全 文 ：·418· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月
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人参总皂苷对人慢性粒细胞性白血病K562细胞Fas、
sFas和FasL的影响
陈婷梅1，张健2，曹唯希1，姜容3，王亚平3
(1．重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室，重庆400016，2．重庆医科大学
组织胚胎学教研室，重庆400016；3．重庆医科大学附属第一医院，重庆400012)
人参PanaxginsengC．A．Meyer是祖国医学
“补气”要药，人参总皂苷(totalsaponinsofPanax
ginseng，TSPG)是其主要有效部位。既往研究已经
证明TSPG既能促进造血干／祖细胞增殖分化及其
信号转导，诱导造血生长因子基因表达[1]，又能诱导
白血病细胞凋亡和向较成熟细胞分化[2’3]。诱导细胞
凋亡的信号和转导途径多种多样，其中Fas—FasL
途径属于死亡因子及其受体介导的信号转导途径。
本实验就TSPG诱导人慢性粒细胞性白血病K562
细胞凋亡的信号转导机制进行探讨，旨在为研究
TSPG治疗白血病等肿瘤的机制提供实验依据。
1材料与方法
i．1药物：TSPG购自重庆中药研究所，质量分数
95％以上，用RPMI一1640液配成所需浓度。
1．2细胞株：人慢性粒细胞性白血病细胞株K562
细胞，由本室保存，用含10％小牛血清的RPMI一
1640液常规传代培养。
1．3试剂与仪器：RPMI一1640培养基，美国Gibco
公司产品；小牛血清购自杭州四季青公司。小鼠抗人
Fas、FasL单克隆抗体、可溶性Fas(solubleFa ，
sFas)检测ELISA试剂盒由TheScrippsRe earch
Institute(SanDiego)罗云萍博士惠赠，SP染色组
化试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。酶标仪
购自Bio—Rad公司。
1．4实验方法
1．4．1 细胞处理[z]：取对数生长期K562细胞，使
终浓度为1×105／mL。实验组培养体积中加入100
pg／mLTSPG；对照组加等量的RPMI一1640培养
液。分别培养3、6、9d，取样测定。
1．4．2TSPG对K562细胞Fas表达的影响：取对
照组和实验组细胞，PBS(pH7．4)洗涤3次后，离
心甩片；加入过氧化物酶阻断剂，室温10min，加封
闭血清，室温15min，再加小鼠抗人Fas单克隆抗
体(工作浓度分别为1。200)，4℃过夜；取出洗涤
3次，加链亲和素一过氧化物酶；再加新鲜配制的
DAB溶液，用水冲洗，苏木素复染，待干镜检，同时
设立不加一抗(以PBS代替)的阴性对照；图像分
析仪计数每例300个细胞，计算阳性表达率。
1．4．3TSPG对K562细胞FasL表达的影响：取
对照组和实验组细胞，同上处理细胞进行免疫细胞
化学染色，小鼠抗人FasL单克隆抗体工作浓度为
1。100，同时设立不加一抗的阴性对照组，图像分析
仪计数每例300个细胞，计算阳性表达率。
1．4．4TSPG对K562细胞培养上清液中sFas水
收稿日期：2006—09—08
作者简介：陈婷梅(1969一)，女，重庆市人，博士，副教授，主要研究方向为肿瘤细胞逆转、分化和凋亡及其机制的研究．
Tel：(023)68485725(0)E—maillchentingme @sohu．com
‘
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月·419·
平的影响：采用ELISA双抗体夹心法测定细胞培
养上清液中sFas。收集培养3、6、9d的实验组和对
照组细胞培养上清液，一20℃保存备用；操作按试
剂盒说明书进行，于酶标仪450nm处读取吸光度
(A)值，用sFas标准品绘制标准曲线，在曲线上用
所测得的标本A值求得相应的sFas质量浓度。
1．5统计学处理：用SAS统计软件进行方差分析、
秩和检验等。
2结果
2．1 TSPG对K562细胞Fas表达的影响：Fas在
对照组K562细胞有一定表达，100弘g／mLTSPG
作用6、9d，K562细胞的Fas阳性表达率均有所升
高，与对照组相比有统计学意义(P
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图2 TSPG(100pg／mL)对K562细胞FasL表达的
影响。士s，弹一3)
Fig．2EffectofTSPG(100pg／mL)onexpression
ofFasLofK562cellsQ士S，一=3)
3 d 6d 9d
t／d
图3 TSPG(100ug／mL)对K562细胞sFas水平的
影响(；士F，露=3)
Fig．3EffectofTSPG(100pg／mL)onsFaslevel
ofK562cells(；土$，辟=3)
后，Fas受体三聚化而活化，激活的受体与FADD
结合，再与caspase一8相互作用使后者激活，最终启
动caspases家族级联反应而导致细胞凋亡。Fas在
一些组织中有丰富的表达，有研究资料显示Fas几
