全 文 ：青龙衣冷 !热乙醇提取物对 uu小鼠肿瘤细胞
膜生化功能影响的研究t
季宇彬 3 o汲晨锋 o马宏图
k哈尔滨商业大学 药物研究所 o黑龙江 哈尔滨 txsszyl
≈摘要 目的 }研究青龙衣的冷 !热乙醇提取物对 uu小鼠肿瘤细胞膜蛋白含量 !膜脂流动性 !膜封闭度的影
响 ∀方法 }应用 ≥⁄≥2°∞电泳分析膜蛋白含量 o按 ≥®¬±¬·½®¼法测定膜脂流动性 o按 ¤°∏§¬²法测定膜封闭度 ∀结
果 }青龙衣的冷 !热乙醇提取物可降低肿瘤细胞膜蛋白含量 o降低肿瘤细胞膜脂流动性 o降低肿瘤细胞膜封闭度 ∀
结论 }青龙衣冷 !热乙醇提取物改变了肿瘤细胞膜的生化物质及生化功能 o其结果导致肿瘤细胞的解体和死亡 o这
可能是青龙衣抗肿瘤作用的机制之一 ∀
≈关键词 青龙衣 ~膜蛋白 ~膜脂流动性 ~膜封闭度
≈中图分类号 u{x1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlsz2sxvt2sw
≈收稿日期 ussw2s{2uy
≈基金项目 黑龙江省青年基金资助项目k±≤su≤wyl
≈通讯作者 3 季宇彬 oר¯ }kswxtl {wysvuvu oƒ¤¬}kswxtl
{w{yysst o∞2°¤¬¯}≠
«µ¥¦∏1 §¨∏1¦±
青龙衣为胡桃科植物胡桃楸 ϑυγλανδ µανδσηυρι2
χα ¤¬¬°和胡桃 ϑ1ρεγια 1 的未成熟外果皮 o始载
于5开宝本草6 o称之为胡桃青龙 o5救急方6中称之为
青胡桃皮 o自5山东中草药手册6称之为/青龙衣0后 o
现多延用此名称≈t ∀现代许多研究表明 o其抗肿瘤
作用明显≈u o作者的前期实验已表明青龙衣的冷 !热
乙醇提取物具有抗肿瘤作用≈v o为进一步探讨其抗
肿瘤作用的机制 o作者就青龙衣的冷 !热乙醇提取物
对 uu小鼠肿瘤细胞膜生化功能的影响进行实验
研究 ∀
1 实验材料
111 药物 青龙衣冷 !热乙醇提取物由哈尔滨商业
大学药物研究所博士后科研工作站提供 ~环磷酰胺
k上海旭东海普药业有限公司 o批号 usswsxsvl ~生理
盐水k哈尔滨制药六厂 o批号 usswsysul ∀
112 试剂 蛋白定量试剂盒k南京建成生物工程研
究所l ~蛋白酶水解抑制剂对甲苯磺酰胺k°≥ƒl
k≥¬ª°¤公司l ~x °°²¯#pt¤≤v缓冲液 ~vs h丙烯
酰胺贮存液 ~t1x °²¯ #pt ×µ¬¶#≤k³ {1{l缓冲液 ~
s1x °²¯#pt ×µ¬¶#≤k³ y1{l缓冲液 ~ts h ≥⁄≥ ~ts h
过硫酸铵k°≥l ~四甲基乙二胺k×∞∞⁄l ~电泳缓冲
液 ~样品缓冲液 ~染色液 ~脱色液 ~⁄°k≥¬ª°¤公司产
品l ~还原型 ⁄k≥¬ª°¤公司产品l ~皂素 ~v ƒ¨
k≤ly ∀
113 仪器 离心机k北京医用离心机厂l ~电热恒温
水浴锅k北京长安科学仪器厂l ~zxt分光光度计k上
海第三仪器厂l ~电泳仪k
¬²2¤§o美国l ~凝胶成像
系统k
¬²2¤§ ¨ ¯ ⁄²¦tsss o美国l ~tst型电热鼓风
干燥箱k吴江华盛烘箱厂l ~≠ p v型多功能调速振
荡器k江苏省金坛市环宇科学仪器厂l ~≤≥ p |vs型
双波长薄层扫描仪k岛津 o日本l ~ ƒ p xws荧光分光
光度计k岛津 o日本l ~低温冰箱k≥≠ o日本l ∀
114 动物及瘤株 昆明种小鼠 o体重kus ? u1sl ªo
雄性 o由黑龙江中医药大学动物室提供 k动物质量
