全 文 ：·1052· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
3．2黄连解毒汤70％醇提物对S，。。小鼠MDR模
型MDR表达产物LRP过度表达的影响：经化疗诱
导4周后传代10d的小鼠耐药S，。。肿瘤细胞LRP
表达率与诱导4周比较无明显变化，而给予黄连解
毒汤70％醇提物明显逆转了耐药S。。。肿瘤细胞
LRP的过度表达，与模型对照组比较差异极显著
(P<0．001)，见表1。
3．3黄连解毒汤70％醇提物对S。。。小鼠MDR模
型MDR表达产物TOPOⅡ表达的影响：黄连解毒
汤70％醇提物显著逆转由化疗诱导后的获得性耐
药小鼠S，。。细胞TOPOⅡ的过度表达，而诱导后传
代10d的模型对照组与诱导后4周时其表达率无
明显差异，提示黄连解毒汤70％醇提物可能通过
逆转TOPOⅡ的过度表达，干预化疗引起的MDR，
见表1。
4讨论
肿瘤化疗获得性MDR的发生，可见到肿瘤细
胞MDR基因、耐药蛋白过度表达，肿瘤细胞TOPO
Ⅱ等相关酶活性增加等表现。耐药基因和耐药蛋白
的过度表达时，可将化疗药物经跨膜转运排出细胞
并阻止药物进入细胞核，使化疗药物不能发挥细胞
毒性作用[4~63；TOPOⅡ活性增强，增强DNA修复
能力，拮抗化疗药物的细胞毒性[6]，还原性谷胱苷肽
酶活性增加，与化疗药物结合，阻止化疗药物作用于
肿瘤细胞，而产生耐药性。中药生物碱具有干预和逆
转肿瘤MDR的作用[7]。
本研究应用模拟临床肿瘤患者临床化疗诱导小
鼠S。。。细胞表达产生耐药性，观察了黄连解毒汤
70％醇提物体内给药对肿瘤细胞耐药相关生物活
性物质P。，。、LRP、TOPOⅡ表达的影响，结果显示
黄连解毒汤70％醇提物可以明显逆转小鼠S。。。细
胞耐药基因MDR的表达产物P。，。、肺耐药蛋白
LRP过度表达，抑制细胞拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)
的活性。提示黄连解毒汤70％醇提物可以抑制肿
瘤细胞MDR的产生，其干预机制可能是通过对耐
药基因和耐药蛋白表达的调控，相关酶活性的影响
而实现的。
References：
E13ZhengHZ，DongZH，SheJ．ModernStudyofTraditional
ChineseMedicine(中医药现代研究)[M]．Beijing：Xueyuan
．Press，1997．
Ez3XuLJ，WangZM，SunFJ，eta1．Establishingmicemodel
of multidurgresistanceoftumorinducedbycombined—
chemotherapy[J]．LabAnirnCampMed(实验动物与比较医
学)，2005，25(4)：215—2r17．
[3]YinGP，GuQ，ChenM，eta1．Establishingofmouse
ascitesmodelinducedwithSis0celllinetoobtainmulti—drug
resistancegenexpression[J]．ShanghaiJImmunol(上海
免疫学杂志)，2001，5(21)：282—285．
[4]HaMH，TsuruoT．Purificationof he170一tO180一
kilodaltonmembraneglycoproteinassociatedwithmultidrug
resistance．170一to180一kilodaltonmembraneglycoproteinis
anATPase[J]．JBionChern，1988，263(3)：1454—1458．
[5]ListAF．Non—P—glycoproteindrugexportmechanismsof
muhidrugresistance口]．SeminHematol，1997，34(4)：20—
24．
[6]BallatoriN，RebberJ F．RolesofMRP2andoatplin
hepatoeellularexportof educedgiutathione[J]．SeminLiver
Dis，1998，18(4)：377—387．
