全 文 ：在较大差异,说明胡芦巴种质资源的生态类型多, 遗
传背景较复杂, 这些差异既和生长环境有关, 也与遗
传基础有关。然而,外部形态的变异受环境因子影
响较大,因此,对胡芦巴种质资源遗传多样性作更为
准确的研究还应结合等位酶分析、DNA 分子标记
等手段来进行。
参考文献:
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刺壳花椒 HPLC指纹图谱的研究
汪文涛1 ,伍城颖2 ,马一华3 , 汪
灿1*
( 1
湖南省药品检验所,湖南 长沙
410001; 2
湖南中医药大学, 湖南 长沙
410208;
3
株洲千金药业股份有限公司, 湖南 株洲
412003)
摘
要:目的
采用高效液相色谱法研究并建立了产于张家界的刺壳花椒药材的指纹图谱。方法
Diamonsil C18
色谱柱 ( 250 mm
4. 6 mm, 5
m) ,乙腈-水流动相系统梯度洗脱,体积流量 1
0 mL / min,检测波长 278 nm。结果
对所采集的 10 批刺壳花椒药材进行了测定, 建立了刺壳花椒的指纹图谱, 共有 11 个共有峰。结论
H PLC 法色
谱指纹图谱分析技术可用于刺壳花椒药材质量的控制。
关键词:刺壳花椒; 指纹图谱; 高效液相色谱
中图分类号: R282
7


文献标识码: A


文章编号: 0253- 2670( 2009) 04- 0634- 04
HPLC Fingerprint of Zanthoxylum echinocarp um
WANG Wen-tao
1
, WU Cheng-ying
2
, M A Y-i hua
3
, WAN G Can
1
( 1
H unan Provincial Inst itute for Drug Contr ol, Chang sha 410001, China; 2. H unan Univer sity of T r aditional Chinese
M edicine, Chang sha 410208, China; 3. Zhuzhou Qianjin Pharmaceutical Co . , L td. , Zhuzhou 412003, China)
Abstract: Objective
To study chromatog raphy f ingerprints of Zanthox y lum echinocarp um by H PLC.
Methods
Diamonsil C18 column ( 250 m m
4. 6 mm, 5
m) w as used w ith acetonitr ile-w ater g radient elu-
t ion, at flow-rate of 1. 0 m L/ min, detect ion w aveleng th at 278 nm . Results
H PLC was used to establish
fingerprint chromatog raph of w ater ex tr act ion from ten batches of Z. echinocar pum, w hich had been har-
vested f rom the sam e area in Zhangjiajie at the sam e t ime. T he r esult show ed that 11 peaks w ere comm on.
Conclusion
T he method could be used for the quality cont rol of Z. echinocar pum.
Key words: Zanthoxy lum echinocar pum H emsl; fingerprint ; H PLC


芸香科花椒属刺壳花椒 Zanthoxy lum echino-
car pum H emsl是我国南方地区民间常用药, 主要
产于南方及西南等地,其药用部位有根、根皮、茎和
叶,有行气止痛的功效。刺壳花椒中已知的化学成
分有木兰花碱、
-别隐品碱、白藓碱、
-花椒碱、茵芋
碱等生物碱类 [ 1~ 3]。由于受产地、气候和生态环境
等的影响,不同药材所含成分有一定差异,仅针对药
材的某个有效成分或指标成分进行定性、定量分析,

634
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
* 收稿日期: 2008- 06-13基金项目:湖南省科学技术厅科技计划重点项目 ( 2007SK2005)作者简介:汪文涛( 1944
) ,男,主任药师,主要从事新药研究开发。T el: ( 0731) 2275848
E-mail: hnyjw w t@ 163. com
并不能有效控制中药材的质量。中药指纹图谱能较
为全面地反映中药的整体化学特征,较为全面地反
映药材的内在质量, 具有整体性、特征性和稳定性等
特点,目前已成为国际公认的控制中药或天然药物
质量的有效手段 [ 4]。本实验按照指纹图谱的技术要
求[ 5] ,对采集于湖南省张家界的 10批刺壳花椒药材
进行测定,建立刺壳花椒药材的 H PLC 指纹图谱,
以期对刺壳花椒药材的质量控制提供有效的方法。
1
实验材料
1
1
实验仪器与试剂: LC
20AT 高效液相色谱
仪、SPD
M 20A 二极管阵列检测器、CT O
20AC
柱温箱、SIL
20A C 自动进样器 (日本岛津)、LC
solut ion 色谱工作站 (日本岛津)、Diamonsil C18色
谱柱 ( 250 mm
4. 6 m m, 5
m, Dikma)、AU W

