全 文 ：312　检测波长选择: 本实验在200～ 700 nm 进行波
长扫描, 经筛选后比较了样品在 256、286、320、342、
370 nm 的色谱图, 发现342 nm 处色谱峰信息丰富,
各峰分离情况良好, 各组分均有较大吸收, 最后确定
色谱分析波长为342 nm。
313　样品指纹图谱分析: 从各样品色谱图可以看
出, 15 个样品的色谱峰都有以 11 号峰为分界线, 呈
左侧峰密集右侧峰稀疏的分布特征。“宁杞É 号”样
品中, 河北样品有12 个共有峰 (缺少10、13、14、15 号
峰) ;“大麻叶”品种有 13 个共有峰 (缺少 4、8、13 号
峰) ;“宁杞Ê 号”品种有 14 个共有峰 (缺少 3、4 号
峰)。值得一提的是河北样品2 号色谱峰为所有样品
中最高, 并且40 m in 处出现了一个在其他样品中极
低或无的色谱峰, 可认为该色谱峰是河北样品特有
的特征峰。从芦丁和绿原酸色谱峰面积来看:“宁杞É 号”样品中宁夏固原黑城乡、宁夏中宁恩和乡、宁
夏银川南梁农场以及新疆样品中芦丁和绿原酸峰面
积均较高, 内蒙和河北与宁夏其他地区“宁杞É 号”
枸杞样品中芦丁和绿原酸峰面积相差不大;“大麻
叶”和“宁杞Ê 号”枸杞品种中芦丁和绿原酸峰面积
较低; 说明不同产地、不同品种枸杞黄酮类化合物指
纹图谱共有峰的相对保留时间基本一致, 相对峰面
积存在显著的差异。
314　枸杞样品相似度比较分析: 对相似度计算结果
(表2)分析可知, 样品余弦夹角和相关系数计算结果
基本一致。以10 个宁夏不同产地的“宁杞É 号”样品
建立的共有模式为对照指纹图谱, 与15 个样品进行
比较,“宁杞É 号”样品中, 宁夏不同产地的枸杞样品
间有较好的相关性, 但也存在差别, 宁夏中卫样品与
共有模式的相关性略低; 新疆样品与共有模式的相
关性较好; 内蒙样品和河北样品与共有模式相关性
较低。此外,“大麻叶”和“宁杞Ê 号”与“宁杞É 号”品
种间的相关性低。说明不同产地、不同品种间枸杞黄
酮类化合物的组成存在差异, 也表明不同的气候条
件和生长条件导致了相同品种在不同产地产生了化
学成分上的差异。
枸杞子具有多种药理作用, 所含有效成分很多,
仅从某一类成分来评价不同产地、不同品种枸杞的
质量不够全面。但所建立的的宁夏枸杞黄酮类化合
物H PL C 指纹图谱能为不同产地、不同品种枸杞的
鉴定提供一定的参考, 也为进一步研究宁夏枸杞的
道地性奠定了基础。
参考文献:
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[ 2 ]　谢培山1 中药制剂色谱指纹图谱鉴别 [J ]1 中成药, 2000, 22
(6) : 39123941
[ 3 ]　周玉新1 中药指纹图谱研究技术 [M ]1 北京: 化学工业出版
社, 20021
[ 4 ]　卢红梅, 梁逸曾1 枸杞的高效液相色谱指纹图谱 [J ]1 中南大
学学报: 自然科学版, 2005, 36 (2) : 24822521
[ 5 ]　黄元庆, 鲁建华, 沈　泳, 等1 枸杞总黄酮类化合物抗脂质过
氧化研究 [J ]1 卫生研究, 1999, 28 (2) : 11521161
[ 6 ]　张　颖, 张立睦, 周红英, 等1 不同产地枸杞子中黄酮含量的
测定 [J ]1 中国中医药科技, 2004, 11 (2) : 10221031
天山雪莲HPLC 指纹图谱研究
欧　元1, 2, 袁晓凡13 , 徐春明1, 2, 赵　兵1, 王晓东1, 王玉春1Ξ
(11 中国科学院过程工程研究所 生化工程国家重点实验室, 北京　100080; 21 中国科学院研究生院, 北京　100049)
摘　要: 目的　建立天山雪莲药材的H PL C 指纹图谱, 为雪莲药材的快速质量控制提供依据。方法　以绿原酸、紫
丁香苷、芦丁、木犀草素、芹菜素5 种对照品为对照, 采用H PL C 法, 测定了10 批次不同产地天山雪莲的色谱图, 确立
参照指纹图谱。色谱条件: 色谱柱D iamonsilTM C18 (250 mm ×4. 6 mm , 5 Λm ) , 甲醇2水 (0. 8% 醋酸, 0. 2% 三乙胺, pH
3. 5～ 4. 0)线性梯度洗脱, 柱温30 ℃, 检测波长270 nm , 记录时间30 m in, 体积流量1. 0 mL öm in。结果　标示出天山
雪莲的 13 个特征指纹峰。结论　该方法准确、重现性好, 为天山雪莲的指纹图谱质量控制提供了参考。
关键词: 天山雪莲; 指纹图谱; H PL C; 相似度
中图分类号: R 28217　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2008) 01 0105 04
·501·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2007204212
基金项目: 国家自然科学基金项目 (20506027) ; 中国科学院西部行动高新技术项目 (KGCX22SW 2506)
