全 文 ：6282630.
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川芎挥发油中藁本内酯在大鼠体内的药动学研究
刘 　洋1 ,胡连栋2 ,唐　星3 3　
(1. 郑州大学药学院 ,河南 郑州 　450000 ; 2.河北大学药学院 ,河北 保定 　071002 ;
3. 沈阳药科大学 ,辽宁 沈阳 　110016)
摘 　要 :目的 　测定川芎挥发油中藁本内酯在大鼠体内的药动学。方法 　采用 RP2HPLC 法 ,以蛇床子素为内标物
测定大鼠口服川芎挥发油的β2环糊精包合物后藁本内酯的血药浓度 ,使用 3P97 药动学软件计算其药动学参数。
结果 　藁本内酯在大鼠体内符合二室模型 ,主要的药动学参数 : tl/ 2 (α) 为 (11429 ±11161) h , tl/ 2 (β) 为 (61877 ±
21275) h , t (peak)为 (31401 ±11951) h ,AUC 为 (70187 ±25192) μg/ mL ·h。结论 　以蛇床子素为内标 ,RP2HPLC
法能够准确、灵敏地测定藁本内酯在大鼠体内的药动学。
关键词 :川芎 ;藁本内酯 ;蛇床子素 ;药动学 ;反相高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0220228203
Pharmacokinetics of l igustil ide in Ligusticum chua nxiong essential oil in rats in vivo
L IU Yang1 , HU Lian2dong2 , TAN G Xing3
(1. College of Pharmacy , Zhengzhou University , Zhengzhou 450000 , China ; 2. College of Pharmacy , Hebei University ,
Baoding 071002 , China ; 3. Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 110016 , China)
Abstract : Objective 　To investigate t he i n v ivo p harmacokinetics of ligustilide in L i g usticum chuan2
x ion g essential oil af ter ig administ ration in rat s. Methods 　The concent ration of ligustilide in plasma of
rat s af ter ig administ ration ofβ- cyclodext rin compound in L . chuanx iong enssential oil was determined by
RP2H PL C method wit h t he osthole as t he internal standard. The plasma concent ration2time curve was
plotted. The main p harmacokinetic parameters of ligustilide were obtained by 3P97 sof tware. Results 　Li2
gustilide in rat s fit s t he two compart ment s model and the main p harmcokinetic parameters were as follows :
tl/ 2 (α) , ( 11429 ±11161) h ; tl/ 2 (β) , ( 61877 ±21275) h ; t (peak) , ( 31401 ±11951) h ; and AUC were
(70187 ±25192) μg/ mL ·h , respectively. Conclusion 　RP2H PL C Met hod wit h osthole as t he internal
standard is accrurate , sensitive , and rapid for t he st udy on p harmacokinetics of ligustiliden in rat s i n vi vo.
Key words : L i g usticum chuanx ion g Hort . ; ligustilide ; ost hole ; p harmacokinetics ; RP2H PL C
　　藁本内酯为伞形科植物川芎 L i g usticum
chuan x iong Hort . 挥发油的主要活性成分 ,具有较
强的抗胆碱作用 ,是评价川芎药材及其制剂的重要
