全 文 ：　　实验结果表明丹皮炭品、丹皮炭鞣质部位及醋酸
乙酯部位均有缩短大鼠 TT 的作用。说明三者均能
较好地提高凝血过程中纤维蛋白原的利用度 ,但丹皮
炭的鞣质部位以及醋酸乙酯部位对凝血过程中纤维
蛋白原利用度的提高作用没有丹皮炭整体效果好。
实验结果表明丹皮炭品、丹皮鞣质部位均有缩短
大鼠 PT 的作用。说明丹皮炭品以及丹皮炭的鞣质
部位均能通过影响外源性凝血系统以及血浆中凝血
因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的活性产生凝血作用 ,但是丹皮炭
品作为一个整体比丹皮炭的鞣质部位作用强。
实验结果表明丹皮炭品、丹皮炭鞣质部位及醋
酸乙酯部位均有缩短大鼠 A P T T 的作用。说明丹
皮炭品以及丹皮炭的鞣质部位、醋酸乙酯部位均能
通过影响内源性凝血系统以及血浆中凝血因子 Ⅷ、
Ⅸ、Ⅺ、ⅩⅡ的活性产生凝血作用 ,但是丹皮炭品作
为一个整体比丹皮炭的鞣质部位以及醋酸乙酯部位
作用强。
3 　讨论
　　目前国内外对牡丹皮药理作用的研究多集中于
生品 ,牡丹皮的炮制作用及丹皮炭止血机制还没有
深入研究。为探讨丹皮炭止血的机制 ,本实验首先
对丹皮炭止血作用主要活性部位进行筛选研究。结
果表明丹皮炭具有一定的止血、凝血作用 ,并初步确
定了其止血作用主要活性部位为丹皮炭鞣质部位以
及醋酸乙酯部位。通常炭药是通过以下途径发挥止
血作用 :首先饮片炒炭后炭素增加 ,加强吸附作用 ,
使局部止血作用增强[3 ] ;其次炒炭后炭药中的鞣质
相对增多 ,而鞣质具有止血和收敛作用 ,能达到止
血、凝血的目的[4 ] ;再次饮片炒炭后钙离子增多 ,而
钙离子是凝血系统中的重要离子 ,它对内源性、外源
性凝血系统和血小板有激活作用 ,使纤维蛋白原转
化为纤维蛋白 ,使血小板聚集 ,从而起到促进止血、
凝血的作用[5 ] 。
PR T 能反映内源性凝血系统的活性 , T T 可以
反映内源性凝血过程第三期中纤维蛋白原的利用
度 ;而 A P T T 反映了内源性凝血系统诸因子如凝血
因子 Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、ⅩⅡ的活性。本实验结果表明 ,丹皮
炭品、丹皮炭鞣质部位及醋酸乙酯部位均有缩短大
鼠 PR T、T T、A P T T 的作用 ,说明三者均能影响内
源性凝血系统 ,加速纤维蛋白原的利用度以及对内
源性凝血系统中的凝血因子 Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、ⅩⅡ表现出明
显的激活作用 ,达到止血、促进凝血的作用。PT 能
反映外源性凝血系统的活性 ,其长短与外源性凝血系
统中凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的活性有关。丹皮炭品、
丹皮炭鞣质部位均有缩短大鼠 PT 的作用 ,说明两者
可通过影响外源性凝血系统以及激活凝血因子Ⅰ、Ⅱ、
Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的活性发挥止血、促进凝血的作用。
实验中同时发现丹皮炭作为一个整体比其鞣质
部位、醋酸乙酯部位具有更强的止血能力 ,说明丹皮
炒炭后也许是多成分通过多途径产生了止血作用 ,即
不仅对内源性和外源性凝血系统产生影响 ,是否还对
凝血途径中的纤溶系统、血小板的功能产生一定影
响 ,还有待于对丹皮炭止血机制进一步深入研究。
参考文献 :
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越橘中原花青素抑制新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及其作用机制
王艳春1 ,任 　旷1 3 ,顾饶胜1 ,杨世杰2
(11 吉林医药学院 药理教研室 ,吉林 吉林 　132013 ; 21 吉林大学基础医学院 药理教研室 ,吉林 长春 　130021)
摘 　要 :目的 　研究越橘中原花青素对血管紧张素 Ⅱ (angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ) 诱导新生大鼠心肌成纤维细胞
(cardiac fibroblast , CFb) 增殖的影响及其作用机制。方法 　用 Ang Ⅱ诱导新生大鼠 CFb 增殖 ,采用 M TT 法检测
细胞增殖 ,EL ISA 法测定 Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及转化生长因子β1 ( T GF2β1 ) 的量 ,硝酸还原酶法、分光光度法检测
·0821· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
3 收稿日期 :2009203212　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :吉林省科技厅发展计划项目资助课题 (200705405)
作者简介 :王艳春 (1972 —) ,女 ,副教授 ,博士 ,研究方向为心血管分子药理学。
Tel : (0432) 4560023 　E2mail : wangyanchun1972 @163. com3 通讯作者　任　旷　Tel : (0432) 4560301 　E2mail : renkuang @sina. com
NO、一氧化氮合酶 (iNOS) 活性 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,免疫细胞化学法测定 p27 蛋白的量。结果 　原花青
