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沙苑子及其伪品的可溶性蛋白质电泳鉴别



全 文 :参 考 文 献
1 刘兴玉 . 西南农业大学学报 , 1990, 12( 2): 203
2 侯喜林 . 南京农业大学学报 , 1990, 13( 3): 42
3 李招文 . 园艺学报 , 1989, 16( 3): 233
4 裘文达 ,李曙轩 . 浙江农业大学学报 , 1983, 9( 3): 243
5 李 英 ,黄建华 ,董彩霞 ,等 . 河南职技师院学报 , 1992, 20( 1): 37
6 钱秀苇 .上海农学院学报 , 1996, 14( 3): 201
( 1999-06-29收稿 )
沙苑子及其伪品的可溶性蛋白质电泳鉴别
河北省职工医学院 (保定 071000)  马晓莉  周文英
摘 要 对沙苑子及其伪品进行了可溶性蛋白质电泳鉴别 ,同时比较了两种蛋白质染色剂考马斯亮蓝 R-250和
G-250的染色效果。
关键词 沙苑子 伪品 电泳鉴别
  沙苑子为少常用中药 ,药典收载的正品为豆科
植物扁茎黄芪 Astragalus complanatus R. Br. 的干
燥成熟种子。由于同属植物种子性状相似 ,沙苑子的
异物同名品甚多 ,各地区的使用情况也不尽相同 ,我
们用连续性非解离型聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ,对
沙苑子及其伪品进行了分析 ,所得蛋白电泳图谱有
显著差异 ,可作为鉴别依据 ,同时比较了两种蛋白质
染色剂考马斯亮蓝 R-250和 G-250的染色效果。
1 实验材料、仪器与药品
1. 1 实验材料
沙 苑 子: 豆 科 植 物扁 茎 黄 芪 Astragalus
complanatus R. Br.种子。
紫云英: 豆科植物紫云英 A. sinicus L.种子。
华黄芪:豆科植物华黄芪 A. chinensis L. 的种
子。
沙大旺: 豆科植物直立黄芪 A. adsurgens Pall
的种子。
以上材料由保定市药检所提供经张建英鉴定。
1. 2 仪器: DYY-Ⅲ 2型稳压稳流电泳仪 (北京市六
一仪器厂 ) ,圆盘电泳槽 (北京市六一仪器厂 ) , LD5-
10型离心机 (北京医用离心机厂 )。
1. 3 药品:丙烯酰胺为化学纯 ,双丙烯酰胺为进口
原装 ,四甲基乙二胺为生化试剂 ,考马斯亮蓝 R-250
和 G-250为进口分装 ,其余药品均为分析纯。
2 实验方法
2. 1 试剂的配制及凝胶的制备:见文献 [ 1, 2] ,凝胶浓
度为 6. 3% 。
2. 2 样品液的制备: 取实验材料 0. 5 g ,加电极缓
冲液 5 mL研磨成匀浆 ,静置 30 min ,移至离心管
中 ,按 3 000 r /min离心 15 min,取上清液 0. 5 mL
加入 0. 05% 溴酚蓝示踪指示剂 1~ 2滴 ,混匀备
用。
2. 3 电泳:调节电流按 1毫安 /管进行电泳 , 2 min
后按 3. 5毫安 /管进行电泳 ,待示踪指示剂行至距
末端 0. 5 cm时 ,关闭电源 ,全程约 40 min。
2. 4 染色:考马斯亮蓝 R-250染色法:将胶条置固
定液中固定 10 min,再置 90℃染色液中染色 10
min,最后用洗脱液反复洗脱 ,至背景清晰为止。 考
马斯亮蓝 G-250染色法: 将胶条置染色液中 ,室温
条件下染色 30 min即得。
3 结果与讨论
3. 1 沙苑子及其伪品的蛋白质电泳图谱 (图 1)各
不相同 ,有显著差别 ,通过多次重复实验 ,重现性好 ,
结果可靠 ,可作为鉴别依据。
1, 1′-沙苑子  2, 2′-紫云英  3, 3′-华黄芪  4, 4′-沙大
旺  1~ 4-用考马斯亮蓝 G-250染色所得图谱  1′~ 4′-
用考马斯亮蓝 R-250染色所得图谱
图 1 沙苑子及其伪品的蛋白电泳图谱
3. 2 我们按颜色的深浅将谱带分为 2级 ,色深者为
Ⅰ级 ,色浅者为Ⅱ级。同种实验材料在相同条件下 ,
分别用两种蛋白质染色剂考马斯亮蓝 R-250和 G-
250染色 ,所得电泳图谱基本相同 ,只是一些细带、
弱带略有差异 ,如沙苑子和华黄芪用 G-250染色所
得图谱与用 R-250染色所得图谱相比 ,少了一些弱
·630· 中草药  Chinese T raditional and Herbal Drug s  2000年第 31卷第 8期
Address: Ma Xiaoli, Hebei Medical Col leg e of Continuing Education , Baoding
