全 文 ：浙江产温郁金挥发油的 HPLC指纹图谱研究
刘 　敏1 ,楚生辉1 ,崔 　友2 ,李校堃1 3
(11 温州医学院 ,浙江 温州 　325035 ;21 浙江天瑞药业有限公司 ,浙江 瑞安 　325200)
摘 　要 :目的 　利用高效液相色谱建立温郁金挥发油的指纹图谱。方法 　采用 Shimadzu VP2ODS C18色谱柱 (250
mm ×416 mm ,5μm) ,以乙腈2011 磷酸溶液梯度洗脱 ,体积流量为 110 mL/ min ,柱温 30 ℃,检测波长 210 nm。结
果 　以牻牛儿酮对照 ,通过对 19 批浙江不同产地温郁金样品测定 ,标定了 14 个共有峰 ,并通过“中药色谱指纹图
谱相似度评价系统软件”和聚类分析等辅助手段 ,计算相似度等有关参数。结论 　该方法准确可靠 ,重现性好 ,为
更好的控制温郁金内在质量提供了科学依据。
关键词 :温郁金挥发油 ;指纹图谱 ;牻牛儿酮 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286106 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2009) 06 0883 03
HPLC Fingerprints of volatile oil of Curcuma wenyu j in in Zhejiang Province
L IU Min1 , CHU Sheng2hui1 , CU I You2 , L I Xiao2kun1
(11 Wenzhou Medical College , Wenzhou 325035 , China ; 21 Zhejiang Tianrui Pharmaceutical Co. , Ltd. , Ruian 325200 , China)
Abstract : Objective 　To establish t he chromatograp hic fingerp rint of Curcum a w eny uj i n by HPL C1
Methods 　The chromatograp hic fingerp rint of C1 w eny uj i n was established by H PL C wit h Shimadzu V P2
ODS C18 column (250 mm ×416 mm ,5μm) , acetonit rile2water (011 p hosp horic acid) gradient elution , t he
flow rate of 110 mL/ min , column temperat ures of 30 ℃, and detective wavelengt h at 210 nm1 Results
Taking germacrone as t he reference peak , 14 common2peaks were selected as t he fingerp rint peaks1 The
similarities among samples of C1 w eny u j i n among 19 approved samples and t heir standard chromatograp hic
fingerp rint s were calculated with a software“S i mi l ari t y Ev al uation S ystem f or Chrom atog ra p hic Fi nger2
p ri nt of Chi nese M ateri a Medica”p ublished by GPC ( Version 2004A) and cluster analysis1 Conclusion
This method wit h bet ter accuracy and rep roducibility could be used in t he quality cont rol of C1 w eny uj i n1
Key words : volatile oil of Curcum a w eny uj i n Y1 H1 Chen et C1 Ling ; fingerp rint ; germacrone ;
H PL C
　　温郁金为“浙八味”之一 ,是姜科植物温郁金
Curcum a w eny uj i n Y1 H1 Chen et C1 Ling 的根
茎 ,有行气破血 ,消肿止痛之功。以产于浙江温州地
区质量最优 ,故温州为其历史道地产区。主要用于
瘀血经闭、食积胀痛、早期宫颈癌。由于其具有消
炎、止痛、活血化瘀、去腐生肌、增强机体免疫力、抗
病毒、抗癌等良好的药理作用 ,被广泛应用于临床。
现代研究表明 ,莪术的主要成分为挥发油 ,油中含有
成分为牻牛儿酮、莪术二酮、莪术醇等。本实验采用
H PL C 指纹图谱法和 SPSS 聚类分析法 ,结合牻牛
儿酮的测定 ,对浙江不同产地 19 个样品采用进行聚
类 ,为全面有效地评价温郁金挥发油的质量控制提
供研究依据。
1 　仪器与试药
　　日本岛津 Shimadzu L C —10A Tvp 液相色谱仪 ,
二级阵列检测器 ,1100 色谱工作站。乙腈 ,磷酸均
为色谱纯 ,水为纯净水。
