全 文 ：·1064· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
草乌叶总生物碱对小鼠免疫功能的影响
乌力吉特古斯1’2，柳占彪3，王怀松4，丁月旭4，苏艳芳4
(1．内蒙古大学生命科学院，内蒙古呼和浩特010017；2．内蒙古自治区中蒙医院，内蒙古呼和浩特010020，
3．天津中医药大学中医药研究院，天津300193；4．天津大学药学院，天津300072)
草乌叶FoliumAconitiKusnezq所i系蒙古族
习用药材，为毛茛科植物北乌头Aconitum
kusnezoffiiReichb．的干燥叶，收载于《中国药典》
2005年版。草乌叶性平，味辛、涩，有小毒，具清热解
毒、止痛、抗炎等功效。几百年来，蒙医临床上常用草
乌叶复方制剂治疗心绞痛、慢性胃炎、乙型肝炎、胰
腺癌、再生障碍性贫血、流行性腮腺炎、卵巢囊肿、结
核等疾病，均有较好的疗效[1]。由于传统中医药均使
用草乌即北乌头的块根，因此对草乌块根的化学成
分及药理作用的研究较多，而对常用蒙药品种草乌
叶的化学成分及药理作用的研究报道较少。现代药
理学证明草乌叶总生物碱有抗炎和镇痛作用[2]，其
中乌头碱还具有降血糖‘33和抗癌等作用‘引，但草乌
叶总生物碱的免疫作用尚未见报道。本实验以ICR
小鼠为实验动物，主要研究了草乌叶总生物碱对小
鼠免疫功能的影响。
1材料
1．1 动物：ICR小鼠，体质量(20±2)g，雌雄各
半，购自中国医学科学院放射医学研究所(天津)。
1．2药物：革乌叶从内蒙古大青山采集，经内蒙古
药品所鉴定，属于毛茛科植物北乌头Aconitum
kusnez珊iReichb．。草乌叶总生物碱提取方法[5]：
取干燥草乌叶约6kg，用95％乙醇冷浸提取3次，
乙醇提取液减压浓缩至膏状，然后用2％硫酸水溶
液超声提取3次，滤过，合并酸水提取液。酸水提取
液用石油醚脱脂，水层用氨水调节至pH7，氯仿萃
取得到萃取物10g；继用氨水调节至pH10，氯仿萃
取得到萃取物1g，硅胶TLC检查两部分氯仿萃取
物组成基本相同，均为草乌叶总生物碱提取物(11
g)，故合并使用。取草乌叶总生物碱用蒸馏水配成1
mg／mL溶液(加入适量聚山梨酯80作为增溶剂)，
备用。
1．3试剂：印度墨汁，北京市西中化工厂产品(批
号020809)；盐酸左旋咪唑，天津兽药厂产品(批号
030105)；兔抗小鼠IgG—HRP，天津TBD公司产品
(批号RM628520H)；小鼠标准IgG(批号
050428)、羊抗小鼠IgG(批号PBDl06)，武汉博士
德生物工程有限公司产品；聚山梨酯80、H。S0。等试
剂均为分析纯。
1．4仪器：TU一1901型双光束紫外可见分光光度
计，北京普析通用仪器有限责任公司；SCR--20BC
高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂生产；1712
型电子天平，W—GERMANY，德国制造。El，X800通
用酶标仪、EI。X50自动洗板机，美国B10一TEK
INSTRUMENTS公司生产；TDL一5一A台式离心
机，上海安亭医用离心机厂生产；ELX800TM通用
酶标仪，美国Bio—Tek公司。
2方法
2。1绵羊红细胞悬液的制备：在无菌条件下，自健
康成年绵羊的外静脉取血，置于有玻璃珠的三角瓶
中，摇动10rain以除去纤维蛋白，加入羊血2倍的
Alsever’S血浆保存液中，摇匀，于4℃冰箱保存，
备用。
2．2 IgG标准曲线的绘制：用PBS稀释液把标准
鼠IgG稀释成6个不同的质量浓度梯度，取20ug／
mL兔抗鼠IgG0．1mL，分别加入96孔酶标板，4
℃包被过夜。次日用洗涤液洗涤3次，分别加入稀释
的标准鼠IgG，每孔0．1mL，作用2h，用洗涤液洗
涤，分别加入封阻液1h，洗涤，每孔加入辣根过氧
化物酶标记IgG0．1mL，37℃作用1h，洗涤，加
入显色液，显色10rain，每：eLJJⅡ入0．1mL终止液，
立即用酶标仪于450nm处测定各孔吸光度(A)
值，绘制IgG标准曲线，按标准曲线回归方程(y=
0．3251X+0．2477，r2—0．9561)计算IgG的量。
2．3碳粒廓清实验法：取ICR小鼠50只，随机分
成5组，每组10只，对照组ig蒸馏水；草乌叶总生物
碱低、中、高剂量组分别以50、100、150mg／kg剂量
ig给药，盐酸左旋咪唑阳性对照以100mg／kg剂量
收稿日期：2007—12-20
作者简介：乌力占特古斯(1963一)，男(蒙古族)，内蒙古人，蒙医主任医师，内蒙古大学博士生，主要从事蒙医临床与新药研究。
Tel；(0471)6980386E—mail：wuliji662003@yahoo．corn．ca
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1065·
ig给药，上述5组均连续给药7d，末次给药2h后，
按0．10mL／10g小鼠iv20％印度墨汁，注射后2、
20min分别从小鼠的左眼眶和右眼眶取血20pL，
加到0．1％碳酸钠溶液2．5mL中，摇匀，于600
nm处测A值，按下列公式计算出碳廓清指数(志)
和吞噬系数(a)。
k一(19A1一lgA2)／(f2一t1)，a—yT·m／(m1+m2)
A。、A2分别为2、20rain时测得的A值，t。t2分别为2、
20min，m为体质量，研。、mz分别为肝、脾质量
2．4小鼠血清IgG定量测定法：动物分组及给药
剂量同2．3项方法。上述5组小鼠均ip10％绵羊红
