全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 729·
参考文献：
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GPT、HBsAg聚细胞改变的观察EJ3．湖北医学院学报，1986，
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甘肃道地黄芪种苗的离体快繁研究
张延红1，何春雨2．，刘晓博1，杜彼1，陈红刚1
(1．甘肃中医学院药学系，甘肃兰州 730000，2．甘肃省冬小麦研究所，甘肃兰州730020)
摘 要：目的 筛选出适于无菌短枝快繁的培养基及研究试管苗移栽驯化技术。方法 以MS为基本培养基添加不
同质量浓度的BA和NAA，对黄芪的不同外植体进行组织快繁研究。结果一年生植株的带芽茎段在MS+BA0．1
mg／L培养基上短枝长势最好；一年生植株的新生芽和两年生植株的带芽茎段，在MS+BA0．8mg／L+NAA0．1
mg／L培养基上均能产生丛生芽。将短枝接种于1／2MS+0．1％活性炭或1／2MS+NAA1．5mg／L+0．1％活性炭的
培养基上，经诱导产生有效根。小苗经沙培驯化后。移栽成活。结论利用蒙古黄芪的无菌短枝快繁优良种苗是一
种经济、快速、可行的育苗方式。
关键词：黄芪，离体快繁，无菌短枝；炼苗；移栽
中围分类号：R282．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1729一04
黄芪AstragalusmembranaceusBge．var．
mongholicus(Bge．)Hsiao为豆科黄芪属多年生草
本植物，以根人药，是常用大宗中药材[1]，也是甘肃
道地药材之一。甘肃陇西就素有“中国黄芪之乡”的
美称。近年来，由于市场需求量逐年增加，野生资源
El渐匮乏，采用育苗移栽进行人工栽植成为黄芪的
主要来源[2]。但是黄芪生长周期长、种子硬实现象严
重[3]，且易受黄芪小蜂危害，所以播种时用种量大、
繁殖系数低，造成药农经济成本增加。同时，黄芪种
植历史悠久，传统栽培中往往不重视优良性状的选
育，存在性状变异多、品系混杂严重等现象，对药材
产量和品质产生不良影响[4]。目前，陇西地区育苗也
出现了一定困难，一年生小苗易遭受病虫侵染，导致
根部出现黑斑甚至断根。因此，寻找一种新的育苗方
式迫在眉睫。
利用植物组织培养的方法，采用黄芪带腋芽及
顶芽的茎段作外植体，进行植物离体快繁，可于短期
内获得大量遗传性状一致的幼苗，比用种子繁殖节
省育苗空间和成本，成苗迅速且便于集中精细管
理[5]。虽然国内外对黄芪的组织培养有一些报道，但
主要研究愈伤诱导和植株再生，利用短枝进行快繁
种苗未见报道。本试验旨在建立黄芪无菌短枝快繁
的育苗体系。
1材料与方法
1．1材料采自甘肃陇西县马河镇产一年和二年生
黄芪，经林丽高级实验师鉴定，剪取实生苗的新生芽
及地上茎段。
1．2短枝诱导：用软毛刷及洗衣粉水轻轻刷洗黄芪
枝条，然后用流水冲洗12h。在超净工作台上先用
75％乙醇漂洗30S，然后用2％次氯酸钠溶液灭菌10
min，再用0．1％升汞溶液灭菌10min，最后用无菌水
冲洗5次，接种于添加不同质量浓度6-BA及NAA
的培养基上。将材料置于室温25℃、光照时间13
h／d左右、光照强度2000Ix的条件下培养。
1．3根的诱导：当短枝长到6-8cm高时，切除基
部较老化部分，然后将形态学下端近节处插入生根
培养基中，在与1．2项相同的培养条件下诱导生
根[6]。生根培养基为1／2MS培养基添加不同质量浓
度NAA和0．1％活性炭。
1．4炼苗和移栽：当短枝基部形成较发达的根系
后，打开瓶塞，炼苗2d，然后轻轻取出小苗，小心洗
去根部的培养基[引，然后将试管苗栽植于蛭石一河
沙一腐殖土(5；4，1)的基质中，用打孔的透明塑料
