全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月·1883·
表4芍药种子胚乳、种皮乙醚萃取残液纸色谱各区段
对白菜种子萌发的影响
Table4 EffectofresidueinetherxtractofP．1actiflora
endospermandtestaindifferents c ionsofpaper
chromato—graphyonseedgerminationndgrowth
ofyoungrootofB．pekinens括
图1 MS(A)和MS+GA。(B)培养基中的胚
Fig．1EmbryogrownonMS(A)and
MS+GA3(B)culturemedium
而附加GA。的培养基，可以打破胚芽的休眠。
3讨论
在长期的系统演化过程中，芍药种子形成了较
为特殊的休眠萌发特性，主要表现为秋季降温时下
胚轴伸长，长出胚根，经过冬季低温后上胚轴休眠被
破除，春季升温后胚芽出土萌发口]。GA。可以代替低
温打破芍药种子上胚轴休眠，说明芍药种子的激素
休眠占主导地位。许多研究也指出，种子休眠的原因
复杂，一般都是综合性的[6]。
本研究认为芍药种子胚乳乙醚萃取液在Rf值
0．5区段对幼根生长抑制活性最强，对种子的萌发
抑制作用较弱，与胚离体培养试验结果一致；去胚乳
的胚在10d左右就能长出胚根，而适当浓度的GA。
在一定程度上能够代替低温打破上胚轴的休眠，说明
在子叶或胚中存在抑制上胚轴生长的内源抑制物质。
芍药种子胚乳中存在抑制胚根生长的物质，当胚根休
眠打破后，子叶或胚中抑制胚芽萌动的激素占主导，
各部位抑制作用大小为：胚乳>胚(子叶)>种皮。
参考文献：
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药研究与实践，2004，18(3)：28—30．
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关木通HPLC—DAD—ESI／MS指纹图谱研究
樊夏雷·一，丁一冰3，冯有龙2，尚 姝2，刘文英1‘
(1．中国药科大学，江苏南京210009；2．江苏省药品检验所，江苏南京210008；3．南京大学医学院，江苏南京210008)
摘要：目的建立关木通HPLC—DAD—ESI／MS指纹图谱分析方法，可用于关木通质量的评价，为进一步开展关
木通的肾毒性代谢研究提供药材质量依据。方法 用75％甲醇对不同产地的关木通样品进行提取，经HPLC—
DAD—Esl／MS联用技术分析。建立指纹图谱，确定共有指纹峰，并选用两种相似度计算方法进行比较。结果关木
通中含有30个特征指标成分，初步建立了30个共有峰为特征指纹信息的HPLC—DAD—ESI／Ms指纹图谱。24批
被测样品的指纹图谱整体相似度在0．871～O．998，各产地关木通之间相似性良好。结论方法准确可靠。重现性
好，可应用于关木通的品质评价和质量控制。
收稿日期：2008—06—10
作者简介：樊夏雷(1965一)，男，浙江绍兴人，在读博士，主要研究方向为色谱分析、质量标准与质量控制方法研究。
E—mail：fanxialei@sohu．cornTel；13805165256(025)83313672
*通讯作者刘文英Tel：(025)83271251E—mail：1wcpu@126．corn
万方数据
·1884· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
关键词：关木通；指纹图谱；HPI。C—DAD—ESl／MS
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1883—05
HPLC—DAD—ESI／MSFingerprintofAristolochiamanshuriensis
FANXia—leil”，DINGYi—bin93，FENGYou—lon92，SHANGShu2，LIUWen—yin91
(1．ChinaPh rmaceuticalUniversity，Nanjing210009，China；2．JiangsuInstituteforDrugControl·
Nanjing210008，China；3．MedicalSchoolofNanjingU iversity，Nanjing210008，China)
Abstract：ObjectiveToes ablishtheanalyticalmethodforfingerprintofAristolochiamanshuriensis
