全 文 :产地加工明党参致敏物质的追踪
李 祥 o陈建伟 o朱 荃 o石荣火
k南京中医药大学 o江苏 南京 utssu|l
≈摘要 目的 }寻找明党参产地加工时引起过敏反应的物质 ∀方法 }根据产地加工明党参过程中可能接触过
敏物质的方式 o以豚鼠皮肤涂敷和雾化接触两种方式 o分别给予鲜明党参自然挥发性顶空气体组分 !沸水烫挥发
性顶空气体组分
!挥发油和蛋白质 o进行过敏试验 o观察皮肤过敏反应 o评价致敏程度 ∀结果 }鲜明党参中提得的
挥发油在两种给药途径下 o均可使豚鼠产生过敏反应 ∀结论 }挥发油为明党参中的致敏物质 ∀
≈关键词 明党参 ~致敏物质 ~挥发油
≈中图分类号 x|x qv ~ u{w qt ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusssltt2syyv2sv
明党参是我国特有的伞形科单种属植物 o属国
家重点保护植物 ∀主要分布于苏 !浙 !皖 v省 o江苏
为地道产区之一 ∀明党参入药 o据考证始于明代 o原
名百丈光 ∀明党参之名始见于5饮片新参6k王一仁
编著 ot|vx年l o其意指明党参蒸煮去外皮 o干后中
实透明 o外形和疗效似人参 ∀具润肺化痰 !养阴和
胃 !平肝解毒之功效 ∀现在明党参产地加工工艺为 }
取明党参鲜根 o置沸水中煮烫 v ∗ x °¬±o捞出 o冷水
浸后 o刮去外皮 o晒干即得 ∀据现代药理研究表明 o
明党参有祛痰 !止咳 !平喘 !改善机体免疫功能 !降血
脂 !抑制血小板聚集和抗凝血 !增强 ≥⁄及 ≥2°¬
的活性 !抗突变等功效 ∀
据调查 o在产地加工明党参时 o部分药工直接接
触明党参根 !茎叶或吸入鲜明党参蒸汽 o会产生局部
或全身红疹 !痒痛 !生水泡以至糜烂症状 o而接触加
工过的明党参则不会发生此类现象 ∀为探讨其致敏
物质 o阐明明党参的加工机理 o本研究将明党参加工
过程中有可能产生的致敏物质分类提取 o分为顶空
气体k固体或液体表面的饱和蒸气≈t l组分 !顶空
气体组分
!挥发油 !蛋白质 o以豚鼠皮肤涂敷和雾
化接触 u种给药方式 o观察有无过敏反应 o来确定致
敏物质的类型 ∀
1 实验材料
111 药品及试剂
鲜明党参 o江苏句容栽培品 o经本校中药鉴定学
≈基金项目 江苏省教委自然科学基金资助项目k|wsysl
≈收稿日期 usss2sv2s{
教研室王春根教授鉴定为伞形科植物明党参
Χηανγιυ µ σµψρνιοιδεσ • ²¯©©的新鲜根 ∀
明党参加工品 o取明党参鲜品 o开水烫煮 v ∗ x
°¬±∀取出剥皮 o晒干 ∀经中药鉴定学教研室王春
根教授鉴定为 ¤§¬¬ ≤«¤±ª¬¬∀
u ow2二硝基氯苯 o上海试剂一厂 o批号 }|ztust ∀
硫化钠 o湖南省南县八一化工厂 o批号 }|ztstu ∀
112 动物 白色豚鼠 o由南京中医药大学实验动物
中心提供 o苏k动l质 }|zssv ∀
2 方法与结果
211 样品制备
21111 鲜明党参自然挥发性顶空气体组分 的制
备 }取鲜明党参 |ss ªo切片 o置于一上端开口 o下具
磨口塞的球形瓶中 ∀球形瓶上口塞紧 o下端连接一
根 u ¦° ≅ wx ¦° 层析柱 o柱内装有大孔树脂适量 ∀
层析柱下端连接抽滤瓶 o抽滤瓶接抽气装置抽气
k °¤s qs|l ∀此装置使鲜明党参挥发出来的顶空气
体组分吸附于大孔树脂上 o持续抽气 w{ «o以乙醚洗
脱大孔树脂层析柱 o收集洗脱液 o洗脱液合并 o室温
k约 us ε l挥散定容至每 t °¯ 相当于 ts ª生药量 o
