全 文 ：桂枝汤有效部位 „对下丘脑热休克蛋白含量的影响
霍海如 o谭余庆 o周爱香 o李晓芹 o郭淑英 o孙玉茹 o姜廷良
k中国中医研究院 中药研究所 o北京 tsszssl
≈摘要  目的 }研究桂枝汤有效部位 „kƒµq„l在双向调节体温的同时对下丘脑热休克蛋白k‹≥°l的影响 ∀方
法 }取高 !低体温大鼠下丘脑组织 o应用蛋白印迹法测定热休克蛋白含量 ∀结果 }ƒµq„ 在双向调节体温的同时 o可
明显拮抗安痛定性低体温大鼠下丘脑 ‹≥°zs含量的降低 o对酵母性高体温大鼠下丘脑 ‹≥°zs含量具有一定的降
低作用 ∀结论 }ƒµq„对高 !低体温大鼠下丘脑 ‹≥°zs含量的调节作用是其双向调节体温的机理之一 ∀
≈关键词  桂枝汤有效部位 ~下丘脑 ~热休克蛋白 ~蛋白印迹法
≈中图分类号 • u{x qx ≈文献标识码 … ≈文章编号 tsst2xvsukussslts2syt|2sv
分子遗传学发现 o在细胞内有一类热休克基因 o
又称应激基因 o当细胞的环境因素k如温度升高 !金
属离子 !能量代谢抑制剂 !氨基酸类似物l !病理因素
k如发热 !病毒或细菌感染 !老化 !局部缺血 !神经损
伤 !药物l等多种非生理条件影响下 o可导致该基因
的表达谱改变 o合成一组热休克蛋白k«¨ ¤·¶«²¦®
³µ²·¨¬±o ‹≥°l o它是迄今被发现的最保守的遗传系
统 o具有对细胞的保护功能 ∀普遍性 o保守性 o合成
的迅速性和可诱导性是 ‹≥°的 w个特点≈t  ∀体温
的升高或降低可视为对机体的伤害性刺激 o使机体
处于应激状态 ∀我们先前的研究已经发现 o桂枝汤
有效部位 „kƒµq„l对体温具有双向调节作用 o并影
响胞内信号传导物质≈u ov  ∀本研究旨在探讨 ƒµq„
在调节体温的同时 o对热应激刺激诱导的下丘脑组
织中 ‹≥°zs含量的影响 o试从分子生物学的角度 o
更深层次揭示桂枝汤双向调节作用的机理 ∀
1 实验材料
1 q1 动物 • ¬¶·¤µ大鼠 o雄性 o体重ktys ? tsl ªo
由中国医学科学院动物研究中心提供 o合格证号 }医
动字第 st2vss{ ∀
1 q2 药品及试剂 ƒµq„ 系桂枝汤的化学提取部
位 o为淡黄色粉末 o由本所化学室提取 o临用时配成
所需浓度供动物口饲 ∀鲜酵母购于北京第二食品
厂 op us ε 冷冻保存 ∀安痛定系北京制药厂出品 o
批号 |zsxux ∀羊抗人 ‹≥°抗体购自 ≥¤±·¤ ≤µ∏½生
物技术公司 o辣根过氧化酶 ŒªŠ驴抗羊抗体购自华
≈收稿日期  usss2st2ts
≈基金项目  /九五0攀登计划预选项目
美试剂公司 ∀ ∞≤试剂购自美国 „ ° µ¨¶«¤±公司 ∀
十二烷基硫酸钠k≥⁄≥l o二硫苏糖醇k⁄× ×l o巯基乙
醇k… ∞l等试剂均为市售分析纯 ∀
1 q3 仪器 半导体温度测温仪k上海医用仪表厂l o
≥2|{ss 液体闪烁计数器k美国 …¨ ¦®°¤± 公司l o
…¬²©∏ª¨ u{• ≥台式高速离心机k德国 ‹ µ¨¤¨ ∏¶公司l o
˜ ∂Œ凝胶图像扫描仪k≥·²«±. ¶Œ±±²√¤·¬²± ≤ ±¨·¨µo
∞±ª¯¤±§l ∀
2 实验方法
2 q1 ƒµq„对酵母致高体温和安痛定致低体温的影
响 选取基础肛温在kvy qx ? s qxl ε 范围的大鼠 o
以致热原鲜酵母悬液背部皮下注射ku qw ª#®ªp t体
重l诱致体温升高 ov qx «后测肛温 o选取肛温升高 ∴
s q{ ε 者 o随机分为 v组 o即正常对照组 !酵母模型
组和酵母 n ƒµq„ z qy °ª#®ªp t组 ∀灌胃给药 o对照
组及模型组给同体积蒸馏水 ot «后 o重复给药 t次 o
剂量同前 ∀第 t次给药后 u«o测肛温 o并计算肛温
升高差值k药后 u «肛温值2基础肛温值l ∀
另选取基础肛温在kvy qx ? s qxl ε 范围的大
鼠 o随机分为 v组 o即正常对照组 !安痛定模型组和
安痛定 n ƒµq„ z qy °ª#®ªp t组 ∀灌胃给药 o对照组