[7]SunFJ，WangN，LiGH，eta1．Effectofmatrino the
expressionofP170，LRPandTOPOI ofobtainedmulti-drug
resistanceofmouseSis0’Stumourcell[J]．JChinMater
Med(中药材)，2004，27(11)：838—840．
沙苑子抗肿瘤活性部位体内外筛选
刘春宇1，顾振纶2，杜崇民1，杨吉成铲
(1．苏州大学药学院，江苏苏州 215123；2．苏州中药研究所，江苏苏州215123；
3．苏州大学细胞和分子生物学教研室，江苏苏州 215123)
沙苑子为豆科植物扁茎黄芪Astragalus
complanatusR．Br．exBunge干燥成熟的种子，具
有温补肝肾、固精、缩尿、益肝明目的功能。药理研究
表明沙苑子提取物具有改善血液流变学指标、降低
血压、调节血脂、抑制血小板聚集、保护肝脏、增强免
疫功能、抗炎、镇痛及调节中枢神经系统等作用‘¨。近
年来，本课题组对沙苑子的有效成分和药理活性进行
了深入研究，实验证明沙苑子黄酮具有较好的保肝、
收稿日期：2006—12—10
基金项目：江苏省高校自然科学基础研究项目(06KJB360105)；苏州市社会发展科技项目(SS0515)
作者简介：刘春宇，女，硕士生导师，教授，研究方向为中药有效成分及药理作用研究。
Tel：(0512)55221518E—mail：chunyuliu998@msn．eom
*通讯作者杨吉成Tel：(0512)65880107E—mail：yangjicheng@suda．edu．an
万方数据
中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月·1053·
抗纤维化、降血脂等药理作用‘2州]，还发现沙苑子提
取物具有显著的抗肿瘤作用，为了进一步阐明沙苑子
抗肿瘤活性成分，本课题组应用溶剂萃取法和大孔吸
收树脂柱相结合的方法分离沙苑子乙醇提取物，采用
MTT法测定各部位体外对人早幼粒白血病细胞
HL一60、人肝癌细胞SMMC一7721、人低分化胃肠癌
细胞BGC一823、人肺癌细胞A549和人宫颈癌细胞
HeLa的抗肿瘤活性，同时采用S，。。小鼠肉瘤模型进
行体内筛选，期望从中找出沙苑子抗肿瘤活性成分。
1材料与方法
1．1材料：沙苑子药材由苏州雷允上药业集团公司
提供，产地为陕西渭南，由苏州市药品检验所吴银生
主任药师鉴定为豆科植物扁茎黄芪A．complanatus
R．Br．exBunge的种子；黄酮吸附树脂ZTC一5柱
(天津正天澄清技术有限公司，南开大学研制)；
RPMI一1640培养基为Gibco产品；MTT为Sigma
产品；小牛血清为四季青公司产品；顺铂注射液为江
苏豪森药业股份有限公司产品(批号041101)；环
磷酰胺(CTX)，江苏恒瑞医药股份有限公司(批号
04123021)。乙醇为药用乙醇，其他试剂均为分析纯。
1．2 动物和细胞系：昆明种小鼠，雄性，SPF级，
18～22g，由苏州大学实验动物中心提供，实验动物
生产许可证号：XCYK(苏)2002—0008；实验动物使
用许可证号：SYXK(苏)2002—0037。人早幼粒白血
病细胞HL一60、人肝癌细胞SMMC一7721、人胃癌细
胞BGC一823、人肺癌细胞A549、人宫颈癌细胞
HeLa和小鼠肉瘤细胞S。。。均引自中国科学院上海
细胞生物研究所的细胞库。
1．3方法
1．3．1沙苑子乙醇提取物的制备：沙苑子10kg，
95％乙醇回流提取3次，每次1h，滤过，减压回收，
制成沙苑子乙醇提取物，备用。
1．3．2各部位的提取与分离：取沙苑子乙醇提取
物，加10倍量的蒸馏水，加热溶解，冷却后，石油醚
萃取3次，回收石油醚，得沙苑子油部分(A1)；母
液上已处理好的黄酮吸附树脂ZTC一5柱，蒸馏水
洗脱至无色，浓缩，为沙苑子多糖(A2)；用20％乙
醇溶液洗脱得沙苑子总皂苷(A3)；用70％乙醇溶
液洗脱色谱柱，得沙苑子总黄酮(A4)。A2含沙苑
子多糖52％，A3含沙苑子总皂苷57％，A4含沙苑
子总黄酮62％。
1．3．3体外抗肿瘤活性部位筛选：HL一60、SMMC-
