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Chromatographic fingerprint of Cistanche deserticola by HPLC

荒漠肉苁蓉的HPLC指纹图谱研究



全 文 :·268· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
荒漠肉苁蓉的HPLC指纹图谱研究
谢洁娜1,赵明波2,吴凤薇1,屠鹏飞”
(1.广州中一药业有限公司,广东广州 510140;2.北京大学医学部药学院,北京100083)
摘要:目的建立荒漠肉苁蓉Cistanchedeserticola的HPLC指纹图谱,评价不同来源的荒漠肉苁蓉药材的内在
质量差异。方法采用HPLC梯度洗脱的方法建立指纹图谱,“计算机辅助相似度评价系统”软件进行数据处理,据
此对不同来源的药材进行比较分析。结果方法精密度、稳定性、重现性较好;不同来源的药材指纹图谱差异较大。
结论不同来源的荒漠肉苁蓉药材的内在质量差异较大,该方法可用于评价肉苁蓉药材的质量。
关键词:荒漠肉苁蓉;指纹图谱;HPLC
中图分类号:R282.71 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2005)02—0268一04
ChromatographicfingerprintofCistanchedeserticolabyHPLC
XIEJie—nal,ZHAOMing—b02,WUFeng—weil,TUPeng—fei2
(1.GuangzhouZhongyiPharmaceuticalCorporation,Guangzhou510140,China;2.SchoolofPharmaceutical
Science,HealthScienceCenter,PekingUniversity,Beijing100083,China)
Abstract:ObjectiveToestablishchromatographicfingerprintofCistanchedes rticolabyHPLCand
evaluatethedifferenceofinnerqualitiesofsamplesfromdifferenthabitats.MethodsHPLCgradientelu—
tionwasappliedtOestablishthec romatographicfingerprintand“ComputerAim dSimilarityEvaluation
System”wasusedindataanalysis.ResultsThischromatographicfingerprintmethodhasgoodprecision,
stability,andrepeatability;thefingerprintsofthesamplesfromdifferenthabitatswerequitedifferent.
ConclusionTherearenotabledifferencesi innerqualitiesofthesamplesfromdifferenthabitats.This
chromatographicfingerprintmethodcanbeusedtoevaluatethequalityofC.deserticola.
Keywords:CistanchedeserticolaY.C.Ma;fingerprint;HPLC
肉苁蓉为列当科多年生寄生植物,主要寄生于
固沙植物梭梭、柽柳、盐爪爪、珍珠柴等的根部,分布
于沙漠、荒漠等干旱地带,我国的内蒙古、新疆、甘肃
和宁夏一带多有分布[1]。肉苁蓉具有极高的药用价
值,有“沙漠人参”之美誉,是我国传统的名贵中药
材。肉苁蓉主要含苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、
木脂素苷类、多元醇、多糖等成分,其中苯乙醇苷类
为其补肾阳主要有效成分乜]。前期研究表明,因来
源、产地不同,肉苁蓉药材有效成分的种类和含量有
一定的差异[3]。为了有效控制肉苁蓉药材的质量,本
实验在建立肉苁蓉药材指纹图谱检测方法的基础
上,对《中华人民共和国药典》2000年版一部收载的
肉苁蓉即荒漠肉苁蓉CistanchedeserticolaY.C.
