全 文 ：中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1227-
·药材与资源·
氮离子注入介导麻黄基因组DNA转化酵母茵
吕 杰h2，金湘1，毛培宏”，凌海秋1，樊永红1，武宝山1，欧阳平凯2
(1．新疆大学物理科学与技术学院离子柬生物技术中心，新疆乌鲁木齐830008，
2．南京工业大学制药与生命科学学院，江苏南京 210009)
摘 要：目的 以麻黄碱为目标产物，探讨氮离子(N+)注入介导麻黄基因组DNA在酵母菌中的转化。方法通过
N+注入介导蓝麻黄基因组DNA分别在酿酒酵母Saccharomycesce evisiae和异常汉逊酵母Hansenulaanomala中
随机转化，转化后的酵母菌经BTB指示性辅助筛选、斜面传代和液体培养后，用铜铬盐定性检识和RP．HPLC方
法，检测重组酵母菌胞外和胞内麻黄碱的量。结果获得了遗传稳定的以葡萄糖为碳源、NaNO。为氮源生物合成麻
黄碱和(或)伪麻黄碱的重组酵母菌9株。液体培养72h，RP—HPLC测试胞外麻黄碱和伪麻黄碱的最高量分别为
18．85和2．88mg／L；胞内麻黄碱和伪麻黄碱最高量分别为4．29和22．16mg／g干细胞。结论采用离子注入介导
麻黄基因组DNA大分子转化技术，通过适当的筛选方法，可获得易于人工培养的产生麻黄碱等次生代谢产物的微
生物工程菌株。
关键词：氮离子注入；麻黄基因组DNAI重组酵母；麻黄碱
中图分类号：R282．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)08—1227—04
NitrogenionimplantationmediatedEphedragenomicDNAtransformationintoyeasts
LUJiel”，JINXian91，MAOPei—hon91，LINGHai—qiul，FANYong—hon91，
WUBao—shanl．OUYANGPing—kai2
(1．InstituteofIonBeamBiotechnology，CollegeofPhysicsS i nceandTechnology，XinjiangUniversity，Urumqi830008。
Chinal2．CollegeofPharmacyandLifeScience，NanjingUniversityofTechnology，Nanjing210009，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigateEph dragenomicDNAtransformationintoyeastsbynitrogen
ionimplantationwiththesoleobjectofephedrineproducts．MethodsThegenomicDNAfromEphedra
glaucaw srandomlytransferredinSaccharomycescerevi iaeandHansenulaanomala，respectivelyby
nitrogenionbombardment．Therecombinedy astswerescreenedandthecontentofephedrineinecto—and
endo—recombinedyeastswaseterminedbythemethodsfbromothymolblue(BTB)indicatorselection．
slantcultivation，liquidculture，copperhromicsaltqualitativetest，andRP—HPLCdetermination．
ResultsNinerecombinedyeastrainsthatproduce／-ephedrineand—pseudoephedrinew reobtained，
whichoulduseglucosea flcarbonsource，NaN03asnitrogensourceandbegeneticallystable．After
cultivatedinliquidmediumfor72handanalyzedbyRP—HPLC。therecombinedstrainscouldproduce
extracellularZ—ephedrine18．85mg／Land—pseudoephedrine2．88mg／L，intracellular／-ephedrine4．29
