全 文 ：·724· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月
小檗碱抑制IKKf3Ser181磷酸化改善高糖诱导的3T3一L1
脂肪细胞胰岛素抵抗的分子机制
易 屏1，陆付耳2’，陈 广2，徐丽君2，王开富2
(1．华中科技大学同济医学院附属同济医院中医科，湖北武汉430030t2．华中科技大学
同济医学院附属同济医院中西医结合研究所，湖北武汉430030)
摘要：目的研究小檗碱对高糖诱导的3T3一L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用，探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的分子
机制。方法 以25mmol／L葡萄糖加0．6nmol／L胰岛素诱导3T3一L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗，予以小檗碱进行
干预，同时以阿司匹秫作为阳性对照，以2一脱氧一[3HJ—D一葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率，用Westernblotti g
检测IKKl3蛋白，IKKpSer181磷酸化，IRS-1蛋白，IRS一1Ser307磷酸化，PI一3Kp85蛋白，GLUT4蛋白的表达。
结果25mmol／L葡萄糖加0．6nmol／L胰岛素作用18h使3T3一L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制
60％，IKK[≥Ser181磷酸化、IRS一1er307磷酸化的表达增加，IRS一1和PI一3Kp85蛋白的表达减少l同时加入小
檗碱或阿司匹林则可逆转上述效应。但高糖、小檗碱、阿司匹林对3T3一L1脂肪细胞IKKp蛋白、GLUT4蛋白的表
达无明显影响。结论小檗碱可以明显改善高糖诱导的胰岛素抵抗，其分子机制可能是小檗碱通过抑制IKKt]Ser
181磷酸化，使IRS一1丝氨酸残基磷酸化减少而酪氨酸残基磷酸化增加，调节胰岛素信号蛋白的表达来实现的。
关键词：小檗碱}胰岛素抵抗IIKK／3；高糖
中图分类号：R286．72 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)05—0724—06
Molecularmechanismofberberineonimprovinginsulinresistanceof3T3一L1
adipocytesinducedbyhighglucosethroughIKK[3Ser181phosphorylation
Y1Pin91，LUFu—er2，CHENGuan92，XULi—jun2，WANGKai—fu2
(1．DepartmentofTraditionalChineseMedicine，TongjiHospital，TongjiMedicalCo lege，HuazhongUniversity
ofScienceandTechnology，Wuhan430030，China2． stituteofIntegratedTra itionalChinese
andWesternMedicine，TongjiHospital，TongjiMedicalCo lege，HuazhongUniversity
ofScienceandTechnology，Wuhan430030，China)
Abstract：ObjectiveTos udytheffectofberberineoninsulinresistanceof3T3一L1adipocytes
inducedbyhighglucoseandtOinvestigateitspossiblemolecularmechanism．Methods3T3一L1
Adipocytesweretreatedwith25mmol／Lglucosewith0．6nmol／Linsulintoindueeinsulinresistance．
BerberinewasusedforthetreatmentandAsprinwasusedforthepositivecontr01．2一Deoxy一[3H3一D—
glucoseuptakingmethodwasusedtOobservethtransportingate．Westernblottingwasusedforthe
determinationofIKKpSer181phosphorylation，IRS一1Ser307phosphorylation，andtheprotein
expressionofIKK8，IRS一1，PI一3Kp85，andGLUT4．ResultsAfterhetreatmentwith25mmol／L
glucosewith0．6nmol／Linsulinfor18h．theinsulin—stimulatedglucoseransportationin3T3一L1
adipocytewasinhibitedby60％，theproteinexpressionofIRS一1andPI一3Kp85werereduced；
phosphorylationofIKKBSer181andIRS一1Ser307wereinduced．Meanwhile，thesewerreversedby