素 (25、50、100 mg/ L) 可抑制 Ang Ⅱ诱导的 CFb 增殖、胶原合成增加及 T GF2β1蛋白量增多 ,并明显提高 CFb NO
的量、iNOS 的活性 ,同模型组比较差异有显著性 ( P < 0105、0101) ,且呈现剂量依赖性。流式细胞仪检测表明 G0 /
G1期细胞比例随原花青素质量浓度增加而增加 ,S 期细胞比例随原花青素质量浓度增加而减少 ,与模型组相比差
异有显著性 ( P < 0105、0101) ,免疫细胞化学染色结果也表明原花青素可增加 p27 的蛋白表达 ,与模型组相比具有
统计学意义 ( P < 0101) 。结论 　原花青素通过促进 p27 的表达 ,使细胞周期阻滞于 G0 / G1期 ,从而抑制 CFb 增殖
和胶原分泌量的增加。
关键词 :原花青素 ; 心肌成纤维细胞 ; 血管紧张素 Ⅱ (Ang Ⅱ) ; p27
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0821280205
Inhibition of procyanidin from Vaccinium vitisidaea on proliferation of cardiac f ibroblast
in neonatal rats and its mechanism
WAN G Yan2chun1 , REN Kuang1 , GU Rao2sheng1 , YAN G Shi2jie2
(11Department of Pharmacology , College of Jilin Medicine , Jilin 132013 , China ; 2. Department of Pharmacology ,
School of Basic Medicine , Jilin University , Changchun 130021 , China)
Abstract : Objective 　To investigate t he effect of p rocyanidin f rom V acci ni um vi t isi daea on t he proli2
feration of cardiac fibroblast ( CFb) induced by angiotensin Ⅱ ( Ang Ⅱ) , and to explore it s mechanism.
Methods 　The CFb proliferation of cultured neonatal rat was induced by Ang Ⅱ and detected by M T T
assay. The levels of collagen Ⅰ, collagen Ⅲ, and T GF2β1 were measured by EL ISA. The change of NO
content and iNOS activity were measured by nit ric acid reductase met hod and spect rop hotomet ry. Cell cy2
cle was assessed via flow cytomet ry ( FCM) . The expression of cell cycle regulatory protein p27 was deter2
mined by t he combination of immunocytochemical staining and image analysis sof tware. Results 　CFb Pro2
liferation , collagen content , and T GF2β1 levels in cult ure medium were markedly inhibited when CFb were
t reated wit h p rocyanidin at concent ration of 25 , 50 , and 100 mg/ L ( P < 0105 and 0. 01) . And iNOS2NO
system activities in CFb were incerased ( P < 0105 and 0. 01) . In t he FCM analysis , it was found that p ro2
cyanidin could block CFb in t he G0 / G1 p hase f rom entering the S p hase , resulting in more cells in t he G0 /
G1 p hase and fewer in t he S p hase. The percentage of the cells in t he G0 / G1 p hase and the S p hase at the
dosage of 25 , 50 , and 100 mg/ L were significantly different in comparison to t he model group ( P < 0105
and 0. 01) . Procyanidin induced p27 expression wit h statistic significance compared to model group ( P <
0101) . Conclusion 　The inhibition of p rocyanidin on CFb proliferation might be due to t he stimulation of
p27 expression and arresting of cells in G0 / G1 p hase.
