全 文 ：中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 721·
杭白菊子叶和下胚轴组织培养技术的研究
张媛，王康才’，汤兴利
(南京农业大学园艺学院中药材科学系，江苏南京210095)
摘要：目的 以杭白菊子叶和下胚轴为外植体进行组织培养，寻找适宜诱导菊花子叶和下胚轴愈伤组织发生和
分化的激素配比。方法 采用不同的激素配比MS培养基对杭白菊子叶和下胚轴分别培养。结果试验设计的培
养基均能诱导产生愈伤组织，但不同的激素配比对芽诱导分化的影响不同。其中Ms+IAA0．3mg／L+6-BA12
mg／L诱导菊花子叶和下胚轴得到的愈伤组织粗大且致密；MS+IAA0．3mg／L+6一BA4mg／L适宜子叶不定芽
的诱导。诱导率为67．5％；MS+KT2mg／L+NAA0．2mg／L适宜下胚轴不定芽的诱导，诱导率为62．5％；生根培
养采用1／2MS+NAA0．1mg／L，7d后生根率为100％。结论本实验建立了以杭白菊子叶和下胚轴为外植体的
高频快繁体系，不定芽诱导频率高且生长健壮。
关键词：杭白菊；子叶；下胚轴；组织培养
中圈分类号：R282．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1721—03
Tissueculturef omcotyledonandhypocotylexp antsofChrysanthemummorifolium
ZHANGYuan，WANGKang—cai，TANGXing—li
(CollegeofHorticulture．NanjingAgriculturalUniversity．Nanjing210095，China)
Abstract：ObjectiveToseekthoptimizationhormonecombinationforthecallusinductionand
differentiationfromc tyledonandhypocotylexplantsofChrysanthemummorifoliumthroughtissue
culture．MethodsCotyledonandhypocotylexp antswereculturedonvariousmediumwithdifferent
hormonecombinations．ResultsCalluscouldbeinductedon verymediadesignedi thisexperiment，but
theffectstotheinductionandifferentiationcul ureofbudsweredifferent．Theresultsshowedthathe
mediumMS+IAAO．3mg／L+6一BA12mg／Lwasuitabletotheinductionofcallusfromcotyledonand
hypocotyl．TheoptimalhormonecombinationwasMS+IAA0．3mg／L+6一BA4mg／Lfortheinitiationof
adventitiousbudfcotyledon．Theshootregenerationpercentagereached67．5％．Theoptimalediumfor
theinitiationofadventitiousbudfhypocotylwasMS+KT2mg／L+NAA0．2mg／L．Theshoot
regenerationpercentagereached62．5％．Rootingwasinducedon1／2MS+NAA0．1mg／L，andtheroot
inductingratioreached100％in7d．ConclusionArapidplantletr generationsystemforC．morifolium
isestablishedfromcotyledonandhypocotylexp ants．Budind ctionfrequencyishigherandtheshootsin
vitrogrowvigorously．
Keywords：ChrysanthemummorifoliumRamat．，cotyledon；hypocotyl；tissueculture
药用杭白菊ChrysanthemummorifoliumRamat．
为菊科植物，以干燥头状花序入药，具有散风清热，
平肝明目之功效，主要用于风热感冒、头痛眩晕、目
赤肿痛、眼目昏花等[1]。组织培养技术在菊花上的应
用研究开展较早，1983年裘文达等[21通过对菊花花
瓣的组织培养获得了新类型。李玉芬[3]对菊花的花
器官——花瓣、花萼、花托、雌雄蕊和开放前的花蕾
进行诱导均实现了植株再生。薛建平等r4]对安徽药
菊叶片组织培养也实现了植株再生，而关于药用菊
