全 文 ：·1500· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月
白英抗肿瘤成分提取工艺的研究
韩 重1，黄 霁1，何 珉2，董春娇1，王敏伟1，孙立新p
(1．沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳1]0016；2．大连长白山医药有限公司，辽宁大连116021)
摘要：目的探讨白英抗肿瘤成分提取工艺的最佳工艺条件。方法采用L。(3‘)正交设计法，分别以浸膏率、半
数有效抑制浓度(IC50)和薯蓣皂苷元的质量分数为考察指标，对白英提取工艺条件进行筛选。结果以浸膏率为考
察指标时，其优选工艺为AzB。Ca，其中提取次数对浸膏率有显著性影响；以Icso为i考察指标时，其优选工艺为
AaBaC。；以薯蓣皂苷元的质量分数为考察指标时，其优选工艺为A：BzC。。综合考察采用50％的乙醇，提取3次，每
次1h为最佳工艺条件。结论本实验所采用的方法适合自英抗肿瘤成分的提取。
关键词：白英；正交设计；提取工艺
中图分类号：R284．2；R286．02；R286．91文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)10一1500一03
Extractingtechnologyforanti—tumorcomponentsinSolanumlyratum
HANZhon91，HUANGjil，HEMin2，DONGChun—jia01，WANGMin—weil，SUNLi—xinl。
(1．CollegeofPharmacy，ShenyangP arm ceuticalUniversity，Shenyang110016，China；2．DalianChangbaishan
PharmaceuticalCo．，Ltd．，Dalian116021，China)
Keywords：Solanuml：yratumThunb．；orthogonaldesign；extractingtechnology
白英为茄科植物白英Solanumlyratum
Thunb．的干燥全草，具有清热解毒、祛风化痰、祛
风除湿等功效。白英中主要化学成分有甾体皂苷类、
甾体生物碱类等，临床上多用于治疗肺癌、胃癌、肝
癌、胰腺癌、乳腺癌等多种癌症，但白英的提取工艺
研究尚未见报道。本实验通过正交试验优选出白英
抗肿瘤活性成分的最佳提取工艺条件，为其进一步
开发利用提供实验依据。
l 实验材料
旋转蒸发器RE一52AA(上海亚荣仪器厂)；
F039003型酶标定量测试仪(奥地利TECAN公
司)；NU一4750型CO。培养箱(美国)；四甲基偶氮
唑盐(MTT)(美国Amresco产品)；RPMI一
1640MEDIUM(HyClone，AMCl5824)，胎牛血清
(北京元亨圣马生物技术研究所，050902)；Shi—
madzuSLC一6A高效液相色谱仪、日本岛津SPD一
6AV紫外检测器、ANSTAR色谱工作站；薯蓣皂苷
元对照品(中国药品生物制品检定所)；其他试剂均
为分析纯。
白英饮片购于上海市徐汇中药饮片厂，由沈阳
药科大学孙启时教授鉴定。人宫颈癌HeLa细胞由
本实验室传代保种。
2方法与结果
2．1 因素水平的选择m：影响白英提取的主要因素
有乙醇体积分数、提取时间、提取次数，故选用3个
因素，每个因素选择3个水平进行试验，以优选出最
佳工艺，因素水平安排见表1。
表1因素水平
Table1 Factorsandlevels
2．2 浸膏得率的测定：将50g药材加入对应量的
乙醇体积分数浸泡过夜，然后加热至沸腾并保持微
沸，提取时间从沸腾开始计时。提取结束后，合并各
滤液，减压浓缩，冷冻干燥，记录干浸膏质量，计算干
浸膏得率。
2．3 半数抑制浓度(IC。。)的测定：收集对数生长期
的HeLa细胞，PBS洗涤后，RPMI一1640培养基重
悬细胞，调整细胞浓度5×104／mL，加于96孑L板，每
孔100肛L，埋板12h后加药。实验孔每孔加不同质
量浓度白英提取液各100肛L(终质量浓度分别为
24、12、6、3、1．5mg／mL)，阳性对照孔加p一榄香烯
收稿日期：2006—02—08
基金项目：沈阳市科技局攻关项目(1032041—3—09)
作者简介：韩重(1981一)·，女，海南文昌人，在读硕士，研究方向为抗肿瘤中药的新药开发研究。E—mail：hanzhon966k@126．tom
*通讯作者孙立新Tel：(024)23986281Fax：(024)23915428E—mail：six04@163．corn
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月·15 1·
100弘L(终浓度为300gmol／L)，阴性对照孔加100
”LRPMI一1640培养基，每个浓度设3个复孔，于
37℃、5％C0。饱湿条件下培养48h后，小心吸弃
孔内培养上清液，每孑L以PBS洗1次，再将上清液
吸弃。每孔加完全RPMI一1640培养液100弘L，MTT
液10肛L，37℃、5％C02饱湿，继续孵育4h后中止
培养，小心吸．弃孔内培养上清液。每孑L加入150v．L
DMSO，振荡10min，使结晶物充分溶解，酶标仪