合格证号 }黑动字第 sststssv号l ~uu腹水小鼠购
自哈尔滨医科大学附属第三医院动物研究所 ∀
2 方法
211 小鼠肿瘤模型的建立 无菌条件下取 uu腹
水癌细胞 o放入无菌容器内 o置冰块中保存 ∀另取少
量腹水 o置于加有肝素的试管中 o作为观察细胞形态
及细胞计数用 ∀癌细胞数为 |z h 以上方可使用 ∀
腹水用无菌生理盐水 tΒw 稀释 o使肿瘤细胞数为
x ≅ tsy#°pt ∀
212 分组 小鼠随机分为 {组 o每组 ts只 ∀分为
实验组 }青龙衣热醇提取物 !冷醇提取物组高 !中 !低
剂量组 ~阳性对照组 }环磷酰胺 ~阴性对照组 }生理盐
水 ∀
#tvx#
第 vs卷第 z期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ z
³µ¬¯oussx
213 给药剂量及途径 实验组剂量为 uss otss oxs
°ª#®ªpt o环磷酰胺剂量为 us °ª#®ªpt o阴性对照组
给相同体积的生理盐水 ∀于接种 uw «后开始腹腔
注射给药 o每日 t次 o连续 z §o于停药次日处死 ∀
214 肿瘤细胞膜的制备 无菌抽取小鼠腹水 t
°o{ss µ#°¬±pt o离心 ts °¬±o弃上清 ∀加入 s1{x h
的 w≤¯ 除去红细胞 o适量生理盐水洗涤 v次 o蒸馏
水破膜 t «∀再以 v sss µ#°¬±pt离心 ts °¬±o弃上
清 o最后将沉淀悬浮在适量生理盐水中 ∀用蛋白试
剂盒定量膜蛋白 o放置低温冰箱备用 ∀
215 青龙衣冷 !热乙醇提取物对 uu小鼠肿瘤细胞
膜蛋白含量的影响 采用 ¤¨ °±¯¬凝胶体系制胶 o然
后将电泳液倒入上下两电泳槽中 o将以加入 x h巯
基乙醇的膜蛋白样品和标准品分别与样品处理液以
tΒt混合 o置水浴中煮沸 x °¬±o待冷至室温后 o用微
量吸管将处理后的膜蛋白样品和标准品上样kus
Λl o接通电源 ~电流为恒流 o先设为 ts ° o当样品
达到分离胶后 o长至 ux ° o当示踪染料溴酚蓝距胶
板下缘 u ¦°时终电泳 ∀将胶浸入考马斯亮蓝 2uxs
蛋白染色液中充分染色 o然后以脱色液k水2乙醇2冰
醋酸 {ΒvΒtl脱色 o直至本底洗脱干净 o照相 ∀将凝
胶板置 ≤≥ p |vs双波长扫描仪上 oxys ±°处扫描得
到膜蛋白电泳图谱 o计算膜蛋白组分的百分含量 ∀
216 青龙衣冷 !热乙醇提取物对 uu小鼠肿瘤细胞
膜脂流动性的影响 取 w °肿瘤细胞悬液kt ≅ tsz
#°ptl ou °加入一试管中 ou °作为标准管 ∀在
标准管中加入 u °⁄°标记液 ∀空白管中加入等
量 !等渗的 °
≥缓冲液 o混匀后于 ux ε 温浴 vs °¬±o
v sss µ#°¬±pt离心 ts °¬±o弃去残留 ⁄° 标记液 ∀
用等渗 °
≥缓冲液洗涤 u次 o再用等渗 °
≥缓冲液
稀释成 w °细胞混悬液 o立即进行荧光偏振度测
量 ∀用 ƒ p xws荧光分光光度计采用氙灯光源 o荧
光激发波长为 vyu ±° o发射波长为 wvu ±°∀在 ux ε
下分别测定与激发偏振光振动方向平行 !垂直时的
荧光偏振光强度 π o计算微黏度 Γ uπrks1wy p πl o
及 ƒ ks1x p πlrπu ∀
217 青龙衣冷 !热乙醇提取物对 uu小鼠肿瘤细胞
膜封闭度的影响 将洗过的影泡放在等渗溶液中 o
vz ε 保温 t «即获得封闭影泡 ∀按 ¤°∏§¬²法进行