mg／gandd—pseudoephedrine22．16mg／gdrycell．ConclusionTheresultsshowthatheion
implantationmediatedEphedragenomicDNAtransformationintoyeastcouldbeusedandtherecombined
yeasttrainscouldbeobtainedbyappropriatescre ningmethods．
Keywords：nitrogenionimplantation；EphedragenomeDNA，recombinedyeast；ephedrine
麻黄碱(／-ephedrine)和伪麻黄碱(d—
pseudoephedrine)是干旱半干旱荒漠地区药用植物
麻黄的主要生物碱类次生代谢产物，具有重要的药
用价值Ⅲ。若能构建产麻黄碱和伪麻黄碱的微生物
工程菌株，最终实现麻黄碱和伪麻黄碱的微生物发
酵生产，就将对我国干旱半干旱荒漠地区生态环境
的保护产生深远的影响。但是，药用植物的次生代谢
产物一般由多基因控制啪，麻黄碱和伪麻黄碱的生
物合成途径复杂‘3~5]，且受环境影响较大，加之目前
还没有与麻黄碱生物合成相关的基因的任何信息，
收稿日期：2007—11一07
基金项目：国家自然科学基金资助项目(10365001)。
作者简介：吕 杰(1978一)，男，新疆乌鲁木齐人，硬士，讲师，博士研究生，主要从事徽生物基因工程制药、离子束生物技术和分子生物
学相关领域研究。E—mail：lvjie@xju．edu．ca
*通讯作者毛培宏Tel：(0991)4543656E—mail：phmao@china．tomphm o@xiu．edu．cn
万方数据
·1228· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
因此，至今无人按照常规的基因工程方法构建工程
菌。在此背景下，进行药用植物麻黄基因组DNA的
遗传转化构建产麻黄碱和伪麻黄碱转基因工程菌的
研究具有重要的理论和现实意义。
离子注入生命体的独特机制，使其成为一种新
的转基因手段[6]，研究证明，注入离子对受体细胞具
有极强的刻蚀作用，致使细胞表面形成可使外源
DNA进去的“通道”；由于注入正离子的积累，大大
降低了受体细胞表面的负电性，从而减少了受体细
胞对溶液中带负电的外源DNA的静电斥力，有利
于外源DNA的导人；加之“通道”局部区域也由于
带正电，便于吸引带负电性的外源DNA主动进入
受体细胞；离子注入在真空环境中进行，真空造成的
负压使受体细胞内部的部分水分蒸发，当干燥的受
体细胞进入含有外源DNA的缓冲液中时，由于吸
胀作用加强，也增加了外源DNA进人受体细胞的
机会；特别是离子注入会对受体细胞内染色体造成
直接损伤(如断裂)和间接损伤(in自由基作用)，大
大增加了外源DNA与受体细胞DNA重组和整合
的机会。离子束介导外源DNA的遗传转化为远缘、
超远缘物种间的基因交流提供了一种新途径。在药
用植物基因组DNA的遗传转化方面，宋道军等[7]
利用离子注入介导法将药用植物银杏总DNA导入
3—16和SR2—14—2两种西瓜，在转化的西瓜当代叶
片中检测出了银杏内酯的量分别为17．0756、
45．9998pg／g，这表明外源DNA供体植物银杏中
与银杏内酯生物合成相关的多个基因在受体植物西
瓜中得到了表达。基于离子注入介导DNA大分子
遗传转化的原理[8]，开展了N+注入介导蓝麻黄基因
组DNA在酿酒酵母和异常汉逊酵母菌中的随机转
化研究，以期获得产麻黄碱和伪黄碱的重组酵母工
程菌株。
1材料与方法
1．1 菌种：酿酒酵母Saccharomycescerevisiae
2．1882和异常汉逊酵母Hansenulaanoma
2．340，来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
1．2 主要试剂和仪器：葡萄糖·H：O，NaNO。，酵
母膏粉，K：HPO。·3H：O，MgSO‘·7H20，琼脂粉，
溴百里香酚蓝(BTB)，CuSO．，NaOH，乙腈(色谱
纯)，石英砂，变色硅胶，CTAB及基因组DNA提取
用试剂(包括RNase)等从ABI公司购买；麻黄碱
和伪麻黄碱对照品由新疆国际实业股份有限公司麻
黄素事业部提供，符合FDA标准。IBBDevice1多
功能离子注入机由中国科学院等离子体物理研究所