带。但同时 ,沙苑子、紫云英、沙大旺的 G-250电泳
图谱比 R-250电泳图谱也多了一些谱带。说明 G-
250的染色效果较好 ,可以和 R-250一样用于生药
的电泳鉴别 ,也表明可能两种染色剂的染色范围略
有差异 ,但这一点还有待进一步考证。本实验结果结
合我们对多组生药的电泳鉴别结果表明 ,用考马斯
亮蓝 G-250进行蛋白质染色 ,具有操作简便、时间
短、节省试剂等优点 ,可用于中药材的电泳鉴别。
参 考 文 献
1 夏 雷 ,刘大程 . 中国中药杂志 , 1990, 15( 7) : 11
2 马晓莉 ,王 晶 . 中草药 , 1998, 29( 6): 412
( 1999-11-24收稿 )
茵陈及混伪品的紫外光谱鉴别
甘肃省白银市第二人民医院药剂科 ( 730900)  刘桂明
甘肃省药品检验所             宋平顺
  茵陈为常用药材 ,《中华人民共和国药典》规定
1-滨蒿  2-菌陈
蒿  3-碱蒿  4-
野艾  5-莳萝蒿
图 1 紫外光谱图
来源于菊科植物滨蒿 Artemisia
scoparia Waldst. et Kit. 或茵陈蒿
A. capil laris Thunb. 的干燥地上
部分 [1 ] ,国内使用的茵陈较为混
乱 [2, 3 ] ;由于其外观性状较为相似 ,
误用、混用现象时有发生。本文用紫
外及一阶导数光谱对其进行鉴别 ,
现将结果报道如下。
1 仪器与材料
1. 1 仪器: 日本岛津 UV-2401 PC
型紫外分光光度计 ;乙醇为分析纯。
1. 2 材料: 实验所用样品: 滨蒿
Artemisia scoparia为 1997年购于
天水商品 ;碱蒿 A. anethi folia We-
ber为 1997年购于白银、酒泉商品 ;
莳萝蒿 A . anethoides Matt f. 为
1997年购于白银及兰州的商品及自
采 ;野艾 A . lavandulaef ol ia DC. 1996年购于兰州
商品 ;茵陈蒿 A . capil laris为 1995年购于张掖 (产
地山东 )。 以上并经作者鉴定。
2 方法与结果
分别取上述样品粗粉适量 ,加乙醇适量超声提
取 30 min,滤过 ; 滤液用乙醇稀释成含生药 2
mg /mL的溶液 ,在 215~ 400 nm范围内测定紫外
光谱和一阶导数光谱 ,结果见图 1, 2及表 1。
1-滨蒿  2-菌陈蒿  3-碱蒿  4-野艾  5-莳萝蒿
图 2 一阶导数光谱图
3 结果分析
茵陈及混伪品同科属植物 ,外观相似 ,因在幼苗
表 1 茵陈及其混伪品的紫外、一阶导数光谱吸收峰谷位置 ( nm )
品 种 紫外光谱λmax    λmin
一阶导数光谱
dλmax dλmin
滨蒿 281  322 263  311  382 233  240  266  278  315 246  272  301  342
茵陈蒿 282  324 262  312  383 244  267  279  318 247  272  301  348
碱蒿 298  331 265  305  389 216  233  243  269  280  318 224  237  247  272  302  352
野艾 300  330 266  305  389 233  242  278  318  393 224  275  292  355  373
莳萝蒿 269  331 266  310 267  287  322  360 218  274  292  301  361
期采收更难区别 ,常常误采误用 ,我们首次对其进行
紫外光谱的鉴别 ,发现样品的零阶紫外光谱差异较
小 ,难以全部区别 ,而一阶导数光谱差异较明显 ,可
以更好地区别。
参 考 文 献
1 中华人民共和国卫生部药典委员会编 .中华人民共和国药典 .
广州:广东科技出版社 , 1995: 214
2 宋平顺 ,刘涵芳 ,张白崇 ,等 . 甘肃药学 , 1992, 7 ( 2): 32; 1994, 9
( 2): 16
3 鞠爱华 ,于丽俊 . 中药材 , 1988, 11( 3): 25
( 1999-08-10收稿 )
·631·中草药  Chinese T raditional and Herbal Drug s  2000年第 31卷第 8期
刘桂明 女 , 1964年 5月出生 , 1986年 8月毕业于兰州医学院药学系 ,学士学位。 现在甘肃省白银市第二人民医院药剂科工作 ,任主管药剂师 ,近几年一直从事医院制剂工作。