测定 o取膜样品k膜液ls1y °于比色杯中 o加反应
液 o混匀后在波长 wus ±°处比色 o以加入 ⁄ 为
起点 o记录反应开始 y °¬±内的 Α值k每隔 t °¬±记
录 t次l ∀比色对照 o除不加 ⁄溶液外其他操作
相同 o计算封闭度 ∀
218 数据处理 用 ≥°≥≥ tt1s软件处理 ∀各组数据
以 cξ ? σ表示 o样本比较采用方差检验 ∀
3 结果
311 青龙衣冷 !热乙醇提取物对 uu小鼠肿瘤细胞
膜蛋白含量的影响 表 t表明 o冷 !热乙醇提取物的
高 !中剂量组显著降低了膜蛋白的含量 o且随剂量的
增加而使膜蛋白的含量逐渐减少 o呈现了一定的量
效关系 ∀低剂量组与生理盐水组比较无显著差异 ∀
表 t 青龙衣冷 !热乙醇提取物对 uu小鼠肿瘤细胞
膜蛋白含量影响kcξ ? σ, ν tsl
组 别 剂量r°ª#®ªpt 膜蛋白含量r h
生理盐水 同体积 s1xts ? s1swu
环磷酰胺 us s1u|v ? s1svvtl
冷醇 t|t1vz s1v{w ? s1suxtl
|x1y{ s1wy{ ? s1swttl
wz1{w s1w|v ? s1swz
热醇 tut1tz s1wwx ? s1svztl
ys1x{ s1wus ? s1su|tl
vs1u| s1xsu ? s1sw{
注 }与生理盐水组比较tl Π s1sxk表 u ov同l
312 青龙衣冷 !热乙醇提取物对 uu小鼠肿瘤细胞
膜脂流动性的影响 表 u表明 o冷 !热乙醇提取物的
高 !中剂量组显著降低了肿瘤细胞膜的流动性 o且随
剂量的增加而使膜流动性逐渐降低 o呈现了一定的量
效关系 ∀低剂量组与生理盐水组比较无显著差异 ∀
表 u 青龙衣冷 !热乙醇提取物对 uu小鼠肿瘤细胞膜流动性的影响kcξ ? σ, ν tsl
组别 剂量r°ª#®ªpt 荧光偏振度 微黏度 Γ 膜脂流动性
生理盐水 同体积 s1txz z ? s1ssz w t1suz x ? s1s{y v tw1|xt x ? t1x{v y
环磷酰胺 us s1tzy x ? s1ssz { t1uw| y ? s1s{| x ts1xtt | ? t1ywy |tl
冷醇 t|t1vz s1tz| s ? s1ss| { t1uzw t ? s1tst | ts1stz v ? t1yzx ytl
|x1y{ s1t{s { ? s1ssy | t1u|y | ? s1s{u | |1{{z x ? t1xsu ttl
wz1{w s1txw z ? s1ssy x t1stx s ? s1sz{ x tw1xt| t ? t1wux x
热醇 tut1tz s1tzx t ? s1sts u t1uvv s ? s1ttu | ts1zs| { ? t1ztv wtl
ys1x{ s1tyz | ? s1ss{ | t1t{w z ? s1tsx y tt1wz| u ? t1y|w ttl
vs1u| s1tyz z ? s1ss{ v t1twz s ? s1s|x y tt1{u{ | ? t1yst u
#uvx#
第 vs卷第 z期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ z
³µ¬¯oussx
313 青龙衣冷 !热乙醇提取物对 uu小鼠肿瘤细胞
膜封闭度的影响 表 v表明 o冷 !热乙醇提取物的
高 !中 !低剂量组显著降低了肿瘤细胞膜的封闭度 o
且随剂量的增加而使封闭度逐渐降低 o呈现了一定
