全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月·1075·
广佛手药材HPLC指纹图谱的研究
张瑞芳，高幼衡+，崔红花，梁盛林
(广州中医药大学中药学院，广东广州510006)
摘要：目的建立广佛手药材HPLC指纹图谱，以便比较完整地反映广佛手的内在化学信息，全面评价广佛手药
材质量，与其他产地佛手进行鉴别。方法应用HPLC法测定了12批佛手的指纹图谱，乙腈一0．50A冰醋酸为流动
相进行梯度洗脱，检测波长290nlTl，体积流量1．0mL／min，柱温30℃，收集75min。结果建立了广佛手HPLC指
纹图谱共有模式，并对不同产地药材进行了相似度比较。结论该方法稳定可靠，信息量大，为广佛手药材鉴别和
质量评价提供了依据。
关键词：广佛手；指纹图谱；HPLC
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)07—1075—03
FingerprintsofFructusCitriSarcodactylisfromGuangdongbyHPLC
ZHANGRui—fang，GA0You—heng，CUIHong—hua，LIANGSheng一1in
(SchoolfChineseMateriaMedica，GuangzhouU iversityfTraditionalChineseMedicine，Guangzhou510006，China)
Abstract：ObjectiveToes ablishtheHPLCfingerprints(HPLC-FPS)ofFructusitriSarcodactylis
(FCS)fromGuangdongforeflectingtheinternalchemicalinformation，evaluatingitsinternalqualityof
FCSandidentifyingthemfromdifferentcul uralareas．MethodsT eHPLC—FPSof12FCSsamplesw re
obtained．TheHPLCseparationwasperformedonaKromasilC18analyticalcolumnbygradientluting
withacetonitrile一0．5％aceticacidattheflowrateof1．0mL／min．Thecolumntemperaturewas30℃，the
UVdetectionwavelengthwas290nm．andthecollectionmewas75min．ResultsThemutualmodeof
HPLCfingerprintswasetupandthesimilardegreestothecruderugsfromdifferentcul uralareaswere
compared．ConclusionThemethodiSstable，reliable，andwithfulli formationwh chanbeusedasa
qualitycontrolitemforFCSfromGuangdong．
Keywords：FructusCitriSarcodactylis(FCS)fromGuangdong；fingerprint；HPLC
佛手为芸香科植物佛手CitrusmedicaL．var．
sarcodactylisSwingle的干燥果实。具有疏肝理气、
和胃止痛的功效，主要用于治疗肝胃气滞、胸胁胀
痛、胃脘痞满、食少呕吐等症[1]。主产于广东、四川、
浙江、福建等地，市场上流通品种主要有3种：广佛
手(产地广东)、川佛手(产地四川)、金佛手(产地浙
江)。不同产地佛手在性状特征、化学成分及药理作
用上存在一定的差异，不同品种佛手质量优劣之争
由来已久[2~5]，为保证临床用药的准确性和安全性，
有必要建立全面评价药材质量的指纹图谱。《中国药
典》2005年版佛手项下，佛手鉴别是与对照药材对
比进行薄层鉴别，目前，尚无文献报道佛手的HPLC
指纹图谱研究。本实验针对广佛手药材，建立了其
HPLC指纹图谱，运用相似度软件进行评价，并对广
佛手药材对照图谱与川佛手、金佛手药材指纹图谱
进行初步研究，取得了满意的结果，为更好地控制佛
手药材及制剂的质量提供依据。
1仪器与试药
DIONEXSUMMITP680高效液相色谱仪，四
元梯度泵，DAD检测器，CHROMELEON数据处理
软件系统；中药色谱指纹图谱相似度评价系统
2004A版(国家药典委员会)。
乙腈为色谱纯(Dikma)；水为超纯水；其他试剂
均为分析纯。
5，7一二甲氧基香豆素对照品(自制[6]，其结构经