7721、BGC一823、A549和HeLa细胞用RPMI-1640
培养液(含10％的小牛血清，100kU／L青霉素，
100mg／L链霉素)，37℃、5oAC02、100％相对湿
度培养，0．25％胰蛋白酶消化传代。调整细胞密度
为5×104／mL，每孔90弘L，培养5h，细胞贴壁后加
药或培养液10pL，实验分对照组，顺铂(10mg／L)
阳性对照组，A1、A2、A3、A4各设3个剂量组
(400、200、100mg／L)，每组3个复孔。置37℃、5％
C02培养48h后每孔加入5mg／mLMTT10肚L。
继续培养4h，每孑L加入10％SDS—HCl100弘L终
止反应，紫色颗粒充分溶解后于570nm处测定吸
光度(A)值。按下列公式计算抑制率，并用Logit
法计算IC。。值。
抑制率一(1一用药组平均A值／对照组平均A值)×
100％
1．3．4体内抗肿瘤活性筛选：小鼠S。。。肉瘤模型：
无菌条件下，抽取小鼠腹腔内连续传代的S。。。细胞，
调整细胞浓度至1×1010／L，小鼠右腋皮下接种0．2
mL，接种后随机分成8组，每组10只，即对照、CTX
(25mg／kg)、A2(200、100mg／kg)、A3(200、100
mg／kg)、A4(200、100mg／kg)组，除对照组外，其
余各组每天分别ig(o．2mL／10g)给药，对照组给
予等体积蒸馏水，连续10d。末次给药24h后处死
小鼠，剥取瘤块称质量，按下式计算抑瘤率。
抑瘤率一(对照组瘤质量一给药组瘤质量)／对照组瘤质
量×100％
1．4 统计学处理：数据以z土S表示，采用
SPSSl0．0统计程序进行单因子方差分析处理，组
间采用Dunnett方法比较。
2结果
2．1体外抗肿瘤活性部位筛选：沙苑子提取物A3
和A4部位对HL一60表现出一定抑制作用，其中
A4抑制作用显著。A3对HL一60的IC。。为
246mg／L，A4对HL一60的IC。。为46mg／L，并在
测定质量浓度范围内呈现出一定的剂量依赖性抑制
作用。A4对SMMC一7721和HeLa细胞显示一定的
抑制作用，IC。。分别为238mg／L和347mg／L，A3
对SMMC一7721细胞的IC。。为678mg／L，其余各部
位无明显抑制作用。对BGC一823细胞和A549细胞
沙苑子提取物各部位均无明显抑制作用。提示，沙苑
子提取物A4(沙苑子总黄酮)可能为沙苑子抗肿
瘤的主要活性部位，而A3(沙苑子总皂苷)也有一
定的抗肿瘤作用，结果见表1。
2．2体内抗肿瘤活性部位筛选：在体外筛选结果的
基础上，采用S，。。小鼠肉瘤模型进一步对A2、A3和
A43个组分进行筛选，结果A4明显抑制小鼠S-s。
万方数据
·1054· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
肉瘤的生长，抑瘤率均在30％以上；A3高剂量组
抑瘤率也在30％以上；体内筛选结果提示，A4(沙
苑子总黄酮)有较显著的抑制小鼠S。。。肉瘤作用，
A3(沙苑子总皂苷)也有一定的抑制作用，但作用
强度不如A4，结果见表2。
3讨论
表1 沙苑子各提取部位对肿瘤细胞的抑制率(；±s，拜一3)
Table1 InhibitoryratesofvariousfractionsextractedfromSemenAstragaliComplanationtumorcellG+s。矗一3)
表2沙苑子各提取部位对S180小鼠肉瘤的影响(；士s，露=10)
Table2 EfleetofvariousfractionsextractedfromSemen
AstragaliComplanationtransplanttumorSlse
inmice(i土s，n一10)
与对照组比较：’P
具有改善血液流变学指标、降低血压、调节血脂、保
肝、抗肝纤维化和增强免疫功能等作用。文献报道，
沙苑子主要含有黄酮类、三萜苷类、有机酸、氨基酸、
多肽、蛋白质、鞣质、甾醇、微量元素等成分[1]，但对
其抗肿瘤等活性成分的研究尚无文献报道。本实验
通过体外和体内方法筛选了沙苑子不同提取组分的
抑瘤活性，结果显示，沙苑子黄酮成分无论体外，还
是体内均显示显著的抑瘤作用，体外抑瘤实验对
