全 文 ：·554· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
野罂粟总生物碱镇痛作用部位的研究
杨宇杰1，王春民如，袁亚非1，刘豫安1，佟继铭1
(1．承德医学院，河北承德067000；2．承德颈复康药业集团有限公司，河北承德067000)
摘 要：目的 研究野罂粟总生物碱(TAPN)的镇痛作用部位。方法采用小鼠福尔马林试验，ip和iv两种给药
途径对醋酸所致小鼠扭体反应所得EDso进行比较，小鼠和大鼠侧脑室给药法(icv)、脊髓蛛网膜下腔给药法(ith)
确定TAPN的镇痛作用部位。结果TAPNip给药对福尔马林致痛的早、晚两相疼痛反应均有抑制作用，对晚期
相更为敏感。ip或iv等剂量的TAPN，对小鼠扭体反应的抑制程度多以ip为强，且测得TAPN给药后各个时间段
的ED一。。，均小于ED一．，，。TAPN微量icv给药具有明显的镇痛作用，而微量ith给药无明显的镇痛作用。结论
TAPN的镇痛作用部位主要在外周，同时也具有中枢镇静作用，且在脊髓以上水平。
关键词：野罂粟总生物碱；镇痛作用；脊髓；中枢作用
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253～2670(2005)04—0554—04
AnalgesicsitesoftotalkaloidsinPapavernudicaule
YANGYu—jiel，WANGChun—rain2，YUANYa—feil，LIUYU—anl，TONGJi—min91
(1．ChengdeMe icalCo lege，Chengde067000，China；2．ChengdeJFKP armaceutic
GroupCo．，Ltd，Chengde067000，China)
Abstract：ObjectiveTostudytheanalgesicsitesandmechanismoftotalkaloidsinPapavernudi—
came(TAPN)．MethodsThesitesofanalgesicactionofTAPNwereobservedbya optingFormalintest
andtwodifferentou esofintracerebroventricular(icv)，intrathecal(ith)inmiceandra sandcomp ring
ED50ofTAPNinwrithingreactioninmiceinducedbyacetica idbyipandivadministration．Results
TAPNsignificantlyloweredpainscoreofthearlyandlatephaseofFormalinresponseandwasmores n—
sitiveinthe1atephase．InhibitionofTAPNatthesamedosebyipadministrationinwr thingreactionin
miceinducedbyaceticacidwastrongerthanthatbyiv．TheED50valueofTAPNatanytimebyipadmin—
istrationwaslowerthanthatbyiVadministration．Bymea sofcentralmicroiniection，TAPNbyiCVad—
ministrationinducedr markableana gesicffectinmice．butTAPNbyithadministrationh dnosignifi—
cantanalgesicffect．ConclusionThesitesfanalgesicactionofTAPNaremainlyatperiphery．TAPN
hasalsocentralanalgesicffect，andthesitemayheatthelevelabovethespinalcord．
Keywords：totalalk oidsinPapavernudicaule(TAPN)；analgesiceffect；spinalcord； entraleffect
野罂粟总生物碱(totalalkaloidsinPapaver
