全 文 ：广陈皮 HPLC 指纹图谱的建立及在药材鉴定中的应用研究①
黄月纯, 魏　刚
(广州中医药大学第一附属医院, 广东 广州　510405)
摘　要: 目的　建立陈皮的H PL C 指纹图谱分析色谱条件, 并应用于市场陈皮的鉴定。方法　采用 Zo rbax E sclipe
XDB C18色谱柱; 流动相为甲醇22% 醋酸溶液, 梯度洗脱; 检测波长为 283 nm ; 柱温为 25 ℃; 体积流量为 110 mL ö
m in。以广东新会产广陈皮 (茶枝柑)指纹图谱为基础建立共有模式。结果　陈皮共标示出 7 个共有峰。以广陈皮共
有模式为对照, 13 批广陈皮相似度达 01996～ 11000, 而 13 批市场陈皮的相似度为 01964～ 01989。结论　方法准确
可靠, 重现性好, 以广陈皮共有模式可鉴定市场陈皮是否为广陈皮, 为广陈皮质量控制与鉴定提供了参考。
关键词: 广陈皮; 陈皮; 指纹图谱; H PL C
中图分类号: R 28217　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 02- 0275- 03
　　陈皮为芸香科植物橘 C itrus reticu la ta B lanco
及其栽培变种的干燥成熟果皮, 陈皮药材分为“广陈
皮”(茶枝柑)、“陈皮”[1 ]。陈皮主要含挥发油[2, 3 ]及以
橙皮苷为主的黄酮类成分等, 陈皮及含陈皮复方制
剂一般以橙皮苷作为质控指标[1 ] ,《中国药典》2005
年版一部通过外观性状对广陈皮与陈皮进行比较鉴
别。广东是陈皮主产区, 陈皮来源主要有茶枝柑、行
柑、甜柑、蕉柑、八月橘等[2 ] , 产量大, 销全国, 并供出
口, 其中广陈皮 (茶枝柑) 是陈皮道地药材, 质量最
优, 价格也最昂贵; 而四川、福建、浙江、江西等地的
大红袍、温州蜜柑、福橘等, 多自产自销。因此本研究
采用 H PL C 法拟建立广陈皮甲醇提取物的特征指
纹图谱, 为广陈皮药材的质量控制积累数据, 并探讨
广陈皮 H PL C 指纹图谱共有模式在市场陈皮中的
鉴别应用。
1　仪器与试药
A gilen t H P 1100 高效液相色谱仪, 光二极管阵
列检测器。甲醇为色谱纯, 其余试剂均为分析纯。13
批广东新会产正品广陈皮原药材分别购自广州市药
材公司等多家药材公司, 经广州中医药大学鉴定教
研 室 鉴 定 系 广 陈 皮 ( 茶 枝 柑 ) C 1 reticu la ta
‘Chach i’; 13 批其他市场陈皮商品购于广东多家药
材公司及药店, 系芸香科植物橘C 1 reticu la ta B lan2
co 及其栽培变种, 饮片多为多个柑橘类成熟果皮的
混合统货, 来源见表 1。
2　方法与结果
211　色谱条件: 色谱柱为 Zo rbax E sclipe XDB C 18
表 1　陈皮来源
Table 1　Sources of Per ica rp ium C itr i Reticu la tae
编号 供货单位 产地
A 1 广州市药材公司　　 广东新会
A 2 广州市药材公司　　 广东新会
A 3 广州市药材公司　　 广东新会
A 4 广州市药材公司　　 广东新会
A 5 广州市药材公司　　 广东新会
A 6 广东省药材公司　　 广东新会
A 7 广东省药材公司　　 广东新会
A 8 广州清平药材市场　 广东新会
A 9 广州清平药材市场　 广东新会
　A 10 广州清平药材市场　 广东新会
　A 11 广州清平药材市场　 广东新会
　A 12 广州杏林药业公司　 广东新会
　A 13 广州杏林药业公司　 广东新会
B1 广东杏林药业公司　 广东潮州
B2 广州市药材公司　　 广东广州
B3 广州致信中药饮片厂 广东　　
B4 广东康美中药饮片厂 广东　　
B5 增城市中药饮片厂　 广东　　
B6 花都东升中药饮片厂 广东　　