　　9 批样品来自浙江温州温郁金 GA P 基地 ,其余
10 批分别来自浙江乐清、新江、马屿、金华、年和、仙
隆、荆谷。样品均由中国药品生物制品检定所中药
标本馆徐纪民鉴定为姜科植物温郁金 C1 w eny uj i n
Y1 H1 Chen et C1Ling 的干燥根茎 ,药材来源见表 1。
2 　方法和结果
211 　色谱条件 :Shimadzu V P2ODS C18色谱柱 (250
·388·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3 收稿日期 :2008208203　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :浙江省科技攻关重大项目 (2005C13019) ;瑞安市重大科技资助项目 (20052005) ;温州市科技计划资助项目 (S2005B001)
作者简介 :刘　敏 (1978 —) ,女 ,陕西咸阳人 ,助理研究员 ,硕士研究生 ,研究方向 :温莪术规范化种植与新药开发研究。
Tel : (0577) 86699350 　E2mail : liumin2008 @21cn1com3 通讯作者　李校堃
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表 1 　温郁金药材产地和批号
Table 1 　Source and lot numbers of C1 wenyuj in
样品 来源 批号 样品 来源 批号
s1 浙江乐清 051223 s11 浙江温州陶山 050608
s2 浙江乐清 051225 s12 浙江温州陶山 051228
s3 浙江新江 051228 s13 浙江温州陶山 060602
s4 浙江马屿 051115 s14 浙江温州陶山 061225
s5 浙江马屿 051135 s15 浙江温州陶山 061115
s6 浙江金华 051205 s16 浙江温州陶山 060125
s7 浙江年和 051215 s17 浙江温州陶山 050225
s8 浙江仙降 051225 s18 浙江温州陶山 050125
s9 浙江仙降 060104 s19 浙江温州陶山 061205
s10 浙江荆谷 060114
mm ×416 mm ,5μm) ;以乙腈2011 磷酸溶液为流动
相 ,洗脱梯度 : 0～20 min ,60 %乙腈 ,20～30 min ,
75 %乙腈 , 30～ 40 min , 80 %乙腈 , 40 min 以后 ,
90 %乙腈 ;体积流量为 110 mL/ min ;柱温 30 ℃;检
测波长 210 nm。
212 　对照品溶液的制备 :取牻牛儿酮对照品 10
mg ,精密称定 ,置 10 mL 量瓶中 ,用乙腈溶解 ,并稀
释至刻度 ,摇匀。精密量取 2 mL ,置 10 mL 量瓶
中 ,用乙腈稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品溶液。
213 　供试品溶液的制备 :取温郁金药材细粉 (过四号
筛) 5 份 ,约 20 g ,精密称定 ,置 1 000 mL 圆底烧瓶中 ,
加水 400 mL ,混匀 ,照挥发油测定法 (《中国药典》
2005 年版一部附录ⅩD) 测定 ,自测定器上端加水使
充满刻度部分 ,并溢入烧瓶中为止 ,再加醋酸乙酯 3
mL ,加热至沸腾 ,并保持微沸 4 h ,冷却 ,分取醋酸乙
酯层 ,测定器用醋酸乙酯洗涤 5 次 ,每次 5 mL ,合并
醋酸乙酯液 ,通过铺有醋酸乙酯的漏斗 ,转移至 50
mL 量瓶中 ,用少量醋酸乙酯洗涤漏斗 ,洗液并入同一
量瓶中 ,加醋酸乙酯至刻度 ,摇匀。精密量取 5 mL 置
50 mL 量瓶中 ,加乙腈稀释并至刻度 ,摇匀 ,即得。
214 　方法学考察
21411 　测定方法 :精密吸取对照品溶液和供试品溶
液各 10μL ,注入高效液相色谱仪 ,进行分析 ,测定 ,以
牻牛儿酮为对照 ,计算相对保留时间和相对峰面积。
21412 　分析时间考察 :吸取供试品溶液 10μL ,注入高
效液相色谱仪 ,运行 120 min ,记录色谱图 ,发现 60 min
以后已无明显色谱峰 ,因此分析时间定为 60 min。
21413 　空白试验 :为考察流动相中是否有杂质干扰
样品分析 ,故先用流动相走空白梯度 ,试验结果表明
流动相中几乎没有杂质干扰样品分析。
21414 　稳定性试验 :取同一供试品溶液 ,制备供试
品溶液 ,分别在 0、2、6、12、24 h 检测指纹图。结果
表明各色谱峰的相对保留时间和单峰面积 ≥5 %总
峰面积的色谱峰的比值基本没有明显变化 , RSD <
3 % ,说明至少在 24 h 稳定。
21415 　精密度试验 :取同一份供试品溶液 ,连续进
样 5 次 ,结果表明各色谱峰的相对保留时间和单峰
峰面积 ≥5 %总峰面积的色谱峰的比值基本一致 ,
RSD < 2。
21416 　重复性试验 :取同一批供试品溶液 6 份 ,同法检
测 ,结果表明各色谱峰的相对保留时间的 RSD <2 %。
215 　指纹图谱相似性评价 :将 19 批样品进样分析 ,
记录色谱图 ,确定了 14 个特征峰构成温郁金挥发油
的指纹图谱 ,其中 8 # 为牻牛儿酮。对照指纹图谱
中各色谱的保留时间 (峰面积 ) 分别为 : 91114、
91769、101093 (1～3 ∶195) 、111348 (293) 、121453 (2