HL一60、SMMC一7721和HeLa细胞有显著的抑制作
用，其IC。。值分别为46、238、37rng／L；沙苑子总皂
苷成分也有一定的抑瘤作用，但强度较弱。体内实验
结果与体外基本一致，沙苑子总黄酮和总皂苷对小
鼠肉瘤S，。。有显著的抑制作用，由此提示，沙苑子总
黄酮为沙苑子抗肿瘤的主要活性成分，沙苑子总皂
苷可能也是活性成分之一，实验结果为沙苑子抗肿
瘤活性单体成分的深入研究提供了依据。
References：
[1]LiuCY，GuZL．Thechemicalonstituentsandpharma—
cologicaleffectsofAstragaluscomplanatusR．Br．I-J]．Chin
WildPlantResour(中国野生植物资源)，2002，21(2)：I-3．
[2]LiuCY，GuZL，HanR，eta1．Protectiveeffectiveffectof
extractinseedofAstragaluscomplanatusonacutehepatic
injuryinducedbycarbontetrachlorideinm ce[J]．Chin
TraditHerbDrugs(中草药)，2002，33(12)：1104—1106．
[3]LiuCY，GuZL，ZhangKP，eta1．Effectofflavonoidsof
AstragaluscomplanatusonliverlibrosisinducedbyDMNin
rats[J]．ChinPharmacolBul (中国药理学通报)，2004，20
(1)：110—113．
[43LiuCY，GuZL，ZhangKP，eta1．Effectsofllavonoids
extractedfromAstragaluscomplanatusonliverfibrosis
inducedbyCCI‘andserumlevelsofIFN一7andTGF—Binrats
[J]．ChinPharmJ(中国药学杂志)，2004，39(12)：910—
912．
[5]LiuCY，GuZL，HanR，eta1．Protectionofflavonidsfrom
Astragaluscomplanatusseedonacuteliverinjuryinducedby
carbontetrachlorideandD—galactosamin[J]．ChinTradit
HerbDrugs(中草药)，2005，36(12)：1838—1841．
[63LiuCY，GuZL，ZhouWX，eta1．EffectofAstragalus
complanatusflavonoidonanti—liverfib osisinrats[J]．World
JGastroenterol，2005，11(37’)：5782—5786．
万方数据
沙苑子抗肿瘤活性部位体内外筛选
作者： 刘春宇， 顾振纶， 杜崇民， 杨吉成
作者单位： 刘春宇,杜崇民(苏州大学药学院,江苏,苏州,215123)， 顾振纶(苏州中药研究所,江苏,苏州
,215123)， 杨吉成(苏州大学,细胞和分子生物学教研室,江苏,苏州,215123)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(7)
被引用次数： 4次
参考文献(6条)
1.Liu C Y;Gu Z L The chemical constituents and pharmacological effects of Astragalus complanatus
R.Br[期刊论文]-中国野生植物资源 2002(02)
2.Liu C Y;Gu Z L;Han R Protective effective effect of extract in seed of Astragalus complanatus on
acute hepatic injury induced by carbon tetrachloride in mice[期刊论文]-中草药 2002(12)