Key words : p rocyanidin ; cardiac fibroblast (CFb) ; angiotensin Ⅱ (Ang Ⅱ)
　　越橘 V acci ni um vi t isi d aea L . 又称蓝莓
(blueberry) ,原花青素 (p rocyanidin) 是越橘中重
要的生物活性成分 ,是表儿茶素和表没食子儿茶素
的低聚体或多聚体。目前国内对越橘原花青素药理
活性的相关研究较少 ,主要发现原花青素具有抗氧
化、抗肿瘤、抗衰老及抗炎症等作用[1 ,2 ] 。本实验室
以血管紧张素 Ⅱ( Ang Ⅱ) 诱导心肌成纤维细胞
(cardiac fibroblast , CFb) 增殖 ,观察越橘原花青素
对 CFb 增殖、细胞周期分布、细胞周期调控蛋白
p27 及 CFb 分泌 Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响 ,以探讨原花
青素抑制 CFb 增殖的作用机制。
1 　材料与方法
111 　动物 :Wistar 大鼠 ,清洁级 ,1～3 日龄 ,雌雄兼
用 ,由吉林大学基础医学院实验动物中心提供。
112 　药品与试剂 :越橘原花青素 (质量分数 > 25 % ,南京苏朗医药科技开发有限公司) , Ang Ⅱ(Sigma) , IMDM、血清 ( Gibco) ,M T T ( Sigma) ,胰蛋白酶 (宝泰克生物科技公司) , Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子2β ( T GF2β) EL ISA 试剂盒 (晶美生物工程有限公司) ,诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)试剂盒 (南京建成生物工程研究所) , NO 试剂盒(碧云天生物技术研究所) ,p27 单克隆抗体 ( Santacruz) ,碘化丙啶 (Biotium) , RnaseA ( Sigma) , S2P试剂盒 (福州迈新生物技术有限公司) 。113 　仪器 :超净工作台 (A IR TECH) ,倒置显微镜(OL YMPU S C K40) ,CO2培养箱 ( H ERA EU S) ,酶标仪 (SUN RISE) ,流式细胞仪 (BDFACSAria) ,低温离心机 (SORVALL) 。114 　CFb 的分离与培养 :取 Wistar 大鼠 ,无菌开胸取心肌 ,D2Hank′s 液清洗 ,剪成 1 mm3大小的碎
·1821·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
片 ,01125 % 胰蛋白酶反复消化 ,收集各次消化上清
液 ,离心 (1 000 r/ min , 5 min) ,弃上清 ,用含 10 %
血清的 IMDM 培养基重悬沉淀 ,制成细胞悬液 ,接
种于培养瓶中 ,置 37 ℃、5 % CO2 培养箱内培养。
用差速贴壁法去除内皮细胞及心肌细胞。实验采用
第 3～5 代细胞。
115 　实验分组和给药 :CFb 细胞分为对照组、模型
组、原花青素组。各组细胞无血清培育 24 h 后 ,除
对照组外均给予终浓度为 1 ×10 - 7 mol/ L 的 Ang
Ⅱ,药物治疗组同时给予原花青素 ,终质量浓度分别
为 25、50、100 mg/ L ,对照组给予 1 % 血清的 IM2
DM 培养基。
116 　细胞增殖 ( M T T 法) :将处于对数生长期的
CFb 制成细胞悬液 ,以 1 ×105 个/ mL 浓度接种于
96 孔板 ,每孔 200μL 。分别给予不同的处理因素
作用 48 h。每孔加入 M T T 溶液 ( 5 mg/ mL )
20μL ,37 ℃继续培养 4 h ,终止培养 ,每孔加入
150μL DMSO ,震荡 10 min 后酶标仪上于 490 nm
波长测吸光度 ( A) 值 ,以各给药组 A 值/ 对照组 A
值 ×100 % 表示细胞增殖率。
117 　EL ISA 法测定 Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的量 :取第