priort eatmentofthecellswithberberineorAspirin．ButtheproteinxpressionofGI。UT4andIKK8in
3T3一L1adipocytewasnochangeduringthistudy．ConclusionTheresultsshowthatberberinecould
significantlyimprovetheinsulinresistanceof3T3一L1adipocytesinducedbyhighglucoseanditsmolecular
mechanismm ghtbethatberberinecoulddecreasethephosphorylationofseriner sidueofIRS一1and
increaseth phosphorylationoftyrosineresiduebyinhibitinghephosphorylationofIKKl3Ser181，
therebyregulatingtheproteinxpressionofthesignalofinsulintOimprovetheinsulin—resistance．
Keywords：berberine；insulinr s stance；IKKB；highglucose
收稿日期：2007—08-09
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30371816)
作者筒介：易屏(1971一)．女，ii9i北武汉人，医学博士，主治医师。主要从事中西医结合内分泌研究。
Tel：(027)62605927E—mail：fpp2004@yahoo．corn．cn
*通讯作者陆付耳Tel／Fax：(027)83663237E—mail：felu@tjh．tjmu．edu．cn

万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月·725·
现代药理学研究表明，小檗碱不仅具有清热解
毒和抗炎的作用，还具有改善胰岛素抵抗，降低血
糖，纠正脂质紊乱的作用E1～43。小檗碱同时具有抗炎
和抗糖尿病的双重作用正好与2型糖尿病在病理本
质上是一种慢性炎症性疾病的最新研究观点Is．6]不
谋而合，小檗碱同时具有抗炎作用与改善胰岛素抵
抗作用的分子机制尚不清楚。本研究以高糖诱导的
胰岛素抵抗细胞为模型[7]，观察小檗碱对炎症分子
靶点IKKp及胰岛素信号转导相关分子的影响，试
图阐明小檗碱同时具有抗炎作用与改善胰岛素抵抗
作用的分子机制。
1材料
盐酸小檗碱、3一异丁基一1一甲基黄嘌呤
(IBMX)、地塞米松、胰岛素、阿司匹林、DMSO、细
胞松弛素B(均购自Sigma公司)；BSA、DMEM、胎
牛血清(FBS)(GibcoBRL公司)；2一脱氧一[3H]一D一
葡萄糖(北京原子高科股份有限公司)；3T3一L1前
脂肪细胞(中国医学科学院基础医学研究所细胞中
心)；兔IKKp抗体、兔磷酸化IKKpSer181抗体、
兔磷酸化IRS一1Ser307抗体(CellSignaling公
司)；兔IRS一1抗体、兔PI一3Kp85抗体(Santacruz
公司)；小鼠GLUT4抗体(R&DSYSTEMS公
司)；兔pactin抗体(LABVISION公司)；辣根酶
标记山羊抗小鼠IgG、辣根酶标记山羊抗兔IgG
(Pierce公司)；蛋白Marker(Fermentas公司)；
BCA蛋白检测试剂盒、增强化学发光法(ECL)试
剂盒(Pierce公司)；其他化学试剂均为分析纯。
SH87261616型CO：培养箱(美国Sheldon公司)；
倒置相差显微镜(日本OlympusCHK公司)；YJ一
1450型医用净化工作台(苏州净化设备公司)；
MicroBeta1540型液闪仪(美国PE公司)。
2方法
2．1 细胞培养及诱导分化：在37℃、5％CO：条件
下，3T3一L1前脂肪细胞在含10％FBS的高糖
DMEM中培养，待细胞融合2d后，加入含0．5
mmol／LIBMX、1／1mol／L地塞米松、10mg／L胰岛
素和10％FBS的高糖DMEM培养48h，然后换上
含10mg／L胰岛素和10％FBS的高糖DMEM再
培养48h，随后以10％FBS的高糖DMEM继续培
养，2d换培液1次，诱导分化8—12d的3T3一L1细
胞90％～95％呈脂肪细胞表型，可用于实验[7]。
2．2 3T3一L1细胞胰岛素抵抗模型的建立与分组
处理：将诱导分化成熟的3T3一L脂肪细胞换上含
0．2％BSA的DMEM无血清培养液培养12h后，
分别换上含25mmol／L葡萄糖、0．6nmol／L胰岛
素、1％BSA的DMEM培养液培养18h(模型组，
M)；含25mmol／L葡萄糖、0．6nmol／L胰岛素、10
／-tmol／L小檗碱、1％BSA的DMEM培养液培养
24、48h(小檗碱高剂量组，BH24，BH48)；含25
mmol／L葡萄糖、0．6nmol／L胰岛素、1tMmol／L小
檗碱、1％BSA的DMEM培养液培养24、48h(zb
檗碱低剂量组，BL24，BL48)；含25mmol／L葡萄
糖、0．6nmol／L胰岛素5mmol／L阿司匹林、1％
BSA的DMEM培养液培养24、48h(阿司匹林组，
As24，As48)；含1％BSA的DMEM培养液培养
24h(正常组，N)。
2．3葡萄糖转运试验：将24孔板中诱导分化成熟
的3T3一L1脂肪细胞以含0．2％BSA的DMEM培
养液培养12h，换以含0．2％BSA的含药培养液孵
育 定时间后，移去培养液，以KRP缓冲液(131．2