220D 电子天平 (日本岛津)。
木兰花碱 (天津中新药业中药现代化技术工程
中心)、乙腈 (色谱纯,浙江临海市浙东特种试剂厂,
台州)、水(重蒸水经 0
45
m 微孔滤膜抽滤) ; 磷
酸、三乙胺等其余试剂均为分析纯(湖南师大化学试
剂厂)。
1
2
药材来源: 2006年 8月由株洲千金药业股份
有限公司马一华采集于湖南省张家界市, 经中南林
业科技大学喻勋林教授鉴定为芸香科花椒属的刺壳
花椒 Zanthox y lum echinocarp um H em sl,药用部位
为根和茎。样品来源见表 1。
表 1
药材来源
Table 1
Source of sample
序号 品名 样品编号 采集来源
1 刺壳花椒 2006003-1 湖南省张家界市永顺县三家馆镇
2 刺壳花椒 2006003-2 湖南省张家界市永定区仙人溪
3 刺壳花椒 2006003-3 湖南省张家界市永定区沅古坪镇
4 刺壳花椒 2006003-4 湖南省张家界市桑植县温塘镇
5 刺壳花椒 2006003-5 湖南省张家界市永顺县罗依溪
6 刺壳花椒 2006003-6 湖南省张家界市桑植县温塘镇
7 刺壳花椒 2006003-7 湖南省张家界市永定区沅古坪镇
8 刺壳花椒 2006003-8 湖南省张家界市永定区沅古坪镇
9 刺壳花椒 2006003-9 湖南省张家界市永定区沅古坪镇
10 刺壳花椒 2006003-10 湖南省张家界市桑植县温塘镇
2
方法与结果
2
1
色谱条件: 色谱柱为 C18 ( 250 m m
4. 6 m m,
5
m ) ;流动相: 采用梯度洗脱, A 相为 0
2% 磷酸
和 0
2% 三乙胺的水溶液, B相为乙腈, 考察了 120
min 的供试品溶液图谱, 70 min 之后再无特征峰出
现,洗脱时间定为 70 m in 比较合理; 体积流量: 1
0
mL/ min,分析时间为 70 min;柱温 30
;检测波长
为 278 nm ,进样量为 10
L。梯度洗脱程序为: 0~
10 m in, A-B ( 95
5) ; 10~ 25 min, A-B ( 90
10) ;
25~ 70 m in, A-B ( 90
10) ; 70 min 以后, A-B
( 60
40)。色谱图见图 1。
图 1
木兰花碱对照品(A)和样品(B)的 HPLC 图
Fig. 1
HPLC Chromatogram of escholine reference
substance ( A) and Z. echinocarpum ( B)
2
2
供试品溶液的制备: 精密称取药材粉末 1
0
g ,置烧杯中,加水 30 m L, 浸泡 30 m in,煎煮并保持
微沸 30 min,倾出煎煮液,再加水 20 mL,煎煮并保
持微沸 20 min,滤过,合并滤液,转移定容于 50 mL
量瓶中,摇匀,即得 (生药浓度为 0
02 g/ mL)。
2
3
对照品溶液的制备: 精密称取木兰花碱对照
品,加色谱纯甲醇溶解, 制成含木兰花碱 1 mg/ mL
的溶液,摇匀,即得。
2
4
方法学考察
2
4
1
精密度试验:取同一供试品溶液, 连续进样
5次, 其相对应的色谱峰相对保留时间的 RSD 小于
3
0%,主要峰的相对峰面积的 RSD 小于 5
0% ,表
明进样的精密度良好。
2
4
2
重现性试验:精密称取同一药材粉末 5份,
分别按
2
2
的方法制备供试品溶液并测定,其相对
应的色谱峰相对保留时间的 RSD 小于 3
0%, 主要
峰的相对峰面积的 RSD小于 5
0% ,表明本方法重
现性良好。
2
4
3
稳定性试验: 取同一供试品溶液, 分别于 0、
2、4、8、10、12 h 测定, 检测色谱图, 对其中的共有色
谱峰进行分析,结果表明供试品溶液至少在 12 h 内
稳定。
2
5
H PLC 指纹图谱建立
2
5
1
图谱的制备:比较供试品的 H PLC 色谱图,
其中有 11个色谱峰是 10批刺壳花椒药材共有的,
因此确定为共有指纹峰。10批供试品溶液检测结
果见表 2~ 4。按 2
2制备采集自张家界的 10批刺
壳花椒药材的供试品溶液并测定, 各批供试品的指
纹图谱见图 2。