的量效关系 ∀其中 o高剂量组的作用效果比阳性对
照组好 ∀
表 v 青龙衣冷 !热乙醇提取物对 uu小鼠肿瘤细胞
膜封闭度的影响kcξ ? σ, ν tsl
组别 剂量r°ª#®ªp t 封闭度r h
生理盐水 同体积 yv1w ? u1{y
环磷酰胺 us xw1x ? u1zvtl
冷醇 t|t1vz xv1{ ? u1uvtl
|x1y{ xz1v ? u1y|tl
wz1{w x|1x ? u1{{tl
热醇 tut1tz xu1x ? v1vutl
ys1x{ xx1w ? u1zytl
vs1u| x{1s ? u1t{tl
4 讨论
细胞膜呈现/液态镶嵌0结构 o/液态0表现为脂
质双层的流动性 o/镶嵌0则表现为有些膜蛋白分子
存在于或穿越脂质双层 o膜蛋白具有传递信息和维
持细胞形态等多种功能 o脂质双层的流动性也具有
十分重要的生理意义≈w ox ∀细胞所有正常的生理功
能都与细胞膜结构的完整性及膜脂质双层的流动性
有关 o对膜的通透性 !变形性 !脆性 !物质运输 !细胞
识别 !细胞免疫 !酶的活性都有影响 ∀近年来 o随着
对膜研究的深入 o已经发现了肿瘤细胞许多变化及
其相随的恶性行为均与细胞表面的结构 !理化性质
和功能的改变有密切关系≈y oz ∀
膜蛋白结构的任何一种变化均可导致膜脂流动
性的下降 ∀某些改变细胞膜脂流动性的外来因素有
可能先作用于膜蛋白 o通过膜蛋白的改变而导致脂
质双层的流动性的改变 ∀实验结果表明 o青龙衣冷 !
热乙醇提取物能明显降低肿瘤细胞表面蛋白质含
量 o且随剂量增加作用呈现增强趋势 o并显著降低了
uu小鼠肿瘤细胞膜的流动性 ∀说明青龙衣醇提取
物能通过影响肿瘤细胞膜蛋白质的含量而影响到细
胞膜的生化功能 o从而干扰细胞代谢达到抗肿瘤的
作用 ∀另外 o细胞膜在等渗溶液中能重新封闭起来 o
恢复对大分子和阳离子的通透屏障 o形成封闭影泡 o
肿瘤细胞膜就具有重新封闭的能力 o因此我们测定
了肿瘤细胞膜的封闭度 ∀结果表明 o青龙衣冷 !热乙
醇提取物可降低肿瘤细胞膜的封闭度 o抑制其重新
封闭 o从而导致肿瘤细胞的解体和死亡 ∀
综上所述 o青龙衣冷 !热乙醇提取物降低了 uu
小鼠肿瘤细胞的膜脂流动性 !膜蛋白含量 !膜封闭
度 o从而从不同方面影响了信号的传导 ∀膜质流动
性的降低使得膜受体的偶连 !寡聚化能力降低 o使得
向内传导信号减弱 ~膜蛋白的减少 o使得膜上酶 !受
体 !通道等蛋白组成的亚细胞单位减少 o影响细胞的
内环境变化 o进而影响细胞的向内传导信号的适当
与否 ~膜封闭性的降低 o导致了细胞内离子环境 !³
值 !氨基酸 !葡萄糖等变化 o扰乱了膜内正常代谢环
境 o直接影响肿瘤细胞的增殖 !复制速度 o从而起到
抗肿瘤的作用 ∀
≈参考文献
≈t 江苏新医学院 q中药大辞典 q上海 }上海科技出版社 ot|{y q
≈u 徐 巍 q青龙衣粉针剂抑瘤与免疫作用的实验研究 q中国中
医基础理论杂志 oussu o{ktsl }v| q
≈v 季宇彬 o马宏图 o杨 波 q青龙衣不同提取部位的抗肿瘤作用
研究 q中草药 oussw ovxktsl }ttwx q
≈w ≥¬±ª¨µ≥ o¬¦²¯¶²± q׫¨ ©¯∏¬§ °²¶¤¬¦°²§¨¯ ²©·«¨ ¶·µ∏¦·∏µ¨ ²©
¦¨¯¯ °¨ °¥µ¤±¨ ¶q Σχιενχε ot|zu otzxkuvl }zus q
≈x 林克椿 q细胞膜的流动性 q生理科学进展 ot|{x oty }{v q