研制并赠送，Sigma3—18K离心机购自Sigma公
司，Waters1525反相高压液相色谱仪(RP—HPLC)
购自Waters公司。
1．3培养基：YPD培养基[9](酵母膏10g，蛋白胨
20g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL)；BTB平板培
养基(葡萄糖·H20100g，NaNO。10g，酵母膏粉
5g，K2HP04·3H201g，MgS04·7H200．5g，蒸
馏水1000mL，用10％NaOH调pH至7．0后，再
加入BTB0．2g，琼脂粉10g)；斜面培养基(葡萄
糖·H20100g，NaN0310g，酵母膏粉5g，
K2HP04·3H201 g，MgS04·7H200．5g，蒸馏水
1000mL，用10％NaOH调pH至7．0后，再加入
琼脂粉10g)；液体培养基(葡萄糖·H：01 0g，
NaN0310g，酵母膏粉5g，K2HPO．·3HzO1 g，
MgSO。·7H200．5g，蒸馏水1000mL，用lO％的
NaOH调pH至7．0)。
1．4野生蓝麻黄的采集及其基因组DNA的制备：
野生蓝麻黄Ephedragl ucaRegel的采集及应用
CTAB法制备其基因组DNA的方法均按参考文献
的方法进行[1引。
1．5酵母菌膜的制备
1．5．1 以保护液为载体的菌膜制备[11‘：将酵母菌
斜面菌种接入YPD培养液中，置摇床230r／rain、
28～30℃培养12h。用保护液对酵母菌培养液进
行稀释。取浓度为1．0×107CFU／mL的菌体稀释
液0．1mL，用无菌玻璃刮铲均匀涂布于直径为90
mm的无菌平皿中央，无菌风吹干制成菌膜。
1．5．2以基因组DNA的TE缓冲液为载体的菌
膜制备：取28～30℃培养12h的酵母菌的斜面菌
种2环悬浮于质量浓度为400／-g／mL的麻黄基因
组DNA的TE缓冲液中，使菌体浓度达到1．0X
108CFU／mL，轻摇使菌体分散，取0．1mL用无菌
玻璃刮铲均匀涂布于直径为90mm的无菌平皿中
央，无菌风吹干制成菌膜。
1．6 酵母菌膜的离子注入[11。：将两种方法制备的菌
膜分别置于离子注入机小真空靶室的无菌靶台上，采
用能量15keV、剂量1．5×1016ions／cm2的N+在
1×10_3Pa真空状态下，以5S脉冲注入酵母菌菌
膜。以真空条件下未注入N+的酵母菌膜为对照。
1．7麻黄基因组DNA的导入及转化菌株的筛选：
离子注入结束后，立即用2mL质量浓度为400／Lg／
mL的蓝麻黄基因组DNA的TE缓冲液浸泡离子
注入后的菌膜，28～30℃静止温育2h后，用无菌
玻璃刮铲反复洗脱2min，获得洗脱液。取0．1mL
万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1229·
洗脱液用无菌玻璃刮铲均匀涂布于BTB平板培养
基，倒置，于28～30℃培养72h。筛选产蓝色指示
圈的菌落。未注入N+的酵母菌膜也按相同方法处
理，并以2mL无菌水代替麻黄基因组DNATE缓
冲液，浸泡离子注入后的菌膜为对照。
1．8重组酵母菌胞外和胞内麻黄碱的检测
将转化后在BTB指示性平板上生长的产生蓝
色指示圈的酵母菌菌落分别接人斜面，28～30℃
培养72h。从斜面分别转接人液体培养基，置摇床
230r／rain、28～30℃培养72h。
液体培养结束后，3500r／rain离心10min，收
集上清液，用于测定重组酵母菌胞外麻黄碱和伪麻
黄碱的量。收集菌体，蒸馏水洗涤离心3次，一20℃
预冻10min，置于研钵中，加入液氮，与石英沙共
研，蒸馏水洗至10mL离心管，4000r／min离心15
min，弃细胞碎片，收集上清液，用于测定重组酵母
菌的胞内麻黄碱和伪麻黄碱的量。同时，将平行实验
收集的细胞于105℃干燥至恒重，测定样品的细胞
干质量。
1．8．1麻黄碱和(或)伪麻黄碱的铜铬盐定性检识
方法[1纠：分别取上述上清液1mL，依次加入10．0％
CuSO‘·5H20试液0．1mL、40．ooANaOH试液
0．1mL、乙醚1．0mL，振摇后放置分层，记录乙醚
层和水层的颜色。
1．8．2麻黄碱和(或)伪麻黄碱的RP—HPLC定量
检测方法：Waters1525pump反相高压液相色谱
仪，UV2487双通道紫外检测器，检测波长(入)210
rim，Kromasil100—5C18色谱柱(150mm×4．6
ram)，Breeze3．30色谱工作站。流动相：0．02mol／L