612) 、161944 (93) 、171898 (549) 、221053 (4 260) 、
341047 (583) 、341678 (9 225) 、471267 (810) 、491359
(1 308) 、501294 (432) 、511955 (147) 。保留时间按
tR 为 221097 min 的 8 # 峰牻牛儿酮为参照物峰 ,以
其保留时间和峰面积为 1 ,计算各峰的相对保留时
间和峰面积比值。色谱图见图 1。
图 1 　19 批温郁金挥发油的 HPLC指纹图谱
Fig11 　Fingerprints of volatile oils from 19 batches of C1 wenyuj in
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21511 　聚类分析 :应用 SPSS 统计软件 ,以皮尔逊
相关系数 ( Person correlation) 为间隔尺度 ,进行 19
批样品的系统聚类分析 ,结果见图 2 。将各类之间
的距离标定为 1～25 ,可以看出 :9 批道地温郁金先
与浙江马屿、年和、荆谷产地聚为一类 ,再与浙江乐
清、仙降产地聚为一大类 ,浙江金华被单独聚为一
类 ,说明金华产温郁金挥发油的指纹图谱与其他样
品存在着较大差别 ,因此将其排除。
图 2 　19 批温郁金挥发油聚类分析的结果
(以相对峰面积聚类)
Fig12 　Cluster analysis of volatile oils from 19 batches
of C1 wenyuj in ( cluster with relative peak area)
21512 　共有模式的建立及相似度分析 :依据聚类分
析的结果 ,将其中 10 批药材进行色谱分析 ,采用药
典委员会颁发的“中药色谱指纹图谱相似度评价系
统 2004 版”软件 ,进行色谱峰自动匹配 ,以中位数法
建立对照指纹谱图即共有模式 ,见图 3。各样品与
共有模式之间的相似度在 0195 以上 ,相似度计算结
果见表 2。可知 9 批道地温郁金挥发油相似度极
高 ,可以建立道地温郁金挥发油指纹图谱。
图 3 　温郁金挥发油共有模式指纹图谱
Fig13 　Fingerprints of common peaks
in samples C1 wenyuj in
3 　讨论
　　采用药典方法 CN 基柱等度洗脱系统 ,各色谱
表 2 　相似度计算结果
Table 2 　Similarity of ten batches of C1 wenyuj in
样品 相似度 样品 相似度
S3 01997 S13 01986
S9 01973 S14 01997
S5 01999 S18 01984
S8 01994 S16 01997
S11 01988 S19 01999
峰不能较好分离。本实验比较了 Shimadzu VP2ODS C18
(250 mm ×416 mm ,5μm) 与 Waters Xterra RP18
(250 mm ×416 mm , 5 μm) 、Waters SunFire C18
(250 mm ×416 mm ,5μm) 、Agilent Zobax SB2C18
(250 mm ×416 mm , 5 μm) 、Shiseido CA PCELL
PA K C18 (250 mm ×416 mm ,5μm) 、Inert sil ODS22
(250 mm ×416 mm , 5 μm) 、Phenomenex Gemini
C18 (250 mm ×416 mm ,5 μm) 、Waters symmetry
C18 (250 mm ×416 mm ,5μm)的分离效果。结果表
明 Waters SunFire C18 (250 mm ×416 mm ,5μm)与
Phenomenex Gemini C18 (250 mm ×416 mm ,5μm)
分离结果较差 ,第 3、4 号大峰重叠为一个峰 ;而 Wa2
ters Xterra RP18 色谱柱保留较小 ,其他剩余的色谱
柱所得的色谱图较为相似 ,但第 3、4 号大峰分离度
不及 Shimadzu V P2ODS C18 色谱柱的分离效果好。
所以本实验采用 Shimadzu V P2ODS C18色谱柱。
　　本实验比较了供试品以甲醇2水、乙腈2水、甲醇2
磷酸溶液、乙腈2磷酸溶液梯度洗脱系统为流动相分
离样品效果 ,结果发现样品以乙腈2磷酸溶液梯度洗
脱结果较好。
　　通过莪术药材指纹图谱特征峰的制定 ,能有效
地控制温莪术的质量 ,为该药材的质量标准的制定
及规范化种植质量控制提供科学依据与参考。
参考文献 :
[ 1 ] 　中国药典[ S]1 一部1 20051
[ 2 ] 　谢培山 1 中药色谱指纹图谱 [ M ]1 北京 :人民卫生出版社 ,
20051
[ 3 ] 　方洪壮 ,崔　友 ,史　权 ,等1 多元分辨方法比较分析不同莪术
油指纹图谱[J ]1 计算机与应用化学 ,2007 ,24 (5) :62926321
[ 4 ] 　孙国祥 ,慕善学 ,侯志飞 ,等1 连翘的 HPLC 指纹图谱研究[J ]1
中成药 ,2007 ,29 (2) :16121631
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