≈y 刘景生 q细胞信息与调控 q北京 }北京医科大学协和医科大学
联合出版社 ot||| q
≈z 吴 珊 o刘宗石 o李晓明 o等 q原发性肝癌及慢性肝脏病变端
粒酶活性的研究 q中华病理学杂志 ot||{ ouzkul }|t q
Στυδψ ον τηε εφφεχτσ οφ χοολ ανδ ηοτ ετηανολ εξτραχτσφροµ
Θινγλονγψι ον τηε βιοχηεµιχαλφυνχτιον οφ τυµ ορ µεµ βρανειν Ηuu µιχε
≠∏2¥¬±o ≤«¨ ±2©¨ ±ªo ²±ª2·∏
( Ποστδοχταλ Ρεσεαρχη οφ τηε Ινστιτυτε οφ Ματερια Μεδιχα , Ηαρβιν Υνιϖερσιτψ οφ Χοµ µερχε , Ηαρβιν txsszy , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨¦·¶²©¦²²¯ ¤±§«²·¨·«¤±²¯ ¬¨·µ¤¦·¶©µ²° ±¬±ª¯²±ª¼¬²±·∏°²µ° °¨¥µ¤±¨ ³µ²·¨¬± ¦²±·¨±·o ¬¯³¬§
©¯∏¬§¬·¼ o¤±§ ° °¨¥µ¤±¨ ¦¯²¶¨ ¦¤³¤¥¬¯¬·¼¬± uu °¬¦¨ q Μετηοδ : ׫¨ ° °¨¥µ¤±¨ ³µ²·¨¬±¦²±·¨±·o¥¼ o¯¬³¬§©¯∏¬§¬·¼¤±§° °¨¥µ¤±¨ ¦¯²¶¨ ¦¤³¤¥¬¯¬·¼
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ z
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º µ¨¨ ° ¤¨¶∏µ¨§¥¼ ° ¤¨±¶²©≥⁄≥2°∞o¶®¬±¬·½®¼ ¤¶¶¤¼ ¤±§¤°∏§¬² ° ·¨«²§µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ qΡεσυλτ : ׫¨ ¦²²¯ ¤±§«²·¨·«¤±²¯ ¬¨·µ¤¦·¶©µ²° ±¬±2
ª¯²±ª¼¬§¨¦µ¨¤¶¨§·«¨ ¦²±·¨±·²©·∏°²µ° °¨¥µ¤±¨ ³µ²·¨¬±o·«¨ ¬¯³¬§©¯∏¬§¬·¼ ¤±§ ° °¨¥µ¤±¨ ¦¯²¶¨ ¦¤³¤¥¬¯¬·¼q Χονχλυσιον : ׫¨ ¦²²¯ ¤±§«²·
·¨«¤±²¯ ¬¨·µ¤¦·¶©µ²° ±¬±ª¯²±ª¼¬¦¤±¦«¤±ª¨ ·«¨ ¥¬²¦«¨ °¬¦¤¯ ¶∏¥¶·¤±¦¨ ¤±§¥¬²¦«¨ °¬¦¤¯ ©∏±¦·¬²±·²¦¤∏¶¨ §¬¶¤ªªµ¨ª¤·¬²± ¤±§§¨¤·«²©·«¨ ·∏°²µ
¦¨¯¯ oº«¬¦« °¤¼ ¥¨ ²±¨ ²©·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶°¶∏±§¨µ¯¼¬±ª·«¨ ¤±·¬2·∏°²µ²© ±¬±ª¯²±ª¼¬q
[ Κεψ ωορδσ] ±¬±ª¯²±ª¼¬~ ° °¨¥µ¤±¨ ³µ²·¨¬±~ ¬¯³¬§©¯∏¬§¬·¼~° °¨¥µ¤±¨ ¦¯²¶¨ ¦¤³¤¥¬¯¬·¼
≈责任编辑 方文贤
枸杞糖肽对缺氧及 ≤¯ 诱导的
心肌细胞钙超载的影响
徐顺霖t 3 o黄 峻t o田庚元u
kt1 南京医科大学 第一附属医院 o江苏 南京 utssu| ~
