全 文 ：阿魏酸钠对氧化 ⁄所致
兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响
喻红 洪嘉玲 吴东方 3
k湖北医科大学基础医学院 武汉 wvssztl
摘要 目的 } 以氧化低密度脂蛋白处理培养的兔主动脉平滑肌细胞k≥ ≤l致细胞增殖 o观察阿魏
酸钠k≥ƒl对 ≥ ≤ 增殖的影响 ∀方法 }应用硫代巴比妥酸比色法测定脂质过氧化物k°’l水平 o氚2胸腺
嘧啶核苷kv‹2ק• l掺入实验观察 ≥ ≤ 的 ⁄‘„ 合成 ∀结果 }≥ƒ 能明显降低培养液中 °’ 水平的升高 o
并呈剂量依赖性地减少 ≥ ≤ v‹2ק• 的掺入量 ∀结论 }≥ƒ 能明显抑制 ≥ ≤ 增殖 o其作用机制可能与抗脂
质过氧化有关 ∀
关键词 阿魏酸钠 脂质过氧化 平滑肌细胞 细胞增殖
阿魏酸钠k≥ƒl是当归水溶性提取物中有效
单体成分之一 o有活血化瘀 !抗脂质过氧化及抗
氧自由基作用≈t ∗ v  o临床上主要用于防治心脑
血管疾病中血栓形成 ∀本文以氚2胸腺嘧啶核
苷kv‹2ק• l掺入量 !脂质过氧化物k°’l含量
为指标 o观察 ≥ƒ 对氧化型低密度脂蛋白k’÷2
⁄l致兔主动脉平滑肌细胞k≥ ≤l增殖作用的
影响 o为扩展 ≥ƒ在临床上的用途提供一定的实
验依据 ∀
1 材料
111 药品及试剂 ⁄∞ 培养基 !胎牛血清 !
小牛血清kŠ¬¥¦²产品l !胰蛋白酶k≥ µ¨√¤产品l ~
胶原酶kŒ型l !‹∞°∞≥k≥¬ª°¤产品l ~t ot ov ov2四
乙氧基丙烷kƒ¯ ∏®¤产品l ~v‹2ק• 由中国原子
能科学院提供 ~≥ƒ 为广东利民制药厂产品k批
号 |vstszl o临用前培养基配制 o过滤除菌 o调
³‹ z1u ∀其余试剂均为国产 „• 级 ∀
112 动物 日本大耳白家兔 ow ∗ y周龄 o体重
s1{ ∗ t1s®ªoα ⎯ 不分 o由武汉大学动物培养中
心提供 ∀
2 方法与结果
211 家兔主动脉平滑肌细胞培养 参照文献
≈w 方法改进 o将家兔胸主动脉中膜内 urv层剪
碎 o以 s1u h胶原酶k ´型lk含 ts h小牛血清l
消化 o组织块变毛时停止消化 o将其以贴块法置
入培养瓶 o加含 us h胎牛血清的 ⁄∞ 培养液
于 vz ε x h ≤’u 培养箱中培养 o其间更换培养
液 ∀当细胞生长融合形成单层后 o用含
s1tux h胰蛋白酶和 s1su h ∞⁄ׄ 消化液消化 o
进行传代培养 ∀
212 低密度脂蛋白的分离 新鲜混合人血浆
经一次性密度梯度超离心法≈x 分离 ⁄kt1syv
∗ t1susªr°¯ l o置 s1| h ‘¤≤¯溶液中 w ε 透析
uw«∀按 ²ºµ¼法≈y 测定 ⁄蛋白浓度 ∀⁄
氧化条件参照文献≈z  o将 ⁄o≤∏u n k终浓度分
别为 xsΛªr°¯ otΛ°²¯rl与培养的 ≥ ≤ 于 vz ε
孵育 uw«∀
213 ≥ƒ对细胞培养液中 °’ 水平的影响 取
生长状态良好的第 v ∗ y代 ≥ ≤ o用 s1tux h胰
蛋白酶和 s1su h ∞⁄ׄ 消化后制成细胞悬液 o
按细胞密度 s1x ≅ tsxr°¯ 接种于 uw孔培养板 o
每孔 s1x°¯ o孵育 uw«o换无血清培养液继续孵
育 uw«后 o随机分为对照组 !⁄氧化组及 ⁄
氧化 n ≥ƒ 组k≥ƒ 浓度见表 tl ∀各组于 vz ε
x h ≤’u培养 uw«o收取条件培养液离心 o以 t o
t ov ov2四乙氧基丙烷为标准品 o用改良硫代巴
比妥酸比色法≈{ 测上清液中 °’ 含量 o结果见
表 t ∀
3 湖北医科大学附属一院 武汉 wvssys
#xyv# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 y期
表 t 阿魏酸钠对 ≥ ≤ 培养液中 °’ 含量的影响
组别
剂量
Λªr°¯
°’
Λ°²¯ r
对照组 u1wv ? s1uu
⁄氧化组 v1vx ? s1vttl
⁄氧化 n ≥ƒ 组 ws u1|v ? s1uzul
{s u1xs ? s1utvl
注 }≠ ξ ? σ  ν € y ≈ 与对照组比较 t) Π  s1st …
与 ⁄氧化组比较 ul Π s1sx v) Π s1stk下同l
给予 ≤∏u n o细胞孵育的 ⁄氧化组培养液中
