全 文 ：桑寄生乙醇提取物抗柯萨奇病毒 …v的实验研究
王志洁t o杨占秋t o黄铁牛u o文 莉t o刘焱文v
kt1 湖北医科大学 病毒研究所 o湖北 武汉 wvsszt ~u1 中南财经大学 o湖北 武汉 wvssyw ~
v1 湖北中医学院 中药系 o湖北 武汉 wvssywl
≈摘要  目的 }为研制抗柯萨奇病毒 …vk≤ ∂ …vl新药 o观察了桑寄生乙醇提取物不同部分抗 ≤ ∂ …v药效 ∀方法 }
以病毒唑为阳性对照 o用空斑减数实验检测了抗 ≤ ∂ …v 药效 ∀结果 }在 ‹∞³2u细胞系统中 o乙酸乙酯萃取部分k…l
对 ≤ ∂ …v直接杀灭 !感染阻断 !增殖抑制的 ∞⁄xs为 u qvu os quw ot q|t Λª# °¯ p t ∀正丁醇萃取部分k≤l的相应数值分别
为 t qww ou qsy ov qzs Λª# °¯ p t ∀病毒唑对 ≤ ∂ …v增殖抑制的 ∞⁄xs为 z qxx Λª# °¯ p t ∀结论 }桑寄生 …部分对 ≤ ∂ …v 直
接杀灭 !感染阻断 !增殖抑制的治疗指数k׌l为 uu qy out| ouz qx o≤ 部分的相应 ׌为 ttx otyx out qy ∀病毒唑对
≤ ∂ …v增殖抑制的 ׌为 v{ o数值相近 ∀桑寄生 …o≤ 部分抗 ≤ ∂ …v作用值得开发 ∀
≈关键词  桑寄生 ~≤ ∂ …v ~药理学
≈中图分类号 • u{x qx ~• |yx qt ≈文献标识码 … ≈文章编号 tsst2xvsukusssltt2sy{x2sv
柯萨奇病毒 …组可引起流行性胸痛 !无菌性脑
膜炎 !脑膜脑炎和心包炎 o特别是 …组 v型柯萨奇病
毒k≤ ∂ …vl引起的人类心肌炎及扩张性心肌病 o给人
类带来了极大的威胁≈t  ∀病毒唑可有效抑制患
≤ ∂ …v心肌炎小鼠心肌的病毒复制 o预防心肌炎的发
生≈u  o但有一定毒性≈v  ∀ ≤ ∂ …v 疫苗虽然可以抑制
小鼠 ≤ ∂ …v心肌炎 o可是需要制备大量的病毒抗原 o
成本过高 o难以推广及大量使用≈w  ∀所以 o筛选研制
抗 ≤ ∂ …v的新药一直受到重视 ∀
桑寄生是桑寄生科桑寄生属植物桑寄生的带叶
茎枝 ∀据报道 o桑寄生煎剂在体外单层猴肾上皮细
胞中 o对脊髓灰质炎和其它肠道病毒k∞≤ ‹ ’2y型 !|
型 o柯萨奇 „| o…w o…xl有显著的抑制作用≈x  ∀为了
研制抗 ≤ ∂ …v 的新药 o我们对桑寄生乙醇提取物的
抗 ≤ ∂ …v活性进行了初步的实验研究 ∀
1 材料与方法
111 材料
11111 中药 毛叶桑寄生 k Λοραντηυσ ψαδορικι
≥¬¨¥ql由湖北医科大学附属二院中药房提供 o由方
学韫 !程仲敏教授鉴定 ∀桑寄生 t ®ªo|x h乙醇回流
提取 o提取物减压浓缩得浸膏 o饱和食盐水热溶 o水
液依次用乙醚 !乙酸乙酯 !正丁醇萃取 o萃取物依次
称为 „ o…o≤ 三部分 ∀室温挥发至干 o用 °…≥将 …o≤
≈收稿日期  usss2st2tt
部分分别配为浓度为 wu ot{ qyz Λª# °¯ p t的工作液 o