Ma进行了系统的指纹图谱研究,考察了不同来源
肉苁蓉药材内在品质的差异,为肉苁蓉的质量控制
提供依据。
1仪器和材料
Agilent1100series型高效液相色谱仪:四元
泵、在线脱气机、柱温箱、自动进样器、DAD检测器
(美国安捷伦公司),旋转蒸发仪(日本EYELA公
司)。松果菊苷(echinacoside)和洋丁香酚苷(类叶升
麻苷,acteoside)对照品均由北京大学药学院天然
药物学系制备,纯度均大于95%。乙腈为色谱纯,水
为高纯水,甲醇、磷酸为分析纯。肉苁蓉药材由北京
大学药学院屠鹏飞教授鉴定为荒漠肉苁蓉C.如一
serticolaY.C.Ma的干燥肉质茎。药材来源见表1。
2方法与结果
2.1 色谱条件:色谱柱为AgilentZorbarExtend—
C18(150mm×4.6mm,5弘m);检测波长330nm;体
积流量:1mL/min;柱温为30℃;流动相:A相为
0.095%磷酸水溶液,B相为0.095%磷酸乙腈溶
液,线性梯度洗脱,o~18rain,96%A一4%B;18~40
收稿日期:2004—06—26
*通讯作者Tel:(010)82802750E—mail:pengfeitu@bjmu.edu.an
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·269·
min,88%A一12%B;40~65min,85%A一15%B;
65.-一75min,85%A一15%B;75~90min,80%A一
20%B;90~100min,80%A一20%B;100min,96%
A一4%B。
表1样品产地及来源
Table1 Habitatsandresourcesofsamples
样品号 产 地 来 源
2.2流动相以及洗脱梯度的选择:文献报道采用乙
腈一醋酸系统作为流动相检测肉苁蓉药材。由于肉苁
蓉成分复杂,在文献方法采用的梯度条件下,存在色
谱峰重叠的情况。另外,醋酸体积分数较高,长期使
用影响色谱柱的使用寿命。因此,比较了甲醇一水系
统、乙腈一水系统,最后确定了0.095%乙腈一0.095%
磷酸水溶液系统(pH约为2.3)作为流动相。经试验
采用梯度进行洗脱,得到的信息量较丰富,各成分峰
形尖锐且分离度良好。
2.3检测波长的选择:利用DAD检测器的全波长
扫描,在210~380nm选取不同波长,比较肉苁蓉
药材在230、280、330、370nm不同检测波长下的
HPLC图谱。结果表明:在330nm处,色谱峰信息最
多,且各峰分离良好。
2.4供试品溶液的制备:将肉苁蓉样品粉碎,过60
目筛,精密称取药材粉末约1.0g,用甲醇超声提取
3次(30、20、20mL),每次15min。滤过,合并滤液,
浓缩至干。用10%乙腈定容至10.0mL,摇匀,0.45
pm滤膜滤过,取续滤液,即得。
2.5数据处理软件的使用:使用中南大学开发的
“计算机辅助相似度评价系统”软件进行数据处理。
该软件可将多个色谱图进行汇总比较,经计算机辅
助计算得到可全面反映多个色谱图特征的对照模式
色谱图,并以此模式为基准,计算每个色谱图与之比
较的相似度。本实验采用相关系数(均数)进行评价。
2.6精密度试验:取同一个肉苁蓉供试样品,制备
供试品溶液,连续进样5次,检测指纹图谱,“计算机
辅助相似性评价系统”进行评价,结果都在0.98以
上(刀一5),表明仪器的精密度良好。
2.7稳定性试验:取同一个肉苁蓉供试样品,制备
供试品溶液,分别在0、2、4、8、16、24h进样,检测指
纹图谱,“计算机辅助相似性评价系统”进行评价,结
果都在0.98以上(咒一6),表明样品的稳定性良好。
2.8重现性试验:取同一批肉苁蓉药材5份,分别
精密称定,制备供试品溶液,分别进样,检测指纹图
谱,“计算机辅助相似性评价系统”进行评价,结果都
在0.98以上(咒一5),表明方法重现性较好。
2.9样品分析:精密吸取供试品溶液10肛L,注入
液相色谱仪,采集100min的HPLC图谱,其主要色
谱峰的保留时间见表2,色谱图见图1。不同来源的
荒漠肉苁蓉指纹图谱见图2。经“计算机辅助相似度
评价系统”软件进行数据处理,结果见表3。
表2荒漠肉苁蓉HPLC指纹图谱特征峰的保留时间
TaMe2 Retentionmefcharacteristicpeak
inHPLCfingerprintofC.deserticola
峰号 保留时间/min 峰号 保留时问/rain
1 13.5 8 45.6
Z 14.2 9 52.1
3 15.8 10 56.7
4 25.7 11 64.3
5 32.8 12 78.4
6 33.8 13 87.6
