中
国中药杂志 oussu ouzkxl }v{v1
≈|  ≤«¨ ± o≤«¬²∏ • ƒ o≤«¨ ± ≤ ≤ o ετ αλ1 ∞©©¨¦·²©·«¨ ³¯¤±·2 ¬¨·µ¤¦·²¶·2
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Υρολousss otyvkvl }t|zx1
Στυδψ οφ Σηυγαν Ψιψανγ χαπσυλε ον ερεχτιλε δψσφυνχτιον
• „‘Š ±¬t o‘Œ °¬±ªu o • ˜ • ¬¨2³¬±ªv o ÷Œ„ «²±ª2¼∏¤±w
(t1 Σχηοολ οφ Βασιχ Μεδιχινε , Βειϕινγ Υνιϖερσιτψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Βειϕινγ tsssu| , Χηινα ;
u1 ∆επαρτµεντ οφ Πηαρµαχολογψ, Ινστιτυτε οφ Βασιχ Τηεορψ, Χηινεσε Αχαδεµψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Βειϕινγ tssszs , Χηινα ;
v1 ∆επαρτµεντ οφ Ρεπροδυχτιϖε Τοξιχολογψ, Σηανγηαι Μεδιχαλ Υνιϖερσιτψ, Σηανγηαι usssvu , Χηινα ;
w1 Βειϕινγ Χηινα2ϑαπαν Φριενδσηιπ Ηοσπιταλ, Βειϕινγ tsssu| , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε}ײ¶·∏§¼·«¨ ³«¤µ°¤¦²¯²ª¬¦¤¯ ©¨©¨¦·²©≥«∏ª¤± ≠¬¼¤±ªk≥Š≠≠l ¦¤³¶∏¯ 1¨ Μετηοδ : ®²±ª°¬±ª °¬¦¨ ¤±§ •¬¶·¤µ
µ¤·¶º µ¨¨ ∏¶¨§·²²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨¦·¶²©≥Š≠≠ ¦¤³¶∏¯¨²± ¶¨¬∏¤¯ §¨¶¬µ¨ o¨µ¨¦·¬²±o ­¨¤¦∏¯¤·¬²±1 ¤±§©¤·¬ª∏¨ 1 ׫¨ º ¬¨ª«·²©³µ²¶·¤·¨o¶¨ °¬±¤¯ √ ¶¨¬2
¦¯¨o·¨¶·¨¶o¯¨ √¤·²µ¶¤±§·«¼°∏¶¤±§¶¨µ∏° ·¨¶·²¶·¨µ²±¨ ¯¨ √¨¯ º µ¨¨ ¤¯¶² ° ¤¨¶∏µ¨§1 ƒ∏µ·«¨µ°²µ¨ o • «¨¶∏¶°²±®¨ ¼ º µ¨¨ ∏¶¨§·²¦²±¶·µ∏¦·¤±¬°¤¯
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√²∏¶¶¼¶·¨° µ¨°¤¬±¨ §¶·¤¥¯ 1¨ Χονχλυσιον : ≥Š≠≠ ¦¤³¶∏¯¨¦¤± µ¨°¤µ®¤¥¯¼¬°³µ²√¨·«¨ µ¨¨¦·¬¯¨ ¤¦·¬√¬·¼o¶¨¬∏¤¯ §¨¶¬µ¨ ¤±§ ­¨¤¦∏¯¤·²µ¼ ¤¦·¬√¬·¼1
׫¨ ° ¦¨«¤±¬¶° ²©≥Š≠≠ ¦¤³¶∏¯¨°¤¼ ¥¨ µ¨ ¤¯·¨§·²·«¨ ¬±¦µ¨¤¶¨ ²©¤±§µ²ª¨ ± ¤±§¤§µ¨±²¦²µ·¬¦²«²µ°²±¨ ¯¨ √¨¯¶1 ¤¶º¨¯¯¤¶·«¨ µ¨§∏¦·¬²± ²©³¨ ±¬¯¨
√ ±¨²∏¶²∏·©¯²º1
[ Κεψ ωορδσ] ¶«∏ª¤±¼¬¼¤±ª¦¤³¶∏¯¨~ µ¨¨¦·¬¯¨ §¼¶©∏±¦·¬²±~¤±¬°¤¯ °²§¨¯ ≈责任编辑 古云侠 