消毒 Šy漏斗抽滤分装待用 ∀
11112 病毒唑 批号 |{syt|2t o武汉滨湖制药厂生
产 o是本实验抗 ≤ ∂ …v的阳性对照 ∀
11113 细胞与病毒 ‹∞³2u细胞购自湖北省医学
科学院病毒研究所 ∀ ≤ ∂ …v 由本所保存 ∀按本所常
规培养细胞 o繁殖病毒 ∀ ≤ ∂ …v× ≤Œ⁄xs为 tsx#pt ∀
112 方法
药物抗病毒试验用 v种方式进行 ∀接种在 t °¯
培养瓶上的细胞长成完整单层后分成 v大组 o分别
作不同方式的抗病毒试验 ∀各组均设置正常细胞对
照以及加入等体积 °…≥ 的单用病毒感染的对照 ∀
整个实验用的感染复数k  ’Œl为 t °ƒ∏r细胞 ∀桑
… !桑 ≤ 抗 ≤ ∂ …v 的试验是通过细胞毒试验的筛选 o
在最大无毒浓度及最小有效浓度的范围内进行的 ∀
11211 药物对 ≤ ∂ …v 的直接杀灭作用 病毒悬液
与含药的  ∞ 培养液混合摇匀 ovz ε 水浴孵 t «o
再感染细胞 ∀吸附 t«后再用 ‹¤±®. ¶液洗 v次 o加
入含 s qx h羧甲基纤维素的细胞维持液 ∀
11212 药物对 ≤ ∂ …v 感染细胞的阻断作用 以含
药  ∞ 培养液预先与细胞孵 u «o用 ‹¤±®. ¶液洗 v
次后 o以 ≤ ∂ …v感染细胞 o其它处理同上 ∀
11213 药物对 ≤ ∂ …v增殖的抑制作用 先以 ≤ ∂ …v
感染细胞 o吸附 t «后以 ‹¤±®. ¶液洗 v次 o加入含
药的细胞维持液 ∀
#x{y#
第 ux卷第 tt期
usss年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtt
‘²√ qousss
113 实验结果评判方法
11311 空斑减数实验 按上述方式作抗病毒试验
后 ovz ε 孵 tx «≈y  o弃维持液 o用 ts h甲醛固定 vs
°¬±o再用 s qx h结晶紫kus h甲醇配制l染色 o计算
空斑数 ∀每次实验重复 v次 ∀空斑减数率 € k病毒
对照组空斑数 p药物处理组空斑数lr病毒对照组空
斑数 ≅ tss h ∀
11312 细胞毒性试验 单层 ‹∞³2u 细胞加含药
 ∞ 培养液孵育 ovz ε 达 zu «后 o以苔盼蓝拒染
法计数死活细胞数 ∀
11313 半数效量的计算 本实验药物抗病毒
∞⁄xs !细胞毒 Œ≤xs的计算采用/加权直线回归法0 ∀
2 结果
211 桑寄生乙醇提取物不同部分的基本性质
用乙醚 !乙酸乙酯 !正丁醇萃取部分在本文中分
别称为 „ o…o≤ 三部分 ∀ „ 和 …部分挥发至干后均
得到黄绿色胶状物 o≤ 部分呈褐色粉状物 ∀用 °…≥
配成溶液后 o在紫外灯下均有黄绿色荧光 o盐酸2镁
粉反应红色 o与 t h三氯化铝乙醇液反应呈黄绿色 ∀
提示 „ o…o≤ 三部分均含有黄酮类物质 ∀
212 桑寄生乙酸乙酯萃取部分抗 ≤ ∂ …v 的空斑减
数实验结果
桑 …部分有效浓度范围为 ux qs ∗ s quw Λª#
°¯ p t ∀从表 t可见 o桑 …部分对 ≤ ∂ …v的直接杀灭 !