细胞悬液0．5mL致敏，8d后再用10％绵羊红细
胞悬液进行第2次ip免疫小鼠，并各组开始连续给
药7d，末次给药后1h采血，1500r／min离心10
min，分离血清，采用双抗夹心ELISA法测定血清
IgG水平。
2．5统计分析方法：实验数据用SPSS11．0统计
软件处理。组间比较采用t检验。
3 结果
3．1对小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能的影响：碳粒
廓清实验结果见表1。与对照组比较，草乌叶总生物
碱高、中、低剂量组a虽有增大但均无显著性差异。
表1草乌叶总生物碱对小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能的
影响(工±s，弹一10)
Table1 Effectof otal kaloidsinFoliumAconia
Kusnezoffiinmonocyte—macrophage
phagocytosisinmice(工土s，肝=10)
与对照组比较：。P
对照组比较，草乌叶总生物碱高、中、低剂量组IgG
表2草乌叶总生物碱对小鼠血清IgG水平的影响
(工士S，一一10)
Table2 Effectof otalkaloidsinFoliumAconitf
KusnezoffiinlgGlevelinserumof ice
(工土s，弹一10)
与对照组比较：。P
常显著性差异(P
4讨论
本实验表明草乌叶总生物碱对小鼠单核一巨噬
细胞吞噬功能无增强作用。草乌叶总生物碱高、中、
低剂量组均可使小鼠血清IgG水平明显升高(_P<
0．05、0．01)，表明草乌叶总生物碱具有增强体液免
疫功能的作用。同时，草乌叶总生物碱高剂量组IgG
水平的升高没有中、低剂量组明显，这可能与高剂量
组对动物产生毒性有关，如高剂量组小鼠出现了嘴
角和四肢麻木的表现，提示在使用草乌叶治疗疾病
时应特别注意控制其用量。 ．
参考文献：
[1]乌力吉特古斯，自学良，阿拉坦松布尔，等．蒙药草乌叶化
学成分及临床研究进展[J]．中草药，2006，37(3)：472—
474．
[23于海兰，贾世山．蒙药草乌叶中一个新二萜生物碱
Beiwucine[J]．药学学报，2000，35(3)：232—234．
[3]苏孝礼．乌头及其炮制品中粗多糖药理作用的研究口]．中
药材，1991，5(14)：28．
[4]汤铭新．乌头碱抑瘤及抗转移的研究与治癌的观察I-J]．jE
京中医药杂志，1986，3：28．
[5]JesosGD，JuanGR．WernerH．Nordiberpeneand
diterpenealkaloidsfromAcoritumvoriegatum[J]．
Phytochemistry，2005，66(7)：837—846．
重 要 启 事
《中草药》杂志自进入“中国期刊方阵”双奖期刊及荣获第二届国家期刊美、第三届国家
期刊奖提名奖和“百种中国杰出学术期刊”以后，承蒙广大读者和作者的厚爱，本刊稿源十分
丰富，为了缩短出版周期，增加报道信息量，提高印刷质量，本刊自2009年第1期开始由原160
页扩版至168页，由现70g双胶印刷改为80g铜板印刷。鉴于2009年1期开始页码增加，印
刷纸张成本增加，从2009年第1期开始《中草药》杂志每册定价由19．80元调至25．oo元。
《中草药》杂志编辑部
万方数据
草乌叶总生物碱对小鼠免疫功能的影响
作者： 乌力吉特古斯， 柳占彪， 王怀松， 丁月旭， 苏艳芳
作者单位： 乌力吉特古斯(内蒙古大学生命科学院,内蒙古,呼和浩特,010017;内蒙古自治区中蒙医院,内
蒙古,呼和浩特,010020)， 柳占彪(天津中医药大学,中医药研究院,天津,300193)， 王怀松
,丁月旭,苏艳芳(天津大学药学院,天津,300072)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(7)
参考文献(5条)
1.乌力吉特古斯;自学良;阿拉坦松布尔 蒙药草乌叶化学成分及临床研究进展[期刊论文]-中草药 2006(03)
2.于海兰;贾世山 蒙药草乌叶中一个新二萜生物碱Beiwucine[期刊论文]-药学学报 2000(03)
3.苏孝礼 乌头及其炮制品中粗多糖药理作用的研究 1991(05)
4.汤铭新 乌头碱抑瘤及抗转移的研究与治癌的观察 1986(03)
5.Jesus G D;Juan G R;Werner H Nordiberpene and diterpene alkaloids from Acoritum voriegatum[外文期刊
] 2005(07)
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3. 朱忠珂.赵宝玉.何生虎.周云风.曹光荣 披针叶黄华总生物碱对小鼠的毒性[期刊论文]-西北农林科技大学学报
(自然科学版)2003,31(2)
4. 张青.韩冬.迟惠昌.杨国旺.赵文硕.王笑民 益气活血中药联合吉西他滨动脉灌注治疗晚期胰腺癌临床观察[期刊
论文]-中国中医药信息杂志2008,15(8)
5. 杨桦.邓晓静.易红 大孔吸附树脂用于川草乌中总生物碱分离提取[会议论文]-1999
6. 黄厚才.胡春萍.彭蕴茹.丁永芳.HUANG Hou-cai.HU Chun-ping.PENg Yun-ru.DINg Yong-fang 钩藤散浸膏对小
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