及模型组给同体积蒸馏水 ot «后 o重复给药一次 o剂
量同前 o同时腹腔注射解热镇痛药安痛定 u qu °¯ #
®ªp tk对照组注射同体积蒸馏水l诱致体温下降 ∀在
注射安痛定后 t qx «o测肛温 o并计算肛温降低差值
k药后肛温值 p基础肛温值l ∀
动物检测肛温后 o立即断头处死 o迅速取脑 o干
冰速冻 op zs ε 保存备用 ∀
#|ty#
第 ux卷第 ts期
usss年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qts
’¦·qousss
2 q2 ‹≥°胞浆蛋白的制备≈w  取冷冻大鼠下丘脑
组织约 xs °ªo加匀浆缓冲液k×µ¬¶2≤¯xs °°²¯#p t o
s qt h ≥⁄≥ os qu °°²¯ #pt ⁄× × ow h … ∞ots h甘
油 o³‹z qwls qz °¯ ∀ tu sss µ# °¬±p t室温离心 ts
°¬±o收集上清 o各取匀浆上清液 usΛ¯ o用 ²ºµ¼法
进行蛋白定量 o余样品 p zs ε 保存备用 ∀
2 q3 • ¶¨·¨µ± …¯ ²·杂交分析 参照文献≈w 方法 o略
作修改 ∀将制备的样品蛋白进行电泳k{ qx h ≥⁄≥2
°„Š∞l o按每一样品 ysΛª蛋白量上样 o电泳完毕后 o
将凝胶进行电转移至醋酸纤维素膜上 o然后将膜置
于 v h牛血清白蛋白的 °…≥中封闭过夜kw ε l o再分
别与第一抗体kt }t sssl反应 t «o用 °…≥液洗 v次 o
每次 ts °¬±o再将膜置于 tΒtss的辣根过氧化酶标
记的 ŒªŠ第二抗体中反应 t «o同法洗 v次 o与 ∞≤
显影发光 o用 ÷ 光片记录影像 ∀用 ˜ ∂Œ凝胶图像扫
描仪对 ÷ 光影像进行扫描记数 o以各带扫描记数值
进行统计学处理 ∀
2 q4 统计学处理 所有实验数据为均数 ? 标准差k
ξ ? σ) ,均数间显著性检验用 τ检验法 ∀
3 结果
3 q1 ƒµq„对酵母致高体温和安痛定致低体温的影
响 如表 t ou所示 oƒµq„对酵母致大鼠体温升高有
显著的降低作用 o对安痛定诱致的体温降低有显著
的回升作用 o体温变化值与模型组比较均有显著性
差异k Π s qsxl o表明 ƒµq„ 可使高 !低体温动物体
温分别向正常水平方向进行调节 ∀
表 t ƒµq„对酵母致大鼠发热的影响
组别
剂量
r°ª#®ªp t
ν 基础肛温r ε
酵母 v qx «后肛温
r ε
药后 u «肛温
r ε
肛温升高值
r ε
对照组 | vy q|s ? s qvy vy q{u ? s qvw vy q|w ? s quv s qsw ? s qxu
酵母组 { vz qts ? s qu| v{ qu| ? s qwvtl v| qt| ? s quutl u qs| ? s qvttl
ƒµq„组 z qy | vz qss ? s qwu v{ qst ? s qvvtl v{ q{u ? s qvtul t qy{ ? s qwuul
注 }ξ ? σ 与对照组比较 t) Π s .st 与酵母组比较 u) Π s qsx
表 u ƒµq„对安痛定致大鼠低体温的影响
组别
剂量
r°ª#®ªp t
ν 基础肛温r ε
药后 t qx «肛温
r ε
肛温降低值
r ε
对照组 | vy q|s ? s qvy vy q|u ? s qut p s qtu ? s qvy
安痛定组 | vy q|w ? s qv| vx qts ? s qv{tl t q{w ? s qxvtl
ƒµq„组 z qy ts vy q{z ? s qvv vx qyw ? s qw|ul t qtv ? s qzxul
注 }ξ ? σ 与对照组比较 t) Π s .st 与安痛定组比较 u) Π s qsx
3 q2 ƒµq„对热休克蛋白的影响
3 q2 q1 ‹≥°zs蛋白的确定 按文献≈x 方法 o计算
•©值 ∀经计算条带 •©值为 s quvux o分子量为 y| q
