全 文 ：·1252· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
的效果。该方法数据处理过程简便快速，在定性对比
多张色谱指纹图谱时具有优势，且与药材的道地性
和生药学鉴定结果相结合，为药材质量的评价提供
了更可靠的依据。
4．5指纹图谱中蕴藏了很多特征的指纹信息，这些
特征信息在中药的质量控制中将起着重要作用。为
了阐明指纹图谱的内在本质，挖掘其中的特征指纹
信息，本文利用GC／MS对28个样品进行了分析，
确定了共有的19个特征指纹峰，并对样品中峰强度
较高的特征峰进行了质谱鉴定，确定了其化学成分，
为柴胡GC指纹图谱的分析比较提供了更全面的信
息，为进一步的谱效结合研究奠定了基础。
4．6气相色谱与质谱的联用为指纹图谱中各峰的
归属提供了强有力的支持，但在组分复杂，成分较多
(如芳香性植物药的挥发油)的情况下，色谱条件即
使尽量优化也难以保证各个成分都得到良好的分
离，峰的重叠和包埋往往影响到化学归属的准确。作
为指纹图谱判断，不必要求“一步到位”，对潜在的化
学归属的不准确性可以“模糊”对待，即能构成指纹
特征即可，直至将来这种“模糊”被明朗，并对判断产
生了关键性影响。
4．7实验结果显示，气相色谱分离化合物有着很高
的效率，质谱检测器可以提供更多的化合物的信息，
提高指纹图谱的可信度，是FID检测器较好的补
充。两者联用为药材的分析提供了全面可靠的依据，
是指纹图谱研究必要的手段。
致谢：河北医科大学药学院生药学教研室聂凤裢教
授和邯郸市药品检验所孔增科主任药师帮助鉴定药
材样品。
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马钱子药材HPLC指纹图谱的研究
王月辉，乔斌，蒋建兰。，元英进
(天津大学化工学院制药工程系，天津300072)
摘要：目的建立马钱子药材的HPLC指纹图谱分析方法，为马钱子的质量控制提供新方法。方法以甲醇一水一
浓盐酸(50；50：1)为提取溶剂，超声波震荡30min，制备马钱子药材样品溶液；采用RP-HPLC(DAD)法，选用
KromasilKRl00—5C18色谱柱(250mm×4．6mm，5pm)，体积流量1．0mL／min，检测波长254nm，流动相为乙腈
(B)一0．2％三乙胺一0．2％乙酸水溶液(A)，线性梯度洗脱：0min时8％：92％，30min时17％：83％，60min时
60％：40％。结果对10批马钱子药材进行测定，以士的宁为参照物，确定了马钱子药材指纹图谱中的12个共有
峰；通过方法学考察，精密度、稳定性、重现性试验RSD均小于3％；采用相似度作为指纹图谱的评判参数，计算了
不同批次与对照指纹图谱之间的相似度，均大于0．9，表明10批药材质量均一、稳定。结论该方法适用于马钱子
药材的质量控制。
关键词：马钱子；指纹图谱；HPLC；质量控制
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)08—1252—04
HPLCFingerprintofSemenStrychni
WANGYue—hui，QIAOBin，JIANGJian—lan，YUANYing—jin
(DepartmentofPharmaceuticalEngineering，SchoolofChemicalEngineeringandTechnology，
TianjinUniversity，Tianjin300072，China)
Keywords：SemenStrychni；fingerprint；HPLC；qualitycontrol
收稿日期：2005—12-12
作者简介：王月辉(1980一)，女，天津人，硕士研究生，主要研究方向为中药指纹图谱研究。
*通讯作者蒋建兰Tel：(022)27400388E—mail：jian90202@126．corn
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1253·
马钱子为马钱子科植物马钱Strychnos以“z—
vomicaL．或云南马钱S．pierranaA．W．Hill的
干燥成熟种子，其主要成分为生物碱[1]。马钱子味
苦、性寒，有毒。归肝、脾经，具有散热消瘀、消肿利
咽、消癌化痞、通痹止痛、接骨续伤、清热解毒的功
