全 文 ：毒宁注射液在稀释 120 倍时进行内毒素定量检测 ,
同时与热原检查法进行对比试验 ,结果见表 4。
表 4 　热毒宁注射液细菌内毒素的检测结果
Table 4 　Determination of endotoxin in Reduning Injection
样品
批号
阴性对照反
应时间/ s
120 倍液反
应时间/ s
变异系
数/ %
实测内毒素/
( EU ·mL - 1 )
原液/
( EU ·mL - 1 )
热原检
测结果
080309 > 3 600 　3 184 41 19 01 012 8 　11 536 合格
080501 > 3 600 > 3 600 — — < 检测限 合格
080502 > 3 600 　3 123 21 40 01 018 1 　21 172 合格
080601 > 3 600 > 3 600 — — < 检测限 合格
080610 > 3 600 > 3 600 — — < 检测限 合格
080701 > 3 600 > 3 600 — — < 检测限 合格
080801 > 3 600 > 3 600 — — < 检测限 合格
080809 > 3 600 > 3 600 — — < 检测限 合格
080901 > 3 600 > 3 600 — — < 检测限 合格
080905 > 3 600 > 3 600 — — < 检测限 合格
081005 > 3 600 > 3 600 — — < 检测限 合格
3 　讨论
干扰试验结果表明热毒宁注射液用定量鲎试剂检测
在稀释 1～30 倍出现干扰 ,以致无法检测 ,将样品稀
释至 60 倍时 ,方可完全排除干扰因素影响 ,内毒素
回收率在 50 %～200 %。根据表 3 可得热毒宁注射
液的日常检验取 120 倍稀释液即可。
　　对 10 批热毒宁注射液中的内毒素定量检测表
明 ,热毒宁注射液内毒素实际检测值均远远低于限
值 (8175 EU/ mL) ;表明热毒宁注射液在生产过程
中未被污染 ,较为安全。
　　中药注射剂由于组分较复杂 ,干扰因素多 ,加之
原药材和制备工艺的变化使干扰因素变化不定 ,在
用本法测定内毒素时 ,应同时进行加样加收考察以
排除可能因素对实验结果的干扰。
HPLC法测定板蓝根和板蓝根颗粒中 RS2告伊春和腺苷
王钢力1 ,聂黎行1 ,迟玉明2 ,姚令文1 ,刘 　莹2 ,刘丽丽 3 ,张晓兰2 ,林瑞超1
(11 中国药品生物制品检定所 ,北京 　100050 ;21 北京同仁堂科技发展股份公司 ,北京 　100075)
摘 　要 :目的 　建立板蓝根颗粒及药材中腺苷和 RS2告伊春的测定方法。方法 　RS2告依春的测定采用 Dikma Dia2
monsil C18色谱柱 (200 mm ×416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈2水2三乙胺 (10 ∶90 ∶012 ,用冰醋酸调 p H 值 512) ;柱温 :
室温 ;体积流量 :018 mL/ min ;检测波长 :245 nm ;腺苷的测定采用 Dikma Diamonsil C18色谱柱 (200 mm ×416 mm ,5
μm) ;流动相 :乙腈2水 (5 ∶95) ;柱温 :室温 ;体积流量 :110 mL/ min ;检测波长 :260 nm。结果 　RS2告依春的线性范
围为 01676～1311μg/ mL ;板蓝根颗粒和药材的平均回收率分别为 101166 %、99174 % ,RSD 分别为 019 %、114 %
( n = 6) ;腺苷的线性范围分别 01005～0105 mg/ mL ,板蓝根颗粒和药材的平均回收率分别为 97176 %、97132 % ,
RSD 分别为 1162 %、0162 %( n = 6) 。结论 　所建立的方法准确、可靠 ,可用于板蓝根颗粒及药材的质量控制。
关键词 :板蓝根 ;板蓝根颗粒 ;RS2告依春 ;腺苷 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2009) 1021587203
　　板蓝根为十字花科植物菘蓝 Isatis i ndi gotica
Fort1 的干燥根 ,含有生物碱类、核苷类、氨基酸类
及有机酸类成分 ,具有清热解毒、凉血利咽之功效 ,
主要用于瘟毒发斑、舌绛紫暗、大头瘟疫、痄腮、烂喉
丹痧、丹毒、痫肿等症。《中国药典》2005 年版一部
板蓝根项下仅有以精氨酸为对照的薄层色谱鉴别和
性状鉴别项。现有的板蓝根制剂包括颗粒剂、茶剂、
片剂、注射剂、糖浆剂等多种剂型 ,其中板蓝根颗粒