作者简介: 欧　元 (1982—) , 女, 河北石家庄市人, 硕士研究生, 主要研究方向为中药指纹图谱。3 通讯作者　袁晓凡　T el: (010) 62574372　E2m ail: yuanxf99@yahoo. com
HPLC F ingerpr in t of Saussu rea involucra ta
OU Yuan1, 2, YUAN X iao2fan1, XU Chun2m ing1, 2, ZHAO B ing1, W AN G X iao2dong1, W AN G Yu2chun1
(11 State Key L abo rato ry of B iochem ical Engineering, Inst itu te of P rocess Engineering, Ch inese A cadem y of Sciences,
Beijing 100080, Ch ina; 21 Graduate U niversity of Ch inese A cadem y of Sciences, Beijing 100049, Ch ina)
Abstract: Objective　To estab lish H PL C fingerp rin ts of S aussu rea involucra ta fo r the qu ick quality
con tro l1 M ethods　Ch lo rogen ic acid, syringin, ru t in, lu teo lin, and ap igen in w ere u sed as reference sub2
stances1 D iamon silTM C18 (250 mm ×4. 6 mm , 5 Λm ) co lum n w as u sed and the m ethano l2w ater (0. 8%
acet ic acid, 0. 2% triethylam ine, pH 3. 5—4. 0) w as cho sen as a mob ile phase1 T he co lum n temperatu re
w as 30 ℃ and the fingerp rin t w as detected at 270 nm 1 T he detect ion t im e w as 30 m in, and the flow rate
w as 1. 0 mL öm in1 T en batches of S 1 involucra ta samp les from variou s hab ita ts w ere an layzed to estab lish
a reference fingerp rin t1 Results　T h irteen characterist ic peak s w ere indica ted on H PL C fingerp rin ts1 Con-
clusion　T h is m ethod is simp le and accu ra te w ith a good rep roducib ility and p rovides a reference standard
fo r the quality con tro l of S 1 involucra ta1
Key words: S aussu rea involucra ta Kar1 et K ir; f ingerp rin ts; H PL C; sim ilarity
　　菊科植物天山雪莲S aussu rea involucra ta Kar1
et K ir, 又名新疆雪莲, 具有通经活血、暖宫散瘀、散
寒除湿和强筋助阳等多种功效, 主治雪盲、牙痛、风
湿及类风湿性关节炎、肾虚阳痿、麻疹不透、肺寒咳
嗽及某些妇科疾病。近年来作为民族药和民间药, 在
抗炎镇痛、抗早孕、抗衰老及抑制癌细胞增殖方面的
作用备受关注[1 ]。天山雪莲主要含有黄酮、生物碱、
内酯甾醇、多糖及挥发油等多种化学成分, 其中主要
的次生代谢物是黄酮及黄酮苷类[2 ]。目前国内关于
天山雪莲质量控制的研究还不够完善,《中国药典》
2005 年版中天山雪莲的质量控制仅限于绿原酸、芦
丁的薄层鉴别[3 ]; 薛秀峰[4 ]、苗爱东[5 ]等人分别用紫
丁香苷、芦丁为对照品, 对其指纹图谱进行了研究;
黄毅[6 ]用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对天山
雪莲不同部位的H PL C 色谱图进行相似度计算。本
实验采用R P2H PL C 法对天山雪莲指纹图谱进行了
研究, 同时标示出了绿原酸、紫丁香苷、芦丁、木犀草
素、芹菜素5 种主要有效成分的特征峰, 并利用中药
色谱指纹图谱相似度评价系统对 10 批次不同产地
的药材进行相似度计算。通过方法学考察, 可以在30
m in 内得出天山雪莲的特征性色谱指纹图谱, 为雪
莲建立快速、稳定、全面的质量控制方法提供科学
依据。
1　仪器与材料
111　仪器: 高效液相色谱仪 (W aters 2695) 配自动