理化试验及波谱分析鉴定，HPLC面积归一化法测
得质量分数为99．81％)；10批广佛手药材均来自广
东德庆GAP基地，川佛手产地四川洪雅，金佛手产
地浙江金华。以上药材均由广州中医药大学中药鉴
定教研室黄海波副教授鉴定。
收稿日期：2006—11—20
基金项目：国家“十五”重大科技专项“创新药物和中药现代化”资助项目(2001BA701A38)；广东省科技厅重点项目(2004833001010)
作者简介：张瑞芳(1980一)，女，广州中医药大学2003级硕士研究生，从事中药质量标准及活性成分研究。
E-mail：zhangruifan980@yahoo．corn．cn
*通讯作者高幼衡Tel：(020)39358083E—mail：gaoyouheng@yahoo．corn．ca
万方数据
·1076· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱KromasilC18柱(250mm×
4．6mm，5肛m)；流动相A为乙腈，B为0．5％醋酸水
溶液，梯度洗脱75min，0～3min，A(5％)；3～8
rain，B(5％～10％)；8～48min，B(10％～27％)；
48～63min，B(27％～55％)；63～68min，B(55％～
100％)；68～75min，B(100Voo)。检测波长290nm，
柱温30℃，体积流量1mL／min，进样量20弘L。
2．2供试品溶液的制备：各药材低温干燥后，粉碎，
使全部通过80目筛。取药材粉末1．5g，置具塞三角
瓶中，加甲醇超声处理，35mL／次，共3次，滤过合
并滤液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容到10
mL，过4．5肛m微孔滤膜。
2．3对照品溶液的配制：精密称取5，7-二甲氧基香
豆素对照品2．3mg，用10mL甲醇溶解定容即得。
2．4 精密度试验：取同一供试品溶液，连续进样5
次，测得各主要共有峰保留时间的RSD为0．07％～
0．62％，表明仪器精密度良好。
2．5 重现性试验：取同一样品5份，按2．2项下方
法制备供试品溶液，分别进样，测得各主要共有色谱
峰保留时间RSD为0．09％～0．27％，表明方法重
现性良好。
2．6稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在0、2、
4、8、16、24h进样，测得各共有色谱峰保留时间
RSD为0．08％～1．21％，表明供试品溶液在24h
内稳定。
2．7样品指纹图谱测定：分别各取供试品，置自动
进样器中，进样量20弘L，按2．1项下的色谱条件操
作，记录色谱图，即得。对照品及广佛手药材HPLC
指纹图谱，见图1。HPLC指纹图谱见图2。
2．8广佛手药材指纹图谱分析与评价
2．8．1广佛手药材共有指纹峰的标定：采用相对保留
时间标定共有指纹峰。将10批广佛手药材的指纹图谱
进行匹配后，有21个共有峰，以5，7一二甲氧基香豆素
对照品对应的色谱峰保留时间为1，计算各色谱峰的相
对保留时间，各共有峰相对保留时间见表1。，．_l～
0 10 2030 4050 6070 0 10 20304050 6070
t／min
图1 5，7-二甲氧基香豆素对照品(A)和广佛手药材(B)的
HPLC色谱图
Fig．1HPLCChromatogramof5，7-dimethoxycoumarin
referencesubstance(A)andFCSfromGuang—
dong(B)
瓣鍪妊幽‘上 I山。，。．．^．一丁一
萎鍪-k
000 1250 25．00 3750 50．00 62．50 ’75．【)【)
t／rain
S1～s10一广佛手s11一金佛手S12一川佛手
S1一SlO—FCSfromGuangdongS11-FCSfromZhejiang
S12一FCSfromSichuan
图2 12批佛手的HPLC指纹图谱
Fig．2HPLC—FPSof12batchesofsamples
表1广佛手药材指纹图谱共有峰相对保留时间
Table1 Relativeretentionmeofcommonpeaksin amples’fingerprintsofFCSfromGuangdong
2．8．2共有指纹峰的相对峰面积：《中药注射剂指
纹图谱研究的技术要求》中有关技术要求规定，色谱
指纹图谱中单峰峰面积占总峰面积<10％，峰面积
比值不作要求，仅需要标定相对保留时间。广佛手药
材指纹图谱中，仅有一个共有峰(2号峰)峰面积大
于20％，其余均小于10％，由于2号峰为未完全分