是《中国药典》2005 年版一部收载品种 ,仅收载了理
化鉴别和检查项。现代药理研究表明 :板蓝根中的腺
苷具有抗炎作用 ,还可用于冠心病诊断 ,具有较高的
敏感性和特异性[1 ] ; RS2告依春具有明显的抗流感病
毒作用[2 ] 。因此本实验建立了高效液相色谱法 ,分别
测定腺苷和专属性成分 RS2告依春 ,为板蓝根制剂及
其原料质量标准的修订与完善和制剂生产的过程控
制提供了可供借鉴的检测手段和科学依据。
1 　仪器与试药
　　Waters 269522487 HPL C 色谱系统 , Empower
色谱工作站。
　　乙腈 (Merck)为色谱纯 ,水为超纯水 ,其他试剂
均为分析纯。RS2告依春对照品、腺苷对照品均由
中国药品生物制品检定所提供 ;板蓝根颗粒 (含糖型
·7851·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 10 期 2009 年 10 月
3 收稿日期 :2009201228　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :北京市科技计划项目 ( H30230130011)
作者简介 :王钢力 (1969 —) ,女 ,北京人 ,研究员 ,2001 年毕业于北京中医药大学 ,获博士学位 ,从事有关中药活性成分及质量控制的研
究工作。Tel : (010) 67095424 　E2mail :dunneer @163. com3 桂林医学院 2004 级药学本科实习生
和无糖型)由北京同仁堂科技发展股份有限公司制
药厂提供 ;板蓝根药材均产于河北唐山 ,由北京同仁
堂河北中药材科技开发有限公司提供 ,经中国药品
生物制品检定所中药标本馆张继馆长鉴定 ,为十字
花科植物菘蓝 I1 i ndi gotica Fort1 的干燥根。
2 　方法与结果
211 　RS2告依春的测定
21111 　色谱条件 :Dikma Diamonsil C18色谱柱 (200
mm ×416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈2水2三乙胺 (10 ∶
90 ∶012 ,用冰醋酸调 p H 值 512) ;柱温 :室温 ;体积
流量 :018 mL/ min ;检测波长 :245 nm。
21112 　对照品溶液的制备 :精密称取 RS2告依春对
照品 8145 mg 于 25 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释
至刻度 ,摇匀 ,作为对照品储备液。精密量取该溶液
适量 ,分别加甲醇制成 6184、1137μg/ mL 溶液。
21113 　供试品溶液的制备 :取板蓝根颗粒 ,研细 ,精
密称取 1 g 置 50 mL 量瓶中 ,加入蒸馏水 40 mL ,充
分震摇使溶解 ,再用蒸馏水稀释至刻度 ,摇匀 ,用
0145μm 微孔滤膜滤过 ,即得。
　　取板蓝根药材 ,粉碎 ,过 3 号筛 ,精密称取 1g 置
锥形瓶中 ,精密加入蒸馏水 100 mL ,精密称定质量 ,
回流提取 1 h ,放冷 ,用蒸馏水补足减少的质量 ,摇
匀 ,用 0145μm 微孔滤膜滤过 ,即得。
21114 　线性关系考察 :精密量取 RS2告依春对照品
储备液 ,逐级稀释得到质量浓度分别为 1311、6176、
217、1131、01676μg/ mL 的溶液 ,摇匀 ,按上述色谱
条件分别进样 10μL ,测定峰面积。以质量浓度 ( X)
为横坐标 ,峰面积 ( Y) 为纵坐标绘制标准曲线。结
果表明 RS2告依春在 01676～1311μg/ mL 与峰面
积的线性关系良好 ,回归方程为 Y = 71 351 177109
X + 920 , r = 01999 9。
21115 　精密度试验 :取板蓝根颗粒 (批号 7112630)
和药材 (5 # ) 供试品溶液各 1 份 ,按上述色谱条件 ,
分别重复测定 6 次 RS2告依春峰面积值 ,计算得其
RSD 分别为 019 %、011 %。
21116 　重现性试验 :取板蓝根颗粒 (批号 7112630)和
药材(5 # ) ,平行制备 6 份供试品溶液 ,分别测定 ,计算
RS2告依春的质量分数 ,其 RSD 分别为 016 %、012 %。
21117 　稳定性试验 :取板蓝根颗粒 (批号 7112630)和
药材(5 # )供试品溶液 ,分别于 0、1、3、6、9、12 h 进样 10
μL ,测定 RS2告依春峰面积值 ,计算得其 RSD 分别为