bvHPLC—DAD—ESI／MS，whichcanbeusedast ebasisforqualitycontroIofthedrugandforthefurther
studiesonkidneytoxicitymetabolite．MethodsSampleA．manshuriensisfromdifferenthabitatswere
extractedby75％methanolandanalyzedbyHPLC—DAD—ESI／MS，whosechromatographicfingerprints
wereestablished．TWOwaystOcalculatethesimilaritywereselectedtOcomparetheresultsbydetermining
thecommonpeaks．ResultsTherew re30maincharacteristiccomponentsinA．rnanshuriensis．The
HPLC—DAD—ESI／MSfingerprintofthe30commonpeakswasestablishedpreliminarily．Thesamplesof
A．manshuriensisfromdifferenthabitatswafoundhavingagoodsimilarity，andher geofsimilarities
for24balchesofA．manshuriensiswere0．871一O．998．ConclusionThemethodiSreliable，accurate，and
ofgoodstability．andcanbeusedforthequalitycontrolandvarietyidentificationofA．manshuriensis．
Keywords：AristolochiamanshuriensisKom．；fingerprint；HPLC—DAD—ESI／MS
近年来有关马兜铃属植物引起肾毒性[1]的临床
报道日益增多，国外一些国家禁用了该属植物，美国
FDA对于含有或可能混淆的品种予以禁止应用和
进口。其中包括关木通、马兜铃、青木香、天仙藤和广
防己药材品种及相关中成药。我国也采取了相应的
措施，对有关品种进行了控制。
马兜铃事件对我国的中药现代化和国际化已经
产生了深远影响，值得国内学者的关心、分析和研
讨。由于大部分中药应用过程中缺少明确的体内过
程及量效关系的理论依据，现有的研究结果尚难以
判定关木通等含马兜铃酸中药的安全剂量和使用期
限。研究中发现对于不同产地关木通，分析研究得也
较少，其相应的质量研究更少。按照中医药学术特色
的思路对药材质量标准进行研究是十分必要的，本
实验以LC—DAD—ESI／MS为检测手段，建立了关木
通的LC—UV和LC—ESl／MS指纹图谱，对24批不
同产地关木通进行了相似度比较，同时比较了指纹
图谱相似度的不同计算方法，为关木通的分析鉴定
提供了新的方法和依据，为关木通肾毒性的代谢研
究提供基础实验数据。
1仪器与试药
1．1仪器：HPll00高效液相色谱仪，Agilent1100
SeriesLC／MSDTrap。
1．2 试药：乙腈为色谱纯；甲醇、甲酸、醋酸铵为分析
纯；关木通主要产自东北，有专人到主产区收集，经江苏
省药品检验所胡浩彬主任药师鉴定均为关木通
AristolochiamanshuriensisKom．的干燥藤茎(表1)。
表l关木通样品来源
‘
Table1 OriginofA．manshuriensissamples
药材编号 产地 药材编号 产地
1 延吉 13 东北(具体产地不明)
2 延吉 14 东北(具体产地不明)
3 图门 15 东北(具体产地不明)
4 图门 16 东北(具体产地不明)
5 图门 17 东北(具体产地不明)
6 集安 18 东北(具体产地不明)
7 集安 19 东北(具体产地不明)
8 集安 zO 延吉
9 长白 21 延吉
lO 长白 22 长白
11 长白 23 图门
12 长白 24 集安
2方法与结果
2．1分析条件
2．1．1 液相色谱条件：色谱柱为Phenomenex
GeminiC18(250mmX4．6mm)，流动相：水(0．1％
甲酸一5mmol／I。醋酸铵)(A)一乙腈(0．1％甲酸)
(B)，梯度洗脱条件：0min(7％B)一20min(15％
B)一65min(40％B)一80min(100％B)一100min
(100％B)，体积流量：1．0mL／min；检测波长：254
