全 文 ：虫草菌丝及其药物血清对肝脏
枯否氏细胞生成 Œ2toŒƒ‘及 × ‘ƒ 的影响
刘平 朱剑亮 黄耀羲 刘成
k上海市中医药研究院肝病研究中心 usssvul
摘要 大鼠肝枯否氏细胞在虫草菌丝提取物及其药物血清作用下o其 Œ2toŒƒ‘及 × ‘ƒ 的生成量
显著提高o尤以 Œ2t及 Œƒ‘为著∀动物体内给药后分离的药物血清的作用结果与其提取物基本一致o但
更具重复性和良好的稳定性∀
关键词 虫草 枯否氏细胞 干扰素 白细胞介素2t 肿瘤坏死因子
我们曾报道应用冬虫夏草菌丝k虫草菌丝l
治疗肝炎后肝硬化以及合用桃仁提取物抗肝纤
维化具有一定的临床效果1t∗ v2o对患者免疫机
能的异常有着较好的调整作用∀本文就虫草菌
丝提取物及饲喂虫草菌丝的动物血清对体外培
养的大鼠肝脏枯否氏细胞分泌白细胞介素t!干
扰素及肿瘤坏死因子的影响进行了研究o现报
告如下∀
1 材料与方法
111 材料
• ¬¶·¤µ雄性大鼠!体重t{s∗ uusªo购自中
国科学院实验动物中心k合格证号}中科动管
ssx号l∀…„…Ù≤ 小鼠ou周龄o购自上海市计
划生育研究所∀虫草菌丝系自青海冬虫夏草
Χορδψχεπσ σινενσισk… µ¨®ql≥¤¦¦q中分离得到的
蝙蝠娥拟青霉 Παεχιλονψχεσ ηεπιαλι ≤ «¨ ± ≤¶2w
菌株o人工发酵!制备而成k江西国药厂产品l∀
 ¤·µ¬½¤°¬§¨ o ¯ 型胶原酶及 ≤²±„ 购自 ≥¬ª°¤
公司k¶·瑞士o ²l∀‹ ∞°∞≥k‘2u2«¼§µ²¬¼ ·¨«¯
°¬³¨ µ¤½¬± 2¨‘2u2¨ ·«¤± ¶¨∏¯©²±¬¦¤¦¬§l及tyws粉
末为美国 ŠŒ…≤’ 产品~链霉蛋白酶 ∞k³µ²±¤¶¨
∞l购自  µ¨¦® 公司k德国o⁄¤µ°¶·¤§·l∀v ‹ 2
× §µ购自中国科学院上海原子核研究所∀
112 方法
11211 药物的制备 虫草菌丝用zxh 乙醇提
取o回收酒精后浓缩至含生药xªÙ° o¯低温冷冻
备用∀使用前以tyws培养液稀释!低速离心后弃
沉淀o上清液直接用于细胞培养实验∀
11212 药物血清的制备 • ¬¶·¤µ大鼠o体重
vvs∗ vysªo将虫草提取液稀释成s1xªÙ° o¯按
临床成人公斤体重剂量的ts倍!vs倍!xs倍计
算o即uoyotsªÙŽª体重灌胃给药o于给药t«后
在无菌条件下剖腹o下腔静脉取血o离心分离血
清k简称虫草血清lo冻存备用∀
11213 大鼠肝枯否氏细胞的分离 麻醉下打
开腹腔o暴露门静脉o插入t{Š 的留置针∀连接
恒流泵o灌入含 ‹ ∞°∞≥o无 ≤¤un 的 ‹ ¤±®χ¶液
k‹ …≥≥ltss° o¯流速tu° Ù¯°¬±o继以含s1sxh
胶原酶 ‹ ∞°∞≥2‹ …≥≥ 溶液tss°¯及s1sxh 链
霉蛋白酶 ‹ ∞°∞≥2‹ …≥≥ 溶液xs°¯灌流后o摘
出肝脏细切o加入含有s1sxh 链霉蛋白酶的
‹ ∞°∞≥2‹ …≥≥ 溶液中vzε 振荡消化us°¬±∀经
纱布滤过去除未消化的肝组织owssµÙ°¬±owε o
u°¬±离心去除细胞碎屑o其上清经tussµÙ°¬±
离心ts°¬±收集细胞o并用 ‹ …≥≥ 沉洗v次o将
所得的细胞经z1xh  ·¨µ¬½¤°¬§¨ 非连续梯度
离心法分离肝非实质细胞o此肝非实质细胞再
用 ‹ …≥≥ 沉洗v次~以含ush 小牛血清kƒ≤ ≥l的
•  ⁄Œ tyws培养液悬浮o分注于塑制培养皿
k°„ ≤’‘vssvl中o在通过含xh ≤ ’ u的高湿度
空气的培养箱中ovzε 培养uw«后o吸弃培养
液o并用 ‹ …≥≥ 清洗培养皿o去除未粘附的细
胞o再加入含s1suh ∞⁄× „ 的 °…≥ 溶液o静置
tx°¬±后o用包有橡胶的玻璃棒刮取粘附于培
#zyv# 中国中药杂志 t||y年第ut卷第y期