B7 广东康美中药饮片厂 广东　　
B8 广州药店 1 　　　　 广东　　
B9 广州药店 2 　　　　 广东　　
　B10 广州药店 3 　　　　 广东　　
　B11 广州药店 4 　　　　 广东　　
　B12 广州药店 5 　　　　 广东　　
　B13 广州药店 6 　　　　 广东　　
(250 mm ×416 mm , 5 Λm ) ; 流动相: 甲醇22% 醋酸,
梯度洗脱; 0～ 20 m in 甲醇由 20% 变为 40% , 20～
35 m in, 甲醇由 40% 变为 70% , 35～ 55 m in 甲醇由
70% 变为 100% , 55～ 60 m in 甲醇为 100% , 60～ 65
m in 甲醇由 100% 变为 20% ; 检测波长: 283 nm ; 柱
·572·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
① 收稿日期: 2007205215
基金项目: 广东省科技计划项目 (2005B33001038)
作者简介: 黄月纯 (1968- ) , 女, 广东省人, 副主任中药师, 硕士, 1991 年毕业于广州中医药大学中药专业, 现在广州中医药大学第一附属
医院工作, 主要从事中药质量标准及指纹图谱研究, 现承担广东省科技厅课题 2 项, 主要参与广东省科技厅课题 4 项, 在核心期
刊发表论文 20 余篇。　T el: (020) 36591724　E2m ail: huangyuechun@ 1631com
温: 25 ℃; 体积流量: 110 mL öm in。
212　供试品溶液的制备: 取陈皮粉末 015 g, 精密称
定, 精密加入甲醇 25 mL , 称质量, 超声处理 45 m in,
取出, 用甲醇补足减失的质量, 滤过, 取续滤液, 即得。
213　方法学考察
21311　精密度试验: 取供试品溶液 10 ΛL , 连续进
样 6 次。结果表明: 7 个共有峰的相对保留时间的
R SD 均小于 2% , 相对峰面积的R SD 均小于 3%。
21312　稳定性试验: 取供试品溶液 10 ΛL , 分别在 0、
4、8、12、24、48 h 进样 6 次。结果表明, 7 个共有峰的
相对保留时间的R SD 均小于 2% , 相对峰面积的R SD
均小于 3% , 提示 48 h 内供试品溶液稳定性较好。
21313　重现性试验: 取同一批样品粉末 6 份, 平行
操作, 制备供试品溶液, 进样测定, 结果表明 7 个共
有峰相对保留时间的R SD 均小于 2% , 相对峰面积
的R SD 均小于 3%。
214　样品检测: 取供试品溶液 10 ΛL , 依法检测, 结
果 26 批样品共标出 7 个共有峰, 广陈皮共有模式和
样品B 5 的H PL C 指纹图谱见图 1。
töm in
A 2广陈皮共有模式　B2市场陈皮样品 (B5)
A 2m utual pattern of C itrus R eticu la ta‘Chach i’
B2P ericarp ium C itri R eticu la tae (B5)
图 1　陈皮的 HPLC 指纹图谱
F ig11　HPLC F ingerpr in t of Per ica rp ium
C itr i Reticu la tae
215　指纹图谱的建立及分析
21511 　共有峰的确定: 26 批陈皮甲醇提取物
H PL C 色谱均主要有 7 个共有峰。13 批广陈皮共有
峰面积分别为 (1126±0122) %、(60106±2184) %、
( 0177 ± 0112 ) %、( 10182 ± 0180 ) %、( 0175 ±
0112) %、(9104+ 0158) %、(1162±0155) % , 总共有
