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Fingerprint of Radix Pseudostellariae by HPLC

太子参HPLC色谱指纹图谱研究



全 文 :中草祷 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·761·
表3
Table3
10批秦艽药材与共有模式的相似性
Resemblancebetw encommonpattern
andtenbatchesofG.macrophylla
批号 Cs Rs 批号 Cs Rs
1 0.9981 0.9984 6 0.9997 0.9997
2 0.9987 0.9984 7 0.9904 0.990
3 0.9974 0.9976 8 0.9953 0.9942
4 0.9993 0.9992 9 0.9982 0.9978
5 0.9990 0.9991 10 0.9991 0.9992
4讨论
4.1 参照《中国药典))2005年版[1]一部秦艽药材供
试品溶液的制备方法,在制备过程中主要考察了恒
温水浴加热回流提取与超声提取的差异、不同提取
时间、不同液料比、不同提取温度的差异,经正交试
验设计,最终确定了供试品溶液的制备方法。
4.2检测波长选择:通常作为一个色谱体系,从信
息理论的角度而言,其测定方法的优劣可用分析体
系中包含的化学组分所获得的精确度及总的分析效
率来表示[2]。本试验采用基于色谱峰面积、保留时间
与理论塔板数的互信息,最终选择信息量值最大的
222nm作为检测波长。
4.3根据10批秦艽供试品图谱的检测结果,标定
秦艽药材的共有指纹峰。以龙胆苦苷峰为内参照峰,
按照相对保留时间标定,共有18个共有指纹峰。考
虑到线性及精密性是外标法定量的基础,所以首先
对这些峰进行了线性及精密度的试验,从而排除在
定量准确性上存在问题的峰。最终筛选出线性试验
7中相关系数r>0.995且精密度试验中RSD<5%
的9个峰作最后的分析用。
4.4按照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求
(暂行)》[33对有规定的指纹峰分别做总结,结果可
知,无论是共有峰还是非共有峰的参数,各批样品均
基本能满足规定的要求。
4.5峰重叠率是两相相互比较样品_的各自峰数及
两者共有峰数的基础上,从质的角度上考虑其相关
性。本课题中10批秦艽药材色谱图的重叠率均在
80%以上,说明这10批秦艽药材有较好的相似性。
4.6 以上计算结果从质和量的角度表明,10批秦
艽药材相关性很好,各主要组分的量差异较小。进而
说明这10批秦艽药材制定的指纹图谱可用作青海
麻花秦艽药材的质量控制。
References:
[1]∞P(中国药典)ES].VolI.2005.
Ez]ZhangQ,ZhangXH,ChenJ M.Applicationof
chemometricsinthechoiceofthebestdetectionwavelength
ofthefingerprintsofFagopyrumtatariumGaertn.FJ].Chin
PharmI,(中国药学杂志),2003,38(6):419—422.
E33、TechnicalRequirementsoftheFingerprintResearchin
InjectingofChineseMateriaMedica(TentativeS ndard)
《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》[S].2001.
