全 文 ：·742· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月
抑制淋巴细胞的增殖，或作用于过客细胞促进了宿
主形成免疫耐受，就能够有效地起到抗排斥反应的
作用，延长移植物存活时间。
本研究利用大鼠原位肝移植模型观察大黄素对
肝移植ACR作用的时机选择。实验结果显示，其抑
制排斥反应作用和给药时间有关。手术前8d给药
组(B组)和手术前4d至术后4d给药组(C组)
的存活时间分别与对照组相比无明显延长，均属于
排斥反应模型的术后生存期，提示于这两个时间段
给予大黄素对排斥反应影响不大。而术后8d给药
组，肝移植大鼠存活时间与对照组相比则明显延长，
提示作用发生在排斥反应期间，作用方式可能为直
接抗排斥反应或者减轻排斥反应的严重程度。
Banff分级方案是国际移植学会制订的肝移植
术后(ACR)组织病理学诊断标准[6]。本研究中，B
组和C组RAI均为8分以上，发生了重度ACR，两
组与对照组RAI的差异均无统计学意义；而D组
RAI则为6．16±0．55，仅发生了中度ACR，与对照
组相比差异显著。该结果从组织病理学的角度证实
了术后1～8d给予大黄素对大鼠移植肝的排斥反
应有明显抑制作用。至于具体的作用机制，有待今后
进一步研究。
参考文献：
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芩百浓缩丸体内外抗肺炎支原体作用的实验研究
王伟明h2，张俊威1，许庆瑞1，张树明1
(1．黑龙江省中医研究院中药研究所，黑龙江哈尔滨150036}2．黑龙江中医药大学药学院，黑龙江哈尔滨150040)
摘 要：目的 研究复方中药芩百浓缩丸的体内外抗肺炎支原体作用。方法 采用微量稀释法检测芩百浓缩丸的
体外最小抑菌浓度(MIC)；采用滴鼻法建立大鼠肺炎支原体感染模型，以PCR检测造模情况，以细菌培养、器官指
数测定、病理学观察评价药物疗效。结果芩百浓缩丸的MIC为100pg／mL，能降低感染动物体温和肺指数，提高
胸腺指数，减轻肺组织的病理组织学改变。结论芩百浓缩丸在体内外均具有抗肺炎支原体作用。
关键词：芩百浓缩丸；肺炎支原体；MIC
中图分类号：R286．4 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)05—0742—04
肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae)是呼吸
系统感染最常见的病原体之一，感染主要见于儿童
和青年人(约占71％)，其分布呈全球性，全年都有
散发感染。在我国支原体肺炎在d,JL肺炎中的发生
率平均约为25％，而在学龄儿童中有时可达
50％～75％‘1。。在中医理论上，支原体肺炎归属为
“风温”病范畴。芩百浓缩丸(由黄芩、百部、紫菀等
中药组成)是用于治疗支原体肺炎的中成药，在多
年的临床实践中取得了良好的疗效。现通过体外抗
菌和动物实验方法对芩百浓缩丸治疗支原体肺炎的
收稿日期：2007—12—14
基金项目：国家中医药管理局新药开发专项基金资助项目(DIX055B)
作者简介：王伟明(1966一)，女．黑龙江省哈尔滨市人，黑龙江省中医研究院副院长．研究员，博士生，长期从事中药新药研发工作．
Tel／Fax：(0451)55665478E—mail：yjs—163163@163．corn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5,El·743·
作用进行研究，评价其体内外抗肺炎支原体作用。
1材料
1．1 肺炎支原体菌株：肺炎支原体国际标准菌株
FH(ATCCl5531)由首都儿科研究所鉴定并惠赠。
1．2主要试剂及仪器：牛脑心浸液基础培养基，进
口美国试剂；无菌胎牛血清，天津市灏洋生物科技责
任有限公司。超净工作台，哈尔滨东联电子技术开发
有限公司生产；DH5000电热恒温培养箱，天津市泰
斯特仪器有限公司；PCR反应仪，GeneAmp
PE2400。
1．3受试药物：芩百浓缩丸，自制，相当于生药2．5
g／g，本品为棕褐色薄膜包衣浓缩水丸，符合2005
版《中国药典》丸剂项下的各项规定，HPLC法测定