nudicaule，TAPN)是从罂粟科植物野罂粟P出
pavernudicauleL．中提取出来的总生物碱，药理学
研究表明其具有较强的镇痛作用，且维持时间较长，
毒性较低，长期应用未出现致身体依赖性[1’2]。本实
验初步分析确定TAPN的镇痛作用部位，为进一步
研究开发TAPN奠定实验基础。
1材料
1．1动物：昆明种小鼠，18～22g，河北省实验动物
中心提供，合格证号：医动字第04056号。Wistar大
鼠，180～220g，中国医学科学院实验动物中心提
供，合格证号：医动字2002—048号。
1．2药品与试剂：TAPN(质量分数为59．3％)，承
德医学院中药研究所提供；吗啡，东北第六制药厂生
产，批号001009；吲哚美辛，上海第一制药厂生产，
批号990212；醋酸，化学纯，上海化学试剂厂出品，
批号980425；甲醛，化学纯，上海泗联化工厂出品，
批号990402。
1．3 仪器：DT一100A分析天平，北京光学仪器厂；
江湾Ⅱ型立体定位仪，贝克曼公司；冰冻切片机，上
海新华元件厂；WQ～9E痛阈测定仪，北京海淀电
子医疗仪器厂。
2方法与结果
2．1 福尔马林试验：取小鼠40只，随机分为4组，
收稿日期：2004—06—16
作者简介：杨宇杰(1969一)，女，医学硕士，副教授，研究方向为中药新药开发与研究。
*通讯作者
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·555·
即生理盐水(NS)组、吲哚美辛(20mg／kg)组、
TAPN两个剂量(74、37mg／kg)组。各组小鼠ip给
予相应药物后30min，于小鼠右后足掌SCl％福尔
马林10弘L，分别观察记录注射后o～5min(早期
相)及20～30min(晚期相)的疼痛症状并评分。0
分：行走自如；1分：跛行，不动时撑地；2分：抬足；3
分：抖足或舔足。各组总评分按下列公式计算。结果
见表1(数据均用z±S表示，组间进行t检验)。
评分一(Otl+It2+2t3+3t4)／(￡1+f2+如+f4)
tl、t2、t3、t4分别为0、1、2、3rain的各自持续时间
表1 TAPN对福尔马林致小鼠疼痛反应
的影晌(；土s，席一10)
Table1 EffectofTAPNonpainreactioninmice
inducedbyFormalin(；士s，厅一10)
与NS组比较：’P<0．05一P<0．01
’，
痛作用：取小鼠90只，随机分为9组，每组10只，
分别为NS组、ip和ivTAPN50、25、12．5、6．25
mg／kg剂量组(O．2mL／10g)，给药后5min各组
小鼠ip0．7％醋酸0．1mL／10g，观察小鼠扭体反
应：腹部内凹，躯干与后腿伸直，臀部高起，连续记录
每10min内的扭体数，计算药物对扭体反应的抑制
率，以给药后扭体次数减少50％以上为有效镇痛
作用指标。结果见表2。根据表2结果，采用简化机
率单位法求出药物镇痛的ED。。及95％可信限，结
果见表3。
抑制率一(NS组平均扭体数一给药组平均扭体数)／NS
组平均扭体数X100％
2．3 TAPN经脊髓蛛网膜下腔给药(intrathecal
injection，ith)的镇痛作用
2．3．1 TAPNith给药对小鼠的镇痛作用：小鼠
ith给药法：实验时固定小鼠腰骶两侧，用4号针头
连微量注射器，自L。～L。间隙进针，以鼠尾突然侧
向摆动为注射成功标志，约1rnin内缓慢注射完，一
次注射量为10弘L。取小鼠40只，随机分为4组，即
NS组、吗啡(0．05mg／kg)组和TAPN(0．4、0．2
mg／kg)组，分别ith给药10弘L，ipo．7％醋酸o．1
mL／10g后，连续记录每10min内的扭体数，计算
药物对扭体反应的抑制率，结果见表4。
2．3．2 TAPNith给药对大鼠的镇痛作用：大鼠
ith给药法：ip戊巴比妥钠35mg／kg麻醉大鼠，暴
露并刺破L。～L。间隙的黄韧带，置入聚乙烯PE一10
导管(内径0．28mm，外径0．61ram)，见导管外口
有脑脊液缓慢滴出，表示导管已插入蛛网膜下腔，封
口。外露部分固定于肌肉和皮肤，并缝合。手术后第
表2 TAPNip和iv给药对醋酸致小鼠扭体反应的影响(工±s，n—10)
Table2 EffectsofTAPNbyipandivadministrationonwr thingreactioninmiceinducedbyacetica id(j±s，行一10)