进样器、四元泵、柱温箱、PDA 二极管阵列检测器
(W aters 2996)、Empow er 色谱工作站; TDL —5—A
型低速台式离心机 (上海安亭科学仪器厂) ; 超纯水
器 (美国M illipo re) ; KQ 5200DB 型数控超声清洗器
(中国玉环曙峰)。
112　材料: 甲醇、乙腈 (色谱纯, J&K Chem ical) ; 无
水甲醇、醋酸 (分析纯, 北京化工厂) ; 三乙胺 (分析
纯, 北京化学试剂公司) ; 水为超纯水; 芦丁、绿原酸
对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号 00802
200105、110752200312) ; 紫丁香苷 (安徽D EL TA 公
司, 质量分数> 98% ) ; 木犀草素、芹菜素 (Sigm a) ;
天山雪莲对照药材 (中国药品生物制品检定所, 批号
12120520101) ; 不同产地野生天山雪莲样品购于新
疆, 来源地见表 1, 均由中国科学院过程工程研究所
植物分类学博士王晓东副研究员鉴定。
2　方法与结果
211　色谱条件: 色谱柱: D iamon sil (TM ) 钻石 C18 柱
(250 mm ×4. 6 mm , 5 Λm ) (北京迪马公司) ; C 18保
护柱LBBM 2600220。流动相组成: A 甲醇2B 水 (添加
0. 8% 醋酸, 0. 2% 三乙胺, pH 3. 5～ 4. 0) ; 梯度条
件: 0～ 10～ 15～ 25～ 30 m in; V A ∶V B = 20∶80～
30∶70～ 60∶40～ 80∶20～ 80∶20, 二元梯度洗脱。
检测波长: 270 nm , 柱温: 30 ℃, 体积流量: 1. 0 mL ö
m in, 进样量: 20 ΛL , 记录时间: 30 m in。在此色谱条
件下, 绿原酸、紫丁香苷、芦丁、木犀草素、芹菜素 5
种对照品的保留时间分别为 10. 28、11. 66、18. 73、
22. 91、24. 78 m in。
212　雪莲药材提取方法的选择: 实验研究了天山雪
莲药材的最佳提取条件, 分别比较了室温浸提、加热
回流、索氏提取、超声提取 4 种方法, 以及不同提取
剂浓度、不同提取时间的提取效果, 最终确定以下最
优方法: 植物材料经烘箱50 ℃干燥后, 粉碎机粉碎,
过40 目筛精确称取粉末0. 1 g。密闭容器中经10 mL
·601· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
70% 甲醇超声提取 40 m in 后, 4 000 röm in 离心 10
m in, 过 0. 20 Λm 有机相针式滤器, 取续滤液进行色
谱分析。
213　色谱指纹峰的标定: 以参照物芦丁对应的色谱
峰的保留时间和峰面积为 1, 计算 10 批次样品其他
各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积。
214　方法学考察
21411　精密度试验: 精密称取同一棵野生天山雪莲
粉末0. 1 g, 按2. 2 项方法制备成供试品溶液, 连续进
样6 次, 进样量均为20 ΛL , 测定峰面积, 以芦丁峰为
对照, 计算出各共有峰的相对保留时间和峰面积比
值的R SD < 3%。结果表明本方法精密度好。
21412　稳定性试验: 精密称取野生天山雪莲粉末
011 g, 按 2. 2 项方法制备成供试品溶液, 在室温下
分别放置 0、1、4、8、12、24 h 后分析, 进样量均为 20ΛL , 测定峰面积, 以芦丁峰为对照, 计算出各共有峰
的相对保留时间和峰面积比值的R SD < 3%。结果表
明, 供试品溶液在24 h 内稳定。
21413 　重现性试验: 取同一批野生天山雪莲粉末 6
份, 按 2. 2 项方法制备成供试品溶液, 分别进样分
析, 进样量均为 20 ΛL , 测定峰面积, 以芦丁峰为对
照, 计算出各共有峰的相对保留时间和峰面积比值
的R SD < 3%。结果表明本方法重现性好。
215　不同批次天山雪莲指纹图谱相似度评价: 测定
了10 批次的天山雪莲样品, 色谱图见图1。应用“中
药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004A 版中国药
典委员会) , 将所得谱图进行色谱峰匹配。以10 批次
拟合图谱为对照图谱, 见图 2, 生成原理为中位矢量
法。以夹角余弦法计算图谱之间的相似度, 结果见表
1。计算结果在0. 9～ 1. 0, 符合“中药注射剂指纹图谱
试验研究的技术要求 (暂行)的通知 (2000)”。说明不
同产地雪莲药材的化学组成一致性较好, 质量较
稳定。
表 1　10 批次天山雪莲样品相似度结果 (n= 3)
Table 1　Sim ilar ity of ten batches of S1 involucra ta
samples (n= 3)
编号 来源 相似度 编号 来源 相似度