依据之一[1～4 ] 。近年来随着研究的深入 ,发现藁本
内酯是一个很有发展前途的化合物 ,相比于川芎中
的川芎嗪、阿魏酸等成分而言 ,藁本内酯的研究更有
必要深入化[ 5 ] 。由于藁本内酯稳定性问题十分突
出 ,因此其药动学的研究报道鲜见。本研究采用
CO2 超临界萃取技术提取川芎中的挥发油成分 ,测
定其中藁本内酯 ,并采用β2环糊精包合技术将挥发
油固化和稳定化后给大鼠灌胃 ,选择合适的内标物
测定了藁本内酯大鼠口服后的体内药动学[ 6 ] 。
1 　仪器与试药
CL C —6A 型日本岛津高效液相色谱仪 ,SPD —
6AV 型检测器 ,Anasta 色谱工作站 , T GL —16B 型
超速离心机 (上海安亭科学仪器厂) , YKH —Ⅲ快速
混合器 (江西医疗器械厂) 。
藁本内酯对照品 (自行提纯 ,经 GC2MS 分析质
·822· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 收稿日期 :2008205216　　　
作者简介 :刘　洋 (1980 —) ,女 ,河南省新乡市人 ,讲师 ,从事基因药物给药系统研究工作。
Tel :13673638040 　E2ma i l :liuyang8016 @l26. com
量分数为 98 %) ,肝素钠注射液 (天津市生物化学制
药厂 ) , 氯仿、甲醇为色谱纯 ;β2环糊精 ( 批号
20040213 ,浙江诚意药业有限公司) 。
Wistar 种大鼠 ,雌雄兼用 ,体质量 230～250 g ,
沈阳药科大学实验动物中心提供 ,合格号 : SYXK
(辽) 20042006。
2 　方法与结果
211 　检测波长的选择 :将藁本内酯对照品溶解于甲
醇 ,配制成 940μg/ mL 溶液 ,在紫外 200～400 nm
波长进行扫描。结果在 280、320 nm 处有最大吸
收。经高效液相色谱法测定 ,320 nm 处灵敏度更
高 ,故选用 320 nm 为检测波长。
212 　色谱条件 :色谱柱为 Diamonsil C18 (200 mm ×
416 mm , 5μm) ;预柱 : YW G C18 (10 mm ×4 mm ,5
μm) ;流动相 :甲醇2水2冰醋酸 (78 ∶22 ∶013) ;体积
流量 :110 mL/ min ;柱温 :30 ℃;检测波长 :320 nm。
213 　血浆样品的采集与处理 :10 只大鼠禁食 12 h ,
自由饮水 ,口服川芎超临界 CO2 萃取物的β2环糊精
包合物 40 mg/ 100 g ,于给药后 015、1、115、2、3、4、
6、8、12、15、24 h 眼眶静脉取血 015 mL ,经肝素抗凝
后 4 000 r/ min 离心 10 min。吸取 012 mL 血浆 ,加
入 5215μg/ mL 内标物蛇床子素溶液 10μL ,涡旋混
合 2 min ,加入甲醇 800μL ,涡旋混合 5 min ,4 000
r/ min 离心 10 min ,吸取上清液。用相同量的甲醇
二次提取 ,合并两次所得的上清液 ,于 40 ℃水浴 ,
N2 吹干 ,加入 100μL 甲醇2氯仿 (1 ∶1) 溶解残渣 ,
进样 20μL ,内标法定量。
214 　标准曲线与检测限 :取空白血浆 200μL ,加入
11210、21415、61040、12108、24115、60139、150196
μg/ m L 藁本内酯对照品溶液 20μL ,52150μg/ mL
内标物蛇床子素 10μL ,混匀 ,配制成相当于血浆药
物质量浓度为 01210、01525、1105、2110、5125、
1311、5215μg/ mL 的血浆样品 ,进样分析 ,记录色
谱图。以藁本内酯峰面积与内标物峰面积之比对质量
浓度进行线性回归 ,得标准曲线方程 Y = 46138 X +
13119 , r = 01999 6。结果表明血浆中藁本内酯在
01210～5215μg/ mL 线性关系良好。血浆中药物
的检测限为 01105μg/ mL 。
215 　方法的专属性 :取空白血浆、含藁本内酯和蛇
床子素的空白血浆、受试大鼠口服包合物后采集的
血浆 ,按血浆样品的采集与处理项下处理 ,进样 ,得
色谱图 ,见图 1。结果表明 ,血浆样品中藁本内酯与
内标蛇床子素的保留时间分别为 615、810 min ,血
　
t/ min
12藁本内酯　22蛇床子素
121igustilide 　22ost hole
图 1 　空白血浆 ( A) 、含藁本内酯和蛇床子素的空白血浆
( B) 、口服藁本内酯后的血浆样品( C)的 HPLC图谱
　Fig. 1 　HPLC Chromatograms of blank plasma ( A) ,
blank plasma with ligustilide and osthole ( B) ,
and plasma sample after ig administration of L.