mmol／LNaCl、4．71mmol／LKCl、2．47mmol／L
CaCl2、1．24mmol／LMgS04、2．48mmol／L
Na3P04、10mmol／LHEPES，pH7．4)洗3次，再以
含或不含100nmol／L胰岛素的KRP缓冲液37℃
孵育30min，加入1mL含1．75×10‘Bq／mL2一脱
氧一[3HI—D一葡萄糖的KRP缓冲液37℃孵育10
min，以预冷含10mmol／L葡萄糖的PBS快速洗3
次中止反应，加1mL0．1mol／LNaOH作用2h，
取细胞裂解液，用液闪仪计数其每分钟衰变数
(cpm)。另设一组加10弘mol／L细胞松弛素B作为
2一脱氧一[3H]一D一葡萄糖的非特异摄取率，所有数据
减去此值，作为各组细胞的葡萄糖摄取率[8]。每次实
验设3个复孔，共重复3次实验。另用CCK一8法监测
细胞的数目和活力[9j。
2．4 Westernblotting试验：分化成熟、高糖(25
mmol／L)加胰岛素(0．6nmol／L)、小檗碱(10、1
tⅡmol／L)、阿司匹林(5mmol／L)分别处理24、48h
3T3一L1脂肪细胞用细胞裂解液裂解后提取总蛋
白，用BCA试剂盒测定蛋白浓度。取等量的蛋白样
品50pg，用样品缓冲液处理，蛋白变性、SDS—
PAGE胶电泳分离蛋白、电转移法使蛋白转移至
PDVF膜上，用含5％脱脂奶粉的TBST(Tris—
HCl50mmol／L、NaCl150mmol／L，pH7．4，
0．1％聚山梨酯)室温下封闭2h以减少非特异性
结合，封膜后加入抗相应蛋白的抗体为特异性第一
抗体，4℃过夜，TBST洗膜后以辣根过氧化物酶
(HRP)标记的二抗(1：3000)孵育，室温下轻摇2
h，TBST洗膜后用ECL化学发光法曝光显影，洗片

万方数据
·726· 中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月
后用Bio—Rad图像分析系统对目的条带进行扫描，
然后用QuantityOne软件进行分析。
2．5统计学处理：实验结果以Z土5表示，两组间比
较用t检验，所有数据应用SPSS软件进行统计学
分析。
3 结果
3．1小檗碱对3T3一L1脂肪细胞葡萄糖转运的影
响：葡萄糖转运实验发现，诱导分化成熟的3T3一L1
脂肪细胞，胰岛素刺激的葡萄糖转运较基础状态下
明显增加，是基础状态下的5．6倍，这表明诱导分
化成熟的3T3一LI脂肪细胞对胰岛素极其敏感，是
研究胰岛素增敏剂的理想细胞模型，胰岛素刺激的
葡萄糖转运值可以反映胰岛素敏感性。实验结果显
示：25mmol／L葡萄糖加0．6nmol／L胰岛素作用
18h使3T3一L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运
抑制60％；加入1、10t比mol／L小檗碱作用24h后
3T3一L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运分别增
加46％、56％，作用48h后分别增加52％、61％，呈
时间剂量依赖效应，加入5mmol／L阿司匹林作用
24h后3T3一L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运
增加58％，作用48h后增加65％，见图1。
：
霍i
喜；
lo
基础值N MBH48BLA8As48BH24BL24As24
与模型组(M)比较：一尸<0·01
。。P<0．01t，5model(M)group
图1各组3T3一L1脂肪细胞对2一脱氧一[3H3一D一葡萄糖的
摄取(；±s，一=9)
Fig．1Insulin—induced2-deoxy-[3H]-D—glucoseuptaking
in3T3．LIadipocytes(；士F，一一9)
CCK一8结果显示：25mmol／L葡萄糖加0．6
nmol／L胰岛素存在时，3T3一L1脂肪细胞的CCK一8
值无影响；加入1、10ttmol／L小檗碱作用24、48h
对3T3一L1脂肪细胞的CCK一8值均无影响，加入5
mmol／L阿司匹林作用24、48h对3T3一L1脂肪细
胞的CCK一8值亦无影响，与正常组比较差异不显著
(P>O．05)，见表1。
3．2 小檗碱对3T3一L1脂肪细胞IRS一1、PI一3K
p85和GLUT4蛋白表达的影响：采用Western
blotting检测3T3一L1脂肪细胞IRS一1、PI一3Kp85
和GLUT4蛋白的表达，结果显示：25mmol／L葡
农l小檗碱对3T3一LI脂肪细胞CCK一8的影响
(；士s，席一9)
Table1 EffectofberberineonCCK一8in3T3-Ll
adipocytes(；土$，万一9)
组别 CCK一8值 组别 CCK一8值
N 1．869士0．050As48 1．837士0．023
M 1．855士0．019BH24 1．856士0．025
BH48 1．849士0．020BL24 1．854士0．021
BL48 1．854士0．019As24 1．845土0．030
萄糖加0．6nmol／L胰岛素作用18h可以明显抑制
IRS一1和Pl一3Kp85蛋白的表达，与正常对照组比
较差异非常显著(P<0．01)；同时加入小檗碱或
IKKB抑制剂阿司匹林则可以逆转其作用，使IRS一1
和PI-3Kp85蛋白的表达增加，与模型组比较差异
显著(P呈依赖关系(图2、3)。但是无论加入高糖还是同时加
入小檗碱或阿司匹林对3T3一L1脂肪细胞GLUT4
蛋白的表达无明显影响∽>0．05)，见图4。