KH2PO．一乙晴(95：5)；体积流量：1．2mL／min。每
次进样量10．0弘L。为了减少测试误差，在RP—
HPLC测试过程中，每隔3～5个测试样品，进行
1-2次标样测试。
2结果和分析
2．1 BTB平板培养基初步筛选：麻黄碱和伪麻黄
碱分子结构中的氮原子在侧链上，因此碱性较强，其
pKa值分别为9．58和9．74。指示剂BTB由黄色一
蓝色的pH范围为5．8～7．6。在BTB平板培养基
上，若重组酵母菌落周围出现黄色指示圈，意味着该
菌株可能具有麻黄碱和(或)伪麻黄碱的生物合成能
力，但不能分泌到胞外。若重组酵母菌落周围出现蓝
色指示圈，意味着该菌株能将胞内合成的麻黄碱和
(或)伪麻黄碱分泌到胞外。通过BTB指示性平板
初步筛选，共获得菌落周围呈蓝色的阳性转化子
463个(表1)，分别编号后，全部移接入斜面培养基。
真空条件下未注入N+的酵母菌，在导人麻黄基因组
DNA处理中，未获得阳性转化子。以2mL无菌水
代替麻黄基因组DNATE缓冲液，浸泡离子注入后
的菌膜为对照的处理中，也未获得阳性转化子。
表1不同制膜方法获得的转化子统计表
Table1 Statisticsofpo itiveyeastclonesobtainedusing
differentm thodsfcellfilmpreparation菌株——转化子／个
保护液制膜蓝麻黄基因组DNA的TE缓冲液制膜
2．2重组酵母菌产麻黄碱和(或)伪麻黄碱的定性
检识：根据各菌株培养液的铜铬盐定性检识结果，获
得了铜铬盐阳性反应的在转接培养6次后还稳定的
T。代重组酵母菌株9株，其中以酿酒酵母2．1882
为蓝麻黄基因组DNA大分子受体菌的1株(编号
0806)，以异常汉逊酵母2．340为受体菌的8株(编
号1016、1025、1159、1179、2010、3101、3140、3161)。
2．3重组酵母菌产麻黄碱和(或)伪麻黄碱的定量
检测：9株T。代重组酵母菌培养液的RP—HPLC测
试结果表明，编号0806、1016，2010和3161的4个
菌株只产生胞外麻黄碱，菌株1025和1179具有同
时产生胞外麻黄碱和伪麻黄碱的性能，而菌株3140
只产生胞外和胞内伪麻黄碱(表2)。重组酵母菌
1179T6代液体培养72h胞外RP—HPLC的色谱图
见图1。
表2重组酵母菌T。代72h胞外及胞内麻黄碱
和伪麻黄碱的产量
Table2 Yieldsof／-ephedrineord—pseudoephedrine
producedIn xcellularmediumand
IntracellularsolutionofT‘generation
recombinedyeastsculturedtor72h
⋯⋯ 胞外／(皿g·L-1) 胞内／(mg·g-i)
菌株绾号——————二二_————一———————二_———一
『．麻黄碱 士伪麻黄碱 J-麻黄碱 士伪麻黄碱
一：未检出
一；undetected
万方数据
·1230· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
l 2
7 8 9 10 7 8 9 10
t|min
A一对照品 &重组菌株1179T6代液体培养72h胞外
A—standards mplesB-extracellularso tionofstrain1179
culturedfor72hofT6generationyeasts
1一麻黄碱2一伪麻黄碱
1一ephedrine2-pseudoephedrine
图1 1179菌株T。代胞外RP—HPLC色谱图
Fig．1RP—HPLCAnalysisof／-ephedrineand—pseudo—
ephedrineproducedinextracellularsolutionof
strain1179ofT6generationrecombinedyeasts
2．4 氮离子注入介导麻黄基因组DNA在酵母菌
中的遗传转化效率和稳定性：9株T。代重组酵母菌
(表2)继续转代培养到T。。代，RP—HPLC定量检测
其产生麻黄碱和伪麻黄碱的性能仍然稳定。以麻黄
碱或伪麻黄碱为目标产物，计算得知N十注入介导蓝
麻黄基因组DNA在酿酒酵母2．1882中的遗传转
化率为1．15％，在异常汉逊酵母2．346中的遗传转
化率为2．13％。由于注入离子的质量沉积效应[6]，具
有生物活性的N+注入受体细胞后，是否参与了外源
DNA受体菌中含氮物质(包括麻黄碱、伪麻黄碱及
其生物合成前体芳香簇氨基酸)的生物合成，尚有待
