全 文 ：·402· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
而与LTL组作用接近；对于APO引起的自发活动
增强，UMHS及JLY和LTL的作用相近。对于
APO引起的血浆与脑内DA含量的改变，UMHS与
JLY均能给予校正，使其接近正常值水平。
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葛根素对糖尿病大鼠主动脉内皮形态功能的影响
茅彩萍，顾振纶，许夕慧，曹 莉
(苏州大学医学院药理教研室、苏州中药研究所，江苏苏州 215007)
摘 要：目的 探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病(DM)大鼠血管内皮细胞形态和功能变化，及葛根素(Pue)
对其的影响。方法 以STZ诱导DM大鼠模型，将DM大鼠随机分为DM模型组、不同剂量Pue治疗组(0．5、
0．25、0．125g／kg，ig)和氨基胍治疗组(o．1g／kg，ig)，另设一正常对照组；分别于给药8周、12周时，以葡萄糖氧
化酶法测定血糖，放免法测定血浆内皮素一1(ET一1)，硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的
水平，并取主动脉作光镜和电镜观察。结果DM大鼠血糖、血浆ET一1水平明显升高，而NO、NOS水平明显下降；
且8周时光镜下可见主动脉内皮细胞肿胀，有的突向腔面；电镜下内皮细胞线粒体明显肿胀、空泡变，12周时内皮
细胞广泛坏死脱落，病变加重。Pue治疗组血糖、血浆ET一1含量明显降低，而NO、NOS水平显著上升，主动脉内皮
病变也明显减轻。结论Pue可通过降低DM大鼠血糖，调节ET—NO间动态平衡，对主动脉内皮细胞损伤产生一
定的保护作用。
关键词：糖尿病；内皮细胞；内皮素；一氧化氮；葛根素
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)03—0402—04
Effectofpuerarinonmorphologyandfunctionofaorticendotheliumind abeticrats
MAOCai—ping，GUZhen—lun，XUXi—hui，CAOLi
(DepartmentofPharmacology，SuzhouInstituteofChineseMateriaMedica，
MedicalCo legeofSuzhouUniversity，Suzhou215007，China)
Keywords：diabeticmellitus(DM)；endothelialcell；endothelin；nitricoxide(NO)；puerarin(Pue)
糖尿病血管并发症(diabeticvascularcompli—
cations，DVC)以全身血管损害为特点，而血管内
皮细胞损伤是血管病变的一个重要原因。研究表明
内皮素一一氧化氮(ET—NO)间的动态平衡对维持
内皮细胞的正常形态功能及血流动力学等起着重要
作用，糖尿病时高血糖引起蛋白非酶糖化和氧化应
激增加、血液流变学异常、蛋白激酶C激活等均参
与损伤血管内皮细胞，致使血管平滑肌细胞过度增
殖，ET—N0平衡失调，血管功能障碍和动脉粥样硬
化形成，进一步加重DVC的发生发展[1]。葛根素
(puerarin，Pue)是从野葛Puerarialobata
(Willd．)Ohwi或甘葛藤P．thomsoniiBenth．的根
中提取的主要有效成分之一。前期研究表明Pue可
通过下调肾脏蛋白激酶C(PKC)活性来改善糖尿
病大鼠高血糖状态下引起的肾脏形态和功能损伤，
对糖尿病大鼠肾脏病变有一定的保护作用[21；Pue
还可在降低糖尿病大鼠血糖的同时，降低血清中可
溶性细胞间黏附分子(SICAM一1)、氧化低密度脂蛋
白(ox—LDL)和血浆中肿瘤坏死因子一a(TNF—a)
的含量，控制DVC的发生发展[3]。本研究以STZ诱
收稿日期：2004—06—19
基金项目：江苏省中医药管理局科研基金资助项目(H一028)
作者简介：茅彩萍(1968一)，女，江苏苏州人，副教授，博士，主要从事中药药理学的研究。