chuanxiong essential oil
浆中的内源性物质不干扰测定。
216 　精密度试验 :将 3 个质量浓度的藁本内酯血浆
样品一式 5 份 ,1 d 内经提取后进样分析 ,计算 3 种
质量浓度的日内 RSD。同时配制 5 份含藁本内酯
的血浆样品于 - 20 ℃冰箱冷冻保存 ,分别于 5 d 提
取 ,进行测定 ,计算日间 RSD ,结果见表 1。
表 1 　测定方法的精密度( n = 5)
Table l 　Precision for determination ( n = 5)
质量浓度/ (μg ·mL - 1) 日内 RSD/ % 日间 RSD/ %
01 525 71 9l 12133
11 05 61 54 10125
51 25 31 36 8123
217 　回收率试验 :取空白血浆 200μL15 份 ,加入
6104、12108、601 39μg/ mL 藁本内酯对照品溶液适
量 ,各 5 份 ,配制 01525、1105、5125μg/ mL 3 个质量
浓度 ,处理 ,进样分析。以样品的峰面积与相同质量
浓度的对照品峰面积之比计算提取回收率。并将血
浆中药物的峰面积代入标准曲线方程中计算药物的
质量浓度 ,与理论值相比计算方法准确度 ,结果
见表 2。
表 2 　方法的回收率与准确度( n = 5)
Table 2 　Recovery and accuracy for determination ( n = 5)
质量浓度/ (μg ·mL - 1)
提取回收率/ % 准确度/ %
数值 RSD 数值 RSD
01525 9017 31 0 10212 1104
1105 7712 21 5 9619 0186
5125 8316 151 8 9815 0178
218 　药动学参数与隔室模型的建立 :大鼠口服藁本
·922·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
内酯后的血药浓度数据用中国数学药理学会编制的
药动学软件 3P97 进行处理 ,结果藁本内酯在大鼠
体内较符合二室模型[7 ] ,各项药动学参数见表 3。
藁本内酯在大鼠体内的药时曲线见图 2。
表 3 　大鼠口服川芎挥发油后藁本内酯药动学参数
Table 3 　Pharmacokinetic parameters of ligustilide
in rats after ig administration of L.
chuanxiong essential oil
参数 单 位 x ±s ( n = 7)
A μg ·mL - 1 161 18 ±18137
Ke h - 1 0111 ±01 0373
Ka h - 1 1185 1 ±21880
lag time h 0124 ±01 1346
t1/ 2 (α) h 11429 ±11 161
t1/ 2 (β) h 61877 ±21 275
t (peak) h 31401 ±11 951
Cmax μg ·mL - 1 41999 ±11 769
AUC μg ·mL - 1 ·h 701 87 ±25192
CL/ F (s) (mg/ 100 g) h - 1/ (μg ·mL - 1) 0168 ±011 795
V / F (c) (mg/ 100 g) / (μg ·mL - 1) 71072 ±31 322
t/ h
图 2 　藁本内酯在大鼠体内的药时曲线
Fig. 2 　Mean plasma concentrateion2time curves 　
of ligustilide in rats after ig administration
of L. chuanxiong essential oil
3 　讨论
随着藁本内酯在提取物中量的不断提高 ,其异
构化速率加快 ,室温条件下放置 2～4 d 可下降 50 %
以上 ,长时间放置还可氧化成多种复杂产物乃至最
后消失[8 ] 。本研究针对藁本内酯的不稳定性 ,采用
β2环糊精进行包合 ,提高挥发油中藁本内酯的稳定
性并且将挥发油固化 ,避免有效成分损失 ,用于口
服[6 ] 。本实验经 GC2MS 法测定超临界 CO2 萃取得
川芎挥发油中主要成分为藁本内酯 ,归一化测定其
质量分数为 64124 % ,且其在挥发油中可长期稳定
存在[9 ] 。
检测波长选择时 ,将川芎挥发油经提纯分离得
到的藁本内酯纯品经紫外扫描 ,得到的吸收光谱图
在 280、320 nm 处均有吸收峰 ,但经高效液相色谱
分析可知 ,320 nm 的吸收更灵敏且杂质对其干扰更
小 ,故选择该波长为检测波长。
流动相的选择时 ,考虑到藁本内酯的极性与血
浆样品的分析情况 ,选择甲醇2水 (78 ∶22) ,经高效
液相测定不同 p H 值流动相时 ,发现 p H 410 时 ,藁
本内酯出峰较快且峰形尖锐 ,与内标物分离效果较
好。使用冰醋酸调节 p H 值 ,确定流动相的组成为
甲醇2水2冰醋酸 (78 ∶22 ∶013) ,结果表明 ,藁本内
酯与内标物蛇床子素完全分离 ,出峰时间分别为
615、810 min ,血浆中的内源性杂质不干扰测定。
藁本内酯极性较强 ,通常应选用低极性的有机
溶剂提取浓缩法 ,但实验中发现 ,采用醋酸乙酯、乙
醚等有机溶剂提取浓缩后 ,提取回收率不超过
50 % ,可能是由于药物的血浆蛋白结合率高且较牢
固 ,蛋白不经变性药物无法游离出来 ,考虑到内标物
蛇床子素在甲醇中溶解度较好 ,藁本内酯在氯仿中
溶解度较好 ,在甲醇中亦有一定的溶解度 ,故采用甲
醇沉淀蛋白与二次提取相结合 ,合并上清液吹干浓
缩 ,氯仿2甲醇 (1 ∶1) 溶解残渣结果表明 :提取回收
率可达到 80 %以上。
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