115 %、011 %。表明供试品溶液在 12 h 内稳定。
21118 　回收率试验 :精密称取批号 7112630 板蓝根
颗粒 6 份 ,每份 015 g ,分别精密加入 1 mL 1124
mg/ mL RS2告依春对照品溶液 ,制备供试品溶液 ,并
按色谱条件进行测定 ,计算得表告依春的平均回收
率为 101166 % ,RSD 为 019 %。取 5 # 板蓝根药材 ,
精密称定 6 份 ,每份 015 g ,分别精密加入 3 mL
1124 mg/ mL RS2告依春对照品溶液 ,制备供试品溶
液 ,并按色谱条件进行测定 ,计算得 RS2告依春的平
均回收率为 99174 % ,RSD 为 113 %。
21119 　样品测定 :按上述方法 ,分别测定板蓝根颗
粒和药材中 RS2告依春的质量分数 ,采用外标法计
算 ,结果见表 1 ,色谱图见图 1。
表 1 　板蓝根颗粒和板蓝根药材中 RS2告依春和腺苷的
测定结果( n = 2)
Table 1 　Determination of RS2goitrin and adenosine in
Banlangen Granula and Radix Isatidis ( n = 2)
规格 批号/ 编号
RS2告依春/
(mg ·g - 1)
腺苷/
(mg ·g - 1)
颗粒 含糖型 7112606 01 267 01559
7112607 01 225 01508
7112609 01 223 01506
7112611 01 232 01466
7112630 01 339 01484
无糖型 7111807 01 327 01298
7111809 01 297 01252
7111811 01 333 01256
7111815 01 398 01246
7112614 01 322 01279
药材 2002 年 1 01 600 01249
2 01 368 01197
2003 年 3 01 766 01113
4 01 546 01115
2006 年 5 01 470 01237
6 01 239 01237
图 1 　RS2告依春对照品( A) 、板蓝根药材( B) 、板蓝根颗粒
(含糖型 ,批号 7112630) ( C) 和板蓝根颗粒( 无糖型 ,
批号 7111807) ( D)的色谱图
Fig11 　Chromatograms of RS2goitrin reference substance
( A) , Radix Isatidis ( B) , Banlangen Granula ( sug2
ar , Batch 7112630) ( C) , and Banlangen Granula
( sugar free , Batch 7111807) ( D)
·8851· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 10 期 2009 年 10 月
212 　腺苷的测定
21211 　色谱条件[3 ] : Dikma Diamonsil C18 色谱柱
(200 mm ×416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈2水 (5 ∶
95) ;柱温 :室温 ;体积流量 :110 mL/ min ;检测波长 :
260 nm。
21212 　对照品溶液的制备 :精密称取腺苷对照品 5
mg 于 100 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 ,作为对照品储备液。精密量取该溶液适量 ,分
别加甲醇制成 0105、01005 mg/ mL 的溶液。
21213 　供试品溶液的制备 :取板蓝根颗粒 ,研细 ,精
密称取 1g 置 50 mL 量瓶中 ,加入甲醇 40 mL ,超声
提取 30 min ,放冷 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,用 0145μm
微孔滤膜滤过 ,即得。
　　取板蓝根药材 ,粉碎 ,过 3 号筛 ,精密称取 1g 置
50 mL 量瓶中 ,加入甲醇 40 mL ,超声提取 30 min ,
放冷 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,用 0145μm 微孔滤膜滤
过 ,即得。
21214 　线性关系考察 :精密量取腺苷对照品储备
液 ,逐级稀释得到质量浓度分别为 0105、0104、
0102、0101、01005 mg/ mL 的溶液 ,摇匀 ,按上述色