杯罩住保湿。用半透明塑料膜遮荫，每日喷水2次，
收稿日期：2008—01—11
基金项目：本科生毕业专题专项基金资助
作者简介：张延红(1977一)，女．讲师．硕士，主要从事药用植物育种和组织培养方面的研究和教学工作。
*通讯作者何春雨Tel：13919459087E-mail：hchyr@lzcc．edu．cn
万方数据
·1730· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
逐渐增加光照并降低湿度。
2结果与分析
2．1不同外植体在相同培养基上生长状况比较：培
养两周后进行观察统计，发现相同激素处理的培养
基中，不同材料表现出的生长状况不同(表1)。相同
的培养基中，一年生植株及两年生植株的腋芽诱导
的枝条矮且粗壮，一年生的新生芽则普遍较高。其中
以一年生植株的茎段诱导的枝条长势最好，接种材
料全部成枝(图1)。其原因可能是一年生苗的茎段内
源激素量较高，营养物质充足口]，因此，抽枝分化容
易，生长良好。一年生植株的茎段及一年生苗的新生
芽较两年生植株的茎段易抽生二级侧枝，且生长旺
盛、株型丰满。在MS+BA0．8mg／L+NAA0．1
mg／L培养基上，两年生植株的茎段及一年生植株
的新生芽经诱导后在原叶腋处产生了丛生芽，一年
生植株的茎段则无丛生芽发生。
表1不同外檀体在不同培养基上的短枝生长
Table1 Growthofshortbranchesofdifferentexplantsondifferentm dia
(1)平均茎长≤6-0cm为较矮16·0cm<茎长<8．0cm为较鬲I茎长≥8·0cm为商
(2)平均茎粗≤3．0mm为细弱}3．0ram<茎租<3．3mm为较粗-茎粗i>3．3mm为粗壮
(3)短枝上侧枝是指经诱导后抽生的短枝上产生的二级分枝
(1)averagestemh ight≤6．0cmisshortIheight>6．0cmand<8．0cmishigher)height≥8．0cmishighest
(2)averagestemdiameter≤3．0mmisslimI stemdiameter：>3．0mmand<3．3mmisstronger)diameter≥3．3misstrongest
(3)sidebranchissecondarybranchofshortbranchwhichwasinduced
株普遍表现低矮，愈伤组织块变大、褐化减轻。由此
可见，BA对短枝粗细、愈伤组织大小及褐化程度的
影响较显著。在MS+BA0．8mg／L+NAA0．1
mg／L培养基上，经诱导后大部分材料产生丛生芽。
其中以MS+BA0．1mg／L培养基上的短枝长势
最好。
2．2．2一年生植株的茎段：随着BA质量浓度的升
图1生长旺盛的短枝 高，短枝和愈伤组织状况与两年生植株茎段相似，在
Fig．1BIoomplantletsofshortbranches MS+BA0．1mg／L培养基上的短枝长势也最好。
2．2激素质量浓度不同配比的培养基上，同种外植 在MS+BA0．1mg／L及MS+BA0．5mg／L+
体生长状况比较：外植体来源相同，但培养基激素质 NAA0．1mg／L培养基上，材料经诱导后，短枝上
量浓度配比不同，外植体经诱导后生长状况亦有差异。 抽生的二级侧枝生长旺盛、株型丰满。
2．2．1 两年生植株的茎段：当NAA为0．1mg／L 2．2．3一年生植株的新生芽：随着BA质量浓度的
时，随着BA质量浓度的升高，短枝由粗变细，但植 升高，短枝则由细变粗，植株较高变为高，愈伤组织
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 731·
块由小变大、褐化减轻。在与上述一年生植株茎段相
同的培养基上，也诱导产生了二级侧枝。在与两年生
植株茎段相同的培养基上诱导产生了丛生芽。
因此，综合3种外植体的共同表现分析，BA质
