全 文 ：PCA 投影分析中 ,以数据所做的投影图基本没有达
到分类的效果 ,并且 PCA 投影图也未能全面体现出
决明子样本之间内在的联系。采用聚类分析方法 ,
结果表明决明子样品的确存在差异 ,但分类并不
明显。
参考文献 :
[ 1 ] 　中国药典 [ S]1 一部1 20051 [2 ] 　王清华 , 纪　玲 , 丛保忠1 高效液相色谱法测定决明子中大黄酚的含量 [J ]1 中医药学报 , 1996 , 20 (5) : 482491[3 ] 　冯晓冰1 决明子药材中大黄酚含量的反向 HPL C 法测定[J ]1 分析测试学报 , 1999 , 18 (4) : 801[4 ] 　裴妙荣 , 贾宏伟 , 王世民1 生、炒决明子蒽醌含量比较 [J ]1中国中药杂志 , 1990 , 15 (8) : 291[5 ] 　张启伟 , 阴　健 , 张 　俊 1 生、炒决明子及其煎剂中部分活性成分的比较 [J ]1 中草药 , 1996 , 27 (2) : 792811
不同产地巴戟天中糖类成分 HPLC2ELSD 指纹图谱研究
刘晓涵 ,陈永刚 ,林 　励 3 ,肖凤霞 ,刘 　征 ,赵红英
(广州中医药大学中药学院 ,广东 广州 　510006)
摘 　要 :目的 　建立巴戟天中糖类化学成分 HPLC 指纹图谱的分析方法 ,研究不同产地的巴戟天药材的质量。方
法 　采用 HPLC 法。色谱柱为 Inert sil N H2 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈2水梯度洗脱 ;柱温 :室温 ;体积
流量 :112 mL/ min ,以蒸发光散射检测器 ( EL SD)检测 ,检测条件 :漂移管温度 100 ℃;N2 气流速度 212 L/ min ; He
在线脱气 ,气流速度 20 mL/ min。使用计算机辅助相似度评价软件进行数据处理。对不同产地的巴戟天药材指纹
图谱的相似度进行比较分析。结果 　除两批外 ,其余 8 批巴戟天与系统生成对照指纹图谱的相似度均在 0194 以
上 ,归纳出巴戟天 13 个共有峰。通过与对照品的保留时间比较 ,1、2 号峰分别为 D2果糖、蔗糖。不同产地巴戟天
药材中糖类化合物化学组成相似 ,但相对比例有明显的差异。结论 　所用方法稳定、重现性好 ,可突出巴戟天药材
的内在质量特征 ,为更好地控制巴戟天的内在质量提供了科学依据。
关键词 :巴戟天 ;糖类成分 ;指纹图谱 ; HPLC2EL SD
中图分类号 :R28217 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 1021641203
HPLC2ELSD Fingerprint of carbohydrate constituents in Morinda of f icinalis
from different habitats
L IU Xiao2han , CH EN Yong2gang , L IN Li , XIAO Feng2xia , L IU Zheng , ZHAO Hong2ying
(College of Chinese Materia Medica , Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine , Guangzhou 510006 , China)
Abstract : Objective 　To establish HPL C fingerp rint analysis met hod of carbohydrate constit uent s in
M ori n da of f ici nal is collected f rom different habitat s1 Methods 　HPL C Method was employed and a
Columns Inert sil N H2 (250 mm ×416 mm , 5μm) wit h acetonit rile2water as mobile p hase by gradient elu2
tion was used , t he flow rate was 112 mL/ min , column temperat ure was room temperature1 Detector was
EL SD and t he temperat ure of drif t t ube was 100 ℃1 The flow rate of N2 was 212 L/ min , Helium degasifi2
cation on2line with flow rate was 20 mL/ min1 The fingerp rint s evaluating software by comp uter2assisted
for the similarity was used to process the experiment data and compare t he similarity of HPL C fingerp rint
of M1 of f ici nal is f rom different habitat s1 Results 　Except for two batches , t he fingerp rint similarity value
of ot her eight batches of herbs was above 0194 compared wit h system generation spect rum and 13 common