≈收稿日期  ussv2s{2sx
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kvsuztvsvl
≈通讯作者  3孙颖浩 oר¯ }ksutluxszuszz
黄芩苷诱导前列腺癌细胞株 ⁄˜twx凋亡的体外研究
顾正勤 o孙颖浩 3 o许传亮 o刘 毅
k第二军医大学 长海医院 泌尿外科 o上海 usswvvl
≈摘要  目的 }探讨黄芩苷诱导前列腺癌细胞株 ⁄˜twx凋亡的作用机制 ∀方法 }采用不同浓度的黄芩苷处理
细胞后 o用流式细胞仪检测前列腺癌细胞 ⁄˜twx的凋亡率及细胞周期分布 ~电镜下观察细胞超微结构 ~免疫组织化
学染色检测凋亡相关蛋白的表达 ∀结果 }xs otux Λ°²¯#pt黄芩苷能诱导前列腺癌细胞 ⁄˜twx凋亡 o凋亡率与剂量
正相关 ~⁄˜twx随药物浓度及作用时间变化 o细胞周期分布呈现 Št期细胞比例逐渐增高 o并出现典型的凋亡峰 ~电
镜下可见特征性的凋亡小体 ~免疫组织化学染色提示 ¥¦¯2u在药物处理的 ⁄˜twx中表达下调 o…¤¬表达缺失 oƒ¤¶表
达上调 ∀结论 }黄芩苷能诱导前列腺癌细胞凋亡 o并明显抑制癌细胞增殖 o具有直接抗肿瘤作用 ∀
≈关键词  黄芩苷 ~凋亡 ~前列腺癌 ~细胞
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxlst2ssyv2sw
黄芩苷是从中药黄芩中提取的化合物 o具有抗
炎 !解热 !抗氧化 !抗过敏等作用 ∀近来研究表明黄
vy
第 vs卷第 t期
ussx年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qvs oŒ¶¶∏¨ t
¤±∏¤µ¼oussx
芩苷能诱导肿瘤细胞凋亡 o具有抗肿瘤的作用≈t ou  ∀
笔者采用从中药黄芩中提取的黄芩苷作用于前列腺
癌细胞株 ⁄˜twx o初步探讨黄芩苷诱导前列腺癌细
胞凋亡的作用机制 ∀
1 材料和方法
111 仪器 !试剂 黄芩苷对照品kttsztx2ussutul购
自上海市药品检验所 ∀黄芩苷干粉用二甲基亚砜
k⁄≥’l溶解 o制成 t °°²¯#pt浓度并分装 op us ε
保存 o使用时用 • °Œtyws培养基稀释 o使 ⁄≥’终
浓度小于 s1t h ∀ • °Œ tyws培养基kŠ¬¥¦²公司l o
电子显微镜k‹¬·¤¦«¬o¤³¤±l o流式细胞仪kƒ¯ ∏²µ¨¶2
¦¨±¦¨ ¤¦·¬√¬·¨§¦¨¯¯ ¶²µ·²µoƒ„≤≥l o„±±¨ ¬¬±∂2°∞ „³²³·²2
¶¬¶Ž¬·Œo≤¼¦¯¨ ×∞≥×א °˜≥ ⁄‘„ • ¤¨ª¨ ±·Ž¬·k均为
…¨ ¦·²± ⁄¬¦®¬±¶²±公司l !∞±√¬¶¬²±×试剂k小鼠l即用
型 !小鼠抗人 ¥¦¯2u单克隆抗体k⁄¤®²公司l o小鼠抗
人 ¥¤¬单克隆抗体 !小鼠抗人 ƒ¤¶单克隆抗体k北京
中山生物技术有限公司l ∀
112 细胞培养 前列腺癌细胞株 ⁄˜twxk„×≤≤2
‹×…2{tl用含 ts h 的小牛血清 !青霉素 ktss ∏#
°ptl !链霉素kt °ª#°ptl的 • °Œtyws培养基 o置
vz ε ox h ≤’u孵箱内静置培养 ∀
113 早期细胞凋亡的检测 按 „±±¨ ¬¬±∂2°∞ „³²³2
·²¶¬¶Ž¬·Œ操作手册进行检测 ∀
114 细胞周期变化检测 培养瓶中细胞消化制成
单细胞悬液 o均匀接种于 y孔培养板 ou个时段各种
u块板 o移入 ≤’u孵箱静置培养 ∀次日 o细胞贴壁生
长良好 ~每块板的 y个孔分别设为对照组和不同浓
度药物组 o每孔加药 ts ˏo使药物终浓度为 xs otux