低温避光密闭存放 ∀
21112 鲜明党参沸水烫挥发性顶空气体组分
的
制备 }取鲜明党参 |ss ªo切片 o置于一 x sss °¯ 的圆
底烧瓶中 o加沸水至药材全部淹没k下置电热套加
热l o即刻在圆底烧瓶上口将冷凝管接好 ∀冷凝管再
与一根 u ¦° ≅ wx ¦°的层析柱上端连接 o余下装置
同上法 ∀此装置使有可能随水蒸气蒸馏出来的挥发
油回流至烧瓶内 o而使挥散的顶空气体组分吸附于
#vyy#
第 ux卷第 tt期
usss年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qtt
²√ qousss
大孔树脂上 ∀保持沸腾 v ∗ x °¬±后 o撤去电热套 o
同上法抽气 !洗脱 !合并后挥散乙醚 o定容至每 t °¯
相当于 ts ª生药量 o低温避光密闭存放 ∀
21113 挥发油的制备 }取上述 21112 所剩残渣液 o
用挥发油测定器水蒸汽蒸馏提取 ts «o得 s qx °¯ 挥
发油 o残渣弃去 o以乙醚溶解并定容至 |s °¯ o得 t
°¯ 含 s qssxx °¯ 挥发油的乙醚液k相当于 ts ª生药
量l o低温避光存放 ∀
21114 蛋白质的制备 }取明党参 vxs ªo切片 o加水
适量 o置于高速组织捣碎机中捣碎 o用纱布过滤 o残
渣挤尽汁液 ∀汁液高速离心 o取上清液抽滤 o得滤液
vss °¯ o滤液置冰箱冷冻放置一夜 ∀次日加 u倍量
|x h乙醇至 |ss °¯ o出现沉淀 o滤过 ∀沉淀溶解于
蒸馏水中 o定容至 t °¯ 相当于 ts ª生药量 o冰箱冷
藏 ∀
212 皮肤过敏试验
取健康无伤豚鼠 w{只 o体重 uss ∗ uxs ªo雌雄
各半 ∀将豚鼠背部脊柱左侧用 { h硫化钠脱毛 o脱
毛面积约 v ¦° ≅ v ¦° ∀将脱毛豚鼠随机分为 y组 o
每组 {只 ∀分为顶空气体组分 组 !顶空气体组分
组 !挥发油组 !蛋白质组 !阳性对照组k阳性致敏物
质为u ow2二硝基氯苯 o致敏浓度t h o激发浓度
s qt h o用乙醚溶解l和溶剂组k乙醚组l ∀
致敏接触 }脱毛后 uw «oy组豚鼠分别在左侧脱
毛区涂顶空气体组分 液 !顶空气体组分
液 !挥
发油液 !蛋白质液 !t h u ow2二硝基氯苯液 !乙醚液各
s qu °¯ r只 o涂抹范围 u qx ¦° ≅ u qx ¦° oy «后酒精棉
球擦去药物 ∀第 z天 !第 tw天以同样方法各重复一
次 ∀
激发接触 }于末次给药后 tw §o在豚鼠背部脊柱
右侧用 { h硫化钠脱毛 o脱毛面积约 v ¦° ≅ v ¦° o按
上述方法重复给药ku ow2二硝基氯苯换以 s qt h浓
度激发l oy «后同上法去除药物 o即刻观察 ∀然后
于 uw ow{ ozu «再观察皮肤过敏反应情况 ∀按表 t
标准评分 o并评价致敏程度≈u ∀结果见表 u ∀
213 顶空气体组分追加剂量皮肤过敏试验
考虑到明党参顶空气体组分 和顶空气体组
分
为一些易挥发的小分子化合物 o在上述过敏实
验中易挥散 o与豚鼠皮肤接触时间较短 o剂量可能偏
低 o故对该两组样品进行加大剂量重复致敏实验 ∀
取健康无伤豚鼠 vu只 o按 2 q1 方法脱毛 o将脱
毛豚鼠随机分为 w组 o每组 {只 ∀分为顶空气体组
分追加剂量 组 !顶空气体组分追加剂量
组 !阳
性对照组k阳性致敏物质同 2 q1l !溶剂组k乙醚液l ∀
表 t 皮肤过敏反应程度评分标准
红斑形成 积分 水肿形成 积分
无红斑 s 无水肿 s