7 35.2 14 9B.0
.. !』。“i!』 .;i笑:! !; 页.!:.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
时间t/rain
7一松果菊苷9一洋丁香酚苷
7-echinacoside9-act oside
图1荒漠肉苁蓉指纹图谱
Fig.1FingerprintofC.deserticola
3讨论
3.1对不同产地的荒漠肉苁蓉的指纹图谱进行分
析可以看出,其指纹图谱具有以下特征:(1)在保留
万方数据
·270· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
O 10 20 30 40 50 60 70 8090 0 10 20 30 40 50 6070 80 90
时间t/min
1~16为表1中样品号
1—16samplesofTable1
图2不同来源的荒漠肉苁蓉指纹图谱
Fig.2FingerprintofC.deserticolafr mdifferenthabitats
表3不同来源的荒漠肉苁蓉相似度评价结果
Table3 SimilaritiesofC.deserticola
fromdifferenthabitats
样品号 相似度 样品号 相似度
1 o.69 9 o.61
2 o.77 10 o.81
3 o.70 11 o.84
4 0.98 12 o.75
5 o.94 13 o.79
6 o.58 14 O.67
7 o.90 15 O.65
8 o.70 16 o.88
时间35~53min有3个明显的色谱峰,其中7号峰
(松果菊苷,保留时间约35min)和9号峰(洋丁香
酚苷,保留时间约52min)为相对峰面积较大的色
谱峰,8号峰(肉苁蓉苷A,保留时间约45min)峰面
积一般小于7号和9号峰,形成两边高中间低的明
显特征峰。在化学结构上,因松果菊苷比洋丁香酚苷
多连接一个糖,易发生水解,转化为洋丁香酚苷,如
果药材干燥时间长或霉变,则7号峰降低,而9号峰
升高。(2)1号峰和2号峰分别为2个色谱峰组成,
有时两峰未达到基线分离。此两峰为国产荒漠肉苁
蓉的特征峰。
3.2不同来源的荒漠肉苁蓉指纹图谱差异较大。首
先,不同药材色谱峰峰数有明显差异,有些样品出现
特征峰的缺失,说明化合物的种类有明显差异;其
次,信号强度差异很大,信号范围从50到2500
mAU不等,说明所含化合物差异很大。其中购自新
疆乌鲁木齐药材市场的样品(6号)和哈萨克斯坦进
口的样品(14号)色谱图中,松果菊苷和洋丁香酚苷
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·271·
对照品峰信号很低,与大多数药材有明显差异;而宁
夏甘草种植场栽培的样品(9、10号),松果菊苷量极
高,这可能与栽培场的药材干燥速度快,松果菊苷未
发生转化有关。产地相同的不同药材,如阿拉善左旗
张泰乡的样品(11~13号)也有较大差异,提示除产
地来源外,还有其他因素影响肉苁蓉的质量。
3.3 肉苁蓉中含有苯乙醇苷类化合物,其中以松果
菊苷和洋丁香酚苷的量较高,并且为重要的活性成
分,以这2个化合物为对照品,可以很好地代表肉苁
蓉药理作用的化学物质基础,使药材的质量评价与其
药理作用能够彼此对应,提高了质量评价的针对性。
3.4 由指纹图谱可见各峰分离较好,实验中利用
DAD检测器采用归一化比较法对HPLC图中主要
色谱峰进行纯度检查,结果显示各主要峰纯度较好,
故本方法除了可以用于定性考察药材质量外,也可
用于多种单一成分的一次同时定量检测,使测定更
加简便快捷。
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广藿香茎发育及不同发育期挥发油的分布
冯承浩1’2,吴鸿2。
(1.韶关学院英东生物工程学院农业工程系,广东韶关512005;2.华南农业大学
生命科学学院药用植物研究中心,广东广州 510642)
摘 要:目的 揭示广藿香茎的发育及不同发育阶段挥发油在其内的分布,为合理的取药、用药提供理论和实践上
的指导。方法石蜡切片法、半薄切片法、组织化学法。结果 在广藿香茎的原分生组织中,未观察到有挥发油分
布;在茎的初生、分生组织和初生结构形成早期,挥发油主要分布在茎表皮上着生的腺毛中;在茎的初生结构中,挥
发油主要分布在皮层薄壁组织细胞中;在茎的次生结构中,挥发油则主要分布在残存的皮层薄壁组织细胞中。结论
广藿香茎内的发挥油主要分布在茎的皮部,广藿香茎皮的厚薄可作为优良品种的选育指标。
关键词:广藿香;茎;发育;挥发油;分布