Λ°²¯#2t o将 y孔板移入 ≤’u孵箱 o在 vz ε ox h ≤’u
及饱和湿度环境下静置培养 ∀药物作用 w{ ozu «
后 o分别收集每孔细胞放入 ƒ≤  检测专用试管中 o
行 ƒ„≤≥检测 ∀ ⁄‘„含量分析按 ≤¼¦¯¨ ×∞≥×א °˜≥
⁄‘„ • ¤¨ª¨ ±·Ž¬·操作手册进行检测 ∀
115 细胞超微结构观察 贴壁生长的 ⁄˜twx细胞
中分别加入 xs otux Λ°²¯#pt黄芩苷 ow{ «后将贴壁
细胞消化收集 o°…≥重悬细胞 !洗涤 o离心 t sss µ#
°¬±pt使细胞成团 o沿管壁缓缓加入 w ε 预冷的 u h
戊二醛 w °ow ε 下固定 vs °¬±o将管中细胞团块剥
出 o用 t h锇酸固定 t ∗ u «∀常规电镜样品制备程
序脱水 !渗透 !包埋 !超薄切片 o铀铅染色 ∀透射电镜
下观察细胞超微结构的变化 ∀
116 免疫组织化学染色 取对数生长细胞 o用
s1ux h胰蛋白酶消化 o制成单细胞悬液 o接种于盖玻
片上 o设空白对照 !替代对照各 t个孔 o对照组及加
药组各 v个孔 o移入 ≤’u孵箱静置培养 ∀次日 o观察
细胞贴壁生长良好 o吸弃旧培养液 o对照孔加细胞培
养液 o药物孔加黄芩苷稀释液 o在 vz ε ox h ≤’u 孵
箱中静置培养 w{ «∀取出盖玻片 o°…≥漂洗 o|x h乙
醇固定 ~s1v h ‹u’u抑制内源性过氧化物酶 ~微波处
理修复抗原 ~滴加特异性抗体k一抗 tΒtssl !∞±√¬2
¶¬²±×试剂 o⁄„…显色 o细胞核衬染 o树脂封片 o显微
镜下观察 ∀空白对照细胞片用 °…≥代替一抗 o结果
为阴性 ∀替代对照细胞片用非免疫小鼠血清代替一
抗 o结果为阴性 ∀结果判断 }以胞浆呈棕褐色为阳性
染色 o随机选择 w个视野 o每个视野观察 tss个细胞
中的阳性细胞数 o取 w个视野的阳性细胞平均百分
率为显色指数 o显色指数  x h为阴性k p l ox h ∗
xs h为弱阳性k n l o xs h为强阳性k 6 l o所有结果
均进行双盲读片 ∀
117 统计学处理 用 ≥°≥≥ts1s软件包处理实验数
据 o采用 „‘’∂ „方法进行统计学分析 ∀
2 结果
2 q1 早期细胞凋亡率 前列腺癌细胞株 ⁄˜twx在
xs otux Λ°²¯#pt浓度的黄芩苷作用 zu «后 o结果提
示凋亡率与剂量呈正相关 o分别为 |1u h ott1x h ∀
见表 t ∀
表 t 各组前列腺癌细胞株 ⁄˜twx凋亡率的比较
组别 剂量rΛ°²¯#pt 细胞凋亡率r h
对照组 t1vu ? s1wu
黄芩苷组 xs |1ut ? t1{vtl
tux tt1xu ? u1vxtl
注 }与空白对照组比tl Π s1st
212 细胞周期的变化 通过 ƒ„≤≥对 ⁄‘„含量分
析结果显示 o同对照组细胞相比 oxs Λ°²¯#pt的黄
芩苷作用 w{ ozu «后 o ⁄˜twx 细胞明显阻抑在 Št
期 o并与时间变化呈正相关k表 ul ∀黄芩苷诱导
⁄˜twx细胞凋亡的凋亡率k表 vl o与浓度变化呈正
相关 ∀
213 细胞凋亡的特征性形态学变化 透射电镜观
察可见细胞核缩小或裂解 o染色质凝集或边集 o可见
包裹核碎片或整个浓缩的细胞核 !细胞器和胞质的
凋亡小体样结构k图 tl ∀
214 免疫组织化学染色 黄芩苷ktux Λ°²¯#ptl组
免疫组化结果提示 o¥¦¯2u在 ⁄˜twx中表达下调 o显
wy
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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¤±∏¤µ¼oussx