1．2
a1．0
譬0．8
罢0．6
凶0．4
仨
一0．2
O
N MBH48BL48As48BH24BL24As24
与模型组(M)比较：’P<0．05一P<0．01
’P<0．05一P<0．01口5model(M)group
图2各组3T3一LI脂肪细胞IRS—l蛋白的表达
(；士j，n=9)
Fig．2ProteinxpressionofIRS一1in3T3-L1
adipocytes“土，，n=9)
c
l-O
翟
等O·8
器0．6
圣o．4
’
芷0．2
O
N MBH48BL48As48BH24BL24As24
与模型组(M)比较：一P<0．01
一P<0．01wmodel(M)group
图3各组3T3-Ll脂肪细胞PI一3Kp85蛋白的表达
Q±j，n=9)
Fig． ProteinxpressionofPI一3Kp85in3T3一Ll
adipocytes(暑士s，露=9))

万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月·727·
1．2
1．0
0．8
O．6
0．4
0．2
0
壬
N MBH48BL48As48BH24BL24As24
图4各组3T3一LI脂肪细胞GLUT4蛋白的表达
(；士s，n一9)
Fig．4ProteinxpressionofGLUT4in3T3一L1
adipocytes(工士s，／I一9)
3．3小檗碱对3T3一L1脂肪细胞IRS一1Ser307磷
酸化的影响：采用Westernblotting检测3T3一L1
脂肪细胞磷酸化IRS一1蛋白的表达，结果显示：25
mmol／L葡萄糖加0．6nmol／L胰岛素作用18h可
以刺激1RS一1Ser307磷酸化，与正常对照组比较
差异非常显著(P<0．01)；同时加入小檗碱或
IKKp抑制剂阿司匹林则可以逆转PA的作用，使
IRS一1Ser307磷酸化明显减少，与模型组比较差异
显著(P<0．05)，并且IRS一1Ser307磷酸化程度
与小檗碱的剂量和作用时间呈依赖关系，见图5。
1．4
1．2
1．O
0．8
0．6
O．4
O．2
0
}
●● ●●
} 壬
’¨
：厂1．
N MBH48BL48As48BH24BL24As24
与模型组(M)比较：’P<0．05一P<0．01
’P<0．05’。P<0．01口jmodel(M)group
图5各组3T3一L1脂肪细胞IRS一1Ser307磷酸化
的表达(；土s，厅=9)
Fig．5ExpressionofIRS一1Ser307phosphoryIation
in3T3·L1adipocytes“±s，乃=9)
3．4小檗碱对3T3一L1脂肪细胞IKKpSer181磷
酸化和IKK8蛋白表达的影响：采用Western
blotting同时检测3T3一L1脂肪细胞磷酸化与非磷
酸化IKKt3蛋白的表达，结果显示：25mmol／L葡萄
糖加0．6nmol／L胰岛素作用18h可以显著刺激
IKKBSer181磷酸化，与正常对照组比较，差异非
常显著(P剂阿司匹林则可以逆转PA的作用，使IKKt3Ser
181磷酸化明显减少，与模型组比较，差异非常显著
(P剂量和作用时间呈依赖关系。但是，高糖、小檗碱、阿
司匹林对3T3一L1脂肪细胞非磷酸化IKKp蛋白的
表达并无影响(尸>O．05)，见图6。
缸1．2
墨1．0
{苦c 0．8
罢0．6
盆0．4
受0．2
置0
N MBH48BL48As48BH24BL24As24
与模型组(M)比较：一P<0．01
’。P<0．01wmodel(M)group
图6各组3T3一L1脂肪细胞IKK[3Ser181磷酸化
及IKK[3蛋白的表达(工±s，n=9)
Fig．6PhosphorylationofIKK[3Ser181andprotein
expressionofIKK[3in3T3一L1adipocytes
G+s，辟=9)
4讨论
小檗碱是从黄连等植物中提取的一种异喹啉类
生物碱，最初作为清热解毒药和抗炎药应用于临床。
最近研究表明小檗碱通过激活AMPK途径而增加
胰岛素敏感性，表明小檗碱具有改善胰岛素抵抗，降
低血糖，纠正脂质紊乱的作用[1~‘]。相关文献报道传
统的解热镇痛抗炎药水杨酸制剂通过抑制IKKp而
逆转肥胖和饮食诱导的胰岛素抵抗[1“儿]，IKK激酶
复合物属丝氨酸／苏氨酸(Ser／Thr)蛋白激酶超家
族成员，其主要功能是调节核因子(NF—KB)的转位
活化，其激活NF—KB的功能主要由IKKp介导[121。
近年来的研究显示，胰岛素信号转导过程中的多种
信号蛋白除受到酪氨酸磷酸化调节外，还受到Ser／
Thr磷酸化的调节，Ser／Thr蛋白激酶IKKp的活
化与胰岛素抵抗的发生密切相关，是治疗胰岛素抵
抗的重要分子靶点[1⋯。本研究探讨了小檗碱的抗炎
作用与改善胰岛素抵抗作用共同的分子靶点是否为
IKKt3。
本实验室前期采用小剂量链脲佐菌素尾iv加
高脂高糖饮料喂养方法建立Wistar大鼠胰岛素抵
抗模型，予以小檗碱干预治疗10周后，动物的空腹
血糖和胰岛素水平明显降低，葡萄糖耐量明显改善，
血清炎症因子IL一1p、IL一6、TNF—a，急相反应蛋白
(CRP)、黏附分子(ICAM一1、VCAM一1)明显降低，
同时脂肪、肌肉组织的InsRp亚基酪氨酸磷酸化蛋
白、IRS一1酪氨酸磷酸化蛋白、IRS一1蛋白、GLUT4
I厂●●●●●●，●●●●J．，“—●■■■I
●
LLlIl上扪引引姒‘．．．．．．。．．．上．，“■●■■■■，．o．。．，。．。上■■■■■■■I，，■■■■I

万方数据