花子叶和下胚轴组织培养技术尚未见报道。一般情
况下，选用子叶和下胚轴为外植体，不仅具有愈伤组
织诱导率高、不定芽分化频率高等优点，而且较其他
外植体易产生变异。王仑山等[5]对枸杞下胚轴进行4
次继代培养筛选出耐盐变异体。齐飞等[6]诱导辣椒
子叶并成功筛选出辣椒的抗疫病体细胞变异体系。
兰州大学通过对紫苏子叶和下胚轴组培建立了快繁
体系并发现了形态变异口]。本课题组在研究杭白菊
开花结实习性的基础上，开展了子叶和下胚轴的组
织培养研究，寻找适宜诱导菊花子叶和下胚轴愈伤
组织的激素配比和适宜的芽诱导培养基，以期获得
收稿日期：2008一01—30
基金项目：江苏省科技厅高技术研究项目(BC2005318)
作者简介：张嫒(1982一)．女．山东充州人，在读硕士研究生，从事药用菊花栽培育种方面的研究。E—mail：yz—zy@126．com
*通讯作者王康才Tel：(025)84396125E—mail：njwkc2002@126．tom
万方数据
·1722· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
变异植株，筛选出药用成分高和抗逆性强的品种。
1材料与方法
1．1 材料：供试品种为杭白菊品种“红心菊”，经南
京农业大学王康才教授鉴定。种植于南京农业大学
中药材实验基地，花败后收取种子，经消毒接种于
1／2MS培养基培养，以无菌苗的子叶和下胚轴为材
料进行组织培养。
1．2愈伤组织的诱导、分化和继代培养：剪取无菌
苗的子叶和下胚轴，将子叶和下胚轴分别切成2段，
接种于不同激素配比的培养基上，附加蔗糖30g／L，
琼脂5g／L，调pH值5．7～5．8。每瓶装4个外植体，
重复10瓶。25℃、2000Ix条件下培养。每20d继
代1次，观察统计愈伤组织的诱导、不定芽的诱导和
分化情况，最后筛选出适宜的愈伤组织诱导培养基
和不定芽诱导分化的培养基(不同激素配比培养基
浓度见表1)，外植体均为40个，培养30d统计结果。
1．3生根培养：将初代培养和继代培养的丛生苗转
接到1／2MS+NAA0．1mg／L的生根培养基上进
行生根培养。
2结果与分析
2．1 不同激素配比诱导愈伤组织的差异：培养
13d，下胚轴较子叶先开始形成愈伤组织。培养
30d，子叶和下胚轴在8种培养基中愈伤组织的生
长情况见表1。从整体上看，IAA+6一BA激素组合对
菊花愈伤组织的诱导较好，愈伤组织生长快，颜色浓
绿，尤其是MS+IAA0．3mg／L+6一BA12mg／L诱
导的愈伤组织块粗大致密。2，4一D虽然诱导率也高，
但其诱导的愈伤组织多呈紫红色(图1)，且随着
2，4一D质量浓度的升高，现象越严重，后期出现褐
化。下胚轴愈伤组织的平均诱导率高于子叶，说明下
胚轴对激素的种类和浓度的选择性不强，易诱导产
生愈伤组织，其脱分化能力比子叶强。
2．2不同激素配比对诱导不定芽的影响：培养21d，
MS+KT2mg／L+NAA0．5mg／L诱导菊花子叶
和下胚轴愈伤组织直接出苗，且随着KT／NAA的
增大，直接出苗的效果越明显(图2)。培养40d，各培
养基不定芽诱导率见表2。结果表明，子叶较下胚轴
不定芽诱导率高，说明子叶的再生频率较下胚轴
高。适宜子叶不定芽诱导的激素组合是MS+IAA
0．3mg／L+6一BA4mg／L，诱导率为67．5％。适宜下
胚轴不定芽诱导的激素组合是MS+KT2mg／L+
NAA0．2mg／L，其不定芽的诱导率为62．5％。
2．3生根、炼苗与移栽：将5cm左右的丛生苗及继
代培养的苗转至生根培养基1／2MS+NAA0．1
裹1不同激素配比愈伤组织诱导率
Table1 lnductivityofcallusoncotyledonandhypocotyl
explantsofC．morifoliumwithdifferent
hormonecombinations
子叶 下胚轴
培养基／(mg·L。)愈伤组织愈伤组织愈伤组织愈伤组织
形成块散形成率／％形成块数形成率／％
圈1 2，4-D直接诱导生根
Fig．12，4一Dtodirectinductionofr oting
圈2 MS+KT2mg／L+NAA0·5mg／L培养基诱导子时
直接产生丛生芽
Fig．2MS+KT2mg／L+NAA0．5mg／Ltobudinduction
fromcotyledon
mg／L上，7d后即形成不定根，不定根的诱导率为
100％。当试管苗长至10cm、5～6条粗根时，拧开瓶
盖，用封口膜封上，在封口膜上扎少许小孔，7d后，
撤去封口膜，再培养3d，转入蛭石中炼苗7d。以上
过程均在培养室内进行，而后即可移栽人大田。
3讨论
药用菊花组织培养主要用于培育新品种、快速
繁殖及脱毒等方面。本研究首次建立了以杭白菊子
叶和下胚轴为外植体的高效快繁体系，不定芽诱导
率高且生长健壮，为筛选出药用成分高和抗逆性强
的品种奠定基础。适宜子叶和下胚轴愈伤组织诱导
的激素组合均为MS+IAA0．3mg／L+6-BA12