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月·1077·
离的几个峰的组合，且保留时间靠近死时间，可能与
溶剂峰混合，不太稳定，故不做标定。
2．8．3相似度计算：应用国家药典委员会发布的中
药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A版)，将10
批广佛手样品实验数据导入，选择11．72、41．61及
62．02min(对照品峰)时的3个色谱峰进行多点校
正，色谱峰自动匹配后，以平均值生成广佛手药材对
照指纹图谱(广佛手药材共有模式)，进行相似度计
算。各样品与对照指纹图谱的相似度见表2。从表2
可以看出，有6批药材与对照图谱相似度在0．99以
上，其余样品的相似度均在o．94以上，说明10批广
佛手药材各化学成分及量相近，质量稳定。
表2 10批广佛手药材指纹图谱相似度
Table2 SimilarityoftenFCSsamplesfromGuangdong
批号 相似度 批号 相似度
S1 o．980 S6 0．947
S2 0．993 S7 0．942
S3 0．997 S8 0．950
S4 0．996 S9 0．997
S5 0．996 S10 0．996
2．8．4应用指纹图谱进行产地鉴别的初步研究：在
相似度计算软件中导入系统生成的广佛手药材对照
图谱及川佛手、浙佛手的指纹图谱，以广佛手对照指
纹图谱为参照图谱，用“2．8．3”项下3个色谱峰校正
后，自动匹配，计算二者与广佛手对照指纹图谱的相
似度，计算结果为川佛手0．687，浙佛手0．928，与直
观观察结果一致。
3讨论
3．1提取溶剂的选择：分别以甲醇、95％乙醇、醋酸
乙酯为提取溶剂，采用超声提取，对不同提取时间，
不同提取溶剂用量和提取次数进行了考察，实验表
明，用甲醇超声取3次(35mL／次，15min／次)，提
取率高，所得图谱峰较多且分离度好。
3．2 色谱条件优化：试验中试用了甲醇一水、乙腈一
水、甲醇一0．5％冰醋酸水溶液、乙腈一0．2％磷酸水、
乙腈一0．5％冰醋酸水溶液等多种流动相体系，实验
表明，乙腈一0．5％冰醋酸水溶液分离效果最好，根据
所得图谱，不断优化，最终确定了梯度洗脱条件。试
验中记录了120min色谱图，发现75min后无色谱
峰出现，故确定采集时问为75min。
3．3扫描波长的选择：取一份供试品溶液，用DAD
检测器记录75min内从190～800nm全波段的三
维图谱，比较各波长下的色谱图，最后确定在290
am时，所得图谱信息量大且峰值分布合理。
3．4采用HPLC梯度洗脱法主要对广佛手药材进
行了指纹图谱的研究，实验证明，该方法可操作性
强、重现性好，可作为佛手药材指纹图谱研究的基
础。并且应用指纹图谱对3种产地佛手进行了初步
研究，结果较理想，可为进一步鉴别不同产地的佛手
提供依据。
3．5 指纹图谱相似度计算结果表明，广佛手药材之间
相似度均大于0．940。初步产地鉴别研究结果表明，川
佛手、金佛手与广佛手药材共有模式的相似度分别为
0．687、0．928，与直接观察图谱判断结果一致，说明本
实验所建立的广佛手指纹图谱具有特征性，可用于不
同产地药材鉴别的研究。研究结果同时表明，不同产地
药材中各成分的量差别较大，有必要对制剂原药材固
定产地，以保证临床药效和用药安全。
3．6本实验只测定了10批广佛手药材的指纹图
谱，在此基础上建立的广佛手药材对照指纹图谱，得
出了不同产地药材相似度差别较大的初步结论，有
待于进一步测定更多批次的药材进行研究证实，确
定不同产地佛手指纹图谱的相似度值范围，使应用
HPLC指纹图谱鉴定和判断佛手药材质量的方法更
加完善和科学。
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更正：
《中草药》杂志2003年第34卷第7期“中药超微破壁粉碎技术与中医药现代化”一文由于作者自己的原因，将第二作者
“于文强”误写为“丁文强”，应作者要求(附单位证明)，该文第二作者由“丁文强”更正为“于文强”。
《中草药》杂志编辑部
万方数据
广佛手药材HPLC指纹图谱的研究
作者： 张瑞芳， 高幼衡， 崔红花， 梁盛林， ZHANG Rui-fang， GAO You-heng， CUI Hong-hua
， LIANG Sheng-lin
作者单位： 广州中医药大学中药学院,广东,广州,510006
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(7)
被引用次数： 5次

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