°’含量明显高于对照组k Π  s1stl o≥ƒ ws o
{sΛªr°¯ 能明显降低⁄氧化条件液中°’ 水
平 o统计学差异有显著性和高度显著性k Π 
s1sx和 Π s1stl ∀
214 ≥ƒ对 ≥ ≤ v‹2ק• 掺入量的影响 按细
胞密度 s1w ≅ tsxr°¯ 接种于 |y孔培养板 o每孔
s1t°¯ o孵育 uw«后换无血清培养液继续孵育
uw«分组k分组及 ≥ƒ浓度见表 ul o加药培养 t{«
时各孔内加v‹2ק• s1uΛ≤¬oy«后收样 o弃含v‹2
ק• 培养液 o⁄2‹¤±®¶液洗 v次 o以 s1tux h胰
蛋白酶和 s1su h ∞⁄ׄ 消化液消化 o真空泵将
细胞抽吸于玻璃纤维滤纸上 ox h 三氯醋酸固
定 o无水乙醇脱水 o干燥后置闪烁瓶中加闪烁液
k配方 }甲苯 xss°¯ o°°’ vªo°’°’° s1tªl于液
体闪烁分析仪上测各样本每分钟放射脉冲数
k≤°l ∀按下列公式计算v‹2ק• 掺入量的抑
制率 o结果见表 u ∀
抑制率k h l € kt p ⁄氧化 n ≥ƒ 组 ≤°⁄氧化组 ≤° l ≅ tss h
表 u 不同浓度阿魏酸钠对
≥ ≤ v ‹2ק• 掺入量的影响
组别 剂量 Λªr°¯ v ‹2ק• ≤° r孔 抑制率 h
对照组 wvt1v ? yz1{
⁄氧化组 xxu1s ? {{1ztl
⁄氧化 n ≥ƒ 组 us w{z1| ? zy1v tt1y
ws wwx1t ? xy1v ul t|1w
{s vz{1t ? x|1{ vl vt1x
tus vsz1w ? xx1v vl w{1v
注 }ν € {
⁄氧化组 ≥ ≤ v‹2ק• 掺入量明显增加 o
与对照组比较 o统计学差异有高度显著性k Π 
s1stl ∀不同浓度的 ≥ƒ 以 ≥ ≤ v ‹2ק• 掺入量
有一定的抑制作用 o随 ≥ƒ 浓度增加 o其抑制作
用增强 o有较好的量效关系 o其中 ≥ƒ 超过
wsΛªr°¯ 时 ov‹2ק• 掺入量均明显低于 ⁄氧
化组 o统计学差异有显著性或高度显著性k Π 
s1sx或 Π s1stl ∀
3 讨论
⁄在体内经细胞氧化后促进 ≥ ≤ 增殖
是致动脉粥样硬化的重要机制之一 ∀ ≥ƒ 对超
氧阴离子 !羟自由基和过氧化氢有直接清除作
用 o亦能与膜磷脂酰乙醇胺结合 o阻止膜脂质被
自由基侵袭 o从而发挥抗脂质过氧化作用 ∀本
实验在 ≥ ≤ 培养液中加入 ≤∏u n o致 ≥ ≤ 氧化
⁄而促发细胞增殖 ∀加入 ≥ƒ 后 o°’ 水平明
显降低 o表明 ≥ƒ能抑制细胞对 ⁄的氧化 ∀
胸腺嘧啶核苷是 ⁄‘„ 合成的原料 o测定细
胞v‹2ק• 掺入量是反映细胞增殖的常用指标 o
一般认为v‹2ק• 掺入量的抑制率达 us h以上
表明有抑制细胞增殖的作用 ∀本实验结果显
示 o≥ƒ 对氧化 ⁄致 ≥ ≤v‹2ק• 掺入量的增
加具显著的抑制作用 o其抑制率可达 tt1y h ∗
w{1v h o表明 ≥ƒ 可抑制 ≥ ≤ 增殖 ∀因此 o推测
≥ƒ 具抗动脉粥样硬化形成作用 o其机理可能与
抗脂质过氧化及抑制 ≥ ≤ 增殖有关 ∀
4 参考文献
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的作用 q中西医结合杂志 ot|{x oxkttl }yz{
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制探讨 q中国中药杂志 ot||y outkxl }u|z
w 赵三妹 o夏人仪 o王宗立 o等 q动脉平滑肌细胞的培养方法及
其应用 q中华病理学杂志 ot|{z otykwl }uys
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细胞低密度脂蛋白受体活性的影响 q基础医学与临床 o
t||w otwktl }uz
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{ 钟福孙 o胡文尧 o冯驰 q硫代巴比妥酸比色法测定血清过氧
化脂质 q临床检验杂志 ot|{y ov }tu|
t||z2tt2us收稿
#yyv# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 y期