Tel：(0512)65125270E—mail：Maocpl018@sina．COrn．cn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·403·
导DM大鼠模型，观察不同病程时DM大鼠血糖、
内皮素一1(ET一1)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶
(NOS)水平的变化、主动脉超微结构改变，以及
Pue对上述指标的影响，以此探讨糖尿病大鼠血管
内皮损伤的机制和葛根素对此的防治作用。
1材料与方法
1．1 药物及试剂：葛根素(Pue)，棕黄色粉末(纯
度90％)，由湖南金农生物资源股份有限公司提供；
氨基胍(aminoguanidine，AG)、链脲佐菌素
(STZ)，Sigma公司产品，临用前用柠檬酸缓冲液配
成1％的STZ溶液。血糖测定试剂盒，卫生部上海
生物制品研究所产品；ET放射免疫分析测试药盒，
北京东亚生物制品公司产品；N0、NOS测试药盒，
南京聚力生物医学工程研究所产品。
1．2 仪器：J一68型冷冻离心机(Beckman公司)，
752型分光光度计(上海第三分析仪器厂)，SN一
682型放射免疫了一计数器(中国科学院原子核研究
所日环仪器厂)，Leica2135石蜡切片机，Olympus
显微镜；H一600型电子显微镜(日立公司)。
1．3动物：清洁级雄性SD大鼠，由苏州大学医学
院实验动物中心提供，实验动物使用许可证号：
SYXK(苏)2002—0037；实验动物生产许可证号：
SCXK(苏)2002—008。
1．4糖尿病大鼠模型的建立、分组及给药：健康雄性
SD大鼠，体重为180～220g，禁食12h后按文献方
法¨3并略作改进，一次性ipSTZ60mg／kg制备大鼠
模型，空白对照组仅ip等量柠檬酸缓冲液，72h后眼
底静脉丛取血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖，若血糖
值≥16．7mmol／L，尿糖为+++～++++者，确
定为糖尿病大鼠。将糖尿病大鼠随机分为5组：即模
型组(DM组)，Pue大、中、小剂量组(0．5、0．25、
0．125g／kg)，AG治疗组(0．1g／kg)，另取8只大鼠
作为正常对照组。在注射STZ4d后，各组大鼠分别
每日ig给予相应的药物1次，连续给药12周。
1．5取材与指标测定：分别于给药8周、12周时，
大鼠禁食15h后，麻醉，腹主动脉取血，分离血清测
定血糖、硝酸还原酶法测定NO和NOS的水平；并
取3mL注入含抑肽酶的抗凝管中，4℃3000r／
min离心10min，分离血浆，放免法检测ET一1的水
平。取血后处死大鼠，分离主动脉，以眼科剪纵向剪
开动脉，并将内表面朝上贴于滤纸上，用生理盐水冲
洗，置福尔马林液固定，HE染色进行光镜检查，另
剪取约1cm长主动脉，放入4％戊二醛固定，1％
锇酸固定，乙醇梯度脱水，包埋剂渗透包埋，切片，经
醋酸双氧铀一柠檬酸铅双染色，制作电镜标本。
1．6统计方法：数据均用SPSSl0。0软件进行统
计，两组间比较用方差分析(ONE—WAYANOVA)
中的最小显著差法(LSD)。
2 结果
2．1各组大鼠空腹血糖的变化：各组大鼠给药后8
周和12周，结果表明：大、中剂量Pue治疗后糖尿
病大鼠血糖值较DM模型组显著降低(P但仍高于正常组。说明Pue具有明显的降血糖作
用，但尚不能使血糖恢复到正常水平。见表1。
表1 Pue对STZ诱导的糖尿病大鼠空腹血糖的影响(；±s)
Table1 EffectsofPueonfastingbloodglucose
indiabeticratsinducedbySTZ(；±s)
与正常组比较：。。P与DM模型组比较：Ap<0．05AAp<0．01
’。P▲P2．2血浆ET一1、血清NO和NOS水平的变化：8
周、12周时糖尿病大鼠血浆ET—l明显升高，血清
NO含量明显降低，与正常组比较(尸大、中剂量组及AG组均可明显降低ET一1水平，明
显提高NO和NOS水平(尸<0．01、0．05)，见表2。
2．3主动脉形态学变化
2．3．1主动脉光镜观察结果：8周时糖尿病大鼠主
动脉有不同程度的内膜增厚病灶，局部主要由排列
紊乱的平滑肌组成，病灶表面内皮细胞肿胀，有的向
腔面突起，内弹力板局部厚薄不均；Pue治疗后，主
动脉内皮细胞肿胀程度减轻，内弹力板较平直，内皮
下纤维组织轻度增生。12周时，糖尿病大鼠主动脉
内皮细胞有的脱落、甚至坏死，内弹力板厚薄不均或