通过对照品与样品图谱比较, 对样品图中色谱
峰进行标定,样品图中保留时间为 35 min 处的色谱
峰 (即 7号峰) 为木兰花碱对照品的色谱峰。

635
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
表 2
10批刺壳花椒药材指纹图谱共有峰相对保留时间
Table 2
Relative retention time of common peaks for ten batches of Z. echinocarpum in HPLC fingerprints
批号 各峰相对保留时间
1 2 3 4 5 6 7( S) 8 9 10 11
2006003-1 0
320 5 0
346 4 0
400 2 0
442 2 0
500 5 0
559 7 1 1
179 5 1
287 3 1
426 7 1
461 2
2006003-2 0
320 5 0
346 4 0
399 7 0
441 8 0
499 5 0
558 3 1 1
177 3 1
285 2 1
424 6 1
459 0
2006003-3 0
318 5 0
344 2 0
397 5 0
439 2 0
499 7 0
560 9 1 1
171 6 1
278 3 1
416 7 1
450 9
2006003-4 0
316 3 0
342 8 0
396 7 0
439 2 0
497 0 0
553 7 1 1
186 2 1
300 1 1
443 3 1
478 5
2006003-5 0
318 5 0
344 5 0
398 1 0
439 0 0
496 2 0
553 3 1 1
173 2 1
285 1 1
424 4 1
458 6
2006003-6 0
332 8 0
358 9 0
415 4 0
461 2 0
522 9 0
588 2 1 1
223 2 1
321 1 1
463 8 1
498 6
2006003-7 0
331 6 0
357 8 0
414 2 0
460 0 0
521 8 0
586 8 1 1
221 8 1
319 7 1
462 2 1
497 0
2006003-8 0
329 4 0
355 6 0
411 6 0
456 2 0
516 6 0
580 4 1 1
212 5 1
315 4 1
457 7 1
492 4
2006003-9 0
326 9 0
352 9 0
408 3 0
452 6 0
512 8 0
576 0 1 1
206 2 1
308 4 1
449 8 1
484 3
2006003-10 0
329 9 0
356 1 0
411 9 0
456 4 0
516 6 0
579 5 1 1
214 4 1
318 1 1
461 3 1
496 2
均值 0
324 5 0
350 5 0
405 3 0
448 8 0
508 4 0
5697 1 1
196 6 1
301 9 1
443 089 1
477 7
RSD/ % 1
91 1
79 1
87 2
07 2
11 2
42 0 1
74 1
28 1
27 1
26
表 3
10 批刺壳花椒药材指纹图谱共有峰相对峰面积
Table 3
Relative areas of common peaks for ten batches of Z. echinocarpum in HPLC f ingerprints
批号 各峰相对峰面积
1 2 3 4 5 6 7( S) 8 9 10 11
2006003-1 0
064 734 0
044 272 0
159 146 0
137 415 0
062 154 0
165 621 1 0
045 953 0
147 946 0
052 126 0
113 042
2006003-2 0
064 883 0
043 929 0
154 803 0
132 588 0
061 922 0
174 397 1 0
065 752 0
183 143 0
063 911 0
145 872
2006003-3 0
074 502 0
050 737 0
189 735 0
165 079 0
074 267 0
176 728 1 0
072 423 0
196 216 0
109 010 0
328 698
2006003-4 0
090 608 0
061 401 0
222 864 0
194 443 0
105 398 0
231 388 1 0
077 738 0
202 320 0
112 000 0
353 347
2006003-5 0
028 254 0
019 281 0
066 147 0
054 471 0
026 617 0
084 817 1 0
029 514 0
092 298 0
033 187 0
104 917
2006003-6 0
038 872 0
030 364 0
105 736 0
104 174 0
042 694 0
110 229 1 0
031 364 0
063 936 0
038 200 0
091 231
2006003-7 0
055 506 0
045 402 0
149 420 0
144 532 0
061 534 0
153 456 1 0