轻度红斑 t 轻度水肿 t
中度红斑 u 中度水肿 u
重度红斑 v 重度水肿 v
水肿性红斑 w p p
表 u 明党参不同组分对豚鼠皮肤的致敏性
组别
剂量
r °¯ #k¦°ul p t
红肿平均反应值r«
y uw w{ zu
致敏率
r h
乙醚 p s s s s s
⁄≤
s qsvu v qv v qy u qv t qs tss
顶空气体组分 s qsvu s s s s s
顶空气体组分
s qsvu s s s s s
挥发油 s qsvu u qs u qy t qy t qs tss
蛋白质 s qsvu s s s s s
注 }实验用豚鼠均为 {只k表 v o表 w o表 x同l
致敏 !激发接触同 2 q2 ∀结果见表 v ∀
实验结果表明 o顶空气体组分 组 !顶空气体
组分
组加大给药量后 o仍未见豚鼠有过敏现象产
生 ∀
表 v 明党参顶空气体组分对豚鼠皮肤的致敏性
组别
剂量
r °¯ #k¦°ul p t
红肿平均反应值r«
y uw w{ zu
致敏率
r h
乙醚 p s s s s s
⁄≤
s qsvu u qs v qx u qy t qv tsstl
顶空气体组分 s qtu{ s s s s s
顶空气体组分
s qtu{ s s s s s
注 }tl除脱毛处皮肤出现红斑轻度水肿外 o还出现眼部红赤 !流
泪或泪水充盈 !搔痒 !烦燥难耐等过敏症状k表 x同l
214 不同剂量挥发油的皮肤过敏试验
21411 样品配制
挥发油高剂量组 }取按 21113 制备挥发油乙醚
液 vy °¯ o室温挥散乙醚至 ts °¯ o得 t °¯ 含 s qsu °¯
挥发油的乙醚液k相当于 vy ª生药量l ∀挥发油中
剂量组 }取按 21113 制备挥发油乙醚液 o即得 t °¯
含 s qssxx °¯ 挥发油的乙醚液k相当于 ts ª生药
量l ∀挥发油低剂量组 }取按 21113 制备挥发油乙醚
液 w qs °¯ o加乙醚定容至 tt qu °¯ o得 t °¯ 含 s qssus
°¯ 挥发油的乙醚液k相当于 v qy ª生药量l ∀
21412 致敏 !激发接触同 212 ∀结果表 w ∀
#wyy#
第 ux卷第 tt期
usss年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qtt
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表 w 明党参挥发油低 !中 !高剂量对豚鼠皮肤的致敏性
组别
剂量
r °¯ #k¦°ul p t
红肿平均反应值r«
y uw w{ zu
致敏率
r h
乙醚 p s s s s s
⁄≤
s qsvu t q{ v qt u qt t qs tss
低剂量 s qsyw t qu t qz t qv t qs tss
中剂量 s qtzy u qs u qv t qv t qs tss
高剂量 s qyws u qy v qv u qs t qt tss
215 雾化接触给药过敏试验
21511 样品处理 }取顶空气体组分 液 tx °¯ o挥
去乙醚后 o加水和适量 u h吐温 {s共 vs °¯ o溶解备
用 ∀顶空气体组分
!挥发油和阳性对照组k阳性致
敏物质同 211l同样制备 o各得 vs °¯ 混悬液备用 ∀
21512 过敏试验 }取健康无伤豚鼠 ws只 o体重 uxs
∗ vss ªo雌雄各半 ∀随机分成 x组 o每组 {只 o分为
顶空气体组分 组 !顶空气体组分
组 !挥发油组 !