分层，中膜浅层平滑肌细胞增生，中层弹力板与平滑
肌细胞间排列紊乱；Pue治疗组主动脉内膜较平坦，
内皮细胞扁平，内弹力板较平直，中弹力板与平滑肌
细胞之间较整齐相间排列，接近于正常。
2．3．2主动脉超微结构变化：8周时糖尿病大鼠内
皮细胞内线粒体肿胀、空泡变明显；Pue治疗组内皮
细胞也有轻度线粒体的肿胀、空胞变。12周时，糖尿
万方数据
‘404。 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
表2 Pue对STZ诱导的糖尿病大鼠血浆ET一1、血清NO和NOS水平的影响(i土s)
Table2 EffectsofPueonplasmaET一1，serumNO，andNOSlevelsindiabeticratsinducedbySTZ(；±s)
与正常组比较：一P’1P<0-01VSnormalgroup：▲P病大鼠可见主动脉内膜增厚，内皮细胞线粒体肿胀、 细胞间基质和纤维增多，可见平滑肌细胞穿越内弹
空泡变性明显、有的游离内弹力膜，有的核边集似凋 力板断裂处进入内膜，且此类平滑肌细胞内常无密
亡。内皮细胞下间隙增宽，其胞浆内也可见空泡，有 斑、密体结构，表明此类平滑肌细胞有向纤维细胞转
自溶现象，并有较正常明显增多的糖原颗粒，细胞浆 化趋势；Pue治疗组内皮细胞线粒体有不同程度肿
内吞饮小泡明显增多，细胞核周池增宽，细胞周围有 胀、少见空泡变性，无内皮细胞坏死脱落现象，内弹
较多基质和细纤维，内弹力板厚薄不均匀，可见断 力板厚薄较均匀，Pue大剂量组主动脉内皮细胞超
裂，中膜浅层平滑肌增生，多突起，排列紊乱，平滑肌 微结构基本正常(图1)。
A一模型组(8周)B—Pue0．5g／kg组(8周)C一模型组(12周)D—Pue0．5g／kg组(12周)
A—modelgroup(8weeks)B—Pue0．5g／kgroup(8weeks)C—modelgroup(12weeks)D—Pue0．5g／kgroup(12weeks)
图1 电镜下观察Pue对STZ诱导的糖尿病大鼠主动脉内皮细胞超微结构的影响
Fig．1EffectsofPueonaorticendothelinmu trastructureindiab ticratsinducedbySTZunderlectronmicroscope
3讨论 形态学的变化在DVC中起重要作用‘8|。
ET—NO系统是血管内皮细胞的重要调节系
统，对维持血管正常的生理功能(形态、通透性、收
缩与舒张功能)起着重要作用。糖尿病时高血糖等
因素引起血管内皮细胞受损，ET—NO系统功能失
调，并最终导致DVC的产生[5]。ET一1主要由内皮
细胞产生，是目前已知作用最强和维持时间最持久
的一种缩血管物质，是调节血管通透性的重要因子，
并与其他因子如血管表皮生长因子(VEGF)、NO
等共同作用[6．7]，NO是由NOS催化L一精氨酸与氧
分子经多步氧化还原反应生成，NOS是NO合成过
程中的关键酶。诱导型NOS(iNOS)在受到细胞因
子刺激时，通过启动基因转录合成iNOS，进而生成
高浓度的NO，高浓度NO是损伤胰岛B细胞的终
末因子，而血清NO水平代表体内NO水平。由于
糖尿病慢性并发症的原发病损在血管(如视网膜、
肾脏、心脏、神经等部位的血管)，而血管内皮细胞损
伤是血管病变的始动环节，高血糖时血管内皮细胞
本实验结果发现在不同病程中，糖尿病大鼠血
糖、血浆ET一1明显升高，NO、NOS水平明显下降，
电镜下8周时糖尿病大鼠主动脉内皮细胞只出现
线粒体肿胀、空泡变，而12周时内皮细胞则有大量
坏死脱落现象，表明随病程的延长，其内皮细胞病变
是由量变到质变的过程，此时，血管中膜平滑肌细胞
穿越内弹力膜进入内膜层，并有向纤维细胞转化的
趋势，提示了血管内皮细胞损伤后内膜增厚的原因，
同时内皮细胞脱落，内膜裸露，可见血浆蛋白附着物
黏附在内皮细胞上，而血液成分黏附到血管壁上，是
引起血小板聚集和血栓形成等血管病变的始动环
节，也是动脉粥样硬化、DVC发病中的关键因素之
一[9]。Pue治疗后糖尿病大鼠血糖、血浆ET水平下
降明显，而血清No及NOS水平提高，从而抑制某
些细胞的异常生长增殖，抑制细胞外基质(ECM)
合成。电镜下Pue治疗组大鼠主动脉未见内皮细胞
坏死脱落现象，但内皮细胞内仍可见线粒体有不同
万方数据