峰面积在 8018%～ 8619% , 且各共有峰相对量较稳
定, 具有指纹图谱特征性, 可初步拟定为广陈皮甲醇
提取物指标成分群。13 批其他陈皮共有峰面积分别
为 ( 9195 ± 2163) %、( 71101 ± 6101) %、( 2152 ±
0132 ) %、 ( 2162 ± 3175 ) %、 ( 0192 + 0144 ) %、
(1136±1133) %、(1107±0139) % , 总共有峰面积在
8013%～ 9313% , 各共有峰相对量差异性较大, 但同
样具有指纹图谱特征性, 亦可初步作为陈皮甲醇提
取物指标成分群。经对照品对照, 2 号峰为橙皮苷
峰, 均为第一大峰。
21512　指纹峰相似度分析: 采用国家药典委员会中
药指纹图谱相似度软件 2004A 版计算均值相似度。
以 13 批广陈皮测定结果拟定广陈皮H PL C 指纹图
谱的共有模式, 并以此共有模式为对照计算各批陈
皮的相似度, 结果见表 2。表明广陈皮相似度高达
01996～ 11000, 其他陈皮样品相似度为 01964～
01989, 均小于 01990, 与广陈皮相比具特征性差异,
提示广陈皮 H PL C 指纹图谱共有模式鉴定商品陈
皮是否为广陈皮, 方法可行。
表 2　26 种样品指纹图谱相似度计算结果
Table 2　Sim ilar ity of HPLC f ingerpr in t for 26 samples
编号 相似度
A 1 01999
A 2 01999
A 3 01996
A 4 01999
A 5 01998
A 6 11000
A 7 01998
A 8 01998
A 9 01998
　A 10 01996
　A 11 01999
　A 12 01999
　A 13 01999 编号 相似度B1 01989B2 01984B3 01966B4 01965B5 01967B6 01964B7 01964B8 01985B9 01971　B10 01965　B11 01983　B12 01969　B13 01965
3　讨论
用甲醇2水、甲醇22% 醋酸、乙腈2水、乙腈22% 醋
酸的梯度洗脱作为流动相, 结果差异性不大, 水相用
酸水比水效果稍佳, 最后确定甲醇22% 醋酸梯度洗
脱作为流动相。用不同的检测波长检测及用光二极
管阵列检测器分析, 橙皮苷峰在 283 nm 波长处有
最大吸收, 在 283 nm 波长处指纹峰较多, 响应值均
较大, 而且基线较平稳, 故选择 283 nm 作为指纹图
谱检测波长。
供试品溶液的制备采用不同体积分数甲醇溶液
作为提取溶媒, 结果甲醇提取效果最好。比较不同的
提取方法, 结果超声处理方法简便, 提取完全; 比较
不同的超声处理时间, 超声处理 45 m in 可提取完
全, 故确定超声处理 45 m in。由于橙皮苷的溶解性
较差, 当供试品溶液浓度增加到一定程度时, 橙皮苷
的相对量减少, 造成测定结果的不准确; 而当供试品
溶液质量浓度太低, 一些小峰不能检测出来, 影响指
·672· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
纹图谱的意义。通过制备不同质量浓度的供试品溶
液进行分析比较, 结果供试品溶液小于 3% 生药量
范围内, 各共有峰的相对量较稳定, 故确定供试品溶
液的质量浓度为 2% 生药量。
按拟定的方法, 测定了 26 批广东产陈皮的甲醇
提取物, 共标出 7 个共有峰, 总共有峰峰面积的量在
80% 以上, 可初步拟订为陈皮的甲醇提取物成分指
标成分群, 同时表明广东多个来源的陈皮均具有相
类似的主要成分。13 批广陈皮均以 2、4、6 号峰为三
强峰, 7 个共有峰峰面积的相对量均较稳定, 相似度
