全 文 ：·1838· 中草药ChineseTraditionalsndHerbalDrugs第36卷第12期2005年12月
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r9一HortelanoSⅢCtrilloA．AfvarezAM，eta1．Contribution
ofcyclopentenoneprostaglandinstothere olutionof nflam D4]
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沙苑子黄酮对CCI。及D一氨基半乳糖致急性肝损伤的保护作用
刘春宇1，顾振纶1，韩蓉1，朱路佳1，周文轩2，郭次仪2
(1．苏州大学医学院药理教研室，苏州中药研究所，江苏苏州215007；2．香港保健协会，香港)
摘要：目的探讨沙苑子黄酮(FAc)对肝损伤的保护作用。方法采用0．1％CCI。(10mL／kg)、D-氨基半乳糖
(DGal，700mg／kg)分别ip造成小鼠急性肝损伤模型．并lg不同剂量的FAC，测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷
草转氨酶(AST)活性，观察肝组织病理改变；用CCIt损伤原代培养大鼠肝细胞，测定细胞培养液ALT、AST活
性，MTT法测定肝细胞增殖活性。结果FAC能显著降低小鼠CCI；和D—Gal损伤原代培养大鼠肝细胞模型ALT
和AST活性(P<0．01)，病理学观察显示．FAC明显减轻肝组织损伤程度(P性，促进肝细胞增殖。结论FAC具有显著的保肝作用。
关键词：沙苑子；黄酮；CCI。；D一氨基半乳糖；肝损伤
中图分类号：R286．55 文献标识码；A 文章编号：02532670(2005)12183804
ProtectionofflavonoidsfromAstragaluscomplanatusseedonacuteliverinjury
inducedbycarbontetrachlorideandD—galactosamine
LIUChun—vul，GUZhen—lunl，HANRon91，ZHULuIial，ZHOUWen—xuan2，GUOci—yi2
(1-DepartmentofPharmacology，SuzhouInstituteofChineseMeteriaMedica．MedicalCollegeofSuzhouUniversity
Suzhou215007，China；2．TheHongKongAssociationforHealthCare，HongKong，China)
Keywords：theseedofAstragaluscomplanatusR．Br．；flavone；CCl4；D—Gal；hepaticinjury
沙苑子系豆科植物扁茎黄芪AstragalusCOin-
planatusR．Br．exBunge的种子，是补益肝肾的传
统中药，主要含有黄酮类、三萜苷类、有机酸、氨基
酸、多肽、蛋白质、鞣质、甾醇、微量元素等“]。前期实
验结果表明沙苑子醇提取物具有明显的保肝作
用o]，为了进一步研究沙苑子保肝有效成分，本课题
组从醇提取物中分离出黄酮成分，采用CCl。、D一氨
基半乳糖(D—Gal)致小鼠急性肝损伤模型和CCI。
损伤原代培养大鼠肝细胞模型，观察沙苑子黄酮
(FACS)的保肝作用。
1材料
1．1药物：沙苑子黄酮(FACS，含黄酮70％)自
制，临用时用生理盐水溶解。联苯双酯片(江苏鹏鹞
药业有限公司)，临用时碾成细粉加生理盐水制成混
悬液。
1．2试剂：CCI。分析纯(南京化学试剂厂)，以橄榄
油稀释成0．1％溶液；DGal(Sigma公司)，临用前
蒸馏水溶解稀释成70mg／ml。溶液；四甲基偶氯唑
盐(MTT，Amerso分装)；谷丙转氨酶(ALT)、谷
草转氨酶(AST)测定试剂盒(上海科欣生物技术
研究所)。
1．3动物：昆明种小鼠，雄性，SPF级，18～24g；
Wistar大鼠，雄性，250～300g，均由苏州大学实验
动物中心提供。
鉴銎品智：箬落景蓉强会研究项目。：HK。。。。。。。。，
作者简介2裂孝{器器?磊j；毫；哥甏2裂教c授hu毒雪馨躬；蔷慧有n．教corn成分及药理作用研究
万方数据
中草药ChineseTradi．dona[andHerbal[)rugs第36卷第12期2005年12月·1839·