养皿壁的细胞o洗净后供实验用∀用含tsh ƒ≤ ≥
的 •  ⁄Œ tyws培养液将细胞浓度调整至x≅
tsxÙ° o¯用于添加药物的培养实验∀
11214 虫草菌丝及虫草血清对枯否氏细胞的
作用 于uw孔培养板的孔内添加调整为x≅
tsxÙ°¯的细胞悬浮液s1x° Ù¯孔~再分别加入不
同浓度的虫草提取物k分别为相当于生药u1xo
xotsousows°ªÙ°¯及空白对照组l或各种给药
剂量的虫草血清及未投药的正常大鼠血清o培
养uw«后吸弃上清o加入含tsh ƒ≤ ≥ 的 •  ⁄Œ
tyws培养液s1x° o¯≤²±„ tssΛªÙ°¯溶液xsΛ¯
培养w{«o离心o取上清o储存于p zxε 冰箱中
待测∀
11215 白细胞介素tkŒ2tlo干扰素kŒƒ‘lo肿
瘤坏死因子k× ‘ƒl含量的测定 检测样品量
均取上述各培养上清液xsΛ ∀¯
Œ2t的测定}采用 …„…Ù≤ 小鼠胸腺细胞
增殖!v ‹ 2× §µ掺入的生物学方法测定∀
Œƒ‘活性测定}用微量细胞病变抑制法∀由
中国科学院生化研究所测定∀
× ‘ƒ 的测定}用 ∞„ ≥„ 方法测定o药盒
购自中国军事医学科学院o按说明书要求操作∀
2 结果
211 虫草提取物对枯否氏细胞产生 Œ2to
Œƒ‘o× ‘ƒ 的影响
在一定剂量 ≤²±„ 的刺激下o经虫草提取
物作用后的大鼠枯否氏细胞生成的 Œ2t量显
著增加o且呈一定的量效关系o以us°ªÙ°¯的
作用最强o增加至ws°ªÙ°¯时其作用反而减
弱∀
枯否氏细胞经虫草提取物作用uw«后o再
用 ≤²±„ 诱导o观察药物对细胞生成 Œƒ‘的影
响∀经药物作用后的细胞o其生成 Œƒ‘的量明
显增加o且呈一定的量效关系o以us°ªÙ°¯的
作用最为显著o增加至ws°ªÙ°¯时其作用反而
减弱∀
枯否氏细胞经虫草菌丝提取物孵育uw«
后o在 ≤²±„ 的作用下可生成一定量的 × ‘ƒo
但作用较弱∀见表t∀
212 虫草血清对大鼠枯否氏细胞产生 Œ2to
Œƒ‘o× ‘ƒ 的影响
在一定剂量 ≤²±„ 的刺激下o经虫草血清
作用后的枯否氏细胞生成的 Œ2t量显著增加o
以yªÙ®ª体重给药的药物血清的作用最为显
著o高于虫草提取物各剂量组∀
枯否氏细胞经虫草血清作用uw«后o再用
≤²±„ 诱导o见到经药物血清作用后细胞生成
Œƒ‘的量显著增加o而且呈一定的量效关系o以
yªÙ®ª体重给药的药物血清的作用最为显著o
tsªÙ®ª体重给药的药物血清的作用反而减弱∀
细胞经虫草血清孵育uw«后o在 ≤²±„ 的
作用下可生成一定量的 × ‘ƒo但作用较弱o见
表u∀
表t 虫草菌丝提取物对大鼠
枯否氏细胞生成 Œ2toŒƒ‘o× ‘ƒ 的影响
组别
剂量
°ªÙ°¯
Œ2t
¦³°
Œƒ‘
˜Ù°¯
× ‘ƒ
ΛªÙ°¯
空白对照 v{{? z{ s1vs? s1xs s? s
虫草菌丝 u1x xzy? {vtl w1zs? s1|sul s1tv? s1sz
x zsv? ty{ul y1zs? t1|sul s1tx? s1tv
ts {us? {xul ts1zs? v1{sul s1ut? s1tytl
us tswx? tzsul tv1vs? z1xsul s1tx? s1ty
ws {ux? tx|ul y1ss? t1yvul s1sx? s1s|
注}≠ ξ ? ≥⁄  ±€ zk下同l 与对照组比较tl °  s1sx
ul ° s1st
表u 虫草血清对大鼠
枯否氏细胞生成 Œ2toŒƒ‘o× ‘ƒ 的影响
组别
剂量
ªÙ®ª
Œ2t
¦³°
Œƒ‘
˜Ù°¯
× ‘ƒ
ΛªÙ°¯
空白对照 vvy? {x s1vs? s1xso s? s
未给药 wty? tvv u1ss? t1ys s? s
虫草血清 u {vt? tx1xul y1zs? t1|sul s1sw? s1sw