阳性对照组 !水和 u h吐温 {s混合液组 ∀实验第 t
天 o将每组豚鼠逐只放入体积为 w 的玻璃罩内 o以
s qw ®ª#k¦°ulp t压力喷入受试药物 t °¬±o使玻璃罩
内充满样品气体 ∀第 z天 !第 tw天按第 t天给药方
法重复给药 ∀第 u{天 o将豚鼠脊柱两侧用 { h硫化
钠脱毛 o脱毛面积两侧各 ts ¦°u ∀第 u{天再重复给
药一次 oy ouw ow{ ozu «观察脱毛处及其它部位有无
过敏反应 o并记录过敏反应情况 o结果见表 x ∀
表 x 明党参各组分雾化接触对豚鼠皮肤的致敏性
组别
红肿平均反应值r«
y uw w{ zu
致敏率
r h
u h吐温 {s水溶液 p s s s ss
⁄≤
t q| v qs t qy t qt tsstl
顶空气体组分 s s s s s
顶空气体组分
s s s s s
挥发油 t qy u qv t qv t qs tsstl
挥发油组及阳性对照组豚鼠第 u{天给药后 o脱
毛处皮肤出现红斑轻度水肿 o如表 x所示 ∀还出现
眼部红赤 !流泪或泪水充盈 !搔痒 !烦燥难耐等过敏
症状 ∀其它 v组均未见有类似过敏反应出现 ∀
3 讨论
311 考虑到顶空气体组分 和
的挥发性较强 o
且浓度未知 o故在其第一次皮肤过敏试验中未见有
过敏现象的情况下 o追加剂量至原剂量的 w倍 o仍未
见过敏现象 ∀鉴于蛋白质不易挥发 o在产地加工过
程中 o仅手臂上皮肤易接触 o故未将其进行雾化接触
过敏试验 ∀
312 综合多次实验结果 o可初步认为挥发油为鲜明
党参中的致敏物质 ∀鲜明党参中含一定量的挥发
油 o在加工时随水蒸气弥散 o故可使接触者在吸入气
体或皮肤接触时均产生过敏 o这与本试验结果较为
一致 ∀
313 过敏反应可因工业接触 !环境 !药品或食品过
敏引起 ∀致敏原必须为抗原或半抗原 o抗原为生物
大分子 o如球蛋白 ∀半抗原可以是小分子 o进入机体
后与机体的蛋白质结合 o具有完全抗原的性质 ∀易
与蛋白结合的半抗原基团有 ) ≤t o) ƒk如 ⁄≤
o
⁄ƒ
l o) n o) ≥ 等 ∀本试验结果排除了
全抗原2明党参蛋白质 o推测为挥发油中的某一或某
几个成分作为半抗原而致敏 o顶空气体组分 o
中
可由于不存在半抗原分子或半抗原分子含量极低而
不具致敏性 ∀
≈参考文献
≈t 北京大学化学系有机化学教研室 1 有机化学词典 1 北京 }科学
出版社 ot|{z1wx{1
≈u 陈 奇 1 中药药理研究方法学 1 北京 }人民卫生出版社 o
t||v1tyy1
≈责任编辑 袁桂京
启 事
本刊已加入5中国学术期刊k光盘版l6和中国期刊网 !万方数据k≤«¬±¤±©²l系统科技期刊群等 o来稿一经刊用 o本刊即拥有
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