表 u 黄芩苷kxs Λ°²¯#ptl对 ⁄˜twx细胞 ⁄‘„含量
及细胞周期分布的影响
组别 时间r« Št ≥ Šu n 
对照组 xv1ww ? x1z{ ut1zx ? w1vs uv1|t ? w1xt
黄芩苷组 w{ yt1uu ? y1vsul tz1{w ? v1y| tx1wv ? v1ux
zu yz1vu ? z1u{ul tx1vz ? w1st tt1w| ? u1w|
注 }与对照组比ul Π s1sx
表 v 流式细胞仪检测不同组别kzu «l前列腺
癌细胞株 ⁄˜twx凋亡率
组别 剂量rΛ°²¯#pt 细胞凋亡率r h
对照组 s1|s ? s1tx
黄芩苷组 xs x1xt ? s1|ztl
tux z1{x ? t1vttl
注 }与对照组比tl Π s1st
图 t 黄芩苷ktux Λ°²¯#ptl组 ⁄˜twx
细胞的超微结构k ≅ ts sssl
色指数为弱阳性 ~…¤¬表达缺失 o显色指数为阴性 ~
ƒ¤¶表达上调 o显色指数为强阳性k图 u ∗ zl ∀
图 u 对照组 ⁄˜twx细胞 ¥¦t2u染色强阳性k ≅ ussl
图 v 黄芩苷ktux Λ°²¯#ptl组 ⁄˜twx细胞
¥¦t2u染色呈弱阳性k ≅ ussl
图 w 对照组 ⁄˜twx细胞 ¥¤¬染色阴性k ≅ tssl
图 x 黄芩苷ktux Λ°²¯#ptl组 ⁄˜twx细胞
¥¤¬染色阴性k ≅ tssl
图 y 对照组 ⁄˜twx细胞 ƒ¤¶染色呈弱阳性k ≅ ussl
图 z 黄芩苷ktux Λ°²¯#ptl组 ⁄˜twx细胞
ƒ¤¶染色呈强阳性k ≅ ussl
3 讨论
关于黄芩苷的药理作用机制已有报道 o显示黄
芩苷能增强荷艾氏腹水瘤小鼠免疫功能 o抑制体内 !
外艾氏腹水瘤细胞增殖≈t  ∀黄芩苷在 tss ∗ uss Λª#
°pt作用培养肝癌细胞 w{ «后引起典型的细胞凋
亡≈u  ∀在前列腺癌方面 o黄芩苷诱导前列腺癌细胞
凋亡的作用机制还不甚清楚 ∀
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¤±∏¤µ¼oussx
细胞凋亡在控制细胞增殖 !肿瘤发生和生长中
起重要作用 ∀研究表明 o许多人类恶性肿瘤是其细
胞的凋亡过程严重受阻 o而使肿瘤细胞在数量上无
限制恶性增生的结果 o这种增殖与死亡的平衡失调
被认为是由细胞凋亡的调节紊乱引起的 ∀前列腺癌
凋亡主要与凋亡相关基因 ¥¦¯2u o…¤¬oƒ¤¶o׊ƒ2Βo¦¤¶2
³¤¶¨ 有关≈v2z  o涉及多条凋亡通路 ∀¥¦¯2u抑制凋亡 o
¥¤¬则促进凋亡 o两者的比值决定细胞是否对凋亡
信号发生反应≈{  ∀ ƒ¤¶蛋白属于肿瘤坏死因子r神
经生长因子受体超家族 o是 ´型跨膜蛋白质分子 o在
许多细胞膜上有表达 ~ƒ¤¶配体kƒ¤¶l是 µ型膜蛋
白 o属肿瘤坏死因子家族成员 o主要在活化的 ×细胞
膜上表达 ∀有实验显示 o与正常组织比较 o前列腺癌
中 ƒ¤¶基因表达明显减弱 o¥¦¯2u基因表达明显增强 o
这两种基因的变化可能破坏了细胞增殖与凋亡的平
衡 o在前列腺癌的发生中起一定的作用 ∀
本实验结果提示 o黄芩苷能诱导前列腺癌细胞
株 ⁄˜twx凋亡 o与黄芩苷剂量成正相关 ~并通过诱
导凋亡抑制细胞增殖 o阻抑 ⁄˜twx细胞在 Št期 o并
与黄芩苷作用时间与剂量呈正相关 ~电镜下可见特
征性的凋亡小体 ~免疫组织化学染色提示 ¥¦¯2u在黄
芩苷处理的 ⁄˜twx中表达下调 o…¤¬表达缺失 oƒ¤¶
表达上调 ∀由此推论 o黄芩苷诱导前列腺癌细胞凋
亡的作用机制可能与上述凋亡相关基因有关 ∀
凋亡作为一种重要的肿瘤病理学特性 o能够影