效。临床上主要用于治疗各种风湿病，疗效卓越，为
历代医家所推崇。近年来，随着对马钱子作用的认识
越来越深，马钱子的应用也越来越广，用于诸多系统
的各种疾病，并取得良好的效果[2]。《中国药典}2005
年版一部对马钱子的质量控制是采用HPLC法测
定其中马钱子碱和士的宁的量[3]。众所周知，单一指
标性成分的量测定往往难以反映中药整体质量，而
指纹图谱具有整体性特点，能较全面反映中药品质，
现已成为中药质量评价和控制研究的热点之一[4]。
wH0、FDA、英国草药典等均接受色谱指纹图谱的
质控方法[5]。目前HPLC是最基本、最适合绘制指
纹图谱，用途最广的一种方法[6]。所以本研究采用
RP—HPLC方法建立了马钱子药材的指纹图谱，为
从整体上控制马钱子药材质量提供了科学依据。
1仪器与试药
FinniganSurveyor型高效液相色谱仪，配置四
元梯度泵、自动进样器、柱温箱、DAD检测器，
Xealibur色谱工作站；甲醇、乙腈均为色谱纯，冰醋
酸、浓盐酸、浓氨水、三乙胺均为分析纯；马钱子碱对
照品购自中国药品生物制品检定所，批号：0706—
200104；士的宁对照品购自中国药品生物制品检定
所，批号：11070—200306；10批马钱子药材样品由越
南进口，其来源见表1。采用《中国药典2(2005年版
一部)方法，经李霞老师鉴定为马钱子科植物马钱
S．nU,T—vomicaL．的干燥成熟种子。
表1马钱子样品来源
Table1 SourceofSemenStrychnisamples
2方法与结果
2．1色谱条件的选择
2．1．1 流动相：分别比较了甲醇一水、乙腈一水、甲醇一
水一三乙胺、乙腈一水一三乙胺、甲醇一水一乙酸一三乙胺、
乙腈一水一醋酸一三乙胺，等度洗脱和梯度洗脱的效果，
结果表明乙腈一水一乙酸一三乙胺梯度洗脱分离效果较
好，色谱峰较多，保留时间适中。采用乙腈(B)：0．2oA
三乙胺一0．2％醋酸(A)线性梯度洗脱：0min时8％：
92％，30rain时17％：83％，60rain时60％：
40％。体积流量：1．0mL／min；柱温：30℃。
2．1．2色谱柱：分别比较了KromasilKRl00—5C。8
柱(250mm×4．6mm，5弘m)；依利特SinoChrom
oDS—BP(250mm×4．6mm，5pm)；Thermo
ODS一2HYPERSIL(250mm×4．6mm，5肛m)色
谱柱，其中以KromasilKRl00—5C。。色谱柱所得图
谱色谱峰最多，分离度最好。故选用Kromasil
KRl00—5C。。色谱柱。
2．1．3检测波长：采用二极管阵列检测器对检测波
长进行了考察，分别提取在220、254、275nm波长
处的色谱图，结果在254am处各色谱峰均有较好
的紫外吸收，色谱信息最为丰富，并且生物碱类化合
物在此波长下大多有吸收，因此，选择该波长作为检
测波长。
2．2供试品溶液的制备
2．2．1提取溶剂的考察：分别比较了甲醇一浓氨水
(20：3)、浓氨水一氯仿(4：46)、甲醇一水(50：50)、
甲醇一水一浓盐酸(50：50：1)对马钱子药材的提取
效果。取马钱子药材4份，每份1．35g，分别加入50
mL的不同溶剂，超声提取30rain，提取液滤过。用
HPLC法测定马钱子碱和士的宁的量并对指纹图谱
进行考察。结果表明甲醇一水一浓盐酸(50：50：1)提
取溶液中马钱子碱和士的宁的量较高，指纹图谱中
色谱峰最多。
2．2．2提取方式的考察：分别比较了超声提取30
rain和室温放置24h对马钱子药材的提取效果。取
马钱子药材2份，每份1．35g，分别加入甲醇一水一浓
盐酸(50：50：1)50mL，在不同方式下提取，提取
液滤过，采用HPLC法测定马钱子碱和士的宁的量
并对指纹图谱进行考察。结果表明超声提取30rain
溶液中士的宁和马钱子碱的量较高，指纹图谱中色
谱峰较多。根据以上试验结果，最终确定以甲醇一水一
浓盐酸(50：50：1)为提取溶剂，超声提取30rain。
2．2．3供试品溶液的制备：取本品粉末1．5g，精密
称定，置具塞容量瓶中，加甲醇一水一浓盐酸(50：
50：1)50mL，超声提取30rain，冷却后补足损失
质量，取上清液用0．45tzm微孑L滤膜滤过，作为供
试品溶液。
2．3参照物溶液的制备：分别取真空干燥3h的马
万方数据