S1 阜康　　 0. 949 S6 药检所 0. 908
S2 巩留　　 0. 930 S7 巴里坤 0. 962
S3 哈密　　 0. 998 S8 奇台　 0. 956
S4 乌鲁木齐 0. 950 S9 和静　 0. 902
S5 焉耆　　 0. 901 S10 新源　 0. 922
3　讨论
311　检测波长的选择: 采用PDA 二级管阵列检测
图 1　10 批次天山雪莲HPLC 指纹图谱 (编号见表 1)
F ig. 1　HPLC F ingerpr in ts of ten batches of
S 1 involucra ta (No1 seen in Table 1)
52绿原酸　62紫丁香苷　92芦丁　122木犀草素　132芹菜素
52ch lo rogen ic acid　62syringin　92ru tin　122lu teo lin
132ap igen in
图 2　天山雪莲对照指纹图谱
F ig. 2　Reference f ingerpr in t of S1 involucra ta
器对检测波长进行了考察, 分别比较波长 220～ 400
nm 的色谱图, 结果在 270 nm 处各色谱峰均有较好
的紫外吸收, 色谱信息最为丰富, 并且5 种对照品在
此波长下都有最大吸收峰, 因此选择270 nm 作为检
测波长。
312　流动相的选择: 天山雪莲含有多种化学成分,
如黄酮、生物碱、内酯、甾醇、多糖等活性物质, 成分
较为复杂, 很难找到较理想的等度洗脱条件, 故采用
梯度洗脱。黄酮类成分含有多个酚羟基, 呈弱酸性,
故使用酸性缓冲系统[7 ]。实验中分别采用了乙腈2醋
酸、甲醇2醋酸等不同浓度、不同比例的流动相进行
梯度洗脱对比, 结果发现甲醇20. 8% 醋酸, 添加
0. 2% 三乙胺防拖尾剂, 在线性梯度下各组分得到较
好分离。另考虑到甲醇较乙腈毒性小且更经济, 故选
用甲醇作为流动相。
313　参照峰的选择: 芦丁为天山雪莲的主要有效成
分, 峰面积大, 出峰位置适中且稳定, 故选作参照峰。
314　从色谱图上比较, 虽各批次样品成分的量有差
异, 相对峰面积R SD 值差异较大, 但色谱图概貌一
致, 说明药材的成分种类和相对质量分数较一致。本
实验采用R P2H PL C 法对天山雪莲指纹图谱进行了
研究, 同时标示出了13 个共有峰中5 种主要有效成
分的色谱峰, 方法稳定、可靠、重现性好, 弥补了《中
·701·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
国药典》的不足, 可以对天山雪莲药材进行快速、全
面的质量评价。
参考文献:
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布及化学成分的研究进展 [J ]1 植物学通报, 1999, 16 (5) :
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中国药学杂志, 1998, 33 (8) : 44924521 [ 3 ]　中国药典 [S ]1 V o l1 É 1 20051[ 4 ]　薛秀峰, 张海茹, 潘丽娜, 等 1 雪莲及其注射液的指纹图谱研究 [J ]1 哈尔滨医科大学学报, 2005, 39 (1) : 722741[ 5 ]　苗爱东, 孙殿甲, 彭　燕, 等1 H PL C 法建立新疆雪莲指纹图谱研究 [J ]1 中成药, 2003, 25 (9) : 69126931[ 6 ]　黄　毅, 周　茜, 阎　明, 等1 天山雪莲不同部位总黄酮含量及高效液相指纹图谱分析 [J ]1 中药材, 2005, 28 (11) : 98029821[ 7 ]　赵明波, 邓秀兰, 王亚玲, 等1 红花RP2H PL C 指纹图谱的建立及其质量研究 [J ]1 药学学报, 2004, 39 (3) : 21222161
黄檗种子及果肉中抑制物质活性的研究
张秋菊1, 杨文娣2, 刘雪莲1, 杨晓翠1Ξ
(11 通化师范学院 生物系, 吉林 通化　134002; 21 通化师范学院 制药系, 吉林 通化　134002)
摘　要: 目的　探讨黄檗野生种群更新困难的原因, 为其种子的萌发机制研究提供参考依据。方法　采用甲醇、乙
醚、蒸馏水分别浸提黄檗果肉和种子, 以白菜、小麦和黄檗作为受试植物, 检测种子发芽及幼苗生长情况。结果　黄
檗果肉和种子的浸提液分别降低了白菜、小麦和黄檗种子的发芽率, 对幼苗生长也有不同程度的抑制作用。抑制作
用随浓度的增高而增强, 以乙醚提取液抑制作用最强, 水提液抑制作用不明显。将黄檗种子分离为胚、胚乳和子叶3
部分用蒸馏水提取, 生物测定发现子叶水提液的抑制活性最强。结论　黄檗果肉和种子中均存在着活性较强的抑
制物质, 能够明显抑制自身及其他植物的生长, 抑制物质主要存在于子叶中。
关键词: 黄檗; 种子; 果肉; 抑制活性
中图分类号: R 28212　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2008) 01 0108 04