对感染的阻断以及对增殖抑制的实验中 o随着桑 …
部分剂量的增加 o≤ ∂ …v的空斑减数率也随之增加并
与之成正比 ∀病毒唑对 ≤ ∂ …v 增殖抑制的 ∞⁄xs为
z qxx Λª# °¯ p t o∞⁄|s为 uv qwu Λª# °¯ p t ∀桑寄生 …部
分对 ≤ ∂ …v直接杀灭 !感染阻断 !增殖抑制的 ∞⁄xs分
别为 u qvu os quw ot q|t Λª# °¯ p t o∞⁄|s分别为 tt qyy o
v q|w oty qxs Λª# °¯ p t ∀病毒唑对 ≤ ∂ …v 不具直接杀
灭及感染阻断作用 o对 ≤ ∂ …v 增殖抑制的 ∞⁄xs及
∞⁄|s数值均比桑寄生 …部分大 ∀说明桑 …部分抗
≤ ∂ …v的药效比病毒唑强 ∀
213 桑寄生正丁醇萃取部分抗 ≤ ∂ …v 的空斑减数
实验结果
桑 ≤ 部分有效浓度范围为 vz qs ∗ s qus Λª#
°¯ p t ∀从表 t可见 o在桑寄生 ≤ 部分对 ≤ ∂ …v 的直
接杀灭 !对感染阻断及对增殖抑制的试验中 o随着桑
≤部分剂量的增加 o≤ ∂ …v的空斑减数率也随之增加
并与之成正比 ∀桑 ≤ 部分对 ≤ ∂ …v 直接杀灭 !感染
阻断 !增殖抑制的 ∞⁄xs分别为 t qww ou qsy ov qzs Λª#
°¯ p t o∞⁄|s分别为 y qxw oy q|x owy qus Λª# °¯ p t ∀病
毒唑对 ≤ ∂ …v 不具直接杀灭及感染阻断作用 o对增
殖抑制的药效与桑 ≤ 部分相近 o说明桑 ≤ 部分抗
≤ ∂ …v药效比病毒唑强 ∀
表 t 桑寄生 …及 ≤ 部分抗 ≤ ∂ …v空斑减数实验
药物
空斑减数率
us ws xs ys {s |s
病毒唑ul v qx|tl y qsw z qxx | qwx tx q{u uv qwu
桑 …部分vl s q{y t qzt u qvu v qty y qx{ tt qyy
s qs{ s qtz s quw s qvw s qzz v q|w
s qxu t qsu t q|t u q{z z qyy ty qxs
桑 ≤ 部分vl s q{s t qut t qww t qzt u qxz y qxw
s qtt t qyu u qsy u qyu w qx{ y q|x
s qzt u qux v qzs y qs| t| qwt wy qus
注 }tl数字代表剂量 o单位为 Λª# °¯ p t ul病毒唑对 ≤ ∂ …v增殖的抑制作用 vl桑 …及桑 ≤ 部分数据 }上排指对 ≤ ∂ …v直接杀灭 ~中排为对
≤ ∂ …v感染的阻断 ~下排为对 ≤ ∂ …v增殖抑制的剂量
214 桑寄生乙酸乙酯及正丁醇萃取部分的细胞毒
作用
病毒唑对 ‹∞³2u 细胞的 Œ≤xs为 u{| qys Λª#
°¯ p t ∀桑 …部分 Œ≤xs为 xu qxz Λª# °¯ p t o桑 ≤ 部分
Œ≤xs为 {s qts Λª# °¯ p t ∀
3 讨论
从空斑减数实验的初步结果 o可以得出以下结
论 }≠ 病毒唑对 ≤ ∂ …v 不具直接杀灭及感染阻断作
用 o桑寄生 …部分及 ≤ 部分对 ≤ ∂ …v 具有明显的直
接杀灭及感染阻断作用 o药效比病毒唑强 ∀  病毒
唑对 ≤ ∂ …v 增殖抑制的 ∞⁄xs及 ∞⁄|s均比桑 …部分