进一步研究。
2．5麻黄基因组DNA大分子的完整性对其在酵
母菌中遗传转化的影响：本研究中，采用蓝麻黄基因
组DNA的TE缓冲液为载体制备菌膜，再进行N+
注入，这种方式仅获得1株编号为2010的遗传稳定
的产麻黄碱重组酵母菌，且胞外麻黄碱产量仅为
0．21mg／mL(表2)。这说明，N+注入使DNA大分
子随机断裂[1引，而这些DNA片段并未提高外源
DNA的转化率，由此推测控制麻黄碱生物合成的
多个基因是紧密连锁或成簇。因此，对于多基因或基
因簇控制的次生代谢产物或数量性状，在离子注入
介导转基因中，以结构完整的DNA大分子作为外
源基因供体，可获得较高的转化率。
3讨论
人们很难想象比微生物基因组大许多倍的药用
植物基因组DNA如何能在微生物中遗传转化?实
际上，人们只是期望药用植物基因组DNA中，与天
然药物或次生代谢产物生物合成相关的多个基因能
在微生物中遗传转化[2’1“。但当植物的某一次生代
谢产物或天然药物的生物合成途径及其相关基因均
为未知时，又如何能获得产生植物次生代谢产物的
微生物工程菌株?本研究为回答这个问题提供了一
条新的有效的途径。
作为一种新的外源DNA遗传转化手段，离子
注入介导转基因的最大特点是不需要事先知道或克
隆出目的DNA片段；而且转入的外源DNA是直
接整合入宿主总DNA中，具有较好的遗传稳定性。
因此，从理论上讲，无论人们是否清楚植物的某一次
生代谢产物或天然药物的生物合成途径，也无论是
否清楚相关的基因，都可采用离子注入介导外源
DNA大分子遗传转化技术，通过适当的筛选方法，
从而获得易于人工培养的产生植物次生代谢产物的
微生物工程菌株。
致谢：中国科学院离子束生物工程重点实验室
余增亮、吴李君研究员对本项工作的帮助；乔坤云、
周俊和冯婷进行RP—HPLC的分析测试工作；新疆
国际实业股份有限公司麻黄素事业部提供RP—
HPLC测试用麻黄碱和伪麻黄碱对照品。
参考文献：
[1]查丽杭，苏志国，张国政，等．麻黄资源的利用与研究开发
进展[J3．植物学通报，2002，19(4)；396—405．
[23CroteauR，KutehanTM，LewisNG．NaturalProducts
(SecondaryMetabolites)[M]．Rockville：AmericanSociety
ofPlantPhysiologists，2000．
[3]YamazakiK，TamakiT，UzawaS，eta1．Partiieipationof
C6七lunitinthebiosynthesisof phedrineinEphedraLI]．
Phytochemistry·1973，12：2877—2882·
[4]GunnarGS，SpenserI D．BiosynthesisofephedrineEJ]．J
AmChemSoc，1988，110(11)：3714·3715．
Is]SchmidtHL。WernerRA．EisenreichW．Systematicsof2H
patternsinnaturalcompoundsa itsimportanceforthe
elucidationofbiosyntheticpa hways[J]．尸hytochemistry，
2003，2：61—85．
[63YuZL．IntroductiontoIonBeamBiotechnology[M]．New
Yorkr SpringerPublishingHouse，2006．
[7]SongDJ，ChenRL，JunRC，eta1．Super—distant
molecularhyb idizationofplantseedsbyionbeam—mediated
genecluster口]．ProgNatSci，2001，11(7)：557—560．
[8]樊永红．毛培宏，金湘．离子束介导DNA大分子遗传转
化的研究FJ]．生物技术，2004，14(3)：65—67．
[93BurkeD，DawsonD，StearnsT．MethodsinYeastGenetics
[M]．NewYork：ColdSpringHarborLabPress，2000．
[】o]邵鹏柱，曹晖．中药分子鉴定[M]．上海：复旦大学出版
社，2004．
[11]陆新红，金湘，毛培宏．转基因受体酵母菌的低能氩离子
注入口]．生物技术。2005，15(z)：37—39．
[12]吴剑峰．天然药物化学[M]．北京：人民卫生出版社，2003．
[13]虞龙，余增亮．低能离子注入介导Vc前体(2一KLG)产生