Inh ib itory activ ity of substance in seed and sarcocarp of P hellodend ron am u rense
ZHAN G Q iu2ju1, YAN G W en2di2, L IU Xue2lian1, YAN G X iao2cu i1
(11 D epartm ent of B io logy, Tonghua N o rm al U niversity, Tonghua 134002, Ch ina; 21 D epartm ent
of Pharm acy, Tonghua N o rm al U niversity, Tonghua 134002, Ch ina)
Abstract: Objective　L ook ing in to the cau ses of self2regenera t ion ob stacle of the w ild P hellod end ron
am u rense popu la t ion in o rder to p rovide the reference fo r the su tdy of the germ inat ion m echan ism 1M ethods
T he germ inat ion and seedling grow th w ere ob served by tak ing cabbage, w heat, and P 1 am u rense as the
tested ob jects and the sarcocarp and seed of P 1 am u rense w ere ex tracted by alcoho l and ethyl ether1 Results
T he ex tract in sarcocarp and seed of P 1 am u rense cou ld decrease the germ inat ion ra te of cabbage, w heat,
and P 1 am u rense seed, a lso inh ib it the seedling grow th in differen t levels1 T he inh ib ito ry effect w as get2
t ing stronger and stronger fo llow ing the concen tra t ion increased1 T he ethyl ether ex tract show ed the best
inh ib ito ry effect, w h ile the w ater ex tract had no sign if ican t effect1 T he em b ryo, em do sperm , and co tyle2
don of P 1 am u rense w ere ex tracted by dist illed w ater, and among them the co tyledon had the st rongest in-
h ib it ion1 Conclusion　T here are som e sub stances w ith the bet ter inh ib ito ry effect in the sarcocarp and seed
of P 1 am u rense, w h ich can inh ib it the grow th of itself and o ther p lan ts sign if ican t ly1 T he sub stance w ith
the inh ib ito ry effect ex its m ain ly in co tyledon1
Key words: P hellod end ron am u rense R up r1; seed; sarcocarp; inh ib ito ry act ivity
　　黄檗P hellod end ron am u rense R up r1 系芸香科
落叶阔叶乔木, 别名黄波罗, 以去栓皮的树皮供药
用, 即为著名中药“黄柏”。黄檗含有多种生物碱, 是
提取黄连素的主要原料。黄檗主要分布于东北三省、
河北等地, 因其市场用量大, 价格上涨, 造成疯狂采
伐, 以致野生资源急剧枯竭, 目前已被列为国家三级
·801· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2007204210
基金项目: 吉林省教育厅项目资助 ( [ 2007 ]- 399)
作者简介: 张秋菊 (1968—) , 女, 吉林省通化市人, 副教授, 硕士, 主要从事植物生理及长白山药用植物驯化研究, 已发表科研论文15 篇,
出版教材1 部。　T el: 013944595515　E2m ail: zhangqiu ju5515@ 163. com