本品含黄芩苷不得少于30mg／g。严迪(罗红霉素
分散片)由哈尔滨制药六厂生产，批号030321—3。
1．4实验动物：Wistar大鼠，体质量(150±10)g，
由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心
提供(合格证号为黑动字第P00102005)，置于清洁
级动物室饲养。
2方法
2．1 药液的配制：将一定量的芩百浓缩丸研碎，用
pH值为8．6的灭菌磷酸盐缓冲液配制成1600pg／
mL的应用液(最终pH7．4～7．6)，严迪配成64
／-g／mL应用液，经0．45肛m无菌滤膜滤过后备用。
2．2体外抗肺炎支原体作用
2．2．1肺炎支原体的培养及测定：将冻存的肺炎支
原体标准菌株复溶，接种到灭菌试管中，密封管口，
一置于37℃恒温箱内培养，每日观察。7d后如培养
基的颜色由红色变为黄色且液体澄清，表明肺炎支
原体已在培养基内生长繁殖。每隔一段时间以1：
10(菌液：培养基)比例进行传代。第3代菌液用于
实验。将待测菌液以10倍稀释法逐管稀释成10叫～
10-12一系列浓度，37℃培养7d，以发生颜色变化
的最高稀释度作为颜色改变单位(colorchange
unit，CCU)，菌液浓度以CCU／mL计[2]。
2．2．2芩百浓缩丸体外抗肺炎支原体最小抑菌浓
度(MIC)的测定：分别在96孔细胞培养板每行的
第l孔中加入芩百浓缩丸应用液或严迪应用液200
弘L，每种药物平行重复4行，其余各孔加入100pL
肺炎支原体培养液，然后将药物从第1孔至第10孔
倍比稀释，芩百浓缩丸质量浓度分别为800、400、
200、100、50、25、12．5、6．25、3．125、1．5625 ug／
mL，严迪质量浓度分别为32、16、8、4、2、1、0．5、
0．25、0．125、0．0625／19／mL。肺炎支原体菌液用培
养液稀释成103～104CCU／mL，加入第1至第11孔
内，每孑L100pL，第12孔加入i00弘L培养液。第11
孑L为不加药物的肺炎支原体生长对照孔，第12孔为
不加肺炎支原体的培养液对照孑L。每孔内滴入一滴
灭菌液体石蜡，置于37℃、5％C0：环境中孵育。每
日做1次，连续重复3d。当肺炎支原体生长对照孑L
培养液由红色变成黄色时记录颜色未发生变化的最
低药物质量浓度，为该药的MIC值。
2．3芩百浓缩丸对支原体肺炎的治疗作用
2．3．1建立支原体感染模型方法的确定：取清洁级
Wistar大鼠70只，随机分为7组，每组10只。1～3
组大鼠每日分别滴鼻感染1×105、1×106和1×107
CCU／mL菌液，连续感染3d；4～6组大鼠分别以
同样浓度菌液连续感染7d；第7组为空白对照组。
感染后第15天处死动物，取肺组织做病理组织学观
察，确定造成大鼠支原体感染的最佳造模方法。
2．3．2大鼠支原体感染模型的建立、分组及给药：
取 级Wistar大鼠60只，体质量140～160g。
实验室观察1周后随机分为6组：模型组，芩百浓缩
丸高、中、低剂量组，阳性药对照(严迪)组，对照
组，每组10只，雌雄各半。除对照组大鼠外，其余大
鼠按最佳造模方法以支原体菌液滴鼻感染。感染第
3天各组动物给药：芩百浓缩丸高、中、低剂量组分
别按16．5、8．25、4．125g／kg(剂量以生药计，低剂
量相当于人的I临床服用剂量)给药，阳性药对照组
给予严迪o．055g／kg，对照组和模型组给予生理盐
水，1mL／100g，ig给药。每日2次，连续2周。逐日
观察动物活动、进食等情况。
2．3．3观察指标：感染第10天，用无菌咽拭子采集
模型组动物咽部分泌物放人装有1mL生理盐水的
无菌试管中，用于肺炎支原体的DNA提取和PCR
扩增以确证造模是否成功[3~5]。
末次给药后24h，测定各组大鼠肛温、称体质
量后脱颈椎处死。取肺脏和胸腺，称质量后计算脏器
系数。
无菌条件下剪取直径为0．2cm左右的左肺组
织2块、右肺组织2块，迅速置于液体培养液内，恒温
箱孵育1周。结果判定：培养液由红色变成黄色表明
肺组织感染肺炎支原体，记为阳性结果；反之颜色未
改变表明肺组织未感染肺炎支原体，记为阴性结果。
另取一块肺组织于10％福尔马林固定，常规脱
水，浸蜡，切片，HE染色，进行肺病理组织学观察。
3 结果