与NS组比较：‘P
表3 TAPNip和iv给药对醋酸致小鼠扭体反应的镇痛ED，。及95％可信限
Table3 AnalgesicED50and95％confidencelimitsofTAPNbyipandivadministration
writhingreactioninmiceinducedbyaceticacid
万方数据
·556· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
表4 TAPNith给药对醋酸致小鼠扭体反应的影响(；±s，肛一10)
Table4 EffectsofTAPNbyithadministrationonwr thingreactioninmiceinducedbyacetica id(i士s，捍一10)
与NS组比较：一P
6天开始实验。取预先脊髓蛛网膜下腔埋管的大鼠24
只，体重180～220g，随机分为3组，即NS组、吗啡
(o．5mg／kg)组和TAPN(1mg／kg)组，分别ith
给药10pL，即将10肛L药液在瘘管外端，用注射器
在1min内缓慢注入蛛网膜下腔，注药后用5肚L人
工脑脊液冲洗导管。给药后用电刺激甩尾法测痛。
大鼠电刺激致痛法：采用WQ一9E痛阈测定仪
输出方波阶梯电流(波宽0．1ms，频率5kHz，阶梯
高度0．02mA，阶梯宽度1S)，刺激鼠尾近尖端1／3
处，以引起动物甩尾的电流强度(mA)作为痛阈，
选取基础痛阈在0．3mA以下的大鼠进行实验，给
药前测痛两次，间隔20min，取其平均值作为基础
痛阈。如给药后测痛电流高达1mA而动物仍不甩
尾时，终止刺激，以1mA作为其痛阈。以给药后痛
阈提高1倍以上者，作为有效镇痛作用。
中枢给药部位的鉴定：大鼠ith给药测痛实验
结束后，经注射管注入氨黑10B20pL，10min后处
死大鼠，解剖脊柱，观察埋置导管的位置及给药部
位。结果见图1。
2．4 TAPN经侧脑室给药(intracerebroventricu—
larinjection，icv)的镇痛作用
2．4．1 TAPNicv给药对小鼠的镇痛作用：小鼠
icv给药法：实验时固定小鼠头部，用49-针头连微
5 10 20 30 60 90 120
f／mln
1一NS2-TAPN3一吗啡
1-NS2-TAPN3-morphine
图1 TAPNith给药对电刺激所致大鼠甩尾
反应的影响(；土s，n一8)
Fig．1EffectofTAPNbyithadministration
ontailflickreactioninratsinduced
byelectricstimulation(；土s，聘=8)
量注射器，在小鼠两耳连线与两眼连线之间，稍偏高
正中线的头盖骨部位上，将注射器垂直刺入约2
mm(预先用外套管固定针尖头端距离)，约1rain
内缓慢注射完，一次注射量为10肛L。取小鼠40只，
随机分为4组，即NS组、吗啡(0．05mg／kg)组和
TAPN(O．4、0．2mg／kg)组，分别icv给药，5min
后ip0．7％醋酸0．1mL／10g，由ip醋酸后的第6
分钟开始连续记录每10min内的扭体数，计算药物
对扭体反应的抑制率，结果见表5。
表5 TAPNicv给药对醋酸致小鼠扭体反应的影响(；±s，万一10)
Table5 EffectsofTAPNbyicvadministrationonwr thingreactioninmiceinducedbyacetica id(j±s，席一10)
与NS组比较：。P
icy给药法：ip戊巴比妥钠35mg／kg麻醉后，将大 内芯的不锈钢注射套管插入侧脑室内。取出内芯，见
鼠固定在立体定位仪上，参考KongandKlippel大有脑脊液流出或波动时即将外套管固定于清洁干燥
4
l
8
5
2
9
2
2
1
1
1
0
璧桀嚣瑚垦巢崾糯妇
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·557·
的颅骨上，手术后第6天开始实验。选取预先侧脑室
埋管的大鼠32只，雌雄兼用，体重180～220g，随
机分为4组，每组8只，即NS组、吗啡(O．5mg／
kg)组和TAPN(1、0．5mg／kg)组，分别icv给药。