{t®⁄o‹≥°zs分子量为 zs®⁄o故本计算结果与之相
符 o也与所购试剂要求相符 ∀
3 q2 q2 ƒµq„对 ‹≥°zs蛋白含量的影响 由表 v可
见 o安痛定具有降低 ‹≥°zs含量的作用 oƒµq„ 则具
有明显的拮抗安痛定性低体温大鼠下丘脑 ‹≥°zs
含量降低的作用 ~酵母具有升高大鼠下丘脑 ‹≥°zs
含量的趋势 oƒµq„对酵母性发热大鼠下丘脑 ‹≥°zs
含量具有降低作用 ∀提示 ƒµq„ 对酵母性发热大鼠
和安痛定性低体温大鼠下丘脑 ‹≥°zs含量具有一
定的调节作用 ∀
表 v ƒµq„对 ‹≥°zs蛋白含量的影响
组别 剂量r°ª#®ªp t ‹≥°zs
对照组 zsvzt ? ttwvt
酵母组 {x{sv ? tw|y{
安痛定组 wuytu ? tysyxtl
酵母 n ƒµq„组 z qy xvtwx ? uuw{|vl
安痛定 n ƒµq„组 z qy xtys| ? x{x|ul
注 }≠ ξ ? σ  ν € y ≈ 与对照组比较 t) Π s .sx …与酵
母或安痛定组比较 u) Π s .sx v) Π s qst
4 讨论
‹≥°在细胞保护 !炎症反应和自身免疫等生理 !
病理过程中具有重要作用 ∀ ‹≥°zs的主要功能是参
与蛋白质的代谢 o清除细胞内的变性蛋白质是其重
要功能 ∀ ‹≥°还通常与具有不同功能的多种蛋白质
在细胞中形成天然复合体 o并通过其形成或解离而
#suy#
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∂ ²¯ qux o‘²qts
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参与有关蛋白质折叠 !亚基的组装 !细胞内运输以及
蛋白质降解等过程 o以调节靶蛋白的活性和功能 o但
又不参与靶蛋白的组成 o因此 o‹≥°已被认为是一种
/分子伴侣0或称 /伴侣蛋白0≈t  ∀可以看出 ‹≥°是
一种具有结构功能的保守性 !生物反应的普遍性 o是
机体维持正常结构与功能所不可缺少的一种保护机
制 ∀正常生理条件下 o也有少量的 ‹≥°zs基因转录
和翻译 ∀机体在热应激状态下 o‹≥° 基因被激活 o
‹≥°zs合成明显增加 ∀ ‹≥°可提高机体的耐热性 o
增强机体从应激中恢复的能力 ∀这种保护机制主要
通过调节胞内信号传递物质的活性如 ¦„  ° o≤¤u n o
Œ°v o°Ž≤ 等而进行≈y  ∀
目前认为第三信使主要参与细胞核内外的信息
传递 o是一种能与靶基因特异序列相结合的核蛋白 o
其功能主要调节基因的转录水平 o发挥着转录因子
或转录调节因素的作用 o这种蛋白也称为 ⁄‘„结合
蛋白≈z  ∀目前国内外对第三信使的具体物质尚未达
成共同的认识 ∀ ‹≥°在保护机体方面所表现的功能
似乎具有第三信使的性质 ∀
本实验表明 oƒµq„ 可拮抗安痛定性低体温大鼠
下丘脑 ‹≥°zs含量的降低 o对酵母性发热大鼠下丘
脑 ‹≥°zs含量升高有一定的拮抗趋势 o表明 ƒµq„
对 ‹≥°zs的调节可能是其对体温双向调节作用的
机理之一 ∀
≈参考文献 
≈t  沈 o方福德 q真核基因表达调控 q北京 }高等教育出版社 o
t||y quxx q
≈u  谭余庆 o李晓芹 o霍海如 o等 q桂枝汤有效部位 „对体温的双向调
节作用及其机理研究 ) ) ) 对大鼠下丘脑 °Š∞u 含量的影响 q中
国实验方剂学杂志 ot||{ owkul }tt q
≈v  霍海如 o李晓芹 o谭余庆 o等 q桂枝汤有效部位 „对体温双向调节
作用及其机理研究 ) ) ) 对下丘脑三磷酸肌醇和钙调蛋白含量的
影响 q中国实验方剂学杂志 ot||{ owkvl }tw q
≈w  陈德权 o陈胜 o潘秋萍 o等 q高温与不同浓度一氧化碳联合作用对
大鼠脑及内脏器官热应激蛋白含量的影响 q中华预防医学杂志 o
t||y ovskxl }uyu q