响预后 !治疗反应和疾病进展 ∀黄芩苷能够诱导雄
激素非依赖性前列腺癌细胞 ⁄˜twx凋亡 o有直接抗
肿瘤的作用 o其与化疗药物相比 o不良反应小 o易被
患者接受 o临床上可望成为前列腺癌治疗的新手段 ∀
≈参考文献 
≈t  袁榴娣 o徐 红 o杜肇宗 1 黄芩苷对艾氏腹水瘤细胞影响的初
步探讨 1 南京铁道医学院学报 ot||z otykwl }uvt1
≈u  松崎子 1小柴胡汤及其成分对细胞凋亡的诱导作用 1 国外医
学#中医中药分册 ot||y ot{kyl }vy1
≈v  Ž¼³µ¬¤±²∏‘oŽ¬±ª∞ ⁄o…µ¤§¥∏µ¼ ⁄o ετ αλ1 …¦¯2u ²√ µ¨¨¬³µ¨¶¶¬²± §¨2
¤¯¼¶µ¤§¬¤·¬²±2¬±§∏¦¨§ ¤³²³·²¶¬¶ º¬·«²∏·¤©©¨¦·¬±ª·«¨ ¦¯²±²ª¨ ±¬¦¶∏µ2
√¬√¤¯ ²©«∏°¤±³µ²¶·¤·¨¦¤±¦¨µ¦¨¯¯¶1 Ιντ ϑ Χανχερot||z ozskvl }vwt1
≈w  ≥∏± ÷  o ¤¦ƒ¤µ¯¤±¨  o«∏¤±ªo ετ αλ1 ⁄¬¶·¬±¦·¦¤¶³¤¶¨ ¦¤¶¦¤§¨¶
¤µ¨ ¬±¬·¬¤·¨§¬± µ¨¦¨³·²µ2° §¨¬¤·¨§¤±§¦«¨ °¬¦¤¯2¬±§∏¦¨§¤³²³·²¶¬¶1 ϑ
Βιολ Χηεµ ot||| ouzwk{l }x sxv1
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√¬¤¬±§∏¦·¬²± ²©¦¤¶³¤¶¨2t2 °¨ §¬¤·¨§¤³²³·²¶¬¶1 Χανχερ Ρεσot||| ox|
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∏³µ¨ª∏¯¤·¬²± ¤±§¤¦·¬√¤·¬²± §∏µ¬±ª¦¤¶·µ¤·¬²±2¬±§∏¦¨§µ¨ªµ¨¶¶¬²± ²©·«¨
µ¤·√¨ ±·µ¤¯ ³µ²¶·¤·¨ ª¯¤±§1 Προστατε ot||| owskul }{|1
≈z  …²º ±¨ ≤ o∂²¨ ¯¯ µ¨‹ oŽ¬®¯¼ Žo ετ αλ1 ≥¼±·«¨¶¬¶²©³µ²2¦¤¶³¤¶¨2v ¤±§
2z §∏µ¬±ª¤³²³·²¶¬¶¬± ³µ²¶·¤·¨ ¦¤±¦¨µ¦¨¯¯¶1 Χελλ ∆εατη ∆ιφφερot||| o
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≈{  ⁄¤¼  o«¤² ÷ o∂¤¯ ²¯µ²¶¬≤ o ετ αλ1 ∞2¦¤§«¨µ¬± ° §¨¬¤·¨¶¤ªªµ¨ª¤2
·¬²±2§¨ ³¨ ±§¨ ±·¶∏µ√¬√¤¯ ²© ³µ²¶·¤·¨ ¤±§ °¤°°¤µ¼ ³¨¬·«¨ ¬¯¤¯ ¦¨¯¯¶
·«µ²∏ª«·«¨ µ¨·¬±²¥¯¤¶·²°¤ ¦¨¯¯ ¦¼¦¯¨¦²±·µ²¯ ³¤·«º¤¼1 ϑ Βιολ Χηεµ o
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Στυδψ οφ βαιχαλιν ιν ινδυχινγ προστατε χανχερ χελλλινε ∆Υtwx αποπτοσισ ιν ϖιτρο
Š˜ «¨ ±ª2 ¬´± o≥˜‘≠¬±ª2«¤²o÷˜ ≤«∏¤±2¯¬¤±ªoŒ˜ ≠¬