3 代 CFb 制成细胞悬液 ,以 215 ×105 个/ mL 浓度
接种于 24 孔板 ,每孔 1 mL 。按 115 项方法给予不
同因素的处理 ,分别在培养的 48 h 吸取细胞上清
液 ,按照试剂盒说明检测 Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的量。
118 　EL ISA 法测定 T GF2β1的量 :细胞按 115 项方
法给予各因素处理后 ,分别在培养的 24 h 吸取细胞
上清液 ,按照试剂盒说明书操作测定 T GF2β1的量。
119 　NO 定量测定 :各处理因素与 CFb 共孵育 6
h ,检测细胞上清液中 NO 的变化。具体操作按试
剂盒说明书进行。
1110 　iNOS 活性测定 :处理细胞方法同上。通过
iNOS 催化产生的 NO 量推算 iNOS 的活力 ,采用
分光光度计法测定 A 值。iNOS 活性以每毫升培养
液每分钟生成的 1 nmol NO 为一个酶活力单位。
用公式 (测定管 A 值 - 空白管 A 值) ×451431 U/
mL 计算。具体操作按说明书进行。
1111 　流式细胞仪分析细胞周期 :将 CFb 以 110 ×
105个/ mL 的密度接种于 25 mL 培养瓶 ,各不同因
素作用 24 h 后 ,胰酶消化、收集细胞 ,经 4 ℃预冷
的 PBS 洗涤 ,悬浮固定于预冷的 70 % 乙醇中 ,4 ℃
过夜。离心、收集细胞 , 重悬于染色液 ( PBS +
011 % Triton X - 100 + 10 % 山羊血清) ,调整细胞
密度为 1 ×105 ～1 ×107 个/ mL ,再加 RNA 酶 200
μL (终质量浓度 50 μg/ mL ) , 37 ℃水浴 30 min
后 ,冰浴中止 RNA 酶的作用。加入碘化丙啶 ( PI)
800μL ,终质量浓度为 50μg/ mL ,保存在冰浴中暗
处 45 min。上机前用孔径 300 目的尼龙网滤过。
根据 PI 所标记的 DNA 的量确定细胞所处的细胞
周期。用 MCYCL E 软件进行细胞周期分析。
1112 　免疫细胞化学染色检测 p27 蛋白的表达 :将
第 3 代 CFb 放入预先放置了 10 mm ×10 mm 盖玻
片的 24 孔板。各种处理因素作用 24 h 后 ,将生长
有成纤维细胞的盖玻片取出 ,用 PBS 洗涤 3 次 ,4 %
多聚甲醛固定 30 min ,晾干后用 SP 法进行免疫细
胞化学染色。阳性反应呈棕黄色细密颗粒 ,阴性对
照用 PBS 取代一抗染色为阴性。用 Media Cyber2
netics 公司的 Image2Pro Plus 图像分析软件分析各
组 p27 在成纤维细胞中表达的平均吸光度值。
1113 　统计学分析 :实验所有数据以 x ±s 表示 ,组
间比较采用方差分析。
2 　结果
211 　原花青素对 CFb 增殖的影响 :M T T 结果表明
模型组细胞增殖率明显高于对照组 ( P < 0101) ,经
原花青素 (25、50、100 mg/ L) 作用 48 h 后 ,细胞增
殖率依次降低 ,与模型组相比有显著性差异 ( P <
0105) ,且量效关系明显。结果见表 1。
212 　原花青素对 CFb 分泌 Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的
影响 :各处理因素作用 48 h 后 ,模型组细胞 Ⅰ型胶
原、Ⅲ型胶原量明显高于对照组 ( P < 0101) 。原花
青素在 25～100 mg/ L 内可抑制 Ang Ⅱ诱导的胶原
合成增加 ( P < 0105、0101) 。结果见表 1。
213 　原花青素对 T GF2β1的影响 :Ang Ⅱ作用 24 h
即可明显升高 T GF2β1 的量 ,与对照组比较有统计
表 1 　原花青素对 Ang Ⅱ诱导新生大鼠 CFb 增殖
及胶原分泌的影响 ( x ±s , n = 8)
Table 1 　Effect of procyanidin on CFb proliferation
and collagen content of neonatal rats
induced by Ang Ⅱ( x ±s , n = 8)
