全 文 ：黄连解毒汤的抗炎作用机理研究
王利津 o徐 强
k中国药科大学 中药药理教研室 o江苏 南京 utsss|l
≈摘要  目的 }研究黄连解毒汤的抗炎机理 ∀方法 }采用小鼠背部气囊内注射角叉菜胶的方法诱导急性气囊
滑膜炎症 ~脂多糖腹腔注射造成内毒素血症模型 ~噻唑蓝比色法测定细胞增殖 ~Šµ¬¨¶¶法检测上清中 ‘’ pu 的浓度 ~
胸腺细胞增殖测定 Œ2t的活性 ∀结果 }黄连解毒汤能抑制角叉菜胶所致小鼠气囊内白细胞的游出 o减少 °Š∞u 的
生成 ∀在体外实验中 o黄连解毒汤能显著抑制 ≤²± „所致的内毒素血症小鼠脾淋巴细胞的增殖 o但对正常小鼠淋
巴细胞的增殖无影响 o且不影响正常及内毒素血症小鼠的脾细胞生成 Œ2u ∀黄连解毒汤还可抑制脂多糖诱导小鼠
腹腔巨噬细胞生成 Œ2t和 ‘’ ∀结论 }以上结果提示黄连解毒汤的抗炎作用主要与抑制 Œ2t o‘’ o°Š∞u 等炎症因
子生成有关 ∀
≈关键词  黄连解毒汤 ~Œ2t ~‘’ ~°Š∞u ~抗炎
≈中国分类号 • u{x ≈文献标识码 … ≈文章编号 tsst2xvsukusssls{2sw|v2sw
黄连解毒汤k‹⁄l源于唐#王焘所著之5外台秘
要6 o由黄连 !黄柏 !黄芩 !栀子四味药组成 o为清热解
毒的代表方 ∀其加减方主要用于治疗各种火毒炽盛
之内 !外科疾病 o后者在现代医学上多属微生物感染
和炎症性疾病 ∀已有报道指出黄连解毒汤对一些实
验性炎症模型有确切的抗炎活性 o但其详细机理尚
不明了 ∀为此 o在本研究中我们首先探讨了黄连解
毒汤对角叉菜胶诱导的小鼠气囊滑膜炎的作用 o然
后通过腹腔注射脂多糖k°≥l诱发小鼠内毒素血
症 o观察了黄连解毒汤对其脾细胞及腹腔巨噬细胞
功能的影响 o从免疫学角度初步探讨了其抗炎解毒
的机理 ∀
1 材料与方法
1 q1 药品及试剂
黄连 !黄芩 !黄柏 !栀子购自南京中医药大学江
苏时珍药房 ∀经中国药科大学中药复方研究室余伯
阳教授鉴定分别为 }毛茛科植物 Χοπτισ χηινενσισ
ƒµ¨±¦«q的干燥根 !唇形科植物 Σχυτελλαρια βαιχαλεν2
σισ的干燥根 !芸香科植物 Πηελλοδενδρον αµ υρενσε
• ∏³µq的干燥树皮及茜草科植物 Γαρδενια ϕασµι2
νοιδεσ ∞¯ ¬¯¶q的干燥成熟果实 ∀
取黄连 !黄芩 !黄柏和栀子按 vΒuΒuΒv的比例混
合 o加 ts倍量的水 o煎煮 t qx «o共煎 v次 ∀滤液合
并离心后浓缩干燥得黄连解毒汤提取物粉末 o收率
≈收稿日期  t|||2ts2s{
为 uu h ∀实验中所用的黄连解毒汤剂量均以该粉
末计算 ∀
1 q2 动物
…„…r¦小鼠ky ∗ {周龄 o体重 t{ ∗ uuªl o购自
南京医科大学动物中心 ∀
1 q3 小鼠气囊滑膜炎实验
小鼠背部皮下注射空气 x °¯ o第 v天及第 y天
再次注入空气各 v °¯ o维持气囊的膨胀 ∀于首次注
射空气的当天起经口给予黄连解毒汤 uss owss °ª#
®ªp t o连续 z §∀末次给药后 u «囊内注射 t h角叉
菜胶 t °¯ r只 o再 y «后处死动物 o于气囊内注入冰
生理盐水k含肝素 xs ˜# °¯ p tlu qx °¯ o轻轻按压 o吸
出 t °¯ ot sss µ#°¬±p t离心 ts °¬±o计数白细胞量 o
上清用紫外分光光度法检测 °Š∞u的含量 o以 ’⁄uz{
表示 ∀
1 q4 内毒素血症小鼠的制备
小鼠腹腔注射脂多糖 s qx °ªr只 otu «后用于
实验 ∀
1 q5 ≤²± „致小鼠脾淋巴细胞转化试验
无菌取出小鼠脾脏 o于 x °¯ ‹¤±®. ¶液中制备获
得脾细胞悬液 ot sss µ#°¬±p t离心 x °¬±后 o用 s qtz
°²¯#p t ×µ¬¶2s qzx h ‘‹w≤¯去除红细胞 o再用 • °2
Œ2tywskŠŒ…≤ ’l培养液k含 tss ˜# °¯ p t青霉素 !