菌DNA的转导[J]．核技术，2004．27(4)：264—268．
[14]RoDK，ParadiseEM．OuelletM，eta1．Productionof he
antimalariald ugprecursorartemisinicacidinengineered
yeast[J]．Nature，2006，440：940—943．
万方数据
氮离子注入介导麻黄基因组DNA转化酵母菌
作者： 吕杰， 金湘， 毛培宏， 凌海秋， 樊永红， 武宝山， 欧阳平凯
作者单位： 吕杰(新疆大学物理科学与技术学院离子柬生物技术中心,新疆乌鲁木齐,830008;南京工业大
学制药与生命科学学院,江苏南京,210009)， 金湘,毛培宏,凌海秋,樊永红,武宝山(新疆大
学物理科学与技术学院离子柬生物技术中心,新疆乌鲁木齐,830008)， 欧阳平凯(南京工业
大学制药与生命科学学院,江苏南京,210009)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(8)
被引用次数： 5次

参考文献(14条)
1.查丽杭;苏志国;张国政 麻黄资源的利用与研究开发进展[期刊论文]-植物学通报 2002(04)
2.Croteau R;Kutchan T M;Lewis N G Natural Products (Secondary Metabolites) 2000
3.Yamazaki K;Tamaki T;Uzawa S Partiicipation of C6-C1 unit in the biosynthesis of ephedrine in
Ephedra 1973
4.Gunnar G S;Spenser I D Biosynthesis of ephedrine 1988(11)
5.Schmidt H L;Wcrner R A;Eisenreich W Systematics of 2H patterns in natural compounds and its
importance for the elucidation of biosynthetic pathways 2003
6.Yu Z L Introduction to Ion Beam Biotechnology 2006
7.Song D J;Chen R L;Jun R C Super-distant molecular hybridization of plant seeds by ion beam-
mediated gene cluster[外文期刊] 2001(07)
8.樊永红;毛培宏;金湘 离子束介导DNA大分子遗传转化的研究[期刊论文]-生物技术 2004(03)
9.Burke D;Dawson D;Stearns T Methods in Yeast Genetics 2000
10.邵鹏柱;曹晖 中药分子鉴定 2004
11.陆新红;金湘;毛培宏 转基因受体酵母菌的低能氩离子注入[期刊论文]-生物技术 2005(02)
12.吴剑峰 天然药物化学 2003
13.虞龙;余增亮 低能离子注入介导Vc前体(2-KLG)产生菌DNA的转导[期刊论文]-核技术 2004(04)
14.Ro D K;Paradise E M;Ouellet M Production of the antimalarial drug precursor artemisinic acid in
engineered yeast[外文期刊] 2005

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引证文献(5条)
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2.凌海秋.金湘.毛培宏.吕杰.武宝山 重组酵母菌生物合成麻黄碱的特性及L-Phe对其合成的影响[期刊论文]-生物
技术 2010(4)
3.金湘.毛培宏.吕杰 离子注入介导甘草基因组DNA转化酵母菌[期刊论文]-中草药 2010(3)
4.凌海秋.毛培宏.金湘.吕杰.武宝山 微生物方法生产麻黄碱和伪麻黄碱的研究[期刊论文]-生物技术 2009(4)
5.吕杰.金湘.毛培宏 生物技术在薯蓣皂苷及其苷元生物合成中的应用[期刊论文]-生物技术 2009(4)


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