·728· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月
蛋白表达及转位、PI一3K蛋白的表达均明显增高，证
明小檗碱同时具有抗炎、降低血糖、改善胰岛素抵抗
的作用[13~15]。本实验以25mmol／L葡萄糖加0．6
nmol／L胰岛素诱导3T3一L1脂肪细胞产生胰岛素
抵抗，予以小檗碱进行干预，同时以IKKp抑制剂阿
司匹林作为阳性对照，检测IKKl]及胰岛素信号转
导相关蛋白的表达。
本实验发现：25mmol／L葡萄糖加0．6nmol／L
胰岛素作用18h后使3T3一L1脂肪细胞胰岛素刺
激的葡萄糖转运抑制60％，若预先加入小檗碱或
IKKp抑制剂阿司匹林则可以逆转其作用，使葡萄
糖转运增加46％～65％。胰岛素刺激的葡萄糖转运
是衡量胰岛素敏感性、判断胰岛素抵抗的重要指标，
这说明25mmol／L葡萄糖加0．6nmol／L胰岛素作
用18h后3T3一L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗，而小
檗碱具有改善胰岛素抵抗的作用。
为了研究小檗碱改善高糖诱导的胰岛素抵抗的
作用机制，应用Westernblotting检测胰岛素信号
转导蛋白IRS一1，PI一3Kp85和GLUT4的表达，结
果发现：25mmol／L葡萄糖加0．6nmol／L胰岛素
作用18h可以明显抑制IRS一1和PI一3Kp85蛋白
的表达，同时加入小檗碱或IKKp抑制剂阿司匹林
则可以逆转其作用，使IRS一1和PI一3Kp85蛋白的
表达增加，但是无论加入高糖还是同时加入小檗碱
或阿司匹林对GLUT4蛋白的表达无明显影响。这
说明高糖诱导的胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制是
IRS一1和PI一3Kp85蛋白表达减少的结果，而与
GLUT4蛋白的表达无关，小檗碱通过提高IRS一1
和PI一3Kp85蛋白的表达改善胰岛素抵抗。
已有研究证实IRS一1Ser307磷酸化可导致
IRS一1蛋白表达减少，且IRS一1Ser307磷酸化发生
于IRS一1蛋白减少之前[1引，是胰岛素抵抗的重要分
子标志[17,18]。于是进一步检测了小檗碱对3T3一I。1
脂肪细胞IRS一1Ser307磷酸化的影响，结果发现：
25mmol／L葡萄糖加0．6nmol／L胰岛素作用18h
可以刺激IRS一1Ser307磷酸化，同时加入小檗碱
或IKKB抑制剂阿司匹林则可以逆转其作用，使
IRS一1Ser307磷酸化明显减少，这说明小檗碱通过
抑制高糖诱导的IRS一1Ser307磷酸化改善胰岛素
抵抗。
据报道，IRS一1Ser307能被Ser／Thr蛋白激酶
IKK或JNK磷酸化[19]，在哺乳动物细胞中，IKKp
Ser181磷酸化是IKKB活化的关键[20。。本实验还检
测了小檗碱对3T3一L1脂肪细胞IKKpSer181磷
酸化的影响，结果发现：25mmol／L葡萄糖加0．6
nmol／L胰岛素作用18h可以刺激IKKpSer181
磷酸化，同时加入小檗碱或IKK[3抑制剂阿司匹林
则可以逆转其作用，使IKKpSer181磷酸化明显减
少，这说明小檗碱通过抑制高糖诱导的IKK[3Ser
181磷酸化，使IRS一1丝氨酸残基磷酸化减少而酪
氨酸残基磷酸化增加，调节胰岛素信号蛋白的表达，
改善胰岛素抵抗。
本研究结果提示，胰岛素抵抗与慢性炎症有关，
IKKp是治疗胰岛素抵抗的重要靶点，小檗碱可能
通过IKKp途径实现其抗炎和改善胰岛素抵抗的双
重功效。如果小檗碱作为一种IKKt3的抑制剂应用
于临床，将为以胰岛素抵抗和慢性炎症为基本病理
生理学基础的非感染性慢性退行性疾病的治疗提供
崭新的思路。
参考文献：
EllLeeYS，KimWS，KimKH，eta1．Berberine，anatur l
plantproduct，activatesAMP—activatedpro inkinasewith
beneficialmetaboliceffectsindiabeticandinsulin—resistant
states[33．工habetes，2006，55l 2256—2264．
[2]YinJ，HuR，ChenM，甜a1．Effectsofberberineonglucose
metabolisminvitro．[J]．Metabolism，2002，51：1439—1443．
[3]LengSH，LuFE，XuLJ，甜a1．Therapeuticeffectsof
berberinein mpairedglucosetoleranceratsanditsinfluence
oninsulinsecretion[J]．ActaPharmacolSin，2004，25：
496—502．
[4]KoBS，ChoiSB，ParkSK，eta1．Insulinsensitizingand
insulinotropicactionofberberinefromCortidisrhizoma．[J]．
Biol尸harmBull，2005。28：1431—1437．
[5]LazarMA．Howobesitycausesdiabetes：notatalltale[J]．
Science，2005，307：373—375．
[6]SyedMA，Barinas—MitchellE。Pi tropaoloSL，eta1．Is
type2 diabetesachronicinflammatory／autoimmunedisease?