nm；柱温：40‘C；柱后分流0．2mL／min进质谱仪。
2．1．2质谱条件：扫描范围m／z100～1000，干燥
气体积流量：10L／min，干燥气温度：350℃，雾化室
压：2．758×105Pa，毛细管电压：4000V，传输电压：
70V，进样量：20弘L。
2．2供试品溶液制备：分别取24批关木通样品，
粉碎，精密称定粉末(粗粉0．25g与细粉0．25g)，
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月·1885·
置具塞锥形瓶中，加入75％甲醇约50mI。，水浴上
加热回流提取2h，取出，冷却至室温，滤至50mL
量瓶中，以少许甲醇洗涤残渣，洗涤液滤入同一量瓶
中，加甲醇至刻度．摇匀，用微孔滤膜(O．45弘m)滤
过，续滤液作为供试品溶液。
2．3内标溶液的制备：取萘普生对照品适量，用甲
醇溶解，制成10弘g／mL萘普生的溶液。
2．4方法学考察
2．4．1稳定性试验：取同一供试品溶液6份，(关木
通13号样品)，分别于0、4、8、12、24h进样检测，各
共有峰的相对保留时间RSD均小于3％，相对峰面
积比值的RSD均小于6％，表明供试品液在24h内
稳定。
2．4．2精密度试验：取供试品溶液(关木通13号
样品)连续进样5次，各共有峰的相对保留时间
RSD均小于3％，相对峰面积比值的RSD均小于
6％，表明仪器状态稳定。色谱与质谱系统稳定。
2．4．3重现性试验：取同一批次关木通6份(关木
通13号样品)，分别提取后，进样分析，各共有峰的
相对保留时间RSD均小于3％，相对峰面积比值的
RSD均小于6％，表明提取方法稳定，重现性良好。
2．5 HPLC—MS指纹图谱的建立
2．5．1指纹图谱的测定：按选定的HPLC—MS条
件对关木通进行分析，测得所有供试品的HPLC—
MS总离子流图；再对总离子流图中的各峰经质谱扫
描后得质谱图。根据总离子流图所给出的峰数，经基
峰图与提取峰图处理，得出各峰的保留时间与峰面积
等相关参数，进行分析、比较，制定HPI．C—MS指纹
图谱，除内标峰cs)夕b共得30个共有峰(图1)。
2．5．2各地关木通药材相似度计算[2]：相似度是评
‘ 19
”
1 ，
撼
_一_
8
rf
也 U经～。旅么 ^一 帆10 40 50 60t／rain
图1关木通的HPLC—ESI／MS指纹图谱
Fig．1HPLC-ESI／MSFingerprintofA．manshuriensis
价中药指纹图谱的一个重要参数，是根据指纹图谱
的整体相似程度来计算重要化学组成的整体波动程
度，据此分析中药质量的稳定性。本实验采用夹角余
弦和相关系数两个统计量为测试方法，其几何意义
是在由行个特征值组成的n维向量空间中，表征两
组变量定义的两个向量之间的夹角余弦值口]。
)．：
夹角余弦法计算公式：Sim(dj，g)2右箐叉衙2
乏叫i．JXwi．口
～|乏硼．j×^Jz峨．q
’loI ’⋯·
w¨为样本特征值，W。为参照物特征值。
对24批不同产地的关木通样品进行了相似度
计算。见表2。各产地相似度除16号外均在0．900
以上，表明各产地关木通之间的相似性良好。
2．6 HPLC—UV指纹图谱的建立
2．6．1HPI。C—UV指纹图谱的测定：按选定的液相
表2 24批关木通LC—MS指纹图谱相似度
Table2 LC—MSFingerprintsimilarityof24batches
ofA．manshuriensis
编号 相似度 编号 相似度 编号 相似度
1 o．988 9 0．995 17 0．978
2 0．982 10 0．997 18 0．987
3 0．985 11 0．997 19 0．996
4 0．998 12 0．996 20 0．987
5 0．996 13 0．995 21 0．987
6 0．998 14 0．974 22 0．987
7 0．987 15 0．918 23 0．998
8 0．990 16 0．87l 24 0．998
条件，由DAD检测器采集254nm处紫外吸光度，
对关木通样品进行分析，记录100min的色谱图。
2．6．2相似度评价：采用“中药色谱指纹图谱相似
度软件2004A版”评价系统，对24批不同来源的关
木通HPLC指纹图谱检测结果进行数据处理，生成
关木通共有模式的对照HPLC指纹图谱(图2中
万方数据
·1886· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
R)，并通过“中药色谱指纹图谱相似度软件2004A