高达 01996～ 11000, 是广陈皮的最大指纹图谱特 征。而 13 批其他品种陈皮, 各批次共有峰的相对量差异较大, 以 1、2、3 号峰所占比例相对增加, 4、6 号所占比例相对减少为主要特征; 以广陈皮共有模式为对照, 相似度为 01964～ 01989, 均小于 01990, 提示广陈皮 H PL C 指纹图谱共有模式鉴定商品陈皮是否为广陈皮, 方法可行。参考文献:[ 1 ]　中国药典 [S ]1 一部 1 20051[ 2 ]　王玫馨, 黄爱东, 郑　毅, 等 1 广陈皮化学成分的比较 (É 挥发油的成分研究) [J ]1 中药材, 1991, 14 (3) : 332361[ 3 ]　严寒静, 房志坚, 黄　宁 1 中药陈皮挥发油的成分分析 [J ]1广东药学, 2001, 11 (1) : 172181
近红外光谱鉴别高丽参的研究①
王钢力, 田金改, 聂黎行, 梁锡猛3 , 林瑞超
(中国药品生物制品检定所, 北京　100050)
摘　要: 目的　应用近红外光谱 (N IR S) 技术鉴别红参和高丽参。方法　收集中国红参、韩国高丽参及朝鲜高丽参
的样品, 采用近红外积分球漫反射法测定光谱图, 用判别分析法对其进行定性鉴别。结果　近红外光谱法可正确鉴
别中国红参和高丽红参。结论　该方法快速、准确, 可运用于高丽参药材的鉴别。
关键词: 红参; 高丽参; 近红外光谱 (N IR S) ; 判别分析
中图分类号: R 28217　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 02- 0277- 04
　　红参是传统名贵药材, 现市场上常见为中国红
参、高丽参 (朝鲜红参和韩国红参) , 历史上还有进口
日本红参, 但近年来未见进口。中国红参、高丽参均为
同种植物, 无本质区别, 给产品检验工作带来一定的
困难。韩国的高丽参由于其种植规范, 加工技术独特,
近年来深得消费者的喜爱, 成为冬令滋补的佳品。由
于价格昂贵, 已有中国的企业邀请韩国的专业技术人
员来到中国, 采用中国人参为原料, 按高丽参的加工
工艺生产合资品牌的产品, 如别直参、新开河参、东风
灵参等。此外国内不少人纷纷效仿韩国的加工技术,
采用国产人参蒸制, 喷以人参露及香精, 压制成将军
肩, 做成黄糙皮, 其外表与高丽参近似, 传统的人工经
验鉴别方法不能适应现代检测工作的需要。
在以往的工作中, 笔者也曾采用薄层色谱法、高
效液相2蒸发光散射、高效液相2质谱联用、气相色谱
等方法进行红参和高丽参的鉴别研究, 但均未能成
功。虽有报道采用H PL C 指纹图谱的方法对红参质
量进行评价[1 ] , 结果虽然也能区分开中国红参和高
丽参, 但该方法需要一系列的样品前处理过程, 而且
对于实验样本扩大后, 该方法的适应性也未做进一
步研究。近红外光谱技术就是一种近期发展起来的
新型分析技术。近红外光谱 (N IR S) 其波长范围为
0175～ 215 Λm (波数范围为13 330～ 4 000 cm - 1) ,
该谱区主要是含氢基团 (C—H , N —H , O —H ) 的倍
频与合频的吸收, 虽然信息量比紫外2可见光谱大,
但是吸收强度弱, 谱带宽, 重叠严重, 解析较难等, 随
着计算机和化学计量学的发展, 该谱区得以广泛的
运用。N IR S 吸收弱的特点也给分析带来了方便, 即
样品不需要稀释等预处理, 可直接进行分析; 而漫反
射技术可直接测定固体样品, 无须破坏样品及制样,
操作简便, 快速, 是一种理想的质量控制和质量保证
的方法[2 ]。本实验采集到 200 多份高丽参和红参样
品的近红外光谱图, 通过对它们的近红外图谱比较
研究, 以期能为准确鉴别高丽参和中国红参提供可
供借鉴的科学依据。
1　材料与方法
·772·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
① 收稿日期: 20072082123 桂林医学院 2007 级本科实习生