．1254· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
钱子碱和士的宁对照品适量，精密称定，加甲醇超声
溶解分别制成0．26和0．24mg／mL的参照物溶液，
按一定比例混合后进样测定。
2．4指纹图谱测定：在上述确定的色谱条件下，进
样10肛L，记录60min的色谱图。对10批不同马钱
子药材进行了测定，通过比较不同样品色谱峰，确定
了12个共有峰，见图1和2，其中S峰为士的宁的
吸收峰，7号峰为马钱子碱的吸收峰。相对保留时间
和峰面积见表2和3。
。 y302—1
．，l ， l A，
．I． ．．I 、—k—。。——^—LL。．忆』一1．．一竺!：!
L 。．I ．。 ^JLL．k JI L 。y302。3
I． ．．1 、—k—。。————LJL 一帆．JI． ^ 一翌!!：!
L J．j ． ^ALL帆．几t y302—5
．L“J．。． ^』Ll，hIJL I
y302—6
1- ．。lk·一 ^』 L_ 小，l l y302。7
．1．。_L。 h』LL一．1 t y3睁8
L “6．I． ^-JbL～．从．上t 即02咱
。． 8 『 y302-10LI。—。．1．． ^Lk。
O 30 40 50 60
，／min
图l lO批马钱子药材HPLC指纹图谱
Fig．1HPLCFingerprintsoftenbatches
ofSemenStrychni
O 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
，／rain
图2马钱子药材指纹图谱
Fig．2FingerprintofSemenStrychni
2．5方法学考察
2．5．1精密度试验：精密吸取马钱子样品y302—1
供试品溶液10弘L，连续进样5次，记录色谱图，计
算各峰相对保留时间、相对峰面积及RSD。结果表
明共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值
分别在0．081％～1．764％和0．750％～2．654oA，均
小于3％，符合指纹图谱技术要求。
2．5．2稳定性试验：精密吸取马钱子样品y302—1供
试品溶液10弘L，每3h进样一次，连续进样5次，记
录色谱图，计算各峰相对保留时间、相对峰面积及其
RSD。结果表明共有峰的相对保留时间和相对峰面积
的RSD值分别在0．158％～1．507％和0．662％～
2．222％，均小于3％，表明供试品在12h内稳定。
表2 10批马钱子药材指纹图谱共有峰的相对保留时间
Table2 RelativeretentionmeofcommonpeaksforfingerprintsoftenbatchesofSemenStrychni
相对保留时间
卅县—————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————一⋯
峰1 峰2 峰3 峰4 峰5 峰6 峰7 峰8 峰9 峰10 峰11 峰12
y302-1O．403 O．441 O．535 O．842 O．931
1．000 1．101 1．248 1．278 1．301 1．442 1．772
v302—2 0．401 0．444 0．532 0．8430．932 I．000 1．096 1．251
1-2791·302 1·4441·769
。302—3 0．399 0．442 0．530 0．840 0．931 1．000 1．102 1．249 1．278 1．301 1·441 1·770
v302—4 0．407 0．439 0．536 0．841 0．934 1．000 1．098 1．248 1．279 l-299l·439 l·771
v302—5 0．398 0．439 0．536 0．841 0．931 1．000 1．099 1．249 1．279 1·2981·440
1·772
。302—6 0．404 0．441 0．533 0．8400．930 1．000 1．099 1．248 1．278 1．304 1-4391·773
v302—7 0．397 0．442 0．532 0．842 0．931 1．000 1．103 1．252 1．281 1．297 l·443 l·772