版”评价系统，分析对比了24个样品的HPLC指纹
图谱(图2中S1～24)与关木通共有模式的对照
HPLC指纹图谱的相似度，结果见表3。
●
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图2关木通对照指纹图谱和24批样品匹配色谱图
Fig．2ControlledfingerprintofA．manshuriensisandmatchedchromatogramsf24batchesofA．manshuriensis
表3 24批关木通HPLC—UV指纹图谱相似度 3．2 在色谱条件优化中试验了甲醇一水、乙腈一水、
Table3 HPLC-UVFingerprintsimilarity
of24batchesofA．manshuriensis
编号 相似度 编号 相似度 编号 相似度
1 0．976 9 0．993 17 0．899
2 o．973 10 0．980 18 0．983
3 0．991 11 0．987 19 0．987
4 0．990 12 0．989 20 0．975
5 0．992 13 0．993 21 0．975
6 0．992 14 0．902 22 0．990
7 0．985 15 O．93l 23 0．993
8 0．970 16 0．910 24 0．989
3讨论
3．1本试验分别考察了超声、水浴和加热回流的提
取方法，发现加热回流得到的峰数较多，另外又比较
了不同提取溶剂如水、三氯甲烷、乙醇、甲醇、醋酸乙
酯、75％甲醇和75％乙醇，结果表明75％甲醇提
取效果较好。综合考虑最终确定提取条件为75％
甲醇，水浴加热回流提取2h。
甲醇一0．1％甲酸水溶液、乙腈一0．1％甲酸水溶液等
多种流动相体系，实验表明甲醇一水洗脱能力较差，
分离效果不好；而乙腈一水体系的柱效高，加入
0．1％甲酸后，采用梯度洗脱程序，被测物质分离
度、峰形都较为理想。
3．3在色谱方法建立初期，本试验选用并比较了不同
品牌和型号的色谱柱，如ZorbaxSB—C。。(250mm×
4．6mm)和HPODSHypersil(100mm×2．1ram)
等，结果表明PhenomenexGeminiC18(250mE×
4．6mm)柱在关木通化学成分的梯度洗脱中，具有柱
效高、分离度好及稳定耐用的特点。
3．4采用了HPLC—DAD—MS联用技术，能够同时
获得待测成分的紫外光谱特征和质谱特征，增强了
分析检测的选择性和专属性。在此基础上建立了关
木通的紫外和质谱指纹图谱，分别得出了相似度，结
果表明两者的相似度评价基本一致。研究结果同时
万方数据
中草蒋 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月：· 887·
表明，虽然LC—MS等方法得到的测定结果不能用
于“中药色谱指纹图谱相似度软件2004A，B版”(原
始数据文件的输出格式必须为．aia)，但通过夹角余
弦等计算方法可得到指纹图谱相似度．为中药材提
供质量上的技术监督手段。
3．5 本试验中选用紫外检测器(DAD)进行色谱
分析时，考察了254和316am波长的指纹图谱和
相似度评价，结果显示，316nm波长处得到的结果
与254nm和HPLC—MS的结论差别较大，相似度
在0．777一-．．0．980。分析原因在316am测定时色谱
峰多，且基线不稳，噪音较大，说明用中药色谱指纹
图谱相似度评价系统2004A版软件对导入的图谱
条件是比较苛刻的，否则会影响到后来相似的计算
结果，建议选用LC—MS等专属性好的方法进行分
析，克服紫外检测法的缺点。
参考文献：
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鲜品肉苁蓉渣和汁有效成分的比较
王丽楠1，陈 君1，杨美华1．，陈士林1，刘同宁2
(1．中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所，北京 100193；2．宁夏永宁县肉苁蓉种植场，宁夏永宁750100)
摘要：目的鲜品肉苁蓉渣和汁有效成分量比较及其药用研究初探。方法采用硫酸一苯酚法测定肉苁蓉多糖的
量；采用大孑L树脂一紫外分光光度法测定了苯乙醇苷的量；采用《中国药典》肉苁蓉项下HPLC方法，测定了松果菊
苷和毛蕊花糖苷的量。结果 以肉苁蓉多糖、苯乙醇总苷、松果菊苷和毛蕊花糖苷主要有效成分的量为综合评价指
标，鲜品肉苁蓉渣中除多糖的量与汁中相差不明显，其余有效成分的量均明显高于其汁，最大相差依次为8、785、