tss ˜# °¯ p t链霉素和 ts h灭活无菌的新生牛血清l
洗涤两次 o调成 x ≅ tsy 个r °¯ 细胞悬液 ∀取 x ≅ tsx
个r孔置 |y孔培养板中 o在 x Λª# °¯ p t≤²± „及不同
#v|w#
第 ux卷第 {期
usss年 {月
中 国 中 药 杂 志
≤«¬±¤²∏µ±¤¯ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ¤·¨µ¬¤  §¨¬¦¤
∂ ²¯ qux o‘²q{
㸻qousss
浓度黄连解毒汤的共存下 o置 vz ε ox h ≤ ’u 下培
养 |y «∀终止培养前 w «加入 us Λ¯ 含 v2kw ox2
§¬° ·¨«¼¯2u2·«¬¤½²¯¼t l2u o x2§¬³«¨ ±¼¯2u‹2·¨·µ¤½²¯¬∏°
¥µ²°¬§¨k  × × ox Λª# °¯ p tl的培养基溶液 ∀w «后吸
去上清 o每孔加入 uss Λ¯ 二甲亚砜 o振荡 o使沉淀完
全溶解 oxws ±°处测吸光度 o将 ≤²± „ 刺激组的吸
光度除以不加 ≤²± „组的吸光度作为 ≤²± „对脾细
胞的刺激指数k¶·¬°∏¯¤·¬²±¬±§¨ ¬o≥Œl ∀
1 q6 ≤²± „诱导小鼠脾细胞产生白介素2ukŒ2ul
无菌摘出小鼠脾脏 o制成 t ≅ tsz 个r °¯ 细胞悬
液 o加入 ≤²± „k终浓度 ux Λª# °¯ p tl在 vz ε ox h
≤ ’u下培养 u «∀经洗涤 u次 o配成 t ≅ tsz 个r °¯ o
于 uw孔培养板中每孔加入细胞悬液 t °¯ 及不同浓
度的黄连解毒汤 t °¯ o置 vz ε ox h ≤ ’u培养 w{ «o
v sss µ#°¬±p t离心 ts °¬±o取上清测 Œ2u活性 ∀采
用活化小鼠脾细胞法 o将加上清组的吸光度除以不
加上清组的吸光度作为刺激指数表示 Œ2u活性≈t  ∀
1 q7 腹腔巨噬细胞的制备≈u 
取小鼠 o腹腔注射 …≤Š t °ªr只 ow §后 o腹腔注
射无血清 • ° Œ2tyws 培养液 u °¯ o断头处死 o用
zx h酒精浸泡 u °¬±o收集腹腔灌洗液 ot sss µ#
°¬±p t ow ε ots °¬±离心收集细胞 o用含 ts h灭活新
生牛血清的 • ° Œ2tyws培养液调整细胞浓度至 t ≅
tsy个r °¯ ∀取 uw孔细胞培养板 o每孔加细胞悬液 t
°¯ o置 vz ε ox h ≤ ’u预培养 u «后 o倾去培养液 o再
用新鲜培养液洗 u次 o除去非贴壁细胞 o获单层巨噬
细胞 ∀
1 q8 ‘’的诱生
取上述单层巨噬细胞 o加入 t °¯ r孔含脂多糖
k终浓度 ts Λª# °¯ p tl的无酚红 • ° Œ2tyws培养液
及 t °¯ r孔不同浓度的黄连解毒汤 ∀vz ε ox h ≤ ’u
下培养 w{«o经 u sss µ#°¬±p t离心 ts °¬±o取上清用
Šµ¬¨¶¶反应检测 ‘’ pu 的浓度 o计算巨噬细胞的 ‘’
生成量 ∀上清与 Šµ¬¨¶¶液kt h磺胺 os qt h ‘2t2萘乙
二胺盐酸盐 ou qx h磷酸l等体积混合 o室温放置 ts
°¬±o检测 xws ±°处的吸光度 ∀以亚硝酸钠为标准
品制作标准曲线 ∀
1 q9 Œ2t的诱生
取上述单层巨噬细胞 o加入 t °¯ r孔含脂多糖
k终浓度 ts Λª# °¯ p tl的 • ° Œ2tyws培养液及 t °¯ r
孔不同浓度的黄连解毒汤 ovz ε ox h ≤ ’u 条件下培
养 w{ «o经 u sss µ#°¬±p t离心 ts °¬±o取上清用胸
腺细胞增殖法检测 Œ2t的活力 o以刺激指数表示 ∀
1 q10 统计
各数据均以 ξ ? σ表示 ,并进行 τ检验 ∀
2 结果
2 q1 黄连解毒汤对角叉菜胶所致小鼠气囊滑膜炎
的影响