[J]．DiabetesNutrMetab，2002，15：68—83．
[7]NelsonBA，RobinsonKA，BuseMG．Highlucoseand
glucosamineinduceinsulinresistanceviadifferentm cha—
nismsin3T3一L1adipoeytes[J]．Diabetes，2000，49l981—
991．
[8]RomeroR，CasanovaB，PulidoN，矗a1．Stimulationof
glucosetransportbythyroidhormonein3T3一L1adipocytes：
increasedabundanceofGLUTlandGLUT4glucose
transporterproteins口]．Endocrinology，2000，164：187—
195．
[9]TakeuehiA，MishinaY，MiyaishiO，甜a1．Heterozygosity
withrespecttoZfpl48causescompletelossoffetalgerm
cellsduringmouseembryogenesis口]．NatGenet，2003，33：
172—176．
[10]YuanM， KonstantopoulosN，LeeJ， eta1． Reversalof
obesity—anddiet-inducedinsulinresistancewithsalicylatesor
targeteddisruptionIKKbeta[J]．Science，2001，293(5535)l
1673一1677．
[11]KimJK，KimYJ，FillmoreJJ，eta1．Preventionoffat—
inducedinsulinresistancebysalicylate[J]．a抽Invest，
2001，108(3)l437—446．
[1z]LiZW，ChuWM，HuYL，eta1．TheIKKfIsubunitofIgB
kinase(IKK)isessent alfornuclearf ctorgBactivationand
preventionofapoptosis[J]．ExpMed 1999，189l1893—

万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月·729·
1845．
E13]肖雁凌，陆付耳，徐丽君，等．黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠
血臂内皮功能的影响[J]．中国中药杂志，2005，30(22)：
1767—1770．
[14]叶爱丽，陆付耳，徐丽君，等．黄连解毒汤对胰岛素抵抗大
鼠骨骼肌IRS一1表达及酪氨酸磷酸化水平的影响[J]．中医
杂志，2005，46(9)：695—697．
[15]谭焱，陆付耳．徐丽君．等．黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠
血清炎性介质和标志物水平的影响[J]．中国医院药学杂志，
2005，25(12)l1 13-1115．
[16]ZhandeR，MitchellJJ，WuJ，eta1．Molecularmechanism
ofinsulin—induceddegradationofinsulinreceptorsubstrate1
[J]．MolCe lBiol，2002，22：1016-1026．
[17]
[18]
[19]
[203
LeeYH，GiraudJ，DavisRJ，eta1．C—JunN-terminal
kinase(JNK)mediatesfeedbacknhibitionoftheinsulin
signalingcascade[13．BiolChera，2003，278：2896—2902．
HirosumiJ，TuncmanG，ChangL．eta1．Acentralo efor
JNKinobesityandinsulinresistance[J]．Nature，2002，
420：333-336．
GaoZ，ZuberiA．QuonM，eta1．AspirinnhibitsTNF—
induceds rinephosphorylationofIRS一1throughtargeting
multipleserinekinases口]．BiolChem，2003，278l 24944．
24950．
DelhaseM．HayakawaM，ChenY，eta1．Positiveand
negativeregulationoflgBkinaseactivitythroughIKKB
subunitphosphorylation[J]．Science，1999，284：309—313．
芦荟大黄素抑制胃癌细胞生长与细胞周期阻滞的关系
肖丙秀1，郭俊明p，刘东海1’2，张顺1’2，刘琼，
(1．宁波大学医学院，浙江宁波315211；2．宁波大学医学院附属医院宁波市第----N院，浙江宁波315210)
摘要：目的探讨芦荟大黄紊抑制胃癌细胞生长与细胞周期阻滞的关系。方法人胃癌SGC一7901细胞用2．5、
5、10、20、40vmol／L芦荟大黄素处理1～5d。分别用MTT方法和流式细胞术检测细胞增殖情况和细胞周期的变
化，然后用Westernblotting方法检测细胞周期相关调控蛋白周期蛋白(cyclin)和周期蛋白依赖性激酶(cyclin—
dependentki ase，CDK)的变化。结果芦荟大黄素以剂量依赖方法抑制胃癌细胞的生长；芦荟大黄素引起细胞
阻滞在G2／M期；其分子机制为引起cyclinA和CDK2的表达水平下降、cyclinBl和CDKl的表达水平上升。结论
芦荟大黄素抑制胃癌细胞生长的机制之一是阻滞细胞周期，说明芦荟大黄素在胃癌治疗方面有潜在的临床价值。
关键词：芦荟大黄素；胃癌细胞SGC一7901；细胞周期
中图分类号：R286．91 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)05—0729—04
RelationshipbetweenantiprOliferatiOneffectsofaloe—emodinongrowth
