全 文 ：菟丝子黄酮对心理应激雌性大鼠海马-下丘脑-垂体-卵巢轴
性激素受体的影响
柯江维1 ,王建红2,赵 宏2
( 1. 江西省儿童医院,江西 南昌 330006; 2. 江西中医学院,江西 南昌 330006)
生殖内分泌系统是易受应激损伤的一个系统,
心理应激可引起生殖内分泌紊乱, 引发生殖内分泌
疾病。目前西医对此类疾病尚缺乏有效的调节手段,
主要以激素替代治疗, 长期应用激素均有明显的副
作用,且疗效不确定,而中医药具有整体调控和多靶
点、多方式调节的特点,因而对女性卵巢功能失调类
疾病的防治显示出一定的优势。现代中西医结合基
础研究表明, 肾与下丘脑-垂体-卵巢轴及生殖内分
泌相关。中医认为卵巢功能失调与肾、肝、脾、瘀血有
密切关系,肾虚是其根本原因,肾虚是由于介导神经
内分泌免疫网络系统平衡功能的相关物质的基因表
达出现异常, 使神经内分泌免疫的功能失衡 [ 1] , 治疗
当以补肾为主,因肾为先天之本,藏经,主生殖, 补肾
中药对下丘脑、垂体、卵巢等存在着多元性和双向性
的调节作用。菟丝子是旋花科植物菟丝子 Cuscuta
chinensis Lam . 的成熟种子,为温补肾阳的要药,在
中医临床上应用广泛, 尤其在治疗生殖内分泌失调
类疾病方面。菟丝子主要成分为黄酮类化合物, 本实
验研究了菟丝子黄酮对模型大鼠海马-下丘脑-垂体
雌 激素受体 ( ER ) 及卵巢促卵泡激素受体
( FSHR)、促黄体(生成)激素受体 ( LHR) 的影响。
1 材料
1. 1 药物:菟丝子药材经江西省儿童医院中药鉴定
教研室鉴定为菟丝子 C. chinensis Lam. 的成熟种
子,经溶剂提取, 聚酰胺柱色谱分离得黄酮提取物,
聚酰胺薄层色谱表明含有槲皮素、金丝桃苷、紫云英
苷和槲皮素-3-O--半乳糖-7-O--葡萄糖 4 个组分,
与文献报道一致[ 2] ;以芦丁为标准对照品,比色法测
定黄酮质量分数为 40%～45%。实验中配成 10、5
mg / mL 混悬液 (分别相当于生药 2、1 g / mL)。调经
促孕丸 (北京同仁堂制药厂) , 购自南昌市黄庆仁药
店,批号 2030118,实验中配成 90 mg / mL 溶液。
1. 2 主要试剂: ER 兔多克隆抗体 (美国 Neo-
M arkers 公司生产) ; FSHR 羊多克隆 ( R-20) 抗
IgG、Lutropin ( S-20) 羊多克隆抗 IgG (均由美国
Santa Cruze 公司生产) ; SP9001 Rabbit SP Kit、
SP9003 Goat SP Kit (均由北京中山公司生产) ; 聚
氧乙烯 20、牛血清白蛋白 ( BSA)、硫酸镍铵。
1. 3 仪器: DVPM 图像分析仪 (南京长城信息技
术公司) ; Imago-proplus 图像分析软件 (美国冷泉
仪器公司) ; Olympus 1×70 倒置显微镜 (日本生
产) ; 美的 KD25B—C 型黑金星微波炉 (产自广东
省顺德市) ;切片机 (上海机械厂) ;声-光-电复合应
激刺激装置 (自制)。
1. 4 动物: SD 雌性大鼠, 体重 180～220 g ,江西省
实验动物中心提供。室温 ( 20±2) ℃, 自然光照, 自
由进水进食。
2 方法
2. 1 动物分组:取 SD 大鼠 50只,适应 2 d, 以后每
天检查阴道涂片观察动情周期的变化。随机分为 5
组: 正常对照组, 模型组,菟丝子黄酮高、低剂量组,
阳性对照组 (调经促孕丸组) ,选择连续有 2个正常
动情周期的大鼠用于造模实验,其余淘汰。
2. 2 给药方法:上述 5组动物,分别 ig 给予生理盐