characteristic peaks were demonst rated1 The first and second peaks were D2f ructose and sucro se , respec2
tively compared wit h t he retention time of standard sample1 The result s showed that t he carbohydrate con2
stit utes of M1 of f ici nal is were similar among herbs f rom different habitat s , but their relative ratio s are
significantly different1 Conclusion 　The met hod in this experiment is stable and rep roducible , which could
·1461·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 10 期 2009 年 10 月
3 收稿日期 :2008212212　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :刘晓涵 (1982 —) ,女 ,湖南省永州市人 ,广州中医药大学博士生 ,研究方向为中药资源开发利用与新药研究。　
Tel : (020) 39356148 　E2mail :liuxia98 @1631com3 通讯作者　林　励　Tel : (020) 39358270 　E2mail :lwyll @gzhtcm1edu1cn
distinguish the internal quality and provide t he reference for quality cont rol of M1 of f ici nal is1
Key words : M ori n da of f ici nal is How ; carbohydrate constit uent s ; fingerp rint ; HPL C2EL SD
　　巴戟天为茜草科植物巴戟天 M ori n da of f ici2
nal is How 的干燥肉质根。味甘、辛 ,性微温 ,有补
肾阳、强筋骨、祛风湿之功效。主要分布在福建、广
东、广西、海南等省的热带和亚热带地区 ,是我国著
名的“四大南药”之一 ,也是出口创汇的名贵药材。
主要含有糖类、氨基酸、脂类、蒽醌、有机酸等化合物
及无机元素[1 ,2 ] 。巴戟寡糖成分具有补肾壮阳作
用[ 3 ] ,并能提高细胞免疫功能[4 ] ,为巴戟天主要有效
成分之一。巴戟天一直在广东、福建等地大面积引
种 ,为考察不同产地巴戟天药材质量 ,笔者对其糖类
进行了指纹图谱分析。
1 　材料、仪器与试剂
Waters 600 高 效 液 相 色 谱 仪 ( Alltech
EL SD2000 检测器) ,Dikma N H2 色谱柱 (250 mm ×
416 mm ,5μm) , Millennium 32 工作站 ; 8953 Die2
tikon 型电子分析天平 (瑞士) ;AS2060B 型超声仪。
D2果糖生化试剂 (BR ,批号 : F20050414 ,国药
集团化学试剂有限公司) 、蔗糖 (分析纯 , 批号 :
20060717 ,广东光华化学厂有限公司) ,水为自制重
蒸水 ,乙腈 (色谱纯 ,Dikma 公司) 。巴戟天样品共
10 批 ,2008 年 7 月采自不同产地 ,来源见表 1。经
广州中医药大学中药学院林励研究员鉴定为巴戟天
M1 of f ici nalis How 的根。以上凭证标本存于广
州中医药大学中药学院实验中心。
表 1 　巴戟天药材来源
Table 1 　Source of M1 of f icinalis
样品号 产　地 采集日期
1 广西　　 2008208205
2 福建和溪 2008208225
3 广东德庆 2008209210
4 广东高要 2008209208
5 广东郁南 2008209210
6 广东广宁 2008209209
7 福建和溪 2008208225
8 广东高要 2008209208
9 福建龙岩 2008208227
10 福建龙岩 2008208227
2 　方法与结果
211 　色谱条件 : Inert sil N H2 色谱柱 (250 mm ×
416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈 ( A)2水 (B) ;梯度洗
脱 : 0 ～ 15 min , 86 % A ～ 81 % A ; 15 ～ 20 min ,
81 %A～75 %A ;20～35 min ,75 %A～70 %A ;35～
50 min ,70 %A～58 %A ;50～60 min ,58 %A～40 %
A ;60～65 min ,40 %A～20 %A ;柱温 :室温 ;体积流
量 :112 mL/ min ;漂移管温度 :100 ℃; N2 气流速度
212 L/ min ; He 在线脱气 ,气流速度 20 mL/ min。
212 　对照品溶液制备 :精密取果糖、蔗糖对照品适
量 ,加 50 %乙醇制成 1 mg/ mL 的溶液 ,作为对照品
溶液。
213 　供试品溶液制备 :取巴戟天药材 (60 ℃干燥)粉
碎成细粉 ,过 60 目筛。精密称取粉末 2 g ,置圆底烧
瓶中 ,以蒸馏水 20 mL 加热提取 2 次 ,每次 1 h (经方
法学考察已基本将糖类化学成分提取干净) ,取出提