为大 o与桑 ≤ 部分相近 ∀桑 …部分对 ≤ ∂ …v 增殖抑
制药效比病毒唑强 o桑 ≤ 部分药效与病毒唑相近 ∀
#y{y#
第 ux卷第 tt期
usss年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o‘²qtt
‘²√ qousss
≈在桑 … !桑 ≤ 部分抗 ≤ ∂ …v 的 v种实验中 o随着桑
… !桑 ≤ 部分剂量的增加 o病毒的空斑减数率也随之
增加并与之成正比关系 ∀ …桑 …部分抗 ≤ ∂ …v 药效
比桑 ≤ 部分强 ∀
治疗指数k×µ¨¤·° ±¨·Œ±§¨ ¬o׌l € Œ≤xsr∞⁄xs ∀
如果统一按直接杀灭 !感染阻断 !增殖抑制的顺序排
列 o桑 …部分抗 ≤ ∂ …v 的 ׌为 uu qy out| ouz qx ∀桑
≤部分抗 ≤ ∂ …v 的 ׌为 ttx otyx out qy ∀病毒唑对
≤ ∂ …v增殖抑制的 ׌为 v{ o与桑 … !桑 ≤ 部分相近 ∀
鉴于桑 …及桑 ≤ 部分的含量还受到桑寄生产地 !桑
寄生采摘季节 !不同桑寄生品种等多种因素的影
响≈z  o我们的下一步试验将充分考虑这些因素 o对桑
… !桑 ≤ 部分所含的黄酮类化合物进一步纯化 o并增
加桑 … !桑 ≤ 部分抗 ≤ ∂ …v 活性的观察指标 o如对
≤ ∂ …v所致细胞病变的抑制作用等 ∀我们还将在动
物试验k小鼠实验性 ≤ ∂ …v心肌炎模型l中检测桑 … !
桑 ≤ 部分的抗 ≤ ∂ …v 作用 o进一步确定开发利用桑
… !桑 ≤ 部分抗 ≤ ∂ …v 活性的价值 o这些工作正在进
行之中 ∀
≈参考文献 
≈t  ¤2µ·¬±² × „ o¬∏° o≥²¯¨  q ∂¬µ¤¯ Œ±©¨ ¦·¬²± ¤±§·«¨ °¤·«²ª¨ ±¨ 2
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„± Œ±¤¦·¬√¤·¨§ ≤²¬¶¤¦®¬¨ …v ¤±§∏√¤±·∂¤¦¦¬±§ • ¬·« °µ²·¨¦·¬√¨
∞©©¨ ¦·o „ª¤¬±¶·∞¬³¨µ¬° ±¨·¤¯  ¼²¦¤µ§¬·¬¶q≥¦¤±§Œ±©¨ ¦⁄¬¶≥∏³³¯ o
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Εξπεριµενταλ Ρεσεαρχη ον Ινηιβιτορψ Εφφεχτ οφ
Αλχοηολ Εξτραχτσφροµ Λοραντηυσψαδορικι Σιεβ . ον Χοξσαχκιε Βv ςιρυσ
• „‘Š «¬2­¬¨t o≠ „‘Š «¤±2 ¬´∏t o ‹ ˜„‘Š ׬¨2±¬∏u o • ∞‘¬t oŒ˜ ≠¤±2º ±¨v
kt q∂¬µ∏¶• ¶¨¨¤µ¦«Œ±¶·¬·∏·¨ o ‹∏¥¨¬ §¨¬¦¤¯ ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o • ∏«¤± wvsszt o‹∏¥¨¬o≤«¬±¤~
u q ¬§¶²∏·« ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ ²© ƒ¬±¤±¦¨ ¤±§∞¦²±²°¬¦¶o • ∏«¤± wvssyw o‹∏¥¨¬o≤«¬±¤~