045 232 0
193 346 0
058 599 0
202 913
2006003-8 0
097 495 0
066 019 0
266 557 0
219 786 0
087 589 0
294 199 1 0
098 189 0
295 837 0
101 036 0
315 528
2006003-9 0
024 993 0
019 761 0
062 685 0
052 665 0
024 459 0
061 364 1 0
028 329 0
059 032 0
021 958 0
098 624
2006003-10 0
031 631 0
028 027 0
088 552 0
069 827 0
036 045 0
092 933 1 0
026 845 0
110 999 0
023 400 0
077 163
均值 0
057 147 80
040 919 0
146 565 0
127 498 0
058 268 0
154 513 1 0
052 134 0
154 507 0
061 343 0
183 134
RSD/ % 45
26 39
73 45
96 45
00 45
25 46
12 0 47
88 47
97 56
55 59
62
表 4
10批刺壳花椒药材指纹图谱共有峰的峰面积
Table 4
Areas of common peaks for ten batches of Z. echinocarpum in HPLC f ingerprints
批号
峰面积
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
共有峰
的峰面
积
总峰
面积
共有峰面
积占总峰
面积百分
比/ %
2006003-1 88 418 60 470 217 373 187 691 84 895 226 217 1 365 871 62 766 202 075 71 198 154 401 2 721 375 2 778 204 97. 95
2006003-2 50 805 34 397 121 212 103 817 48 485 136 554 783 007 51 484 143 402 50 043 114 219 1 637 424 1 769 802 92. 52
2006003-3 123 590 84 167 314 746 273 846 123 199 293 169 1 658 874 120 140 325 497 180 834 545 268 4 043 330 4 285 927 94. 34
2006003-4 129 710 87 899 319 041 278 355 150 883 331 243 1 431 549 111 286 289 631 160 333 505 834 3 795 764 4 103 599 92
50
2006003-5 60 039 40 971 140 560 115 750 56 561 180 235 2 124 975 62 716 196 130 70 521 222 946 3 271 404 3 571 399 91
60
2006003-6 116 707 91 163 317 453 312 762 128 180 330 942 3 002 314 94 166 191 957 114 689 273 904 4 974 237 5 216 279 95
36
2006003-7 123 424 100 957 332 252 321 384 136 828 341 227 2 223 618 100 579 429 927 130 301 451 200 4 691 697 4 918 256 95
39
2006003-8 148 243 100 383 405 304 334 188 133 180 447 333 1 520 514 149 297 449 825 153 627 479 764 4 321 658 4 798 595 90
06
2006003-9 55 849 44 156 140 072 117 682 54 655 137 121 2 234 553 63 303 131 911 49 066 220 381 3 248 749 3 452 566 94
10
2006003-10 72 534 64 269 203 059 160 122 82 655 213 106 2 293 109 61 558 254 533 53 659 176 943 3 635 547 3 984 514 91
24
均值 96 931
8 70 883
2 251 107
2 220 559
7 99 952
1 263 714
7 1 863 838 87 729
5 261 488
8 103 427
1 314 486 3 634 119 3 887 914 93
51

636
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
图 2
10 批刺壳花椒 HPLC图谱叠加图
Fig. 2
Overlapping HPLC chromatogram
for ten batches of Z. echinocarpum