量浓度适当升高，利于减轻褐化程度[B]。MS+BA
0．1mg／L和MS+BA0．5mg／L+NAA0．1mg／L
培养基适于诱导短枝。MS+BA0．8mg／L+NAA
0．1mg／L培养基适于诱导丛生芽。这种培养基中
BA量较高，经验证易于诱导腋芽产生丛生芽。在
MS+NAA0．1mg／L培养基上，材料基部均未产
生愈伤组织块。
2．3不同培养基对诱导生根的影响：将5～6cm长
的短枝接种于MS培养基或添加激素的MS培养基
上，均未诱导生根。但接种于添加活性炭的1／2MS
培养基或添加活性炭和1．5mg／LNAA的1／2MS
培养基上的短枝，经诱导后均产生有效根(表2)。其
中以1／2MS+活性炭培养基诱导效果最佳，培养12
d时发根，20d时形成发达根系(图2)。NAA质量浓
度低时，易诱导生根，但随着NAA质量浓度升高，
根诱导受到阻碍且在根基部产生少量白色愈伤组
织，所以低质量浓度的NAA利于生根。同时笔者也
做了相同激素质量浓度处理，但未加活性炭的对比
试验，经过相同天数的培养，未能诱导生根，可见活
性炭对黄芪短枝生根有良好的促进作用。
哀2不同激素处理对诱导生根的影响
Table2 Effectofdifferenthormoneso inducingofroots
培养基类型接薹萎料瓣平怒料怒鳓囊嚣织
图2试管苗生根
Fig．2Producingrootsintesttube
2．4试管苗移栽驯化：本试验获得了生根的组培小
苗，经沙培驯化后移栽成活(图3)。移栽应在苗基部
形成较发达的根系后进行，过早会导致小苗枯死[g]。
在移栽前需先打开瓶塞炼苗2d，使小苗逐渐适应较
干燥的外界环境。然后轻轻取出小苗，小心洗去根部
的培养基，注意尽量减少根的损伤，罩上塑料杯。在
小苗驯化阶段，应逐渐增加光照并降低湿度，使气孔
逐渐恢复至正常状态[10。。待枝叶上挺、新叶抽出、叶
色转绿后，去除塑料杯，逐渐控制水分，继续锻炼数
日，小苗即可在正常条件下生长。
图3试冒苗移栽成活
Fig．3Viabilityoftransplantintestube
3讨论
3．1 培养时外植体愈伤化和褐化控制：短枝诱导时
凡在添加有BA的培养基中，茎段切口处均产生了
深绿色的致密愈伤组织，该愈伤组织极易褐化且阻
碍根的诱导。随着BA质量浓度的升高，愈伤组织的
量也相应增多，但褐化程度减轻。因此，要减少深绿
色愈伤组织产生，可适当降低BA的用量[11。。
另外，诱导生根时在添加有活性炭、3．0mg／L
NAA或5．0mg／LNAA的1／2MS培养基上，经诱
导在短枝基部均产生了小块的白色较疏松愈伤组
织，但无褐化发生。而在添加活性炭的1／2MS培养
基或添加活性炭和1．5mg／LNAA的1／2MS培养
基上的短枝，既无褐化发生，又无愈伤组织产生，所
以培养中添加活性炭并降低无机盐浓度，可有效地
控制褐化。同时随着NAA质量浓度降低可避免产
生白色愈伤。
3．2材料的污染及其控制：外植体初代培养时极易
污染，污染率最高可达90％。为了提高实验效率在材
料污染控制方面应注意：采材时应选取生长健壮的
无病植株，以地上部分作外植体材料；于春末采材，
材料带菌少，不易污染；在材料预处理时应用毛刷在
洗衣粉稀溶液中轻轻刷洗，再用流动水冲洗12h；外
植体以两种灭菌剂配合灭菌并加入数滴浓度0．2％
的聚山梨酯80，可取得良好的灭菌效果。
3．3前景展望：本实验采用带腋芽或顶芽的茎段进
万方数据
·1732· 中革焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
行组织培养，建立甘肃道地黄芪的离体快繁体系。该
试验最重要的一个突破就是将试管苗成功地移栽于
盆土中且生长良好，这对于实现黄芪种苗工厂化生
产具有非常重要的实践意义。
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产地和采收时间对美花石斛药材中多糖的影响