太子参HPL.C色谱指纹图谱研究
刘伟祥,胡海云,刘喜纯,段启
(广东康美药业股份有限公司技术研究中心,广东普宁 515300)
摘 要:目的 应用HPLC法建立太子参的指纹图谱,为太子参药材的质量控制提供依据。方法采用Dikma
KromasilIOOAC18色谱柱(250mm×4.6mm,5pm),以乙腈一水梯度洗脱,体积流量,0.8mL/min;检测波长203
nm,测定10批太子参药材的色谱图,确立标准指纹图谱。结果太子参药材有7个共有峰,并达到较好分离。该分
析方法具有很好的精密度、重现性和稳定性,各批次间共有峰的相对保留时间的RSD均小于1%,相对峰面积符合
指纹图谱相关要求。结论建立的HPLC指纹图谱法用于太子参药材的质量评价切实可行。
关键词:太子参药材;HPLC;梯度洗脱;指纹图谱
中图分类号:R282.7 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2007)05—0761一04
FingerprintofRadixPseudostellariaebyHPLC
LIUWei—xiang,HUHai—yun,LIUXi—chun,DUANQi
(CentreofResearchandDevelopment,GuangdongKangmeiPharmaceuticalGroupCo.,Ltd.,Puning515300,China)
Keywords:RadixPseudostellariae;HPLC;gradientelution;fingerprint
收稿日期:2006—08—11
万方数据
·762· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
指纹图谱质量控制技术是保证中药功效,实现
中药现代化的关键。控制中药饮片质量,首先要抓源
头,控制中药材的质量。太子参为《中国药典》收载的
常用补益中药,系石竹科植物孩儿参
Pseudostellariaheterophylla(Miq.)PaxexPaxet
Hoffm.的干燥块根,具有益气健脾、生津润肺之功
效,临床常用于脾虚体倦、食欲不振、病后虚弱、气阴
不足、自汗口渴、肺燥干咳等。太子参含有环肽类、三
萜皂苷类、多糖以及少量挥发性成分等;具有抗疲
劳、抗缺氧、抗应激、抗衰老等药理作用。太子参主产
于浙江、安徽、福建等地。参照“中药注射剂指纹图谱
实验研究的技术要求(暂行)的通知(2000)”要求,并
参考相关文献报道,对10批不同产地的太子参进行
了指纹图谱研究,应用中药色谱指纹图谱相似度评
价系统(2004A)(国家药典委员会),对其所有峰和
共有峰相似度进行评价。实验证明该方法简便、准
确、重现性好,结合药材中共有峰和所有峰的相似
度,可以为太子参的品质评价、质量控制、GAP实施
和发展道地药材提供有价值的资料。
1仪器与试药
1.1仪器:Agilent1100高效液柑氤澍!;c(包括:二元泵、在线蝴、蝴、DAD检溅器)。北京塞多陆酾目馓
公司SartoriusBS400S--WEI万分之一天平;色谱柱:
DikmaKromasilC18(250mm×4.6mm,5肛m)。
1.2试药:乙腈(美国Fisher公司,色谱纯),甲醇、
正丁醇均为分析纯(广州化学试剂厂)、乙醇(天津大
茂化学试剂厂,分析纯),水为超纯水。HPLC所有试
剂均经过0.45弘m微孔滤膜滤过。太子参样品见表
1(10批样品是专人到太子参道地和主产区采集,经
江西中医学院龚千锋教授鉴定为《中国药典》规定的
正品太子参)。
表1太子参样品来源
Table1 OriginofRadixPseudostellariaesamples
编号 样品 采集时间 窬号 样品 采集时间
S1 浙江缙云 2005—12—25s6福建宁德柘荣县山乡 2005—06—30
S2 浙江金华东阳 2005—06—25S7安徽郎溪县 2005—11-16
S3 浙江泰顺 2005—12—08s8安徽宣城黄渡乡 2005—12—01
s4 浙江苍南 2005—06—29s9江苏漂阳 2005—11—30
S5 福建拓荣县太 2005—06—29S10贵州施秉县 2005—03—09
子参市场 牛大厂镇
2方法与结果
2.1 色谱条件:色谱柱:DikmaKromasilC18(250
mm×4.6mm,5肚m);以乙腈为流动相A,以水为
流动相B,梯度洗脱程序为(A):o~25min:o%~
15%;25~40min:15%~16%;40~45min:16%~
25%;45~75min:25%~50%。体积流量:0.8mE/