注射给药时，拔出内芯，插入外径与内芯一致，长度
比外套管长约0．5mm的注射管，将10弘L药液缓
慢均匀地注入侧脑室，时间约为1min。注射完毕
后，将注射套管保留20min，以防药液溢出。给药后
不同时间用电刺激甩尾法测痛阈。
中枢给药部位的鉴定：大鼠icv给药测痛实验
后，经注射套管注入生物活性染料氨黑10B10弘L，
10min后处死大鼠，取脑作冰冻切片，参照图谱确
定注射部位。结果见图2。
5 10 20 30 60 90 120
t|min
1-NS2-吗啡 3一’11APN0·5mg／kg4一’rAPN1mg／kg
1-NS2-morphine3TAPN0．5mg／kg4一TAPN1mg／kg
图2 TAPNicv给药对电刺激所致大鼠甩尾
反应的影响(i±s，n一8)
Fig．2EffectofTAPNbyicyadministration
ontailflickreactioninratsinduced
byelectricstimulation(i±s，n一8)
3讨论
在小鼠后足掌注射1％福尔马林可产生持续
时间较长的紧张性疼痛，并表现为两个时相[3]，
Dubuisson等[43认为两相中致痛作用的机制是不同
的，早期相(0--5rain)是由于注射福尔马林后直接
刺激外周神经末梢引起的疼痛反应；晚期相(20～
30min)可能是由于福尔马林注射后继发的炎性反
应所致。本实验研究结果发现TAPN对小鼠福尔马
林致痛的早、晚两相均有抑制作用，而对晚期相更为
敏感，说明TAPN既能抑制因炎症介质引起的痛觉
过敏，又能抑制因直接刺激伤害性感受器引起的疼
痛反应。
Nakamura[51曾用大鼠醋酸扭体法分别测定
Tolmetin钠ip和iv后的镇痛ED。。及血浆和腹腔
渗出液中药物的浓度以鉴别其镇痛作用部位是在中
枢或在外周，认为如果镇痛药的作用部位在外周，则
ip给药后，在用药局部即可显现镇痛作用，而iv给
药则需待一部分药物分布到腹腔后才出现镇痛作
用，故ED。。。。。，小于ED。。。i，，；反之，如镇痛作用部位
在中枢，ip给药时，药物需首先吸收入血，然后进入
中枢才会出现镇痛作用，故ED。。。。。，远远大于
ED。。“，，。本实验参照有关文献的报道[6]，用小鼠醋酸
扭体法测得TAPN给药后各个时间段的ED。。“。，均
小于ED。0(i，)，而且ip或iv等剂量的TAPN，对小鼠
扭体反应的抑制程度多以ip给药为强，结合TAPN
在福尔马林实验中对晚期相疼痛反应更为敏感的特
点，推断TAPN的镇痛作用部位主要在外周。
本实验同时研究了TAPNicv及ith两种给药
途径对小鼠醋酸扭体法和大鼠甩尾法的镇痛作用，
结果发现与全身给药剂量(小鼠ip给药的ED。。为
25．14mg／kg，大鼠ip给药的ED5。为62．35rag／
kg)相比，icv极微量(小鼠0．4mg／kg，大鼠1mg／
kg)TAPN具有明显的镇痛作用，而ith同样微量
TAPN无明显镇痛作用，提示TAPN在中枢也具
有镇痛作用，而且其镇痛作用部位可能在脊髓以上
的神经结构。
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9
4
9
4
9
2
2
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1
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万方数据
野罂粟总生物碱镇痛作用部位的研究
作者： 杨宇杰， 王春民， 袁亚非， 刘豫安， 佟继铭， YANG Yu-jie， WANG Chun-min， YUAN
Ya-fei， LIU Yu-an， TONG Ji-ming
作者单位： 杨宇杰,袁亚非,刘豫安,佟继铭,YANG Yu-jie,YUAN Ya-fei,LIU Yu-an,TONG Ji-ming(承德
医学院,河北,承德,067000)， 王春民,WANG Chun-min(承德颈复康药业集团有限公司,河北
,承德,067000)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(4)
被引用次数： 6次
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