3．1 体外抗支原体MIC测定结果：芩百浓缩丸的
万方数据
·744· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月
MIC为100／19／mL；严迪为2,ug／mL。
3．2肺炎支原体感染动物模型的建立与确证：经预
试验确定大鼠每日感染1×106CCU／mL的支原体
培养液0．2mL，连续感染7d后能形成较明显的肺
组织病变。大鼠在感染肺炎支原体后多数精神沉郁，
活动减少，被毛粗糙，肺部出现明显的肺湿呼吸音。
待14d时模型组各种症状加重，尤其是鼻部出现脓
性分泌物，个别者带有少量血丝，呼吸时可听到鼻塞
声和喘鸣声。
在正式实验过程中模型组有3只大鼠死亡，解
剖后肉眼可见肺部明显的炎症病变。模型组大鼠的
咽拭子扩增出一条约583bp的清晰片段(图1)，处
死大鼠的细菌培养全部为阳性而对照组全部为阴
性，病理组织学观察可见肺部组织形成较明显的间
质性肺炎、肺泡实变等病理学变化。由此证明，本实
验所建立的肺炎支原体感染动物模型可靠。
l 2 3 4 5 6 7 8 卜支原体标准菌株 2～6一感
染大鼠咽拭子7一无模板水对
照 8一DNAMarkerDL2000
—2000bD1一MPstandardst ain
’II)t10卸2--6-nasopheoryngealswab
一 5I)obDofinfectedrats7一water
一250bocontrolwithouttemplate
8一DNAMarkerDL2000
图1 支原体感染大鼠咽拭子的PCR扩增结果
Fig．1PCRAmplificationforpharynxswab
ofratsinfectedbyM．pneumoniae
3．3肛温、肺指数和胸腺指数测定：模型组大鼠较
对照组体温升高(P
模型组肺指数明显升高(P
指数明显增加(P<0．01)。结果见表2。
3．4肺组织细菌培养：将装有肺组织的培养瓶放人
37℃恒温箱内培养7d，结果见表3。
表1 芩百浓缩丸对肺炎支原体感染大鼠体温的影响(；士s)
Table1 EffectofQinbaiconcentratedpell ts
onbodytemperatureofratsinfected
byM．Pneumoniae(；士s)
与对照组比较：。P
与模型组比较：。尸
的影响(；士s，弹=10)
Table2 EffectofQinbalconcentratedpelletsonpul—
monaryandthymusIndexofratsinfected
byM．Pneumoniae(-x+s，甩一10)
组别 剂量／(g·kg．1)肺指数／(g·kg一1)胸腺指数／(g·kg_1)
与对照组比较；。P
Table3 Resultsofgermicultureinl ngtissueofrats
3．5肺脏的病理组织学检查：剖检时可见模型组肺
部病变明显，外观充血、水肿，严重者肺叶分布散在
大小不等的坏死灶，病变程度以模型组最严重。病理
学检查可见病变主要在肺内，病变性质为间质性肺
炎和细支气管肺炎，支气管及血管周围有明显的淋
巴细胞浸润；对照组肺组织基本正常；严迪组可见轻
度间质性肺炎，细支气管周围可见少许炎性细胞浸
润；芩百浓缩丸各剂量组炎症明显减轻，细支气管周
围可见少许炎性细胞浸润，并且间质性肺炎的程度
随着剂量增加而逐渐减轻，其中高剂量组与对照组
相近(结果见图2)。结果表明，芩百浓缩丸具有控制
大鼠肺炎支原体感染的作用，使肺组织病变情况明
显减轻。
4讨论
芩百浓缩丸以长于清泻肺火的黄芩为君药，润
肺止咳的百部为臣，佐以紫菀等药，清肺之热毒苦寒
降肺之逆气，保肺之阴津苦润复金之清肃，共奏清热
解毒、润肺止咳之功效。肺炎支原体没有细胞壁，由
其引起的支原体肺炎的最突出表现为频繁而剧烈咳
嗽。目前临床治疗肺炎支原体感染以大环内酯类抗
生素为主，同时给予相应的镇咳、祛痰、平喘药物进
行对症治疗[6]。但大环内酯类药物常引起较重的胃
肠道反应等副作用，且近年来的耐药菌株有上升趋
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月·745·
坎掣月I 埘照自l 苓I：I浓缩丸f16．5g·kg。1)