与正常组相比 o对照组气囊灌洗液中白细胞与
°Š∞u的含量均明显增加 ∀wss °ª#®ªp t黄连解毒
汤明显地减少了白细胞的数量并抑制了 °Š∞u 的渗
出k表 tl ∀
表 t 黄连解毒汤对角叉菜胶
诱导小鼠急性气囊滑膜炎的影响
分组
剂量r
°ª#®ªp t
• …≤rts p x# °¯ p t °Š∞ur’⁄uz{
正常对照 u qz{ ? t qwstl s qty{ ? s qsvtl
对照 vx quu ? tv qxy s qvux ? s qs|
‹⁄ uss v| q|t ? t| q{{ s qvv{ ? s qs|
wss ty qs{ ? z q|{tl s qusw ? s qsytl
注 }≠ ξ ? σ  ν € { t)与对照组比 Π s qstk下同l
2 q2 黄连解毒汤对正常及内毒素血症小鼠脾淋巴
细胞转化的影响
如表 u所示 o≤²± „ 对正常小鼠脾淋巴细胞的
刺激指数为 x q{z o与其相比 otsp z otsp y otsp x otsp w
ª# °¯ p t各浓度的黄连解毒汤对 ≤²± „所致的淋巴细
胞增殖均无影响 ∀而对于内毒素血症小鼠的脾淋巴
细胞 o≤²± „的刺激指数为 ux o黄连解毒汤对 ≤²± „
所致脾细胞增殖显示了浓度依赖性的抑制作用 o
tsp xª# °¯ p t以上浓度时有显著意义 ∀
表 u 黄连解毒汤对 ≤²± „诱导淋巴细胞转化的影响
分组 浓度
刺激指数
正常小鼠 内毒素血症小鼠
对照 x q{z ? s qvw ux qss ? s q|u
‹⁄ ts p z x q|z ? s qwt uv q|v ? s qyw
ts p y x q{| ? s qwt uv qwz ? s q|s
ts p x x qx| ? s qux tz qzv ? u qvutl
ts p w x quu ? s qxs tu qus ? t qx|tl
注 }每个数据代表 v次独立实验的平均值 o每个实验包括 v个平
行复孔
2 q3 黄连解毒汤对 ≤²± „ 刺激正常及内毒素血症
小鼠脾细胞生成 Œ2u的影响
如表 v所示 o各浓度黄连解毒汤对 ≤²± „ 刺激
正常及内毒素血症小鼠脾细胞生成 Œ2u均无影响 ∀
#w|w#
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中 国 中 药 杂 志
≤«¬±¤²∏µ±¤¯ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ¤·¨µ¬¤  §¨¬¦¤
∂ ²¯ qux o‘²q{
㸻qousss
表 v 黄连解毒汤对 ≤²± „诱导脾细胞生成 Œ2u的影响
分组 浓度
刺激指数
正常小鼠 内毒素血症小鼠
对照 u qvs ? s qut t qzv ? s qvs
‹⁄ ts p z u qtz ? s qtw t q|t ? s qus
ts p y t q|w ? s qv{ t q|y ? s qtz
ts p x u qvt ? s qux t qyv ? s qty
ts p w u qw| ? s qsw t qzz ? s qus
注 }每个数据代表 v次独立实验的平均值 o每个实验包括 v个平
行复孔
2 q4 黄连解毒汤对脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞
生成 ‘’和 Œ2t的影响
与正常巨噬细胞相比 o用脂多糖刺激后 o巨噬细
胞释放 ‘’ 与 Œ2t 明显增加 ∀黄连解毒汤 tsp x o
tsp w ª# °¯ p t显著抑制了 ‘’ 生成 o抑制率分别为
uu qv h和 vx qw h ∀同时 o黄连解毒汤剂量依赖性地
抑制了 Œ2t的产生 otsp z otsp y otsp xtsp wª# °¯ p t的