从表 2~ 4数据可以看出,共有峰的相对保留时
间的 RSD 小于 3
0%; 10 批样品共有峰总面积占
总峰面积的平均百分比为 93
51%, 非共有峰总面
积均小于总峰面积的 10% ; 7号木兰花碱参照峰的
峰面积大于总峰面积的 25% ; 除 7 号峰外,其余峰
的峰面积小于总峰面积的 10%。
2
5
2
指纹图谱相似度计算:本实验采用
中国药
典
指纹图谱相似度计算软件, 以 10 批刺壳花椒药
材 H PLC 图谱建立其共有模式指纹图谱, 对 10批
刺壳花椒样品的 H PLC 图谱进行相似度计算, 结果
见表 5。相似度计算结果显示, 10批样品的相似度
均在 0
9~ 1。
表 5
10 批样品的相似度计算结果
Table 5
Results of similarity analysis for ten batches of Z. echinocarpum in HPLC f ingerprints
批号 2006003- 1 2006003-2 2006003-3 2006003- 4 2006003- 5 2006003- 6 2006003- 7 2006003-8 2006003-9 2006003-10 对照指纹图谱
2006003- 1 1
000 0
996 0
922 0
980 0
995 0
996 0
937 0
953 0
983 0
988 0
986
2006003- 2 0
996 1
000 0
907 0
972 0
994 0
997 0
927 0
946 0
974 0
980 0
980
2006003- 3 0
922 0
907 1
000 0
974 0
929 0
918 0
985 0
981 0
967 0
960 0
965
2006003- 4 0
980 01 972 01 974 11 000 01 983 01 979 01 980 01 988 01 994 01 993 01 995
2006003- 5 01 995 01 994 01 929 01 983 1 000 01 994 01 945 01 959 01 985 01 991 01 991
2006003- 6 01 996 01 997 01 918 01 979 01 994 11 000 01 937 01 953 01 980 01 985 01 984
2006003- 7 01 937 01 927 01 985 01 980 01 945 01 937 11 000 01 995 01 976 01 968 01 976
2006003- 8 01 953 01 946 01 981 01 988 01 959 01 953 01 995 11 000 01 985 01 977 01 983
2006003- 9 01 983 01 974 01 967 01 994 01 985 01 980 01 976 01 985 11 000 01 997 01 996
2006003- 10 01 988 01 980 01 960 01 993 01 991 01 985 01 968 01 977 01 997 11 000 01 998
对照指纹图谱 01 986 01 980 01 965 01 995 01 991 01 984 01 976 01 983 01 996 01 998 11 000
3 讨论
31 1 前期药效试验证明刺壳花椒根和茎水提取物
具有抗炎、镇痛药理作用, 因此采用 H PLC 法主要
考察刺壳花椒药材水提部分, 对刺壳花椒药材进行
水煎煮处理后进行指纹图谱研究。
31 2 检测波长的选择:采用二极管阵列检测器对指
纹图谱的检测波长进行了选择,结果表明在 278 nm
进行检测时,基线平稳, 各色谱峰的吸收较强、大部
分色谱峰达到了基线分离, 在 70 m in 以内, 色谱峰
的分布比较均匀。因此采用 278 nm 波长作为刺壳
花椒水提取物的检测波长。
31 3 流动相的选择:在实验过程中对刺壳花椒水提
部分进行了甲醇-水和乙腈-水流动相系统样品分离
效果的反复摸索, 发现乙腈-水系统基线较甲醇-水
系统平直,流动相中加入磷酸可以改善色谱峰的峰
形和分离程度, 加入有机胺可以减弱碱性溶质与残
余硅醇基的强相互作用, 减轻或消除峰拖尾现象。
31 4 参照物的选择:刺壳花椒中含的木兰花碱在刺
壳花椒水提物的 H PLC 图谱中出峰时间约为 35
m in,此峰特征性最强、峰面积最大且稳定, 是刺壳
花椒药材的主要特征性强峰,也是指纹图谱中的一
个重要鉴别色谱峰。因此实验选择木兰花碱作为刺
壳花椒 H PLC 指纹图谱的参照物。
31 5 10批刺壳花椒药材均于 2006 年 8 月采集自
湖南省张家界市的不同县、乡镇, 从表 2看出, 10批
药材各共有峰峰面积比值差异较大, 因此建议如果
要进一步控制制剂的质量、使制剂质量稳定,必须固
定药材的产地,并且在确定产地时范围不能太大,减
少因药材产地不同而导致的影响。
参考文献:
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#637#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月