全 文 ：HPLC法测定川芎中藁本内酯和欧当归内酯 A的含量
颜仁龙，郭 璐，潘明凤，肖 峰，周先礼* (西南交通大学，生命科学与工程学院，四川成都 610031)
摘要 ［目的］测定川芎药材中的藁本内酯和欧当归内酯 A 的含量。［方法］采用 HPLC 法，色谱柱为 SymmetryShieldTM RP-C18色谱柱
( 4． 6 mm ×250 mm，5 μm) ;以乙腈 －水为流动相，梯度洗脱;检测波长为 280 nm;柱温为 30 ℃ ; 进样量为 10 μl。［结果］藁本内酯和欧当
归内酯 A浓度在各自范围内与峰面积的线性关系良好，相关系数 R分别为 0． 999 0和 0． 999 1; 测得各样品中藁本内酯含量为 15． 97 ～
18． 71 mg /g，欧当归内酯 A的含量为 0． 67 ～0． 81 mg /g。［结论］该方法准确，操作较为简便易行，精密度及重现性良好，可用于川芎药材
的质量评价。
关键词 HPLC法;川芎( RHIZOMA CHUANXIONG) ;藁本内酯;欧当归内酯 A; 含量测定
中图分类号 S567． 7 + 9 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611( 2012) 26 －12857 －02
Determination of Ligustilide and Levistolide A in Ligusticum chuanxiong Hort． by HPLC
YAN Ren-long et al ( School of Life Science and Engineering，Southwest Jiaotong University，Chengdu，Sichuan 610031)
Abstract ［Objective］To determine ligustilide and levistolide A in Ligusticum chuanxiong Hort． ．［Method］A HPLC analysis was performed on
a SymmetryShieldTM RP-C18 Column( 4． 6 mm ×250 mm，5 μm) with the detection wavelength at 280 nm and acetonitrile-water as mobile phase．
The column temperature was 30 ℃ and the injection volume was 10 μl．［Result］The ligustilide and levistolide A showed a good relationship in
the range of 3 －11 μl ( R =0． 999 0 and 0． 999 1，respectively) and the content of ligustilide and levistolide A in Ligusticum chuanxiong Hort． was
15． 97 －18． 71 mg /g and 0． 67 －0． 81 mg /g，respectively．［Conclusion］The method is easy to operate with high accuracy，precision and repro-
ducibility，and can be used for the quality assessment of Ligusticum chuanxiong Hort． ．
Key words HPLC method; Ligusticum chuanxiong Hort． ; Liguistilide; Levistolide A; Content determination
基金项目 新世纪优秀人才基金( NCET-08-0820 ) ; 国家自然科学基金
( 21142004) ; 中央高校研究基金( SWJTU2010-ZT09) 。
作者简介 颜仁龙( 1986 － ) ，男，甘肃兰州人，硕士研究生，研究方向:
天然药物化学，E-mail: rlyan1986@ 163． com。* 通讯作者，
教授，硕士生导师，E-mail: xxbiochem@ 163． com。
收稿日期 2012-04-26
川芎(RHIZOMA CHUANXIONG)为伞形科蒿本属(Ligu-
sticum)植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort．)的干燥根茎，
含有挥发油、生物碱、有机酸和内酯等成分［1］。川芎挥发油
是川芎的主要活性成分，其中藁本内酯的含量最高，对动脉
粥样硬化、脉管炎和脑血栓等心脑血管疾病有防治作用，并
有很强的解痉、平喘和镇定作用，临床上可用于治疗支气管
炎和妇科疾病［2 －3］;欧当归内酯 A是有效成分藁本内酯的二
聚体，和藁本内酯的含量直接相关。在一定条件下，欧当归
内酯 A可以转化为藁本内酯，故同时考察藁本内酯和欧当归
内酯的含量及其变化能更好的评价川芎药材的质量。吴平
丽等用 HPLC法测定了川芎药材中的洋川芎内酯 A 和 Z-藁
本内酯［4］;倪小兰等报道用 HPLC法测定抚芎和川芎中的阿
魏酸和欧当归内酯 A的含量［5］，但目前关于用 HPLC同时测
定川芎中藁本内酯和欧当归内酯 A 含量的研究鲜有报道。
笔者采用 HPLC测定川芎中藁本内酯和欧当归内酯 A 的含
量，以期为川芎药材的质量评价提供新的方法。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。川芎药材，购自成都市荷花池中药材市
场，经西南交通大学生命科学与工程学院宋良科教授鉴定为
伞形科蒿本属植物川芎(Ligusticum Chuanxiong Hort．)的干
燥根茎。
1． 1． 2 主要仪器。Waters600 series 高效液相色谱仪，购自
美国Waters Technologies公司，包括 Waters2487 紫外检测器