抑制率分别为 | qu h otw q{ h ovt qz h ozv qt h k图
tl ∀
图 t 黄连解毒汤对脂多糖诱导小鼠
腹腔巨噬细胞产生 ‘’ 和 Œ2t的影响
每个数据代表 v次独立实验的平均值 o每个实验包括 v个平行
复孔 与对照组比 3 Π s .sx 3 3 Π s qst ‘’ qτ Œ2t qυ
3 讨论
本文首先探讨了黄连解毒汤对角叉菜胶所致小
鼠气囊滑膜炎症反应的影响 o结果发现黄连解毒汤
可明显抑制白细胞的游出及囊内 °Š∞u 的含量 o表
明其有显著的抗炎活性 o其机理与抑制炎症介质
°Š∞u的形成有关 ∀鉴于炎症与免疫反应的密切关
系 o我们进一步从免疫学角度考察了黄连解毒汤的
抗炎机理 ∀
现代医学认为细菌内毒素是中医理论中致病因
素之/毒0的重要物质基础之一 o内毒素腹腔注射或
静脉滴注可造成内毒素血症模型 o内毒素进入血循
环可介导产生多种生物活性物质 o其中包括 × ‘ƒ2Αo
Œ¶o°„ƒ o‘’ oŒƒ‘2Χ等各种细胞因子 ∀这些因子构
成了复杂的网络 ∀影响机体的整个免疫过程 ∀适量
的细胞因子可以调节机体的免疫功能 o发挥防御作
用 o但细胞因子大量释放 o特别是与炎症反应关系密
切的 × ‘ƒ2ΑoŒ2t等 o可造成过度的炎症反应 !局部
组织细胞及全身性损害 ∀在内毒素血症过程中 o
× ‘ƒ2ΑoŒ2t等细胞因子水平继内毒素后显著上升 o
提示这些细胞因子在内毒素血症中起着重要的作
用 ∀国外对 Œ2t受体拮抗剂治疗败血症休克进行
了 ¶期临床试验 o初步结果令人满意≈v  ∀本研究发
现黄连解毒汤对于腹腔巨噬细胞生成 Œ2t有剂量
依赖性的抑制作用 o尤其在高浓度时抑制率高达
zv qt h o这可能是其抗炎作用的主要机理之一 ∀
‘’在炎症反应的许多环节发挥复杂的调节作
用 ∀现已发现 o在许多炎症过程中 o用 ‘’ 合酶抑制
剂如 2‘  „时可减轻炎症性损伤 o而 ‘’的前体
2精氨酸却可加重炎症损害≈w  ∀根据我们的前期研
究 o内毒素血症的小鼠血清 ‘’ tu «时达到高峰 ouw
«时下降至正常水平k实验数据未给出l ∀在本实验
中 o黄连解毒汤剂量为 tsp x ª# °¯ p t和 tsp wª# °¯ p t
时 o对 ‘’生成有显著的抑制作用 o这与 ≥∏½∏®¬等人
的研究结果颇为相似≈x  o表明抑制 ‘’ 的生成也可
能是黄连解毒汤抗炎作用的机理之一 ∀
黄连解毒汤对 ≤²± „所致正常小鼠的淋巴细胞
转化无影响 o而对于内毒素血症小鼠淋巴的细胞的
增殖则有一定的抑制作用 o表明黄连解毒汤对正常
淋巴细胞的活化过程影响较小 ∀进一步研究发现 o
黄连解毒汤对正常及内毒素血症小鼠脾细胞生成
Œ2u的能力亦无影响 ∀已有报道指出 o脾淋巴细胞
中含有微量的巨噬细胞 o除去巨噬细胞后的脾淋巴
细胞对 ≤²± „ 无应答反应 o加入 Œ2t或巨噬细胞 o
则可使 × 细胞增殖≈y  o这表明了巨噬细胞对于 ≤²±
„所致 × 淋巴细胞增殖的重要作用 ∀另一方面 o脂
多糖可刺激巨噬细胞的功能 o本实验发现内毒素血
症小鼠脾细胞对 ≤²± „的敏感性大大提高 ∀黄连解
毒汤抑制内毒素血症小鼠脾细胞的增殖可能与其抑
制 Œ2t的生成或巨噬细胞的功能有关 ∀
综上所述 o黄连解毒汤有确切的抗炎作用 o其作
用机理主要包括抑制某些致炎因子 o如 Œ2t o‘’ o
°Š∞u等的生成 ∀
#x|w#
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中 国 中 药 杂 志
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≈参考文献 
≈t  丁桂凤 o席宏丽 o邓玉兰 o等 1 用活化的小鼠脾细胞测定 Œ2u q
上海免疫学杂志 ot|{{ o{ktl }yw q