min;柱温:25℃;进样量:10弘L,检测波长:203am。
2.2供试品溶液的制备:精密称取太子参样品(粗粉)
1.0g,加50%乙醇50mL,超声30min(300W),滤
过,滤液蒸于,残渣加水10mL溶解,用水饱和的正丁
醇30mL萃取,萃取液再用正丁醇饱和的水20mL洗
涤,正丁醇液蒸干,残渣用50%甲醇溶解,并定容至5
mL,摇匀。过0.45弘m微孔滤膜,即得。
2.3方法学考察
2.3.1精密度试验:取同一供试品溶液(编号1),
连续进样5次,测定HPLC色谱图,选择7个共有
峰进行比较,结果表明共有峰相对保留时间RSD为
0.017%~o.052%,共有峰的相似度均大于0.985,
表明仪器精密度良好。
2.3.2稳定性试验:取同一供试品溶液(编号1),
分别于0、2、4、8、24、36h检测,其共有峰相对保留
时间RSD为0.104%~0.261%。共有峰的相似度
均大于0.987,结果表明:供试品在36h内稳定。
2.3.3重现性试验:取同一批次的供试品5份(编
号1),按照2.2项供试品溶液的制备方法制备供试
品溶液,分别进样,测定其共有峰的相对保留时间的
RSD为0.028%~o.085%,共有峰的相似度均大于
0.988,表明重现性良好。
以上结果表明指纹图谱中各色谱峰的相对保留
时间和面积基本一致,相似度较高,符合指纹图谱研
究的技术要求。
2.4 太子参药材HPLC指纹图谱的建立:依照
2.1、2.2项下的条件和方法测定10批原药材的
HPLC图谱,根据所给出的相关参数,太子参原药材
的色谱峰在75min之内全部出现。共标示出7个特
征峰,从指纹图谱中可以看出1号峰(保留时间
17.287min)峰面积适中、峰形好、纯度高,故选其为
作参照峰。将各指纹峰保留时间与同一图谱中参照
物的保留时间比较,其比值为各指纹峰的相对保留
时间。计算10批药材指纹图谱中各指纹峰的相对保
留时间(表2,图1、2),rO批药材中各共有峰的相对
保留时间值的RSD均小于0.5%。
从10批太子参药材图谱可看出,不同产地样品差
别较大,S3(浙江泰顺)、S4(浙江苍南)、S5和S6(福建
柘荣)具有更大的相似度;S2(浙江金华)、S8(贵州施
秉)、S9(江苏溧阳)、SlO(安徽宣城)虽分布在4个省,
却有更多的共性;S1、S2、S3、S4虽产于浙江,但差异
比较明显,特别是50min以后的峰,基本不具有共性。
这可能与太子参生长环境等多种因素有关。综合以上
因素,将43min以内的7个峰定为共有峰。、
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·763·
10.87 21.73 32.60 43.46 54.33 65.19 76.06
tlmin
图1 10批太子参药材指纹图谱
Fig.1FingerprintoftebatchesofRadix
Pseudostellaritie
U·00 10.87 21·73 32·60.43·46 54-3365·19 76.05
f/rain
图2太子参药材对照指纹图谱
Fig.2ComparedfingerprintofRadrxPseudotellariae
3聚类分析
首先采用同一积分条件对10批药材图谱进行
相对峰面积数据处理,结果采用SPSSll.0统计软
件进行聚类分析,结果见图3。聚类结果显示:1、3、
4、5、6号样品归为一类;2、7、8、9、10号样品归为一
类。表明1、3、4、5、6号样品化学成分间的差异相对
较小,2、7、8、9、10号样品化学成分间的差异较小。
4讨论
4.1 在供试品溶液制备方法考察中,对提取条件
(溶媒、提取方法)及色谱条件(流动相、体积流量、进
样量)进行了单因素平行优选。不同溶媒(不同比例
甲醇、乙醇、水饱和正丁醇)中以50%甲醇和50%乙
醇提取物效果较好,但考虑到甲醇对人体危害较大,
故选用50%乙醇作为提取溶剂。对超声、回流、索氏
S3 3
S5 5
S6 6
S1 l
S4 4
S2 2
S9 9
S8 8
S7 7
S1010
图3聚类分析图
Fig.3Dendrogramofclusteranalyses
提取方法比较,结果3者图谱并无明显差异,但超声
处理较为方便、快速,故选用超声提取法,考察了
50%乙醇15、30、45min提取效果,分析比较后发现
30min提取效果为好。
4.2色谱条件的选择:(1)色谱柱的初步选择:考察
了Kromasil100AC】8、AgilentSB一18、Thermo0DS
hypersil,结果表明太子参样品色谱峰在Kromasil
100Ac,。色谱柱上有较好的分离效果,指纹图谱实