u1 中国科学院 上海有机化学研究所 o上海 usssvul
≈摘要 目的 }研究枸杞糖肽k¥³l对低氧心肌细胞内钙浓度k≈≤¤un ¬l的影响 o以及对 ≤¯ 诱导的心肌细胞
钙超载的影响 ∀方法 }采用 ≥⁄大鼠乳鼠进行心肌细胞培养 o建立心肌缺氧模型 o实验分 v组 }正常对照组 ~缺氧模
型组 }细胞缺氧 y «~枸杞糖肽预处理组 }加入枸杞糖肽 o再行缺氧 y «∀ ××法检测细胞活力 ∀以 ƒ¯ ∏²r 荧光指示
剂负载 o通过激光扫描共聚焦显微系统和 ƒ¯ ²∏2vr 荧光指示剂标记技术 o观察枸杞糖肽对缺氧心肌细胞游离钙含
量的影响 ∀加入终浓度 ys °°²¯#pt≤¯ 溶液 o动态观察 ≤¯ 刺激后心肌细胞≈≤¤un ¬的动态变化及 ¥³预处理后
对 ≤¯ 诱导的钙超载的影响 ∀结果 }心肌细胞缺氧时间延长 o损伤随之加剧 o缺氧枸杞糖肽组心肌细胞荧光密度均
较模型组显著降低k Π s1stl oxs Λª#°pt¥³最为明显 o≈≤¤un ¬明显减少 ∀枸杞糖肽组加入 ≤¯ 溶液后≈≤¤un ¬
荧光强度曲线升高 o但与模型组比较 o幅度明显减小 oux oxs otss Λª#°pt ¥³且呈现量效关系 ∀结论 }低氧导致心
肌细胞钙超载 o而枸杞糖肽能减轻钙超载 ∀亦能对抗 ≤¯ 诱导的心肌细胞钙超载 ∀机制之一是枸杞糖肽作用于
型钙通道 ∀
≈关键词 心肌细胞 ~枸杞糖肽 ~钙超载 ~型钙通道
≈中图分类号 u{x1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlsz2sxvw2sx
≈收稿日期 ussw2sz2s{
≈通讯作者 3 徐顺霖 oר¯ }ksuxl{yz|ys{z o∞2°¤¬¯}¶¯«¨ ¤µ· ±2
°∏1 §¨∏1¦±
枸杞多糖k
°l是中药枸杞子中提取的多糖 o
被证实为提高免疫活性和抗衰老的有效成分 ∀枸杞
糖肽k¥³l是从
°中分离出的糖缀合物 o又名枸
杞糖缀合物 ∀其在分子和细胞水平上促进免疫功能
的作用近几年得到深入的研究 ∀本实验探讨低氧心
肌细胞内钙浓度k ≈≤¤un ¬l的变化 o以及枸杞糖肽减
轻心肌细胞缺氧过程中钙超载的作用 o以及对缺氧
心肌的保护作用 ∀
1 材料和方法
111 材料与试剂 u ∗ v §≥⁄大鼠 o由南京医科大
学实验动物中心提供 ∀胰蛋白酶 o胶原酶 o∞⁄× o
⁄∞干粉培养基和小牛血清购自 ¬¥¦²公司 ∀
ƒ¯ ∏²2vr o²¯ ¦¨∏¯¤µ°µ²¥¨¶o预先按 t °°²¯#pt溶于
⁄≥ o混匀后冻存于 p us ε 作为储备液 ∀从宁夏
枸杞子提取得到
° o经 ⁄∞∞2≤¨¯ ∏¯¯²¶¨ 和 ≥¨ ³«¤§¨¬
2tss柱色谱 o得到均一的 ¥³∀相对分子质量为
{{ κδ o糖组成为 µ¤2¤¯2¯¦ u1xΒt1sΒt1sk摩尔
比l o并含有 t{种天然氨基酸 ∀鉴定为 Ο2连接糖蛋
白 ∀提纯鉴定在中国科学院上海有机化学研究所完
成 ∀
112 心肌细胞培养 在无菌条件下取出乳鼠心脏 o
剪碎 o以 s1ux h的胰蛋白酶于 vz ε 进行梯度消化 ou
次各 ys °¬±差速贴壁后分离非心肌细胞 ∀获得的
心肌细胞用 us h灭活胎牛血清的 ⁄∞ 培养基调
#wvx#
第 vs卷第 z期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ z
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