492nm处测吸光度(A)值。按照生长抑制率一[(正
常对照组A值一用药组A值)／正常对照组A
值]×100％计算。NOSA2．30软件BLiss法计算
IC50。
2．4薯蓣皂苷元的测定
2．4．1色谱条件：色谱柱：ApolloC。8柱(250mm×
4．6mm，5肛m)；流动相：乙腈一水(94：6)；体积流
量：1．0mL／min；检测波长：210nm；柱温：室温。
2．4．2对照品溶液的制备：取薯蓣皂苷元对照品约
。10mg，精密称定，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并
稀释至刻度，摇匀即得。
2．4．3供试品溶液的制备：称取正交试验中各个提
取物干浸膏约80mg，精密称定，加50mL2mol／L
HCl加热回流2．5h，冷却，用30mL氯仿分3次回
流萃取，每次15min。合并氯仿萃取液，水浴蒸干溶
剂，残渣用甲醇溶解并定容到10mL，经0．45弘m微
孔滤膜滤过，即得。
2．4．4标准曲线的制备：分别精密吸取薯蓣皂苷元
对照品溶液0．4、0．8、1．2、1．6、2．0mL，置10mL
量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取20
肚L，注入色谱仪。以薯蓣皂苷元的峰面积(A)为纵坐
标，质量浓度(C)为横坐标作标准曲线，得回归方程
A=5．0×106C一2．0×104(尺2=0．9995)，表明薯
蓣皂苷元在0．04～0．2mg／mL与峰面积呈良好线
性关系。
2．4．5样品测定：取供试品溶液，每次吸取20弘L，
重复3次，注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积，
将各样品测定的峰面积代入标准曲线的回归方程，
计算相应薯蓣皂苷元质量分数。
2．5统计方法：采用SPSSll．5软件正交设计分析
方法。
2．6试验结果：正交试验结果见表2，方差分析见
表3。
以浸膏率为考察指标，极差值显示，各因素作用
主次为B>C>A；方差分析结果表明：B因素对浸
膏率有显著的影响(P
标，极差值显示，各因素作用主次为C>B>A；方差
分析结果表明：A、B、C因素的影响均无显著性意义
(P>0．05)，以A。B。C。为佳；以薯蓣皂苷元为考察
指标，极差值显示，各因素作用主次为B>C>A；方
差分析结果表明：A、B、C因素的影响均无显著性意
义(P>0．05)，以A：B：C，为佳。综合上述3项考察
指标；优化水平组合应为A。B。C。，即50％乙醇，提取
3次，每次1h。在3个因素中只有B因素对考察指
标有显著性影响，因此选择B。，由于A和C因素对
考察指标无显著性影响，从节能消耗方面考虑选A：
而不选A。，从提取周期方面考虑选C，而不选C。。
表2 L，(34)正交试验设计和结果
Table2 DesignandresultofL·(34)orthogonaltest
方差来源 离差平方和自由度 均方 F值 P值
F0．05(2，2)一19．00
万方数据
·1502· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月
2．7 提取工艺的验证：用选定正交试验的优化工艺
作了3次平行验证，结果平均浸膏率为12．86％，
IC。。为5．23rag／mE薯蓣皂苷元的质量分数为
1．29％，表明该工艺稳定、可行、重现性好。
3讨论
本实验以lC。。作为提取工艺考察的指标之一，
从药效学方面考察工艺的合理性，更直观、更全面地
反映结果的可靠性。
近些年来已有许多学者报道薯蓣皂苷元有抗肿
瘤活性[2m“，本课题研究已证明白英中含有薯蓣皂
苷元，因此本实验选用薯蓣皂苷元为另一指标，从质
量控制方面考察提取工艺的合理性。
从实验结果可以看出，在6号试验中，IC。。为
5．84mg／mL，薯蓣皂苷元质量分数为1．77％均为
各列之首，提示1C∞与薯蓣皂苷元可能是有相关性
的，即薯蓣皂苷元质量分数越高，IC。。的值越小，体
外细胞增殖抑制作用越强。
References：
EI]ShiYP，WangH．Studyontheprocessforextracting
flavonoidsfromHypericumperJoractumL．byorthogonaltest
[J]．NatProdResDev(天然产物研究与开发)，2005，17
(3)：325—327．
[2]Hon．gzQ，LinJH．Antitumoractivityofdiosgenininvitro
[J]．JFujianCoil7raditChinMed(福建中医学院学报)，
2005，15(4)：37—39．‘
[3]WangI。J，WangY，ChenSW，eta1．Theantitumoractivity
ofdiosgenini v voandinvitroD]．ChinaJChinMaterMed
(中国中药杂志)，2002，27(10)：60—62．
[43ChenSW，WangY，SunCJ，eta1．Effectofdiosgeninontu—
motgrowthofnudemicebearinghumangastriceailcer[J]。J
JilinUniv：MdSci(吉林大学学报：医学版)，2003，29(2)：
26．27．