组别
ρ/
(mg ·L - 1 )
增殖率/
%
Ⅰ型胶原/
(pg ·mL - 1 )
Ⅲ型胶原/
(pg ·mL - 1 )
对照 - 100104 ± 8110 43156 ± 4124 7183 ±0125
模型 - 149169 ±16133 3 3 561162 ±81115 3 3 38124 ±5142 3 3
原花青素 100 129105 ± 8121 △ 101142 ±24153 △△ 9172 ±1101 △△
50 134133 ± 6181 △ 274124 ±13131 △△16192 ±1121 △
25 140126 ±16168 442142 ±105162 28162 ±8131
　　与对照组比较 : 3 3 P < 0101
　　与模型组比较 : △P < 01 05 　△△P < 0101
　　3 3 P < 01 01 vs cont rol group
　　△P < 01 05 　△△P < 01 01 vs model group
·2821· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
学差异 ( P < 01001) ,原花青素可以抑制 Ang Ⅱ对
于 T GF2β1的诱导作用 ,各剂量组均可降低 T GF2β1
的量 ( P < 0105 , 0101) 。结果见表 2。
214 　原花青素对 NO 水平和 iNOS 活性的影响 :对
照组 CFb 具有 iNOS 活性 ,能够合成 NO ,AngⅡ使
CFb iNOS 活性降低 ,NO 的量减少 ( P < 01001) 。各
剂量的原花青素均可明显提高 CFb 的 iNOS 活性和
NO 的量 ( P < 0101、01001) 。结果见表 2。
215 　原花青素对 CFb 细胞周期的影响 :在 Ang Ⅱ
24 h 的作用下 ,CFb S 期细胞比例增加 ,同对照组
比较有统计学差异 ( P < 0101) 。原花青素组可使
CFb S 期细胞比例降低 , G0 / G1 期细胞数高于模型
组 ( P < 0105 , 0101) 。结果见表 3。
216 　原花青素对 p27 蛋白表达的影响 :免疫细胞
化学染色结果显示与对照组相比 ,Ang Ⅱ作用 24
h ,即可见到 p27 的表达量降低 ( P < 0101) ,而 50、
100 mg/ L 的原花青素在同一时间点可明显提高
p27 的表达量 ,同模型组比较有统计学差异 ( P <
0101) 。结果见图 1。
表 2 　原花青素对 Ang Ⅱ诱导新生大鼠 CFb 的 NO 水平、
iNOS 活性及 TGF2β1水平的影响 ( x ±s , n = 8)
Table 2 　Effect of procyanidin on NO level , iNOS activity ,
and TGF2β1 levels of CFb in neonatal rats
induced by Ang Ⅱ( x ±s , n = 8)
组别
ρ/
(mg ·L - 1 )
NO/
(μmol ·L - 1 )
iNOS/
(U ·mL - 1 )
TGF2β1 /
(ng ·L - 1 )
对照 - 12144 ±1118 9104 ±1114 802151 ±10142
模型 - 2142 ±1140 3 3 3 2163 ±0183 3 3 3 1 237195 ±23148 3 3 3
原花青素 100 7156 ±0169 △△△5132 ±1112 △△△ 895125 ±15195 △△
50 5107 ±0173 △△△4175 ±0108 △△△ 1 016164 ± 3106 △△
25 4163 ±1129 △△ 3134 ±0143 △△ 1 153120 ± 9165 △
　　与对照组比较 : 3 3 3 P < 01 001
　　与模型组比较 : △P < 01 05 　△△P < 01 01 　△△△P < 01001
　　3 3 3 P < 01001 vs cont rol group
　　 △P < 01 05 　△△P < 01 01 　△△△P < 01001 vs model group