图2各组大鼠肺组织病理组织学变化
Fig．2Histopathologicchan esinlungtissueofratsforeverygroup
势[7~9]，限制了其在临床上的使用。中药治疗支原体肺部，可能由于机体死亡后细胞崩解释放溶酶体酶
肺炎具有独特的优势，根据患者不同的临床表现辩 等有害物质使支原体死亡。给药组中除芩百浓缩丸
证施治，各种复方的加减应用在Il缶床上取得了良好 高剂量组细菌培养全部为阴性外其余各组均有阳性
的治疗效果[10|。本实验结果表明芩百浓缩丸不仅在 结果，可见虽然各组药物对支原体肺炎均有治疗作
体内、外具有抗肺炎支原体作用，而且还能降低由于 用，但并没有将黏附在肺组织的支原体全部清除，这
肺炎支原体感染引起的体温升高、改善肺指数和胸 也可能是支原体肺炎容易反复发作的原因之一。本实
腺指数、调节由肺炎支原体引起的免疫紊乱情况，对 验结果提示，芩百浓缩丸能够较好地清除机体内感染
支原体肺炎具有较好的治疗作用。 的肺炎支原体，在体内具有抗肺炎支原体作用。
体外抗菌实验可直观地检测到药物在体外抑制 参考文献：
细菌生长的MIC值，快速筛选出具有抑菌效果的抗 [1]Kei508“8“K08⋯8T，KorppiM·JokinenC，甜al·Epio．109y
菌药物。本实验对中药复方进行了体外抗肺炎支原 pop。Jation．ba：。d。t。dy[J]．P荔。trInfecfDisj1v9-9r8v，17
体检测并与严迪进行了对比。芩百浓缩丸在体外虽 (11)：986·
然具有抑制肺炎支原体生长的作用，但其MIC值高 乜3：：：2。Sair。de。rlilliA。,。Jl“s。t。。J,pleet。42：‘e，c。tdiaion。ricofMpatycio。p。l。a。5mba，
于严迪，说明其体外抗菌效果弱于严迪。体外抗菌实polymerasechainreaction[J]．JClinMicro&ol，1992，30
验由于其细菌的生长环境不同于生物体的内环境且 [3]￥塞蚤j6兰张明，董龙，等．肺炎支原体感染对大鼠免疫
忽略了机体处于感染状态后内环境和免疫、内分泌 功能和一些生化指标的影响[J]．畜牧与兽医，2004，36
等系统的变化及药物在生物体内的代谢等因素，实 (5)．4-6．
验结果往往与其治疗效果存在一定的差异，并不能 E4]梨蒙备需雾磊喜翟’磊薯芸篓套暑罢望蕊尊凳
完全代表药物的疗效。尤其是中药复方制剂，成分复 (6)：44-47．
杂，口服后在体内常产生许多代谢产物而起疗效，使 [53言芋鲁磊嚣，雩。。只j篡煮专黧感染大鼠模型的建立
其体内、外药效不一致，因此，只能用其体外抗菌实 [6]RadisicM，TornA，GutierrezP， t以SevereacuteJung
验作为其药效评价的参考指标。 竺肛””5”byMycoplas”pne“”⋯“LJJ’“”州删
造模后自模型组大鼠的咽部取分泌物进行 [7]赵淑琴．小儿肺炎支原体肺炎药物治疗新进展[J]．辽宁药
PCR检测，证实感染成功。感染部位的细菌培养能 物与临床，2003，6(1)：9-11·
够最直接地说明药物对病原微生物的清除效果。末 嘲嘉惹气8怒l麓支原体肺炎的临床研究‘13·临床荟萃·
次给药后每只大鼠均分别自左、右肺上叶和下叶取4 [9]魏春丽．阿奇霉素和严迪治疗支原体肺炎的比较疗效观察
块肺组织进行细菌培养，结果对照组均为阴性，模型 [1。]罢3‘亲．国菩芸耋喜≥麓,的4实(10验)研：1究15概7．况[J]．河南中医，
组的3个阴性样品均来自一只死亡时间较长的大鼠 2001，21(3)：70．
万方数据
芩百浓缩丸体内外抗肺炎支原体作用的实验研究
作者： 王伟明， 张俊威， 许庆瑞， 张树明
作者单位： 王伟明(黑龙江省中医研究院中药研究所,黑龙江,哈尔滨150036;黑龙江中医药大学药学院
,黑龙江,哈尔滨150040)， 张俊威,许庆瑞,张树明(黑龙江省中医研究院中药研究所,黑龙江
,哈尔滨150036)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(5)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200805035.aspx