y tux{? tyvul tt1vs? v1{sul s1tv? s1sztl
ts {|x? tvwul |1vs? x1ssul s1tx? s1s{tl
注}与未给药组比较 tl ° s1sx ul° s1st
3 讨论
冬虫夏草为名贵中药o具有/补虚损o益精
气0的功用∀近十多年来对其代用品人工虫草菌
#{yv# 中国中药杂志 t||y年第ut卷第y期
丝的研究已积累了相当丰富的资料∀尤其是其
免疫药理学作用以及在慢性肝病中的应用受到
较广泛的关注∀本文虫草菌丝提取物及大鼠饲
喂虫草菌丝提取物后的药物血清对体外培养大
鼠枯否氏细胞生成 Œ2toŒƒ‘o× ‘ƒ 的实验结
果表明o细胞在虫草菌丝提取物及其药物血清
作用后o再由 ≤²± „ 所诱生的 Œ2toŒƒ‘ 及
× ‘ƒ 的量显著提高o尤以提高 Œ2t及 Œƒ‘为
著o且呈一定的剂量依赖性∀提示虫草菌丝对枯
否氏细胞功能确有一定的调整作用∀
Œƒ‘的作用较为明确o而 Œ2t在免疫或炎
症反应中起着传递信息!促使细胞分化繁殖等
多方面的作用o虫草菌丝提高枯否氏细胞生成
Œ2t的量可能与其调整慢性肝病患者的免疫机
能具有一定的关系∀这一点与小柴胡汤及柴胡
皂甙治疗慢性肝病的作用机制是类似的1w2∀
中药粗提物中非药效的成分对体外培养细
胞所造成的影响o一直是体外药效实验难以解
决的问题o有鉴于此o本文同时观察了动物体内
给药后分离的药物血清对细胞的作用o其得到
的结果既与药物提取物的作用基本一致o又更
具重复性和良好的稳定性∀其中yªÙ®ª体重给
药的药物血清提高细胞 Œ2t生成的量明显高
于任何一种剂量药物的直接添加效果∀
4 参考文献
t 刘成等q上海中医药杂志 t|{y~kylÚ vs
u 刘平等q上海中医学院 上海市中医药研究院学报
t|{|~vÚ ux
v 朱剑亮等q中国中西医结合杂志 t||u~tukwlÚ usz
w 尾关恒雄 他q汉方医学 t||t~txÚ uvy
t||x) su) tt收稿
汉防己甲素对阿霉素或长春新碱
耐药株人癌细胞的逆转抗药性作用
叶祖光 孙爱续 李兰芳 曹秀芳 叶文华
k中国中医研究院中药研究所 北京tsszssl
摘要 在敏感株和阿霉素耐药株  ≤ ƒ 2z和  ≤ ƒ 2zل §以及敏感株和长春新碱耐药株 Ž… 和
Ž…√uss两种人癌细胞的体外试验中o发现汉防己甲素对耐药细胞株的  ≤ ƒ2zل §具有明
显的选择性作用o而且基本上可以完全逆转  ≤ ƒ2zل §或Ž…√uss对阿霉素或长春新碱
的抗药性∀
关键词 汉防己甲素 阿霉素 长春新碱 Ž…细胞  ≤ ƒ 2z细胞
肿瘤细胞产生多药耐药性k ∏¯·¬§µ∏ª µ¨2
¶¬¶·¤±¦¨l是导致癌症化疗失败的主要因素之
一∀有试验证明o一些钙离子通道阻断剂能够有
效地逆转肿瘤细胞的多药抗药性1t2o目前越来
越多的证据表明中药汉防己的有效成分汉防己
甲素是一种钙离子拮抗剂1u2∀我们以前的试验
结果表明o汉防己甲素对体外培养的人恶性疟
原虫的抗药性具有逆转作用1v2∀最近有人证明
它对中国仓鼠卵巢细胞系的抗药性也具有逆转
作用1w2∀本文拟采用阿霉素耐药株的人乳腺癌
 ≤ ƒ 2zل §细胞以及长春新碱耐药株的人口
腔上皮样癌Ž…√uss细胞o在体外试验中进一步
研究汉防己甲素对人癌细胞抗药性的逆转作
用∀
1 材料与方法
111 药品与试剂 抗肿瘤药阿霉素和长春新
碱分别为中国浙江海门制药厂和北京医科大学
实验药厂的产品o两种药品均用生理盐水配制o
过滤除菌∀汉防己甲素为浙江金华制药厂的产
品o将其溶于酸水k³‹ € yl中o除菌过滤∀上述
药液在试验时用培养基配制成一系列的稀释
液∀蓝四氮唑k × × l为美国 ≥¬ª°¤公司的产
#|yv# 中国中药杂志 t||y年第ut卷第y期