≈u  ≥«¬±­¬ƒ∏¶«¬¼¤o≠²­¬Ž¬¶«¬oŽ²¬¦«¬‹¤··²µ¬o ·¨¤¯ qƒ¯ ¤√²±²¬§¶©µ²°
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ƒ¤°¬¯¼ q ≤ ¬¯± Œ±¬√ ¶¨·ot||t o{{ }twwx q
≈w  蒋波 o楚正绪 1 一氧化氮与炎症 1 国外医学#生理 !病理科学与
临床分册 ot||{ ot{ktl }ww1
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≈y  徐叔云 o卞如濂 o陈修 1 药理实验方法学 1 第 u版 1 北京 }人民
卫生出版社 ot||t1tuwv q
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Ηυανγλιαν ϑιεδυ ∆εχοχτιον Α Τραδιτιοναλ Χηινεσε Πρεσχριπτιον
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συλτσ: ‹⁄¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼¬±«¬¥¬·¨§·«¨ ¯¨ ∏®²¦¼·¨¬±©¬¯·µ¤·¬²±¤±§°Š∞u ³µ²§∏¦·¬²±¬±·«¨ °²∏¶¨ ¤¬µ2³²∏¦« °²§¨¯qŒ±
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¤¯·¨§©µ²° ·«¨ ±¨§²·²¬¨ ¤°¬¤ °¬¦¨ o¥∏·§¬§±²·¬±©¯∏¨ ±¦¨ ·«¤·©µ²° ·«¨ ±²µ°¤¯ °¬¦¨ q ‹⁄ §¬§±²·¤©©¤¦·≤²± „2
¬±§∏¦¨§¬±·¨µ¯¨ ∏®¬±2u ³µ²§∏¦·¬²±¬± ¶³¯ ±¨²¦¼·¨¶¬± ¬¨·«¨µ±²µ°¤¯ ²µ ±¨§²·²¬¨ ¤°¬¤ °¬¦¨ q‹⁄µ¨ °¤µ®¤¥¯¼ µ¨§∏¦¨§
¬±·¨µ¯¨ ∏®¬±2t ¤±§‘’ ³µ²§∏¦·¬²±¬± ³¨µ¬·²±¨ ¤¯ °¤¦µ²³«¤ª¨¶¨¯¬¦¬·¨§¥¼ ¬¯³²³²¯ ¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ qΧονχλυσιον : ‹⁄ §¬¶2
³¯¤¼¶¤± ¤±·¬2¬±©¯¤°°¤·²µ¼ ©¨©¨ ¦·°¤¬±¯ ¼ ·«µ²∏ª«¬±«¬¥¬·¬±ª·«¨ ³µ²§∏¦·¬²± ²©¬±©¯¤°°¤·²µ¼ ¦¼·²®¬±¨ ¶¬±¦¯∏§¬±ª
Œ2t o‘’ ¤±§°Š∞u q
[ Κεψ ωορδσ] ‹∏¤±ª¯¬¤± ¬¨§∏ ⁄¨ ¦²¦·¬²±~Œ2t ~‘’ ~°Š∞u ~¤±·¬2¬±©¯¤°°¤·¬²±
≈责任编辑 方文贤 
复方丹参滴丸以药品身份获准在俄罗斯上市
天津天士力集团复方丹参滴丸成功通过俄罗斯卫生部处方药注册 o获准在俄罗斯上市 ∀丹参滴丸是俄罗斯卫生部批准
的第一例治疗心血管疾病的复方天然植物的处方用药 ∀申报过程 }复方丹参滴丸通过了俄罗斯药典委员会 !管理委员会的审
查 o并在俄罗斯科学院 !心脏病权威专家指导下 o在几家俄罗斯国家临床医院进行严格的临床试验 o临床结果表明 o复方丹参
滴丸对心绞痛有迅速起效的治疗作用 o并可降低冠心病患者对硝酸甘油的依赖性 ∀与俄罗斯目前治疗心血管病同类药物相
比 o具有疗效好 o安全性好 !质量可靠 !速效及标本兼治的优点 ∀
据俄罗斯卫生部介绍 o俄罗斯是一个高比例心脑血管患者的国家 o所以复方丹参滴丸成功的处方药身份在俄罗斯注册将
有广阔的市场前景 ∀
#y|w#
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