验选用KromasilIOOAC18柱。(2)流动相的考察:曾
试验了乙腈一水(梯度洗脱)、乙腈一磷酸(梯度洗脱)、
乙腈一冰醋酸(梯度洗脱)等条件,最终从液相图谱可
以看出所选的梯度条件分离效果最佳。(3)检测波长
的选择:经DAD全波长扫描得出在203nm下太子
参药材出峰数目较多,信息较丰富,故选择203nm
为测定波长。(4)柱温的选择:根据柱温在20、25、
30、35、40℃的色谱图进行比较,发现并无明显差
异,但因本实验室温度一直控制在25℃左右,故选
25oC。(5)进样量的选择:分别进样5、10、20肛L,但
由于太子参成分紫外吸收较弱,5pL峰面积太低,
进样20弘L除浙江苍南产地样品外其他产地色谱峰
均达到较好分离,进样10弘L时,所有产地样品色谱
峰达到了较好的分离,基本满足实验要求。为实验条
6
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万方数据
·764· 中草菊ChineseTraditionalandHerbaiDrugs第38卷第5期2007年5月
件的一致性,故选进样量为10弘L。
4.3在目前太子参活性成分或指标性化学成分尚
不明确的情况下,制定指纹图谱时,没有适宜的对照
品参照,故以供试品中峰面积适中、峰形好、纯度好、
较稳定的1号峰作为参照峰来标定其他各共有指纹
峰的相对保留时间。
4.4 目前指纹图谱已经成为国际公认的控制中药
或天然药物质量的最有效手段,以不同产地太子参
的相对保留时间作为对照模板,进行相似度计算,优
点是能较全面反映太子参药材的整体特征。如果利
甩道地药材的标准提取物建立标准图谱,则通过待
测样品与标准图谱相似度的比较,有可能判断样品
的品种,这也是今后进一步研究的目标[1]。总之,中
药指纹图谱技术对提高中药质量控制的科技含量,
提高中药工业整体水平,实现中药走向世界,具有非
常重要的现实意义[2]。
References:
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ginsenosidesinPanaxquinquefoiumL.byHPLCandstudy
ontheirfingerprintsanalysisCJ].FoodSci(食品科学),
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ofLigusticumch angxiongandcomparitsonofproducing
areas(1)EJ].JNanjingU ivTraditChinMed(南京中医
药大学学报),2002,18(3):172—173.
国产11种蒿属药用植物种子微形态特征研究
贺学礼1’孙,孙会忠3
(1.河北大学生命科学学院,河北保定071002,2.西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712t00;
3.河南科技大学农学院,河南洛阳471003)
摘 要:目的 为了积累蒿属(ArtemisiaL.)植物种子微形态特征方面的分类学资料,以探讨和解决其分类学中的一些
问题。方法对其11种植物的种子进行了光学显微镜(LM)和扫描电子显微镜(SEM)下的比较观察研究,其电镜资料
为首次报道。结果种子微形态特征具有一致性,种子形态为长椭圆、倒卵形至矩圆形;颜色为灰褐色至黑色;表面纹饰
以脑纹状、纵条纹一网状和搓板状梯形为主。在大小、颜色、表面纹饰的次级结构等方面仍存在种间特异性。结论蒿属11
种植物的种子微形态特征存在细微的种间差异,对该属植物的系统分类具有一定参考价值。
关键词:蒿属;扫描电子显微镜;种子微形态特征
中图分类号:R282.7 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2007)05—0764一03
MicrostructurecharacteristicsofseedfromIIplantsofArtemisiaL. nChina
HEXue—lil一。SUNHui—zhon93
(1.CollegeofLifeScience,HebeiUniversity,Baoding071002,China;2.CollegeofLifeScience,Northwest
Sci—TechUniversityofAgricultureandForestry,Yangling712100,China}3.College
ofAgronomy,HenanSci—TechUniversity,Luoyang471003,China)