230倍。鲜品肉苁蓉渣部分经冷冻后多糖的量显著升高，苯乙醇总苷的量明显下降。结论鲜品肉苁蓉渣部分与其
汁相比药用性更高，为鲜品肉苁蓉科学用药及其保健食品开发提供依据。同时，鲜品肉苁蓉渣部分经冷冻后有效成
分的量明显改变，为鲜品肉苁蓉的储存提供了参考。
关键词：肉苁蓉；多糖；苯乙醇总苷；松果菊苷；毛蕊花糖苷
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1887—03
肉苁蓉CistanchedesertiolaY．C．Ma为列当
科多年生寄生植物，为补肾壮阳、润肠通便之要药。
始载于《神农本草经》，列为上品，主治阳痿、不孕、腰
膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘等，是临床常用中药之
一。因其生长在沙漠环境中，又具有沙漠“人参”的美
誉[1]。由于过度开发利用，野生资源濒临枯竭。肉苁
蓉及其寄主固沙植物梭梭已被列为国家二级保护植
物，并收入《国际野生植物保护名录》L2J。肉苁蓉中主
要活性成分是苯乙醇苷类化合物、肉苁蓉多糖等，其
苯乙醇苷的主要作用是调节内分泌，促进代谢和强
壮作用以及清除自由基和抗衰老作用；肉苁蓉多糖
可以增强机体的免疫功能【3“]。
本实验首次以肉苁蓉多糖、苯乙醇总苷、松果菊
苷和毛蕊花糖苷主要活性成分的量为综合评价指
标，比较鲜品肉苁蓉渣和汁部分的药用性。同时，考
察了鲜品肉苁蓉渣部分经冷冻后有效成分量的变
化，预期为鲜品肉苁蓉的储存及鲜品药用提供参考。
1仪器与试剂
UV一可视分光光度计(岛津2550型)。电热恒
温鼓风干燥箱(DHG一9143BS一11I，无锡市苏嘉实验
设备厂)，TPl50超声清洗机(功率150W，频率40
kHz，北京天鹏新技术有限公司)。
D一101一I型大孑L树脂购于天津市海光化工有限
公司，松果菊苷对照品(批号：111670—200502，供定
量测定用)、毛蕊花糖苷对照品(批号：111530-
200404，供量的测定用)均购于中国药品生物制品检
定所。葡萄糖(分析纯)购于广州化学试剂厂。苯酚、
硫酸均为分析纯(北京化学试剂二厂)。甲醇、乙腈均
为色谱纯(FisherScientific公司)。
苯酚试剂：取AR级苯酚200g加铝片0．2g
收稿日期：2008—05—10
基金项目：宁夏自治区科技攻关计划项目(05GG一10807)
*通讯作者杨美华，女，研究员，博土，研究方向为中药质量分析及新药研究开发。
Tel：(010)62899730(0)13041071999E—mail：yangmeihual5@hotmail．com
万方数据
关木通HPLC-DAD-ESI/MS指纹图谱研究
作者： 樊夏雷， 丁一冰， 冯有龙， 尚姝， 刘文英， FAN Xia-lei， DING Yi-bing， FENG
You-long， SHANG Shu， LIU Wen-ying
作者单位： 樊夏雷,FAN Xia-lei(中国药科大学,江苏,南京,210009;江苏省药品检验所,江苏,南京
,210008)， 丁一冰,DING Yi-bing(南京大学医学院,江苏,南京,210008)， 冯有龙,尚姝
,FENG You-long,SHANG Shu(江苏省药品检验所,江苏,南京,210008)， 刘文英,LIU Wen-
ying(中国药科大学,江苏,南京,210009)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(12)

参考文献(3条)
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3.田润涛;谢培山 色谱指纹图谱相似度评价的规范化研究(一)[期刊论文]-中药新药与临床药理 2006(01)

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1. 阙红玉.谢跃生.王跃飞.戚爱棣.潘桂湘.刘虹.KAN Hong-yu.XIE Yue-sheng.WANG Yue-fei.QI Ai-di.PAN Gui-
xiang.LIU Hung HPLC法测定小鼠血浆中杠柳毒苷的血药浓度[期刊论文]-中草药2008,39(10)
2. 耿慧春.辛颖.艾凤伟.马英丽.GENG Hui-chun.XIN Ying.AI Feng-wei.MA Ying-li 三黄泻心汤HPLC指纹图谱研
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