( ∆επαρτµεντ οφ Υρολογψ , Χηανγηαι Ηοσπιταλ, τηε Σεχονδ Μιλιταρψ Μεδιχαλ Υνιϖερσιτψ, Σηανγηαι usswvv , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ׫¨ ³∏µ³²¶¨ ²©·«¨ ³µ¨¶¨±·¶·∏§¼ º¤¶·²¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ιν ϖιτρο ©¨©¨ ¦·¶²©¥¤¬¦¤¯¬± ²±¬±§∏¦·¬²± ²©¤³²³·²¶¬¶¬±
«∏°¤± ³µ²¶·¤·¨ ¦¤±¦¨µ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ⁄˜twx1 Μετηοδ : ‹∏°¤± ³µ²¶·¤·¨ ¦¤±¦¨µ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ⁄˜twx º¤¶·µ¨¤·¨§ º¬·«§¬©©¨µ¨±·¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©¥¤¬¦¤¯¬±
ιν ϖιτρο1׫¨ ¤³²³·²¶¬¶µ¤·¨ º¤¶§¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ ƒ„≤≥ ¤±¤¯¼¶¬¶o¦¨¯¯ ¦¼¦¯¨§¬¶·µ¬¥∏·¬²± º¤¶§¨·¨¦·¨§¥¼©¯²º ¦¼·²° ·¨µ¼o°²µ³«²¯²ª¬¦¤¯ ¦«¤±ª¨¶¤±§
³µ²·¨¬± ¤±¤¯¼¶¬¶º µ¨¨ §¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ ° ¤¨±¶²©¨¯ ¦¨·µ²± °¬¦µ²¶¦²³¨ ·¨¦«±¬´∏¨ ¤±§¬°°∏±²«¬¶·²¦«¨ °¬¦¤¯ ·¨¦«±¬´∏¨ µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼1 Ρεσυλτ : xs Λ°²¯
#pt ¤±§tux Λ°²¯#pt ²©¥¤¬¦¤¯¬± §²¶¨2§¨ ³¨ ±§¨ ±·¯¼¬±§∏¦¨§¤³²³·²¶¬¶¤±§¬±«¬¥¬·¨§·«¨ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ²©³µ²¶·¤·¨ ¦¤±¦¨µ¦¨¯¯ ⁄˜twx¬± ¤§²¶¨
¤±§·¬° 2¨§¨ ³¨ ±§¨ ±·°¤±±¨ µ1 ⁄‘„ ©¯²º ¦¼·²° ·¨µ¬¦¤±¤¯¼¶¬¶¬±§¬¦¤·¨§·«¤·¥¤¬¦¤¯¬±¬±§∏¦¨§¤¤µµ¨¶·¬± Št ³«¤¶¨ o¶«²º¬±ª¤·¼³¬¦¤¯ ¤³²³·²¶¬¶
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¬±§∏¦·¬²± ²©¤³²³·²¶¬¶¥¼ º¤¼¶²©¬±«¬¥¬·¬²± ²©·«¨ ¥¦¯2u o ²¯¶¶²©·«¨ …¤¬o¤±§∏³µ¨ª∏¯¤·¬²± ²© ƒ¤¶1 Χονχλυσιον : ׫¨ µ¨¶∏¯·¶¬±§¬¦¤·¨ ·«¤·
¥¤¬¦¤¯¬± °¤¼¬±§∏¦¨ ¤³²³·²¶¬¶¤±§¬±«¬¥¬·³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ²©³µ²¶·¤·¨ ¦¤±¦¨µ¦¨¯¯¶o¤±§«¤¶§¬µ¨¦·¤±·¬2·∏°²µ ©¨©¨¦·¶²± «∏°¤± ³µ²¶·¤·¨ ¦¤±¦¨µ¦¨¯¯¶1
[ Κεψ ωορδσ] ¥¤¬¦¤¯¬±~¤³²³·²¶¬¶~³µ²¶·¤·¨ ¦¤±¦¨µ~¦¨¯¯ ≈责任编辑 古云侠 
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