v302—80．399 0．443 0．531 0．841 0．929 1．000 1．104 1．249 1·280 1·301 1·439 1·771
v302—90．402 0．441 0．530 0．8390．933 1．000 1．102 1．251 l·277 l·299
l·441 1·768
。302—10 0．401 0．442 0．534 0．844 0。931 1．000 l，10l 1．250 1．2821．302 1·442 1·769
2．5．3重现性试验：取5份马钱子样品y302—1，按HPLC指纹图谱检测结果(峰面积)，采用夹角余弦
照所确定的方法制备供试品溶液，分别进样，记录色
谱图，计算各峰相对保留时间、相对峰面积及其
RSD。结果表明共有峰的相对保留时间和相对峰面积
的RSD值分别在0．193％～2．079％和0．392％～
2．735％，均小于3％，指纹图谱分析重现性良好。
2．6 相似度评价：根据lo批次马钱子药材的
和相关系数这两种统计量对其相似度进行评价，并
采用中位数矢量法来确定对照指纹图谱。10批马钱
子药材指纹图谱与参照图谱的相似度见表4。结果
表明lo批马钱子药材来源质量均一、稳定。
3 结论
目前还未见关于马钱子药材指纹图谱研究的报
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1255·
表3 10批马钱子药材指纹图谱共有峰的相对峰面积
Table3 RelativepeakareasofcommonpeaksforfingerprintsoftenbatchesofSemenStrychni
表4 10批马钱子药材指纹图谱与参照图谱的相似度
Table4 Similaritiesoff ngerprintsoftenbatches
ofSemenStrychni
道，马钱子药材为剧毒药材，控制其质量尤为重要。
本实验通过比较不同的样品制备方法，考察流动相、
色谱柱、波长等色谱条件，建立了马钱子药材HPLC
指纹图谱，通过方法学考察，表明该方法精密度、稳
定性、重现性均符合指纹图谱技术要求。通过10批
马钱子药材指纹图谱的检测结果，确定了12个共有
峰。评价了10批药材的相似度，均达o．9以上，可见
药材来源质量均一、稳定。该指纹图谱方法的建立，
为马钱子药材和相关制剂的全面质量控制研究提供
了参考。
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李敏1，王琦2，付福友3
(1．成都中医药大学中药鉴定与药用植物教研室，四川成都610075；2．广东省江门市药品检验所，广东
江门 529000；3．西南农业大学生命科学院，重庆400716)
摘 要：目的 用SRAP技术探讨郁金类药材原植物分类，并为郁金类药材的种质资源提供一定的依据。方法对
来源于姜科姜黄属的郁金类药材的9个样品进行了SRAP研究。结果从上、下游各10个引物形成的100个引物
组合中筛选出扩增产物条带信号强、重现性好、特征性好的27个引物组合，扩增，得到847条条带，其中多态性条
带397条，平均每个引物组合产生14．7条多态性条带。结论SRAP技术可以很好地分析郁金原植物的种间关系。
结合形态学资料，将6个郁金品种分为了2个组，一组花序从叶鞘抽出，包括黄丝郁金和黄白丝郁金，黄白丝郁金
收稿日期：2005—10-28
基金项目：四川省科技厅“郁金GAP研究”项目
作者简介：李敏(1963一)，女，四川省成都市人，成都中医药大学药学院中药鉴定与药用植物教研室，副教授、硕士生导师。研究方向为
中药材品种质量和中药材GAP研究。Tel：13320988022Fax：(028)87782078E—mail：limin96@yahoo．eom．cn
万方数据
马钱子药材HPLC指纹图谱的研究
作者： 王月辉， 乔斌， 蒋建兰， 元英进， WANG Yue-hui， QIAO Bin， JIANG Jian-lan，
YUAN Ying-jin
作者单位： 天津大学,化工学院制药工程系,天津,300072
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(8)
被引用次数： 5次

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