ofgastriccancercellsandcellcyclearrest
XIAOBing—xiul，GUOJun-min91，LIUDong—hail“，ZHANGShunl“，LIUQion91
(1．SchoolofMedicine，NingboUniversity，Ningbo315211，China；2．NingboNo．2Hospital，AffiliatedHosp tal，
SchoolofMedicine，NingboUniversity，Ningbo315210，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetweentheantiDroliferationeffectsofaloe—
emodinongrowthofgastriccancercellsandeellcyclearrest．MethodsHumangastriccancerSGC一7901
cellsweretreatedwith2．5，5，10，20，and40／lmol／Laloe—emodinfor1—5d．Theeellgrowthwas
determinedbyMTTassay．Cellpro iferationandcycledistributionswereanalyzedbyflowcytometry．
Westernblottingassaywasusedtodetectthechangesofcellcycleregulators，cyclins，andyclin—
dependentki ases(CDK)．ResultsAlo —emodininhibitedthgrowthofgastriccancercellsinadose—
dependentma ner．Treatmentof loe—emodinresultedincellcyclearrestingatG2／Mphase．Itsmolecular
mechanismsinvolvedthedecreaseofthexpressionofcyclinAandCDK2。theincreaseofthexpression
ofcyclinB1andCDKl．ConclusionOneoftheantitumormechanismofaloe—emodinnthegrowthof
gastriccancerSGC一7901cellsi toarresttheellcycle，whichindicatesthataloe—emodinhasapotential
valueforthetreatmentofgastriccancerinclinic．
Keywords：aloe—emodin；gastriccancerSGC一7901cell；cellcycle
收稿日期：2007—09一12
基金项目：宁波市自然科学基金资助项目(2006A610047)f浙江省“151人才”工程培养项目(2003236)-宁波市高校名师培养项目
(2004771)
作者简介：肖丙秀(1965一)，女，江西兴国人．高级实验师，学士，主要从事肿瘤分子生物学研究。
Tel：(0574)87600759E—mail：xiaobingxiu@nbu．edu．an
*通讯作者郭俊明

万方数据
小檗碱抑制IKKβ Ser 181磷酸化改善高糖诱导的3T3-L1脂肪
细胞胰岛素抵抗的分子机制
作者： 易屏， 陆付耳， 陈广， 徐丽君， 王开富， YI Ping， LU Fu-er， CHEN Guang， XU
Li-jun， WANG Kai-fu
作者单位： 易屏,YI Ping(华中科技大学同济医学院附属同济医院中医科,湖北,武汉430030)， 陆付耳
,陈广,徐丽君,王开富,LU Fu-er,CHEN Guang,XU Li-jun,WANG Kai-fu(华中科技大学同济医
学院附属同济医院中西医结合研究所,湖北,武汉430030)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(5)
被引用次数： 2次

参考文献(20条)
1.Lee Y S;Kim W S;Kim K H Berberine,a natural plant product,activates AMP-activated protein kinase
with beneficial metabolic effects in diabetic and insulin-resistant states[外文期刊] 2006(8)
2.Yin J;Hu R;Chen M Effects of berberine on glucosemetabolism in vitro[外文期刊] 2002(11)
3.Leng S H;Lu F E;Xu L J Therapeutic effects ofberberine in impaired glucose tolerance rats and its
influence on insulin secretion[期刊论文]-Acta Pharmacologica Sinica 2004
4.Ko B S;Choi S B;Park S K Insulin sensitizing and insulinotropic action of berberine from Cortidis
rhizoma[外文期刊] 2005(8)
5.Lazar M A How obesity causes diabetes:not a tall tale[外文期刊] 2005(5708)
6.Syed M A;Barinas-Mitchell E;Pietropaolo S L Is type 2 diabetes a chronic inflammatory/autoimmune
disease? 2002
7.Nelson B A;Robinson K A;Buse M G High glucose and glucosamine induce insulin resistance via
different mechanisms in 3T3-L1 adipocytes[外文期刊] 2000(6)