万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第1I期2008年11月· 723·
表2不同激素配比不定芽的诱导率
Table2 Adventitioussh otinducingratesfrom
cotyledonandhypocotylwithdifferent
hormonecombinations
子叶 下胚轴
培养基／(mg·L-1)产生不定芽不定芽诱产生不定芽不定芽诱
的外植体数导率／％的外植体数导率／％
mg／L，诱导率分别为90％和95％，适宜子叶不定芽
诱导的激素组合是MS+IAA0．3mg／L+6-BA4
mg／L，适宜下胚轴不定芽诱导的激素组合是MS+
KT2mg／L+NAA0．2mg／L。生根培养均采用
1／2MS+NAA0．1mg／L，7d后生根率为100％。实
验中MS+KT2mg／L+NAA0．5mg／L可诱导菊
花子叶和下胚轴愈伤组织直接出苗，成苗周期大大
缩短，不定芽生长健壮。
在本实验中，随着2，4一D质量浓度的升高，愈伤
组织诱导率增大，但其诱导的愈伤组织普遍呈现出
紫红色，在其后期的生长过程中出现严重褐化现象，
这可能是由于2，4一D易引起培养物突变的结果[8]。
鉴于2，4一D的高诱导率，在不定芽诱导中，可以选择
其他的激素配合2，4一D使用，以充分利用其诱导率
高的优点。但在菊花愈伤组织诱导时，不宜添加2，4一
D，以防止褐化发生。
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叶下珠愈伤组织的诱导与培养
常莉1’2，薛建平h2‘
(1．淮北煤炭师范学院生命科学学院，安徽淮北 235000；2．资源植物生物学安徽省重点实验室，安徽淮北235000)
摘要：目的建立叶下珠愈伤组织培养方法。方法采用组织培养方法，比较不同外植体、蔗糖、植物生长物质及
其配比对叶下珠愈伤组织诱导的影响。结果茎段的诱导率最高，为55．56％，叶片诱导不出愈伤组织。6-BA是叶
下珠愈伤组织形成的主要影响因素，2，4-D、NAA、蔗糖次之。结论叶下珠愈伤组织诱导及继代的适宜培养基为
MS+2，4一D0．5mg／L+6-BA1．0mg／L+NAA0．1mg／L+蔗糖10g／L。
关键词：叶下珠；组织培养；愈伤组织
中图分类号：R282．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1723—04
Callusinductionandcultivationofmvllanthusurinaria
CHANGLil．2。XUEJian—pingh2
(1．DepartmentofBiology，HuaibeiCoalIndustryTeacher’SCollege，Huaibei235000，ChinaI2．AnhuiKey
LaboratoryofPlantResourcesandBiology，Huaibei235000，China)
Abstract：ObjectiveToestablishculturemethodforPhyllanthusurinaria．MethodsTostu ythe
possibleeff ctivefactorsfcultureconditionbycomparingw thdifferentexplants，sucrose，plantgrowth
substance，anditsr tio．ResultsTheinductivityofs emwasthehighestabout55．56％，butcallusof
收稿日期：2008—01．14
基金项目：国家农业成果转化基金项目(05EFN213400124)I淮北市重大专项(06085)
作者简介：常莉(1981一)，女，安徽砀山人，讲师．硕士．主要从事组织培养技术研究．
*通讯作者 薛建平Tel：(0561)3802025E—mail：xuejp2000@yahoo．corn．cn
万方数据
杭白菊子叶和下胚轴组织培养技术的研究
作者： 张媛， 王康才， 汤兴利， ZHANG Yuan， WANG Kang-cai， TANG Xing-li
作者单位： 南京农业大学园艺学院,中药材科学系,江苏,南京,210095
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(11)
被引用次数： 2次
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explants of Perilla frutescens and their morphological aspects[外文期刊] 2005(03)
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