3.Liu C Y;Gu Z L;Zhang K P Effect of flavonoids of Astragalus complanatus on liver librosis induced
by DMN in rats[期刊论文]-中国药理学通报 2004(01)
4.Liu C Y;Gu Z L;Zhang K P Effects of flavonoids extracted from Astragalus complanatus on liver
fibrosis induced by CCl4 and serum levels of IFN-γ and TGF-β in rats[期刊论文]-中国药学杂志
2004(12)
5.Liu C Y;Gu Z L;Han R Protection of flavonids from Astragalus complanatus seed on acute liver
injury induced by carbon tetrachloride and D-galactosamin[期刊论文]-中草药 2005(12)
6.Liu C Y;Gu Z L;Zhou W X Effect of Astragalus complanatus flavonoid on anti-liver fibrosis in rats
[外文期刊] 2005(37)
本文读者也读过(10条)
1. 刘春宇.顾振纶.张克平.周文轩.郭次仪 沙苑子黄酮对DMN诱导的大鼠肝纤维化形成的影响[期刊论文]-中国药理
学通报2004,20(1)
2. 刘春宇.顾振纶.杜崇民.杨吉成 沙苑子黄酮对H22荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用及对免疫功能的影响[期刊论文]-中
成药2007,29(11)
3. 韦翠萍.於学良.吴纪凯 沙苑子黄酮对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及作用机制[期刊论文]-山东医药
2009,49(47)
4. 刘春宇.孙雄华.张经硕.胡延维.顾振纶 RP-HPLC法测定沙苑子中沙苑子苷[期刊论文]-中草药2005,36(7)
5. 甄汉深.周燕园.袁叶飞.钟振国.梁臣艳.丘琴.ZHEN Han-shen.ZHOU Yan-yuan.YUAN Ye-fei.ZHONG Zhen-guo.
LIANG Chen-yan.QIU Qin 青天葵活性部位的体内抗肿瘤作用研究[期刊论文]-中药材2007,30(9)
6. 齐琳.刘春宇.吴文倩.杨吉成.盛伟华.Qi Lin.LIU Chun-yu.WU Wen-qian.YANG Ji-cheng.SHENG Wei-hua 沙苑
子黄酮对60Coγ射线损伤作用的影响[期刊论文]-苏州大学学报（医学版）2008,28(1)
7. 刘春宇.顾振纶.张克平.周文轩.郭次仪 沙苑子黄酮抗CCl4大鼠肝纤维化作用及对IFN-γ,TGF-β1的影响[期刊
论文]-中国药学杂志2004,39(12)
8. 孙铭.朱争艳.方淑昌.周立波.赵均铭.楮建新.杜智.宋继昌 中药硇砂提取液裸小鼠肿瘤内注射治疗肝癌的实验
研究[期刊论文]-肿瘤防治研究2002,29(5)
9. 刘春宇.顾振纶 沙苑子的化学成分和药理作用[期刊论文]-中国野生植物资源2002,21(2)
10. 陈景枝 东亚钳蝎粗毒纯化组分对Lewis肺癌瘤源小鼠体内肿瘤的影响[学位论文]2006
引证文献(4条)
1.刘银芳.吴文倩.刘春宇.顾振纶.郭次仪 沙苑子黄酮提取工艺研究[期刊论文]-时珍国医国药 2010(6)
2.吴文倩.刘银芳.张娟.顾振纶.郭次仪.刘春宇 沙苑子中沙苑子苷A对照品的制备及鉴定[期刊论文]-时珍国医国药
2010(6)
3.贾英丽.吴心力.宋彩红 益气活血方联合华蟾素注射液对晚期肝癌患者生活质量的影响[期刊论文]-中国中医药咨
讯 2011(14)
4.杜琴.胡兵.沈克平 补益中药抗肝癌作用研究概况[期刊论文]-中药材 2010(9)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200707034.aspx