2方法
2．1 CCI。小鼠模型一⋯：昆明种小鼠50只，随机分成
5组，即正常组、CCl。损伤模型组、联苯双酯组(25
mg／kg)、FACS(30、120mg／kg)组。正常组和模型
组ig生理盐水，其他各组ig相应药物，每天1次，
连续10d。给药后第1I天，除正常组给予等体积橄
榄油外，其余各组小鼠ip0．1％CCI。，o．1mI．／10
g，禁食，16h后摘眼球取血，制备血清，测定血清
AI，T和AST活性；取肝左叶小块置10％福尔马
林固定，进行苏木精伊红染色，光镜下观察。
2．2DGal小鼠模型：小鼠50只，随机分成5组，
即正常组、D—Gai损伤模型组、联苯双酯组(25rag／
kg)、FACS(30、120mg／kg)组。正常组和模型组ig
生理盐水，其他各组培给予相应药物，每天1次，连
续6d。给药后第7天，除正常组给予等体积生理盐
水外，其余各组小鼠ipD—Gal700mg／kg，禁食z4
h后，摘眼球取血，制备血清，测定血清ALT和
AST活性；取肝左叶小块置10％福尔马林固定，切
片经HE染色，光镜下观察肝细胞损伤程度。
2．3 CCI。损伤培养大鼠肝细胞：参照夏志强等01方
法分离制备肝细胞悬液。0．3％台盼蓝染色判断存
活率，血细胞记数板测定细胞浓度。肝细胞悬液调节
细胞数为5×104／mI．，分别加于24孔培养板，每孔
1mL，预培养20h，换液。根据添加药物的不同分成
5组，每组4个复孔。正常组加入RPMI一1640培养
液；肝损伤对照组加人CCI。溶液至终浓度为20
mmol／L；FACS各组分别加入FACS至终质量浓
为20mmol／I，；FAC组分别加入FACS至终质量
浓度为1．0、0．5、0．25mg／nfl。，并加入CCI。溶液至
终浓度为20mmol／l。。24h后培养板中加入5rng／
mI。MTT溶液，每孔20pL，共同孵育4h后加入
10％十二烷基磺酸钠(SDS)，每孔0．1mL以终止
反应及溶解黑色结晶，酶标仪于570nm波长处测
定吸光度(A)值，反映细胞增殖活性。
2．5 统计学方法：数据以T土S表示，采用SPSS
10．0统计程序进行单因素方差分析处理，组间采用
Dunnett方法比较，等级资料用Ridit检验。
3结果
3．1对CCI。肝损伤小鼠血清ALT和AST的影
响：与正常组相比，模型组小鼠AI。T和AST明显
升高(P<0．01)i与模型组相比，FACS大、小剂茸
组小鼠血清AI。T、AST明最下降(P<0．01)，提示
FACS对CCI。肝损伤小鼠血清ALT和AST活性
升高均有明显的拮抗作用，见表1。
表1 FACS对CCI。肝损伤小鼠血清ALT和
AST活性的影响(；±F，n一10)
TableEfleetofFACSonALTJilldASTaetivities
inserumofliverinjuriedmiceinduced
byCCI。(x2=s，=10)
与模型组比较：一P<01
度为1．0、0．5、0．25mg／mL，并加入CCl。溶液至终 **P浓度为20mmol／L，继续培养4h，取细胞上清液， 3．2对CCl。肝损伤小鼠肝组织病理变化的影响：
测定ALT和AST活性。 与正常组相比，模型组小鼠炎症细胞浸润严重，肝细
2．4肝细胞增殖测定：参照李跃华等MTT法“3测胞点状坏死、碎屑样坏死多见，肝细胞浊肿样变性明
定，肝细胞悬液调节细胞数为5×104／mL，于96孔显。FACS组上述症状明显减轻，碎屑样坏死偶见。
板加细胞悬液，每孔100rtL，正常组加入RPMI一提示FACS对CCl。小鼠肝细胞损伤有明显的保护
1640培养液；肝损伤对照组加入CCI，溶液至终浓度作用，见表2。
表2 FACS对CCI。肝损伤小鼠肝组织病理变化的影响
Table2 EffectofFACS011pathologicalchangesinlivertissueofliver—injuriedmic nducedbyCCl4
组剐
剂量／
(mg·kg1)
炎细胞浸润 坏死 细胞浊肿
正常
模型
联苯双酯
FACS
25
30
与模型组比较；～P<01
’’尸<001口jmodelgroup
万方数据
·1840· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第12期2005年12月
3．3对D—Gal肝损伤小鼠血清ALT和AST的影3．4对D—Gal肝损伤小鼠肝组织病理变化的影