取液 ,滤过 ,合并两次滤液 ,用氯仿萃取 3 次 ,每次 20
mL ,弃去氯仿层 ,水层定容至 25 mL 量瓶中 ,摇匀 ,
0145μm 微孔滤膜滤过 ,滤液作供试品溶液。
214 　精密度试验 :取同一份供试品溶液 ,重复进样
5 次 ,用相似度计算 ,所测得的指纹图谱与其所得共
有模式图谱的相似度分别为 01 992 7、01993 2、
01987 2、01996 8、01995 8 ,均大于 0195 ,其共有峰
的保留时间的 RSD 和峰面积的 RSD 均小于 115 % ,
符合指纹图谱技术的要求[5 ] 。
215 　重现性试验 :精密称取 5 份同一批药材粉末 ,
制得 5 份供试品溶液 ,同法进行检测。5 份供试品
溶液所测色谱指纹图谱直观观察 ,显示指纹图谱的
全貌无明显变化 ;用相似度计算 ,测得的指纹图谱与
其所得共有模式图谱的相似度分别为 01988 4、
01983 3、01991 5、01996 9、01987 5 ,均大于 0195 ,
并考察保留时间和峰面积的一致性 ,各色谱峰峰面
积的 RSD 在 018 %～116 % ,保留时间的 RSD 在
111 %～216 % ,符合指纹图谱的技术要求。
216 　稳定性试验 :取同一份供试品溶液 ,于 0、1、2、4、
8、16、24 h 进样检测 ,直观观察指纹图谱的全貌无明
显变化 ,用相似度计算 ,测得的指纹图谱与其所得共
有模式图谱的相似度分别为 01990 2、01991 1、
01987 6、01994 9、01985 0 ,均大于 0195 ,并考察保留
时间和峰面积的一致性 ,各色谱峰峰面积 RSD 和保
留时间 RSD 均小于 118 % ,表明供试品溶液稳定。
217 　样品测定 :分别吸取上述供试品溶液各 20
μL ,注入液相色谱仪 ,测定 ,记录色谱图。采用“中
药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A 版 (药典委
员会) ”软件对各样品色谱图的原始数据文件进行分
析 ,以 10 批样品生成的对照图谱 (中位数法)作为对
照模版 ,计算各色谱图的整体相似度 ,结果见表 2。
·2461· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 10 期 2009 年 10 月
表 2 　与共有模式比较的巴戟天样品的相似度
Table 2 　Similarity of M1 of f icinalis compared
with common patterns
样品号
指纹图谱相似度 (以对照
谱图为模版 ,中位数法)
样品号
指纹图谱相似度 (以对照
谱图为模版 ,中位数法)
1 01474 0 6 01 983 0
2 01980 0 7 01 986 6
3 01958 0 8 01 853 0
4 01970 0 9 01 985 0
5 01945 0 10 01 962 3
218 　指纹图谱的建立和辨认 :对样品的供试品溶液
进行 H PL C2EL SD 检测 , 得到不同批次巴戟天
H PL C 色谱图 (图 1) 。对巴戟天 H PL C 色谱图进行
解析 ,确定有 13 个共有峰 ,构建了巴戟天药材的
H PL C 色谱图的指纹特征 ,作为巴戟天鉴别的依据
(图 2) 。取 D2果糖、蔗糖对照品混合液 20μL 进样
测定 ,比较相应色谱峰的保留时间和峰面积的变化 ,
确定指纹色谱图中的 1 号峰为果糖 ,2 号峰为蔗糖
(图 3) 。
3 　讨论
本实验对供试品溶液的制备、色谱条件进行了
优化选择 ,对不同提取溶剂、提取方法所得指纹图谱
进行反复考察 ,结果选择水为提取溶剂 ,采用回流提
取法进行提取 ,所得到的信息量最多 ,所包含的小极
t/ min
图 3 　D2果糖与蔗糖对照品 HPLC色谱图
Fig13 　HPLC Chromatogram of D2fructose and sucrose
性杂质最少 ;选择乙腈2水为流动相 ,能较好地使样
品中各色谱峰分离且出峰最多 ;对漂移管温度进行
考察 ,优选的最佳温度为 100 ℃;对 N2 气流速度进
行考察 ,优选的最佳气流速度为 212 L/ min ;分别选
择 Dikma 公司、Mecherey2nagel 的氨基柱 , Grace 的
C18分析柱进样分析 ,结果表明 ,Dikma 公司的氨基
柱效果较好。
　　由表 1 可见 ,其中 8 批巴戟天药材的相似度在
0194 以上 ,这可能与这些产地的生态环境相似以及
种质资源相近有关 ;但有 1 批为01853 0 ;而广西产
巴戟天与对照指纹图谱的相似度在 015 以下 ,这或
许与其加工、采收季节、贮存时间和方式有关。其差
异的产生是否缘于产地关系 ,是否导致药效和质量
差异 ,均有待进一步研究。
　　图 1 显示 ,不同产地巴戟天成分组成基本一致 ,
且均以果糖和蔗糖为主要的色谱峰 ,但各成分的量
有一定的差异。果糖质量分数在所分析的药材中均
较高 ,但在不同来源的药材中差异很大。其中以广
西产巴戟天果糖质量分数最高 ,广东高要产者果糖
最低 ;从指纹图谱相似度来看 ,也正是这两者与其余
8 批药材出现了显著差异。运用 H PL C2EL SD 法制
作巴戟天药材指纹图谱 ,可直观比较不同产地巴戟
天药材的差别 ,有助于揭示巴戟天药材的内在质量
特征。
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·3461·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 10 期 2009 年 10 月