乎可在各种白血病细胞表达n3；用Fas单抗并不能
诱导所有Fas阳性细胞凋亡，说明这些白血病细胞
可能存在着抗凋亡机制；也有研究表明Fas基因转
染HL一60细胞后，细胞对rhG—CSF更敏感，凋亡率
更高，从而证实Fas是一诱导凋亡基因[5山]。FasL则
主要分布在激活的T细胞、NK细胞和在免疫赦免
区如眼、睾丸中表达c7’8]。新近研究发现FasL在一
些型别的白血病细胞和身体其他组织上也有表
达c。3。一般认为，白血病细胞表面高水平的功能性
FasL，可能在白血病发病过程中杀死Fas阳性的免
疫细胞，从而产生“免疫逃逸，作用n叼；但也有资料
显示某些化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的机制是导致
FasL表达增加。因此，目前对于Fas、FasL在细胞
凋亡中的作用有不同的观点。此外，由于Fas和
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万方数据
·420· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月
FasL均可从细胞膜上脱落形成可溶形式的-sFas、
sFasL，当sFas与FasL结合后，抑制相应受体效应
(Fas—FasL)从而抑制细胞凋亡作用[9]，而sFasL具
有与膜Fas(mFas)同样生物学作用，可引起细胞
凋亡。
．本实验发现未用药处理的对照组K562细胞
Fas阳性表达率为(13．93士2．56)％，100ttg／mL
TSPG诱导K562细胞凋亡时，Fas阳性表达率升
高，由此可推测TSPG诱导K562细胞凋亡可能与
上调细胞Fas表达有关；另一方面，对照组K562细
胞FasL阳性表达率为(8．65士0．8)％；在100弘g／
mLTSPG作用K562细胞9d中，实验组与对照组
FasL表达差异无显著性。根据以上实验结果，推测
TSPG诱导K562细胞凋亡可能机制为：①TSPG
诱导K562细胞表达Fas，Fas直接导致细胞凋亡，
即Fas阳性细胞自杀的结果。②在体外K562细胞
培养体系中，虽然TSPG不能使K562细胞表达
FasL的阳性细胞升高，但考虑到仍有部分K562细
胞FasL阳性，也可通过相邻细胞膜表面Fas与
FasL结合而相互残杀，从而导致细胞凋亡。③有文
献报道急性白血病细胞可自分泌肿瘤坏死因子
(TNF)[1¨，是否Fas阳性细胞对自分泌TNF敏感
而促进细胞凋亡，这需要进一步研究。
此外，本实验还分析了100／lg／mLTSPG诱导
K562细胞凋亡时，细胞培养上清液中sFas的变化
情况，结果显示在9d的观察时间内，实验组与对照
组sFas水平无明显变化。由此可初步推测TSPG
诱导K562细胞凋亡可能与细胞Fas升高及其所产
生的受体效应有关，而与sFas作用无关。
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樟芝菌粉对乙醇诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用
，ll
陆震鸣，敖宗华‘，陶文沂，邹锡良，符慧子
(江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡 214036)
樟芝Antrodiacamphorata(M．Zang&C．H．
Su)ShengH．Wu，Ryvaden8LT．T．Chang，又名
牛樟菇、牛樟芝，是一种寄生于台湾特有树种——牛
樟树腐朽内壁的多孔菌[1]。在民间，樟芝长久以来被
用来治疗食物、酒精和药物所引起的中毒，以及腹
泻、腹痛、高血压、乙型肝炎‘副、肝癌‘33和抗氧化‘幻
等。有研究证实樟芝发酵液对四氯化碳所诱发的肝
损伤也有很好的预防和治疗作用口矗]，多糖、三萜类
化合物和酚类物质被认为是樟芝中主要的活性成
分。本实验采用大鼠急性乙醇性肝损伤模型来评价
樟芝菌粉的保肝作用。
1材料
收稿日期：2006—08—27
作者简介：陆震鸣(1981一)，男，江苏无锡人，硕士研究生，研究方向为天然生物活性物质的药物化条件的研究．Telt(0510)85862938
*通讯作者敖宗华Tell(0510)85862412E-maill azh2003@sytu．edu．cn
万方数据
人参总皂苷对人慢性粒细胞性白血病K562细胞Fas、sFas和
FasL的影响
作者： 陈婷梅， 张健， 曹唯希， 姜容， 王亚平
作者单位： 陈婷梅,曹唯希(重庆医科大学,医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆
,400016)， 张健(重庆医科大学组织胚胎学教研室,重庆,400016)， 姜容,王亚平(重庆医科
大学附属第一医院,重庆,400012)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(3)
被引用次数： 1次
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本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200703036.aspx