及Waters Empower色谱工作站;Amersham纯净水发生器，购
自安玛西亚中国有限公司。
1． 1． 3 主要试剂。藁本内酯、欧当归内酯 A标准品，均由该
课题组提供，纯度在 99%以上;乙腈、甲醇均为色谱纯，购自
Fisher Scientific公司;其余试剂均为分析纯，购自成都市高新
区石羊化学试剂厂。
1． 2 方法
1． 2． 1 色谱条件。SymmetryShieldTM RP-C18色谱柱(4． 6 mm ×
250 mm，5 μm);流动相为乙腈 －水，梯度洗脱:0 ～10 min，40%
～50%乙腈;10 ～30 min，50% ～80%乙腈;流速为 1 ml /min;检
测波长为 280 nm;柱温为 30 ℃;进样量为 10 μl。
1． 2． 2 对照品溶液的制备。称取藁本内酯、欧当归内酯 A
对照品适量，精密称定于 10 ml量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻
度，摇匀，再精密量取上述溶液 1 ml至 10 ml量瓶中，用无水
甲醇稀释至刻度，即得浓度分别为0． 32 和0． 1 mg /ml的藁本
内酯、欧当归内酯 A对照品溶液。
1． 2． 3 供试品溶液配制。精密称取川芎药材粉末(过 20 目
筛)2． 000 g，加入 100 ml 无水甲醇，精密称重，超声提取(功
率 250 W，频率 59 kHz)1 h，冷却后称重，加溶剂补足重量，摇
匀后静置，取上清液，通过 0． 45 μm的微孔滤膜过滤，取续滤
液，即得供试品溶液，备用。
1． 2． 4 系统适用性试验。分别取藁本内酯、欧当归内酯 A
对照品溶液和供试品溶液，按“1． 2． 1”的色谱条件下进行
测定。
1． 2． 5 方法学考察。①线性关系考察。分别精密量取对照
品溶液 1、3、5、7、9和 11 μl，按“1． 2． 1”的色谱条件进行测定，
以峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归，计算回归方程。
②重现性试验。取同一批次川芎药材，依“1． 2． 3”项下制备
样品溶液 5份，进样，测定藁本内酯、欧当归内酯 A峰面积积
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(26):12857 － 12858 责任编辑 石金友 责任校对 李岩
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.26.074
分值，计算 RSD。③稳定性试验。取供试品溶液，室温放置，
分别于 0、1、2、4、8和 12 h进样测定，计算 RSD。④精密度试
验。分别精密吸取藁本内酯、欧当归内酯 A 对照品溶液 10
μl，重复进样 6次，测定峰面积，计算 RSD。
1． 2． 6 样品测定。精密称定川芎药材各批次样品 2． 000 g，
按“1． 2． 3”项下操作，然后在“1． 2． 1”的色谱条件进行测定。
2 结果与分析
2． 1 系统适用性试验 图 1 ～ 3表明，藁本内酯和欧当归内
酯 A 的保留时间分别为 7． 42和 20． 20 min，与相邻色谱峰分
离度大于 1． 5，峰对称性良好，理论塔板数分别不低于 9 876
和 2 432。
2． 2 方法学考察 ①线性关系考察。计算得线性回归方程
分别为:藁本内酯 Y = 1． 416 5X + 1． 801 3，R = 0． 999 0，表明
在 0． 320 ～3． 520 μg /ml范围内，藁本内酯浓度与峰面积的线
性关系良好;欧当归内酯 Y = 1． 785 4X + 1． 187 6，R =
0． 999 1，表明在 0． 100 ～1． 100 μg /ml 范围内，欧当归内酯浓
度与峰面积的线性关系良好。②重现性试验。计算得藁本
内酯和欧当归内酯 A 样品峰面积的 RSD 分别为 2． 51%和
1． 90%，表明重现性良好。③稳定性试验。计算得藁本内酯
平均峰面积为 16 149，欧当归内酯 A 的平均峰面积为 1 260;
藁本内酯和欧当归内酯 A 峰面积的 RSD 分别为 1． 26%和
1． 03%，表明藁本内酯和欧当归内酯A含量在12 h内基本稳
定。④精密度试验。计算得藁本内酯和欧当归内酯 A 峰面
积的 RSD分别为 1． 05 %和 1． 32 %，表明精密度良好。
图 1 藁本内酯对照品色谱
图 2 欧当归内酯 A对照品色谱
2． 3 样品的测定 由表 1可知，3批川芎药材中藁本内酯和
欧当归内酯 A 的平均含量分别为 17． 06 和 0． 72 mg /g，RSD
分别为 2． 78%和 2． 06%。
注:1为藁本内酯;2为欧当归内酯 A。
图 3 样品图谱
表 1 川芎药材中藁本内酯和欧当归内酯 A的含量(n =3)
样品
藁本内酯
含量∥mg /g RSD∥%
欧当归内酯 A
含量∥mg /g RSD∥%
1 16． 50 0． 81
2 18． 71 2． 78 0． 67 2． 06
3 15． 97 0． 69
3 讨论
据报道，藁本内酯纯品在室温下 15 d即有 58 %异构化，
其主要异构化产物有 8种，占异构化产物的 90． 81%，主要反
应途径为脱氢、氧化、水解和降解等［5］。藁本内酯在挥发油
中基本稳定，不会出现纯品的异构化，这可能是挥发油中含
有一定量的藁本内酯异构化产物，是异构化反应趋于平衡所
致［5］。而欧当归内酯 A作为藁本内酯的一种二聚产物，其本
身在维持这种平衡中的作用和相应的化学变化过程值得进
一步研究。
试验以藁本内酯和欧当归内酯 A为对象，建立了同时测
定 2组分的 HPLC法，并通过了方法学验证。试验还考察了
乙腈 －水、无水甲醇 －水、乙腈 －无水甲醇 －水和无水甲醇
－浓度 5%异丙醇 4种流动相体系，最后发现用乙腈 －水为
流动相梯度洗脱时所测藁本内酯色谱峰、欧当归内酯 A与相
邻色谱峰得到很好的分离。
参考文献
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85821 安徽农业科学 2012 年