大孔吸附树脂纯化丹参总酚酸的工艺研究
房信胜1，谭晓梅2，王建华1
(1．山东农业大学农学院，山东泰安271018；2．南方医科大学中药新药研究重点实验室，广东广州510515)
丹参为唇型科植物丹参Salviamiltiorrhiza
Bunge的干燥根及根茎，活血调经、凉血消痈、安神，
在临床得到了广泛应用，并且是许多制剂的原料。其
中的酚酸类成分是水溶性主要有效部位，具有明显
的抑制血小板聚集、抗凝、溶纤及抗脂质过氧化的作
用[1]，是丹参活血化瘀的主要活性成分。该类化合物
主要有原儿茶醛、原儿茶酸、丹参素、丹酚酸A，B，
C、迷迭香酸等[2~4]。以往的精制主要采用水提醇沉
法，总酚酸的量低；也有报道用大孔树脂分离丹参中
的水溶性成分[5]，但只是用原儿茶醛和丹参素为指
标，缺乏对总成分和分离条件的系统研究。本实验采
用大孑L吸附树脂纯化该有效部位，并研究分离的工
艺条件和参数。
l仪器、材料和试剂
HP一8453紫外一可见分光光度计(美国惠普公
司)；HP一1100高效液相色谱仪(美国惠普公司)，
G1315A紫外一可见光二级管阵列检测器。
丹参药材购自广东省药材公司，产地四川中江，
由本系刘传明讲师鉴定为唇形科植物丹参S．milti—
orrhizaBunge的根；原儿茶醛对照品(中国药品生
物制品检定所，批号110810-200205)；大孑L吸附树
脂(南开大学和成树脂厂，均为药用型)。
无水乙醇、乙醚、冰醋酸、95％乙醇均为分析纯，
甲醇(分析纯，色谱纯)，蒸馏水(超纯水)。
2方法与结果
2．1丹参总酚酸的测定
2．1．1标准曲线的绘制：精密称取干燥至恒重的原
儿茶醛对照品16．08mg，用无水乙醇配成128．6
弘g／mL的对照品溶液。分别吸取对照品溶液0．2、
0．4、0．6、0．8、1．0、1．2mI。于10mL量瓶中，无水
乙醇定容，随行溶剂做空白，用紫外一可见分光光度
计于281nm依次测定吸光度，以质量浓度(C)为纵
坐标，吸光度(A)为横坐标绘制标准曲线。结果标准
曲线C=0．26842+13．855A，r=0．9995，线性范
围为2．6～15弘g／mL。
2．1．2样品测定：吸取样品液适量，用乙醚萃取4
次，萃取液水浴挥干乙醚，加无水乙醇溶解，滤过，定
容，作为待测液，取待测液适量，用无水乙醇稀释至
合适质量浓度后按标准曲线的绘制项下方法测定．，
计算总酚酸的量。
收稿日期：2005—12-14
作者简介：房信胜(1974一)，男，山东莱芜市人，硕士，主要从事中药药剂学教学及中药制剂开发和质量控制研究。
Tel：(0538)8248073E—mail：xinshf@126．corn
万方数据
白英抗肿瘤成分提取工艺的研究
作者： 韩重， 黄霁， 何珉， 董春娇， 王敏伟， 孙立新， HAN Zhong， HUANG Ji， HE Min，
DONG Chun-jiao， WANG Min-wei， SUN Li-xin
作者单位： 韩重,黄霁,董春娇,王敏伟,孙立新,HAN Zhong,HUANG Ji,DONG Chun-jiao,WANG Min-
wei,SUN Li-xin(沈阳药科大学药学院,辽宁,沈阳,110016)， 何珉,HE Min(大连长白山医药
有限公司,辽宁,大连,116021)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(10)
被引用次数： 5次
参考文献(4条)
1.Shi Y P;Wang H Study on the process for extraeting flavonoids from Hypericum perfbractum L.by
orthogonal test 2005(03)
2.Hong Z Q;Lin J H Antitumor acttvity of diosgenin in vitro[期刊论文]-福建中医学院学报 2005(04)
3.Wang L J;Wang Y;Chen S W The antitumor activity of diosgenin in vivo and in vitro[期刊论文]-中国中
药杂志 2002(10)
4.Chen S W;Wang Y;Sun C J Effect of diosgenin on tumor growth of nude mice bearing human gastric
cancer 2003(02)
引证文献(5条)
1.杨红英.孙长山.马龄.顾广才.齐伟.孙立新 RP-HPLC-ELSD法同时测定白英中蜀羊泉次碱、薯蓣皂苷元和氢化勒帕
茄次碱[期刊论文]-中草药 2010(3)
2.宋敏.王翔林.孙立新 不同来源白英乙醇提取物抗肿瘤活性比较[期刊论文]-实用药物与临床 2011(3)
3.陈焕朝.甘宁.姚品芳.李劲.李广灿.胡志萍 白龙灵沙汤提取物对A549人肺癌细胞凋亡的影响[期刊论文]-肿瘤防
治研究 2009(8)
4.张秀云 抗肿瘤中药有效部位及化学成分研究进展[期刊论文]-科技视界 2012(7)
5.万春霞 白英抗肿瘤研究进展[期刊论文]-江西中医药 2010(12)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200610020.aspx