武孔媛1，王文全”，金家兴2，孙志蓉1，龙友邻2，白音3
(1．北京中医药大学中药学院，北京 100102}2．贵州兴义吉仁堂药业公司，贵州兴义562400；
3．韶关学院，广东韶关512005)
摘要：目的研究不同产地和不同采收季节对美花石斛药材多糖的影响，为确定美花石斛药材的最佳产地和采
收时间提供依据。方法采用苯酚一浓硫酸比色法比较不同产地和不同采收时间美花石斛药材的多糖量，并对结果
进行方差分析。结果不同产地和生长年限美花石斛多糖量差异较大，贵州则戎产的美花石斛药材多糖量最高，为
14．9％；不同采收时期美花石斛药材的多糖量2年生均高于3年生，4月时多糖量最低，从4月开始量逐渐增高．其
中9月量达到最高。结论以多糖量为指标来判断药材质量的好坏，贵州则戎所产的美花石斛药材质量较好，2年
生药材的多糖量较高，采收期安排在9月至次年1月份期间比较合适，这一结果与传统石斛药材秋冬季节采收相
符，并为美花石斛药材的采收和质量评价提供了科学依据。
关键词：美花石斛；产地；采收时间；多糖量
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1732一04
石斛具有滋阴清热、益胃生津、润肺止咳之功
效，为传统名贵中药，其来源植物有40多种，美花石
斛DendrotnumloddigesiiRolfe是《中国药典>>2000
年版收载的环草石斛药材的原植物，化学成分含有
多糖、生物碱和芪类化合物(stilbenoids)等n~3]。药
理实验证明石斛的多糖类成分是石斛中具有免疫促
进和抗肿瘤作用的活性成分[‘]，常以多糖的量高低
来判断某一类石斛药材的质量好坏[3]。因此，多糖量
可以作为评价环草石斛药材质量的指标。
《中国药典>>2005年版中石斛的采收时间是全
年均可采收，对于石斛药材的采收时间没有明确的
规定，但是不同生长年限和生长月份的石斛中有效
成分的量和积累是存在差别的，药材的产地也影响
药材有效成分。白音等[s1研究了不同生长年限美花
石斛茎的多糖量，发现2年生药材的多糖量较高，采
收期安排在第2年生长结束时比较合适，但对具体
的采收时间，未进行动态分析。确定药材的适宜产地
有利于发展药材的生产，而药材适宜采收时间的确
定有利于药农进行采收和确保药材中的有效成分的
量，从而确保临床药效。本实验采用苯酚一硫酸法对
不同产地、不同生长年限和不同月份采收的美花石
斛的多糖量进行测定，并对测定结果进行比较分析，
初步确定美花石斛药材的适宜产地和采收时间，为
其质量评价及探索最佳采收期提供科学依据。
1仪器、试剂与材料
1．1 仪器与试剂：U一2000紫外一可见分光光度计
(日本，HITACHI)；UV一2100紫外一可见分光光度
计(上海优尼柯仪器有限公司)；无水葡萄糖对照品
(北京拜尔迪生物公司，批号G一8270，供定量测定
用)。浓硫酸、苯酚、乙醇均为分析纯(北京化工厂)。
收稿日期：2008．04—05
作者简介：武孔嫒(1982一)，女，贵州省六盘水人。北京中医药大学中药学院在读硕士研究生，主要从事中药质量方面的研究．
Tel：(010)84738623E—mail：kongyuanll2@163．com
‘
*通讯作者王文全Tel：(010)84738623E—mail：wwq57@126．corn
万方数据
甘肃道地黄芪种苗的离体快繁研究
作者： 张延红， 何春雨， 刘晓博， 杜彼， 陈红刚
作者单位： 张延红,刘晓博,杜彼,陈红刚(甘肃中医学院药学系,甘肃,兰州,730000)， 何春雨(甘肃省冬
小麦研究所,甘肃,兰州,730020)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(11)

参考文献(11条)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200811042.aspx