Keywords:ArtemisiaL.; canningelectronmicroscope(SEM);microstructurecharacteristics
ofseed
蒿属(ArtemisiaL.)隶属于菊科(Compositae)
春黄菊族(AnthemideaeL.),为一、二年生或多年生
草本,少数为半灌木或小灌木,全世界300余种,我
国约有200种,各省均有分布。该属植物在医药上多
有清热解毒、抗菌消炎、祛风除湿、通经活络、活血、
止血等功效[1]。自从20世纪70年代中国科学家从
黄花蒿A.annuaL.(惯称青蒿)中提取出具有抗疟
成分青蒿素(artemisinin),掀起了世界医药学界对
蒿属植物药用价值开发的研究高潮,称为天然药物
研究的一个热点领域[2]。目前人们对青蒿素及其衍
生物在抗疟作用、抗疟作用原理、抗肿瘤以及其他方
面都取得了可喜的成就[3~5]。2005年11月在广州举
行了题为“国际菊科艾蒿类植物系统演化与资源利
用”的研讨会,凸显了学界和医药界对蒿类植物开发
收稿日期:2006—09—19
基金项目:国家自然科学基金项目(30470133)
作者简介:孙会忠(1976一),博士研究生,主要从事植物系统学和植物资源学研究。
*通讯作者贺学礼E—mail:xuelhl256@yahoo,tom.en
万方数据
太子参HPLC色谱指纹图谱研究
作者: 刘伟祥, 胡海云, 刘喜纯, 段启, LIU Wei-xiang, HU Hai-yun, LIU Xi-chun,
DUAN Qi
作者单位: 广东康美药业股份有限公司,技术研究中心,广东,普宁,515300
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2007,38(5)
被引用次数: 3次

参考文献(2条)
1.Chen J H;Xie M Y;Wang H Q Determination of ginsenosides in Panax quinquefoium L.by HPLC and study
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本文读者也读过(10条)
1. 唐宝莲.辛绍祺.蔡宝昌.刘训红.陈斌 太子参HPLC指纹图谱的初步研究[期刊论文]-南京中医药大学学报(自然
科学版)2005,21(3)
2. 刘训红.居文政.蔡宝昌.黄明辉.LIU Xun-hong.JU Wen-zhen.CAI Bao-chang.HUANG Ming-hui 太子参HPLC-MS指
纹图谱的初步研究[期刊论文]-中成药2008,30(2)
3. 韩超.陈军辉.刘劼.王小如.黎先春.Han Chao.Chen Junhui.Liu Jie.Wang Xiaoru.Frank Sen-Chun Lee 高效液
相色谱/电喷雾飞行时间质谱分析太子参中环肽类化合物[期刊论文]-分析化学2006,34(12)
4. 宋建平.曾艳萍.刘训红.唐旭倩 不同产地太子参HPLC指纹图谱分析[期刊论文]-江苏中医药2008,40(10)
5. 王文凯.贾静.丁仁伟 中药太子参近年研究概况[会议论文]-2010
6. 刘训红.王媚.蔡宝昌.王玉玺.林新艳.LIU Xun-hong.WANG Mei.CAI Bao-chang.WANG Yu-xi.LIN Xin-yan 太子
参GC-MS指纹图谱的初步研究[期刊论文]-中草药2007,38(1)
7. 刘训红.李伟东.蔡宝昌.黄明辉 太子参的毛细管电泳指纹图谱研究[期刊论文]-南京中医药大学学报(自然科学
版)2007,23(4)
8. 李滢.杨秀伟.LI Ying.YANG Xiu-wei 太子参(柘参1号)的化学成分[期刊论文]-中国中药杂志2008,33(20)
9. 洪庆祥.潘承 中西医结合治疗老年心律失常40例临床疗效观察[会议论文]-2007
10. 李媛媛 山药:低脂进补珍品[期刊论文]-家庭医学(新健康)2005(5)

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2.张礼菊 色谱指纹图谱在中药质量标准体系中的应用[期刊论文]-安徽医药 2009(11)
3.彭华胜.刘文哲.胡正海 太子参的生物学与化学成分的研究进展[期刊论文]-中草药 2008(3)


本文链接:http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200705045.aspx