谱条件分别进样 10μL ,测定峰面积值。以质量浓
度 ( X) 为横坐标 ,峰面积 ( Y) 为纵坐标绘制标准曲
线。结果表明腺苷在 01005～0105 mg/ mL 与峰面积
线性关系良好 ,其回归方程为 Y = 28 564 656 X -
3 793 , r = 01999 9。
21215 　精密度试验 :取板蓝根颗粒 (批号 7112607)
和药材 (5 # ) 供试品溶液各 1 份 ,按上述色谱条件 ,
分别重复测定 6 次腺苷峰面积值 ,计算得其 RSD 分
别为 116 %、118 %。
21216 　重现性试验 :取板蓝根颗粒 (批号 7112630)
和药材 (5 # ) ,平行制备 6 份供试品溶液 ,测定 ,计算
腺苷的质量分数 ,其 RSD 分别为 112 %、114 %。
21217 　稳定性试验 :取板蓝根颗粒 (批号 7112607)
和药材 (5 # )供试品溶液 ,分别于 0、1、3、6、9、12 h 各
进样 10μL ,测定腺苷峰面积值 ,计算得其 RSD 分别
为 018 %、117 %。表明供试品溶液在 12 h 内稳定。
21218 　回收率试验 :精密称取批号 7112630 板蓝根
颗粒样品 6 份 ,每份 015 g ,分别精密量取 2 mL
0105 mg/ mL 腺苷对照品溶液 ,制备供试品溶液 ,按
色谱条件进行测定 , 结果腺苷的平均回收率为
97132 % ,RSD 为 116 %。
　　取 5 # 板蓝根药材 ,精密称定 6 份 ,每份 015 g ,
分别精密量取 2 mL 0105 mg/ mL 腺苷对照品溶液 ,
制备供试品溶液 ,按色谱条件进行测定 ,结果腺苷的
回收率平均值为 97176 % ,RSD 为 016 %。
21219 　样品测定 :按上述方法 ,分别测定板蓝根颗
粒和药材中腺苷的质量分数 ,采用外标法计算 ,结果
见表 1 ,色谱图见图 2。
图 2 　腺苷对照品( A) 、板蓝根颗粒( 含糖型 ,批号 7112630)
( B) 、板蓝根颗粒(无糖型 ,批号 7111807) ( C)和板蓝根
药材( D)的色谱图
Fig12 　Chromatographs of adenosine reference substance ( A) ,
Banlangen Granula ( sugar , Batch 7112630) ( B) , Ban2
langen Granula ( sugar free , Batch 7111807) ( C) , and
Radix Isatidis ( D)
　　由表 1 可知 , RS2告依春在含糖型颗粒中的质
量分数在 012 mg/ g 左右 ,在无糖型颗粒中的则在
013 mg/ g 左右 ,腺苷在含糖型颗粒中的质量分数约
为 012 mg/ g ,在无糖型颗粒中的则约为 015 mg/ g。
3 　讨论
　　提取溶剂考察 :分别以水、50 %甲醇、甲醇为溶
剂 ,对同一板蓝根药材进行提取 ,测定供试品提取液
中 RS2告依春的峰面积值 ,计算其质量分数。结果
以水作为提取溶剂时 ,测定 RS2告依春的质量分数
最高 ,故确定以水作为提取溶剂。以水、50 %甲醇、
甲醇为溶剂 ,对同一板蓝根药材进行提取 ,结果显
示 ,以甲醇作为溶剂 ,图谱中没有其他组分的干扰 ,
腺苷峰的分离度良好 ,故确定以甲醇作为提取溶剂。
　　提取时间选择 :取板蓝根药材粉末 ,分别回流提取
2 次 ,每次 015、1、115 h 和提取 1 次 ,每次 1、2 h。结果
提取时间为 115 h 时 ,RS2告依春的质量分数最高 ,故确
定提取时间为 115 h。取板蓝根药材粉末 ,分别超声提
取 15、30、45、60 min ,结果显示 :甲醇超声 30 min ,腺苷
的质量分数最高 ,故确定提取时间为 30 min。
参考文献 :
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中国天然药物 ,2005 ,3 (6) : 1095.
[ 2 ] 　黄　芳 ,熊雅婷 ,徐丽华 ,等. 板蓝根不同提取物中抗病毒成分
表告依春在大鼠体内的药代动力学 [J ]1 中国药科大学学报 ,
2006 ,37 (6) :519.
[ 3 ] 　许润春 ,杨 　明 ,苏艳桃 ,等. HPLC 测定板蓝根中腺苷含量
[J ]1 中成药 ,2005 ,27 (6) :742.
·9851·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 10 期 2009 年 10 月