响：与正常组相比，D～Gal可使小鼠ALT和AST响：正常组小鼠肝组织结构正常。模型组小鼠肝细胞
明显升高(尸苯双酯组血清中ALT、AST活性均明显下降(P<粒，可见汽球样变肝细胞，嗜酸性变多见于灶状坏死
0．01)，提示FACS对D—Gai肝损伤小鼠血清ALT的边缘。主要为肝细胞点状坏死，较重者可见灶状坏
和AST活性升高有明显的拮抗作用，见表3。 死，汇管区炎细胞浸润明显。FACS组绝大部分肝组
裹3 FACS对D—Gal肝损伤小鼠血清ALT和织结构正常，偶尔可见到单个坏死肝细胞和嗜酸性变
AST活性的影响(z士s，Ⅳ一lo) 肝细胞，汇管区炎细胞浸润明显减轻。提示FACS对
Table3 Effe。‘ofFACSonALTandASTactivities 小鼠D—Gal肝细胞损伤有明显的保护作用，见表4。
m3。“”of‘1’。。。ilIj“‘1。o“1。。‘“4“。。。
3．5 对CCl。损伤培养大鼠肝细胞ALT和AST及
!!!!兰!!圭!：!三!!! 肝细胞增殖的影响：与正常组相比，模型组原代培养
望型型苎!!竺：竖：：!!!!!!!：!：：!竺!!!旦：!!大鼠肝细胞培养液AI。T和AST明显升高(P<
模型 一 126．87土37．4013 ．09土19．470·01)；FACS(o·5、l·0mg／mL)组使肝细胞ALT
联苯双酯 25 47．652=16．28—9714士1137一 和AST活性均明显下降(尸<0．01)，FACS(0．25
队cs 30
59～14．-20“6：：91‘18士，11’85：：mg／mL)组对AST活性无明显影响(P>0．05)，
120 52．98±19．24—82．73士12．54一。 一’ 一⋯⋯⋯’’’—l磊ii磊_■i五i—————————一其作用呈现一定的量效关系，提示FACS对原代培
一P裹4 FACS对D-Gal肝损伤小鼠肝组织病理变化的影响
Table4 EffectofFACSonpathologicalchangesInlivertissueofliver—injuriedmic nducedbyD—Gal
组剐
剂量／
(mg·kg一1)
炎细胞浸润 坏死 嗜酸性小体
正常
模型
联苯双酯
FACS
25
30
120
O。
5
0。
0。
与模型组比较：一P。。P<0．01咖modelgroup
裹5 FACS对CCI‘损伤原代培养大鼠肝细胞ALT和
AST活性殛增殖的影响(i士s，H一4)
Table5 EffectofFACSonALT，ASTactivities，andpro—
liferationofprimaryculturedhepatoeytesof
liver—Injariedratin ucedbyCCI。(i士s，n--4)
与模型组比较：～P<0．01
’。P3．6对CCI。损伤培养大鼠肝细胞增殖的影响：与
正常组相比，模型组大鼠肝细胞增殖明显降低(尸<
0．01)，FACS组与模型组相比肝细胞增殖明显增加
(P高于正常组。提示FACS对CCI；致肝细胞损伤有直
接保护作用，并能显著促进体外培养肝细胞生长，
见表5。
4讨论
CCI。和D—Gal诱导的肝损伤模型是两种评价
肝损伤药物疗效的标准模型，在CCl。肝损伤模型
中，脂质过氧化是其主要的肝损伤机制，DGal是肝
细胞磷酸尿嘧啶核苷的干扰剂，其诱发急性肝损伤
病理学表现为肝细胞弥漫性变性、坏死、大量炎性细
胞浸润，与临床病毒性肝炎病理变化极为相似，是形
成急性肝功能衰竭比较理想的模型。实验结果显示
FACS对CCl。致小鼠急性肝损伤、D—Gal小鼠急性
肝损伤均有明显的保护作用，提示FACS为沙苑子
保肝的有效部位之一。
离体培养的原代肝细胞系统及其体外损伤模
型，既可排除整体水平时神经体液的调节作用，又可
排除离体器官水平时不同细胞之间的相互影响，从
而可以观察各种药物对肝细胞的直接作用。本实验
用胶原酶在体灌注肝脏的酶法分离大鼠肝细胞，
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第12期2005年12月· 841·
CCI。损伤后，培养液中的AI，T和AST活性显著升
高，细胞增殖活性明显降低，FACS明显降低肝细胞
ALT和AST活性，显著促进肝细胞增殖，具有促
进体外培养肝细胞生长的作用，从细胞水平证实了
FACs对肝细胞的保护作用。
RefeFellce$!