表 3 　原花青素对 Ang Ⅱ诱导新生大鼠 CFb 细胞周期
的影响 ( x ±s , n = 6)
Table 3 　Effect of procyanidin on cell cycle of CFb in neonatal
rats induced by Ang Ⅱ( x ±s , n = 6)
组别
ρ/
(mg ·L - 1 )
细胞周期分布/ %
G0 / G1 S G2 / M
对照 - 89105 ±1180 4173 ±1102 6122 ±0155
模型 - 77185 ±0188 3 3 15167 ±1131 3 3 6148 ±1196
原花青素 100 87101 ±1101 △△ 8102 ±0185 △△ 4197 ±0118
50 82112 ±0121 △ 10192 ±1108 △ 6196 ±0123
25 79106 ±2114 14121 ±1123 7171 ±2104
　　与对照组比较 : 3 3 P < 0101
　　与模型组比较 : △P < 01 05 　△△P < 01 01
　　3 3 P < 01 01 vs cont rol group
　　△P < 0105 　△△P < 01 01 vs model group
与对照组比较 : 3 3 P < 01 01 　与模型组比较 : △△P < 01 013 3 P < 0101 vs cont rol group ; △△P < 0101 vs model group
图 1 　免疫细胞化学染色检测原花青素对 Ang Ⅱ诱导新生
大鼠 CFb 的 p27 蛋白表达的影响 ( x ±s , n = 6)
Fig. 1 　Effect of procyanidin on p27 expression of CFb
in neonatal rats induced by Ang Ⅱby immuno2
cytochemical staining ( x ±s , n = 6)
3 　讨论
　　心肌纤维化形成的主要病理改变是大量细胞外
基质 ( ECM) 沉积 ,因而产生 ECM 的 CFb 成为目前
药物治疗纤维化的重要靶标。本实验在细胞水平观
察 AngⅡ对 CFb 胶原代谢和分裂增殖的直接作用 ,以
排除血流动力学及神经内分泌的影响 ,进一步探讨原
花青素对于 CFb 增殖的抑制作用及其作用机制。
CFb 表面存在对 Ang Ⅱ高亲和力的血管紧张
素受体 (A T1 R) ,而 Ang Ⅱ (1 ×10 - 7 mol/ L ) 是促
心肌纤维化的主要因素[3 ,4 ] 。本实验结果表明 :与
对照组的各项参数比较 ,模型组细胞增殖活跃 ,生长
密度 ; Ⅰ型、Ⅲ型胶原、T GF2β1 的量增加 ;流式细胞
仪分析证实模型组 S 期细胞比例高于对照组 ,差异
具有统计学意义。即本实验中 Ang Ⅱ (1 ×10 - 7
mol/ L) 可显著促进 CFb 的增殖及胶原合成 ,与文
献报道相一致[3 ,4 ] ,模型成立。
原花青素是越橘中的主要成分 ,也是其重要的
生物活性物质。目前国内的研究集中在原花青素对
于缺血心肌的保护作用[5 ] 。本实验通过 M T T、胶
原分泌量和细胞周期分析证实 :原花青素体外有直
接抑制心肌纤维化作用。同模型组相比 ,原花青素
在 25～100 mg/ L ,可剂量依赖性降低 CFb 的增殖
率、减少胶原及 T GF2β1的量、阻滞 CFb 由 G0 / G1期
向 S 期转换 ,使 G0 / G1 期细胞增多 , S 期细胞减少。
表明原花青素对 CFb 的增殖与胶原合成有显著抑
制作用。
CFb 具有内源性 iNOS2NO 系统 ,在多种细胞
因子和生长因子的刺激下 CFb 可生成内源性 NO ,
此作用系 iNOS 基因所介导[ 6 ] 。原花青素干预下的
CFb iNOS2NO 系统活性的变化 ,以及与心肌纤维
化的关系 ,文献报道较少。本实验结果表明 :各种处
·3821·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
理因素与 CFb 共孵育 6 h ,即可见到 NO 及 iNOS
的变化 ,说明在 Ang Ⅱ诱导 CFb 增殖的过程中 ,有