8.Romero R;Casanova B;Pulido N Stimulation ofglucose transport by thyroid hormone in 3T3-L1
adipocytes:increased abundance of GLUTl and GLUT4 glucose transporter proteins[外文期刊] 2000(2)
9.Takeuchi A;Mishina Y;Miyaishi O Heterozygosity with respect to Zfp148 causes complete loss of
fetal germ cells during mouse embryogenesis[外文期刊] 2003(2)
10.Yuan M;Konstantopoulos N;Lee J Reversal of obesity-and diet-induced insulin resistance with
salicylates or targeted disruption IKKbeta[外文期刊] 2001(5535)
11.Kim J K;Kim Y J;Fillmore J J Prevention of fatinduced insulin resistance by salicylate 2001(03)
12.Li Z W;Chu W M;Hu Y L The IKKβsubunit of IκB kinase(IKK)is essential for nuclear factor κB
activation and prevention of apoptosis 1999
13.肖雁凌;陆付耳;徐丽君 黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠血管内皮功能的影响[期刊论文]-中国中药杂志 2005(22)
14.叶爱丽;陆付耳;徐丽君 黄连解毒汤对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌IRS-1表达及酪氨酸磷酸化水平的影响[期刊论文]-
中医杂志 2005(09)
15.谭焱;陆付耳;徐丽君 黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠血清炎性介质和标志物水平的影响[期刊论文]-中国医院药学
杂志 2005(12)
16.Zhande R;Mitchell J J;Wu J Molecular mechanism of insulin-induced degradation of insulin receptor
substrate 1 2002
17.Lee Y H;Giraud J;Davis R J C-Jun N-terminal kinase(JNK)mediates feedback inhibition of the
insulin signaling cascade 2003
18.Hirosumi J;Tuncman G;Chang L A central role forJNK in obesity and insulin resistance[外文期刊]
2002(6913)
19.Gao Z;Zuberi A;Quon M Aspirin inhibits TNFinduced serine phosphorylation of IRS-1 through
targeting multiple serine kinases[外文期刊] 2003
20.Delhase M;Hayakawa M;Chen Y Positive and negative regulation of IκB kinase activity through
IKKβ subunit phosphorylation[外文期刊] 1999(5412)

本文读者也读过(6条)
1. 易屏.陆付耳.陈广.徐丽君.王开富.YI Ping.LU Fu-er.CHEN Guang.XU Li-jun.WANG Kai-fu 小檗碱改善3T3-
L1脂肪细胞胰岛素抵抗的分子机制[期刊论文]-中华内分泌代谢杂志2007,23(4)
2. 易屏.陆付耳.陈广.徐丽君.董慧.王开富.Ping Yi.Fu-Er Lu.Guang Chen.Li-Jun Xu.Hui Dong.Kai-Fu Wang 小
檗碱对3T3-L1胰岛素抵抗细胞模型PI-3K p85蛋白表达的影响[期刊论文]-世界华人消化杂志2008,16(19)
3. 易屏.陆付耳.陈广.徐丽君.王开富.YI Ping.LU Fu-er.CHEN Guang.XU Li-jun.WANG Kai-fu 小檗碱抑制核因子
NF-кB p65的核转位改善高糖诱导的3T3-L1细胞胰岛素抵抗的分子机制[期刊论文]-中国医院药学杂志2008,28(12)
4. 易屏.陆付耳.陈广.徐丽君.董慧.王开富.YI Ping.LU Fu-Er.CHEN Guang.XU Li-Jun.DONG Hui.WANG Kai-Fu 高
糖磷酸化IKKβ Ser181诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的分子机制[期刊论文]-中国免疫学杂志2009,25(2)
5. 张艳萍.李继安.ZHANG Yanping.LI Jian 中药治疗2型糖尿病胰岛素抵抗的分子机制研究进展[期刊论文]-华北
煤炭医学院学报2011,13(4)
6. 包·照日格图.却翎.万春平.宋娜丽.唐志国.李翀 五味清浊散对3T3-L1细胞TNF-α浓度和基因表达的影响[期刊
论文]-中国民族医药杂志2008,14(9)

引证文献(2条)
1.罗映.金磊.何琦.周岐新.杨俊霞 小檗碱对兔血脂代谢及维生素D受体和胰岛素诱导基因2基因表达的影响[期刊论
文]-中草药 2011(8)
2.李井彬.陆付耳 中医药改善胰岛素抵抗及其分子机制的研究进展[期刊论文]-中西医结合研究 2011(1)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200805030.aspx