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麻黄汤对大鼠大脑额叶皮层氨基酸类神经递质水平的影响
魏凤环，罗佳波+，谭晓梅，贺丰
(南方医科大学中医药学院．广东广州 510515)
摘要：目的研究麻黄汤(HED)对大鼠额叶皮层中天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)和7一氨基丁
酸(GABA)等氨基酸类神经递质水平的影响，及其量效和时效关系。方法2，4-二硝基氟苯为衍生化试剂，HPI，C—
uV法测定大鼠额叶皮层中氨基酸水平。结果给药5d，HEDl5、18g／kg剂量组Asp、Glu和GABA水平与空白
对照组相比有显著性升高，Gly无显著性改变。4种氨基酸均在ig5d时，与空白对照组相比有显著性升高。结论
HED显著升高了大鼠额叶皮层中氨基酸水平，并呈现一定的量效、时效关系。在试验剂量范围内15g／kg是较敏感
的剂量{给药5d是最佳时间。
美键词：麻黄汤l氨基酸l量效关系
中圈分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)12—1841—04
EffectofHerbaEphedraeDecoctiononlevelsofaminoacidneurotransmitters
inprefrontalcortexofrats
WE／Feng—huan，LUOJia—bo，TANXiao—mei，HEFeng
(SchoolfTraditionalChineseMedicine，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，China)
Keywords：HerbaEphedraeDecoction(HED)；aminoacid dose—effectrelationship
麻黄汤(HerbaEphedraeDeeoction，HED)由
麻黄配伍桂枝、杏仁、炙甘草组成。具有发汗解表、宣
肺平喘的功效。现代研究表明，麻黄中的主要活性成
分左旋麻黄碱和右旋伪麻黄碱具有增强小鼠自主活
动、升高动脉血压、增加心率、导致神经变性等不良
反应[1“]，在临床应用中体现的是产生失眠．震颤、
心悸等。有学者认为麻黄碱致神经变性的原因，可能
与谷氨酸(glutamicc d，Glu)的过量释放有关“J。
Gtu和天冬氨酸(asparticacid，Asp)是脑部重要
的兴奋性神经递质，7一氨基丁酸(7一aminobutyric，
GABA)及甘氨酸(glycin，Gly)是脑部重要的抑
制性神经递质。本实验根据HED中主要成分所产
生的上述中枢神经系统的不良反应，及脑组织中氨
基酸类神经递质的性能，研究了HED对大鼠大脑
皮质额叶中氨基酸水平的影响。
1材料
1．1 动物与试药：SPF级Wistar大鼠，体重为
(2l5±15)g，雌雄兼用，由南方医科大学实验动物
中心提供。麻黄汤参考文献方法制备o]，浓缩至含麻
黄生药1．5g／mL，作为麻黄汤储备液。氨基酸对照
品均购自Sigma公司}2，4-二硝基氟苯(DNFB，日
本)；乙腈、甲醇为色谱纯(Merck，德国)；醋酸钠、
冰醋酸等试剂均为国产分析纯。
1．2仪器：HP一1100高效液相色谱仪(美国安捷
鉴銎最省；留蒙省蔡警学基金重点资助项目(。。。。。。；。)
尊翥帮雍挚罨蕹装76名：毫蛊：≯涂；甓志生翌臻穿f譬邕#翌嚣蔓篓尊及中药新药的研究开发。E。“i“8””8486@”h⋯
万方数据
沙苑子黄酮对CCl4及D-氨基半乳糖致急性肝损伤的保护作用
作者： 刘春宇， 顾振纶， 韩蓉， 朱路佳， 周文轩， 郭次仪， LIU Chun-yu， GU Zhen-lun，
HAN Rong， ZHU Lu-jia， ZHOU Wen-xuan， GUO Ci-yi
作者单位： 刘春宇,顾振纶,韩蓉,朱路佳,LIU Chun-yu,GU Zhen-lun,HAN Rong,ZHU Lu-jia(苏州大学医
学院,药理教研室,苏州中药研究所,江苏,苏州,215007)， 周文轩,郭次仪,ZHOU Wen-
xuan,GUO Ci-yi(香港保健协会,香港)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(12)
被引用次数： 19次

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