≈x  °«¤µ°¤¦¬¤q ≤¤¯¬¥µ¤·¬²± Ž¬·¶©²µ  ²¯ ¦¨∏¯¤µ • ¬¨ª«·⁄¨ ·¨µ°¬±¤·¬²±
˜¶¬±ª ∞¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶q ‘} °«¤µ°¤¦¬¤ Ž… …¬²·¨¦«±²¯²ª¼ Œ±¦q
°¬¶¦¤·¤º¤¼ ot|{{ qu q
≈y  Ž¬¤±ª Š o ׶²®²¶Š ≤ q ‹ ¤¨·≥«²¦® °µ²·¨¬± zs®⁄¤}…¬²¯²ª¼ o…¬²2
¦«¨ °¬¶·µ¼ o¤±§°«¼¶¬²¯²ª¼ q°«¤µ°¤¦²¯ ׫¨ µot||{ o{skul }t{v q
≈z   ²µ¬°·² • Œq ≤¨¯¯ ¬± ≥·µ¨¶¶} ×µ¤±¶¦µ¬³·¬²±¤¯ „¦·¬√¤·¬²± ²© ‹ ¤¨·
≥«²¦® Š ±¨¨ ¶q≥¦¬¨±¦¨ ot||v oux| }tws| q
Εφφεχτ ανδ Μεχηανισµ οφ Αχτιϖε Φραχτιον Α Γυιζηι
∆εχοχτιον ον ∆υαλ2∆ιρεχτιοναλ Τηερµ ορεγυλατιον :
Εφφεχτ ον Ηεατ Σηοχκ Προτειν ιν Ηψποτηαλαµ υσ οφ Ρατσ
‹ ˜’ ‹¤¬2µ∏o× „‘ ≠∏2 ¬´±ªo ‹ ’ ˜ „¬2¬¬¤±ªoŒ ÷¬¤²2 ¬´± o Š˜’ ≥«∏2¼¬±ªo≥˜‘ ≠∏2µ∏oŒ„‘Š ׬±ª2¯¬¤±ª
kŒ±¶·¬·∏·¨ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ¤·¨µ¬¤  §¨¬¦¤o≤«¬±¤ „¦¤§¨ °¼²© ×µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨  §¨¬¦¬±¨ o…¨ ¬­¬±ªtsszss o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ©¨©¨ ¦·²©¤¦·¬√¨©µ¤¦·¬²± „ ¬± Š∏¬½«¬⁄¨ ¦²¦·¬²± kƒµq„l ²± §∏¤¯2
§¬µ¨¦·¬²±¤¯ ·«¨µ°²µ¨ª∏¯¤·¬²± ¤±§¬·¶ ° ¦¨«¤±¬¶° ²©¬±©¯∏¨ ±¦¬±ª «¨ ¤·¶«²¦® ³µ²·¨¬± k ‹≥°l ¬± «¼³²·«¤¯¤°∏¶q
Μετηοδ : ˜¶¬±ª • ¶¨·¨µ± ¥¯²·° ·¨«²§·² ° ¤¨¶∏µ¨ ‹≥° ²©«¼³²·«¤¯¤°∏¶¬± ©¨ ¥µ¬¯¨ ¤±§«¼³²·«¨µ°¤¯ µ¤·¶qΡεσυλτσ:
• ª¨∏¯¤·¬±ª·«¨ ¥²§¼ ·¨°³¨µ¤·∏µ¨ ¬± §∏¤¯2§¬µ¨¦·¬²±oƒµq„ ¦²∏¯§¤±·¤ª²±¬½¨ ·«¨ §¨¦µ¨¤¶¨ ²© ‹≥° ¦²±·¨±·¶²© «¼2
³²·«¤¯¤°∏¶¬± «¼³²·«¨µ°¤¯ µ¤·¶¬±§∏¦¨§¥¼ ¤°¬±²³¼µ¬±¨ o¤±§¤¥¤·¨ ·«¨ ‹≥° ¦²±·¨±·¬± ©¨ ¥µ¬¯¨ µ¤·¶¬±§∏¦¨§¥¼
¼ ¤¨¶·qΧονχλυσιον : ƒµq„ ¤§­∏¶·¶·«¨ ¥²§¼ ·¨°³¨µ¤·∏µ¨ ·«µ²∏ª«µ¨ª∏¯¤·¬±ª·«¨ ¦²±·¨±·¶²© ‹≥° ²©«¼³²·«¤¯¤°∏¶
¬± ©¨ ¥µ¬¯¨ ¤±§«¼³²·«¨µ°¤¯ µ¤·¶q
[ Κεψ ωορδσ] ¤¦·¬√¨©µ¤¦·¬²± „ ¬± Š∏¬½«¬⁄¨ ¦²¦·¬²±~«¼³²·«¤¯¤°∏¶~«¨ ¤·¶«²¦® ³µ²·¨¬±~ • ¶¨·¨µ± ¥¯²·
≈责任编辑 方文贤 
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第 ux卷第 ts期
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