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程度肿胀和空泡变，12周后主动脉内皮细胞病变程
度较8周时有较大改善。本实验结果表明Pue对糖
尿病大鼠主动脉内皮细胞结构和功能损伤均具有一
定的保护作用，该作用的产生可能与Pue降低糖尿
病大鼠血糖，调节ET—NO动态平衡，改善内皮功
能，提高血管自身保护机制有关。提示Pue对预防
或减轻DVC病变无疑是有利的。
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何首乌中二苯乙烯苷在大鼠体内的药动学
孙江浩，袁志芳，王春英，许慧君，张兰桐+
(河北医科大学药学院药物分析教研室，河北石家庄050017)
摘要：目的建立大鼠血浆及组织匀浆中二苯乙烯苷的RP—HPLC测定方法，研究何首乌中二苯乙烯苷在大鼠
体内的药动学及组织分布。方法色谱条件：用Diamonsil⋯C。。色谱柱(250mm×4．6mm，5ttm)，乙腈一甲醇一水
(15：18：67)为流动相，体积流量1．0mL／min，检测波长320nm。大鼠iv二苯乙烯苷20、10mg／kg及垃二苯乙
烯苷100、50mg／kg，于不同时间点取血浆及组织，HPLC法测二苯乙烯苷血药浓度及在组织中的浓度。数据用
3P97软件拟合，计算药动学参数。结果大鼠iv不同剂量二苯乙烯苷后药动学模型为二室开放模型；ig不同剂量
二苯乙烯苷后药动学模型符合一室模型；大鼠iv及ig二苯乙烯苷后，在体内分布广泛，大鼠iv二苯乙烯苷后以
肝、心、肺中分布较高；ig二苯乙烯苷后心、肾中分布较高。结论建立了大鼠血浆及组织匀浆中二苯乙烯苷的RP—
HPLC测定方法，阐明了二苯乙烯苷在大鼠体内的药动学特征及组织分布情况。方法简便快速，结果准确可靠。
关键词：反相高效液相色谱法；何首乌；二苯乙烯苷；药动学
中图分类号：R285．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)03—0405—04
PharmacokineticsofstilbeneglycosidefromPolygonummultifloruminratsinvivo
SUNJiang—hao，YUANZhi—fang，WANGChun—ying，XUHui—jun，ZHANGLan—tong
(DepartmentofPharmaceuticalAnalysis，SchoolofP armacy，HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050017，China)
Keywords：RP—HPLC；PolygonummultiflorumThunb．；stilbeneg ycoside；pharmacokinetics
二苯乙烯苷(2，3，5，47一四羟基二苯乙烯2一。一
』3一D葡萄糖苷)是中药何首乌Po&gonummultiflo—
r甜，竹Thunb．中分离得到的羟芪类化合物，具有明
显降低大鼠血清中总胆固醇以及抗氧化、清除自由
基等药理作用”3|。何首乌原药材及多种含何首乌
的制剂均以二苯乙烯苷作为质量控制指标。笔者曾
采用HPLC法研究了二苯乙烯苷在小鼠体内的药
动学特征，并在研究过程中获得一体内代谢物，确定
其为二苯乙烯苷的葡萄糖醛酸结合物[4]。本实验自
何首乌中分离提取二苯乙烯苷单体成分，进一步研
究其在大鼠体内的药动学及组织分布情况。
1材料与方法
收稿日期：2004—05—10
作者简介：孙江浩(1980一)，男，河北医科大学药学院2001级硕士研究生，研究方向为中药有效成分的药动学研究。
*通讯作者Tel：(0311)6265625Fax：(0311)6052053E—mail：zhanglantong@263．net
万方数据
葛根素对糖尿病大鼠主动脉内皮形态功能的影响
作者： 茅彩萍， 顾振纶， 许夕慧， 曹莉， MAO Cai-ping， GU Zhen-lun， XU Xi-hui， CAO
Li
作者单位： 苏州大学医学院,药理教研室、苏州中药研究所,江苏,苏州,215007
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(3)
被引用次数： 15次

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