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ¤±·¬√¬µ¤¯ ©¨©¨ ¦·²©·º²¦²°³²±¨ ±·¶k… ¤±§≤l ¬±·«¨ ¤¯¦²«²¯ ¬¨2
·µ¤¦·¶©µ²° Λοραντηυσ ψαδορικι ≥¬¨¥©²µ§¨ √¨¯²³° ±¨·²© ±¨ º ¤±·¬√¬µ¤¯ §µ∏ª¶©²µ¦²¬¶¤¦®¬¨ …v √¬µ∏¶k≤ ∂ …vl q
Μετηοδ : ˜¶¬±ªµ¬¥¤√¬µ¬± ¤¶³²¶¬·¬√¨¦²±·µ²¯ o·«¨ ³¯¤´ ∏¨ µ¨§∏¦·¬²± ¤¶¶¤¼ º¤¶¤§²³·¨§©²µ³«¤µ°¤§¼±¤°¬¦§¨·¨¦2
·¬²± qΡεσυλτσ:Œ±·«¨ ‹∞³2u ¦¨¯¯ ¶¼¶·¨° oº¬·«µ¨¶³¨¦··²§¬µ¨¦·√¬µ∏¦¬§¤¯ ¤¦·¬√¬·¼ ¤±§·«¨ ¬±«¬¥¬·¬²± ²± ≤ ∂ …v¬±©¨ ¦2
·¬²± ¤±§ °∏¯·¬³¯¬¦¤·¬²±o∞⁄xs¶²©¦²°³²±¨ ±·… º µ¨¨ u qvu Λª# °¯ p t os quw Λª# °¯ p t ¤±§t q|t Λª# °¯ p t oµ¨¶³¨¦2
·¬√¨¯¼ ¤±§·«²¶¨ ²©¦²°³²±¨ ±·≤ ot qww Λª# °¯ p t ou qsy Λª# °¯ p t ¤±§v qzs Λª# °¯ p t µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ qƒ²µ·«¨ ¬±«¬¥¬2
·¬²± ²± °∏¯·¬³¯¬¦¤·¬²± ²© ≤ ∂ …v o∞⁄xs ²©µ¬¥¤√¬µ¬± º¤¶z qxx Λª# °¯ p t qΧονχλυσιον : ×µ¨¤·° ±¨·¬±§¨ ¬¨ ¶k׌l²©·«¨
§¬µ¨¦·√¬µ∏¦¬§¤¯ ¤¦·¬√¬·¼ ¤±§¬±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¨ ¦·¶²©¦²°³²±¨ ±·…²± ≤ ∂ …v¬±©¨ ¦·¬²±¤±§°∏¯·¬³¯¬¦¤·¬²± uu qy out| ¤±§
uz qx µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ ~¦²°³²±¨ ±·≤ ottx otyx ¤±§ut qy ~¬±«¬¥¬·¬²± ²©µ¬¥¤√¬µ¬± ²± ≤ ∂ …v¬¶v{ oº«¬¦«¬¶¦²°³¤µ¤¥¯¨
·²·«²¶¨ ²©¦²°³²±¨ ±·¶…¤±§≤ qŒ·¬¶·«∏¶¶∏ªª¨¶·¨§·«¤··«¨ ¤±·¬2≤ ∂ …v ¤¦·¬²± ²©¦²°³²±¨ ±·¶…¤±§≤ ¬±·«¨ ¤¯2
¦²«²¯ ¬¨·µ¤¦·¶©µ²° ²µ¤±·«∏¶¼¤§²µ¬®¬≥¬¨¥§¨¶¨µ√ ¶¨·² ¥¨ ¬¨³¯²¬·¨§q
[ Κεψ Ωορδσ] Λοραντηυσ ψαδορικι ~¦²¬¶¤¦®¬¨ …v √¬µ∏¶~³«¤µ°¤¦²¯²ª¼
≈责任编辑 方文贤 
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