中图分类号:R282.6 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2005)02—0271—04
Stemdevelopmentandssentialo ldistributionind fferent
developmentstagesofPogostemoncablin
FENGCheng—ha01”。WUHon92
(1·DepartmentofAgricuturalEngineering,YingdongCollegeofBioengineering,ShaoguanCollege,
Shaoguan512005,China;2.ResearchCenterofMedicinalPl ntDevelopment,CollegeofLife
Science,SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642。China)
Abstract:ObjectiveTostudythestemdevelopmentandssentialo ldistributionind fferentd ve—
lopmentstagesofPogostemoncablina dtoprovideth oreticalinformationndpracticalguidanceforea—
sonableharvestanduseofthismedicinalpl nt.MethodsParaffinmethod,semi—thinsectioning,andhis—
tochemicalmethodwereused.ResultsEssentialoilwasnotfoundinthepromeristemof :inthepri—
marymeristemofstemandthearlystageofstem’Sprimarystructure,theessentialo lwasmainlydis—
tributedinglandularhai s;intheprimarystructureofstem,theessentialo lwasmainlydistributedin
cortexparenchymaceils;inthesecondaryst uctureOfstem,theessentialo lwasmainlydistributedinre—
mainingcortexparenchymacell.ConclusionT‘he ssentialo liSmainlydistributedinthestembark。SO
thethicknessofa tembarkcanbeusedasastandardofselectivebreedingindex.
收稿日期:2004—06—02
基金项目:广东省中医药管理局基金资助项目(F01032);广东省科技攻关项目(C20147)
作者简介:冯承浩(1973一),男,山东省泰安市人,韶关学院农业工程系讲师,硕士,主要从事药用植物学方面的研究。
Tel:(0751)8121376E~mail:fehenghao@163.eom
*通讯作者
万方数据
荒漠肉苁蓉的HPLC指纹图谱研究
作者: 谢洁娜, 赵明波, 吴凤薇, 屠鹏飞, XIE Jie-na, ZHAO Ming-bo, WU Feng-wei,
TU Peng-fei
作者单位: 谢洁娜,吴凤薇,XIE Jie-na,WU Feng-wei(广州中一药业有限公司,广东,广州,510140), 赵
明波,屠鹏飞,ZHAO Ming-bo,TU Peng-fei(北京大学医学部药学院,北京,100083)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2005,36(2)
被引用次数: 7次

参考文献(3条)
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4.宋鹏.屠鹏飞 中药肉苁蓉质量控制及评价的研究进展[期刊论文]-北方药学 2011(2)
5.冯启余.曹玉华.龚立冬 综合利用色谱多维信息建立中药指纹图谱[期刊论文]-计算机与应用化学 2009(5)
6.冯启余.曹玉华.龚立冬 中药指纹图谱共有峰的自动识别[期刊论文]-分析科学学报 2009(1)
7.冯启余.曹玉华.龚立冬 综合利用色谱多维信息建立中药指纹图谱[期刊论文]-计算机与应用化学 2009(5)

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