NO 系统的参与 ,并且是作为一种早期反应的信号。
与模型组比较 ,原花青素 (25～100 mg/ L ) 可剂量
依赖性升高细胞培养液中 NO 的量、增加 iNOS 活
性。表明原花青素对 CFb 的 iNOS2NO 系统的活
性具有促进作用。
细胞周期可在正、负调控因素共同作用下协调
地进行 ,正调控因素作用的增强和负调控因素作用
的减弱是细胞增殖的机制。细胞周期蛋白依赖性激
酶抑制因子 (C KI) 是细胞周期进程的负性调节因
子。C KI 中的 p27 蛋白亚型目前被认为是细胞内
调节增殖及细胞周期的重要影响因素[ 7 ] 。有研究表
明 ,在高血压左心室肥厚的形成过程中 ,p27 蛋白水
平下降 ,证明 p27 在心室肥厚中发挥重要作用[8 ] ;
血小板源性生长 ( PD GF) 和血管升压素能通过下
调 p27 蛋白表达 , 使静止期血管平滑肌细胞
(VSMC) 通过 G1 期进入 S 期开始增殖[9 ] 。Diep
等[ 10 ]也发现 ,给动物注射一定量的 Ang Ⅱ后 ,血管
壁 DNA 合成增加 ,p21 ,p27 的表达降低。
以往的研究表明 ,牛磺酸、苦参碱等抗氧化剂在
发挥抑制 CFb 增殖作用时 ,主要是影响 p27 的表
达 ,对于细胞周期正性调节因子未发现有作用[7 ] 。
本实验通过免疫细胞化学染色证明 , CFb 中存在
p27 的表达 ,在 Ang Ⅱ的作用下 ,p27 的表达降低 ,
细胞增生活跃 ;给予原花青素后 ,CFb 的 p27 蛋白的
表达明显增加 ,细胞增殖受阻。表明原花青素可通过
促进 p27 蛋白表达而发挥对 CFb 细胞周期的调控 ,
使 CFb 停滞于 G0 / G1期 ,从而抑制 CFb 的增殖及胶
原的合成 ,降低 ECM 的沉积 ,抑制心肌纤维化。
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神经网络分析香丹注射液抗心肌缺血有效成分的谱效相关性研究
尹永芹 ,朱俊访 ,沈志滨1 3 ,唐春萍 ,杨超燕 ,孙 　悦
(广东药学院中药学院 ,广东 广州 　510006)
摘 　要 :目的 　寻找香丹注射液中抗垂体后叶素致大鼠心肌缺血的主要有效成分。方法 　采取大鼠舌下 iv 垂体
后叶素 (015 U/ kg) 复制大鼠急性心肌缺血模型 ,观察香丹注射液的不同萃取部位及萃取部位的组合对大鼠注射
垂体后叶素后不同时间点 Ⅱ导联心电图 T 波变化情况 ,结合香丹注射液不同极性萃取部位及萃取部位组合的指纹
图谱 ,运用神经网络分析抗垂体后叶素致心肌缺血的香丹注射液中主要有效成分。结果 　香丹注射液中主要成分
对垂体后叶素引起的心肌缺血模型 T 波抬高存在影响 ,丹酚酸 D 和丹酚酸 A 在 0、5、10 s 对 T 波抬高的抑制作用
随质量分数的提高而增强 ,其余成分在 5 s、10 s、3 min 对 T 波抬高主要为促进作用。结论 　香丹注射液抗垂体后
叶素致心肌缺血的主要有效成分为丹酚酸 A 和丹酚酸 D。
关键词 :香丹注射液 ; 抗心肌缺血 ; 谱效相关性 ; 神经网络
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0821284204
·4821· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
3 收稿日期 :2008212218　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家科技支撑计划资助项目 (2006BAIB03206) ; 广东省科技计划资助项目 (2008B030301035) ; 广东省自然科学基金资助项
目 (8451022401001607) ; 广东药学院科研启动项目 (2007ZYX07)
作者简介 :尹永芹 (1977 —) ,女 ,黑龙江七台河人 ,博士 ,讲师 ,主要从事中药及天然药物有效成分及谱效相关性研究。
Tel : (020) 39352612 　E2mail : yongqinyin @126. com3 通讯作者　沈志滨　Tel : (020) 39352179 　E2mail : szb8113 @yahoo. com. cn