水、生理盐水、菟丝子黄酮 20、10 g/ kg、调经促孕丸
0. 9 g/ kg。给药同时,除正常对照组外,各组进行心
理应激刺激 [ 3] ,造模 20 d。造模停止后,各组继续给
药 5 d,每天 1次,即给药共 25 d。
2. 3 ER、FSHR和 LHR 检测:迅速取大鼠海马、下
丘脑、垂体及卵巢, 10% 甲醛固定, 石蜡包埋, 作病
理切片,进行免疫组化试验。ER 检测用 N-DAB 显
色法,阳性物质是蓝黑色而不是棕黄色,位于神经元
的细胞核内; FSHR 检测用 DAB 显色法, 阳性物质
是棕黄色, 主要位于卵巢颗粒细胞的细胞膜上;
LHR 检测用间接方法测定[ 4, 5] , 即用抗黄体生成素
(LH ) 抗体与黄体生成素结合位点反应, 来判断
·90· 中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 37 卷第 1 期 2006年 1月
收稿日期: 2005-04-22基金项目: 国家自然科学基金资助课题 ( 39960026)
作者简介: 柯江维( 1972—) , 男, 硕士研究生, 主管检验师,主要从事心理应激与免疫和内分泌系统疾病的研究, 近年发表相关学术论文 10余篇。T el:
( 0791) 6813632 6951537 E-mail: kjw0791@ 163. com
LHR 量的多少,二者是成正比的关系。用 DAB 显
色,阳性物质是棕黄色,主要位于卵泡内膜细胞、间
质细胞和黄体颗粒细胞的细胞膜上。用 DVPM 图
像分析仪分别定量分析 ER和 FSHR、LHR。每种组
织选 10 张切片, 每张切片随机观察 10 个视野
( 40×物镜) , 测定积分吸光度 ( I A ) ,以 IA 分别表
示 ER、FSHR、LHR 在相应组织表达的相对强度。
2. 4 统计学方法:各组数据均以 x±s 表示,采用配
对 t 检验,在 SPSS10. 0软件包上完成。
3 结果
3. 1 对大鼠海马中 ER 水平的影响: 见表 1。与正
常组比较,模型组大鼠海马内 ER 的水平明显降低,
差异显著 ( P< 0. 05) ; 菟丝子黄酮高、低剂量组和调
经促孕丸组 ER 的水平明显高于模型组, 差异非常
显著 ( P< 0. 01) ; 菟丝子黄酮高、低剂量组与调经促
孕丸组比较, 差异显著 ( P< 0. 05、0. 01) , 说明在海
马部位虽然菟丝子黄酮两个剂量都达不到调经促孕
丸组的效果, 但高剂量比低剂量作用大些。
3. 2 对大鼠下丘脑中 ER 水平的影响:见表 1。与
正常组比较, 模型组大鼠下丘脑内 ER 水平明显降
低,差异显著 ( P< 0. 05) ; 菟丝子黄酮高、低剂量组
和调经促孕丸组下丘脑内 ER 水平明显高于模型
组,差异显著 ( P< 0. 01、0. 05) ; 菟丝子黄酮高剂量
组和调经促孕丸组 ER 水平比较, 差异无显著性
( P> 0. 05) ; 而菟丝子黄酮低剂量组和调经促孕丸
组 ER水平比较, 差异非常显著 ( P< 0. 01) ,说明在
下丘脑部位菟丝子黄酮高剂量作用效果接近调经促
孕丸。
3. 3 对大鼠垂体中 ER 水平的影响: 见表 1。与正
常组比较,模型组大鼠垂体内 ER 水平明显降低,差
异非常显著 ( P< 0. 01) ;菟丝子黄酮高剂量组和调
经促孕丸组 ER 水平与模型组比较,差异非常显著
( P< 0. 01) , 而菟丝子黄酮低剂量组不能阻止垂体
ER 水平下降的趋势, 说明在垂体部位菟丝子黄酮
高剂量作用明显好于低剂量。
3. 4 对大鼠卵巢 FSHR 和 LHR 水平的影响: 见表
2。与正常组比较,模型组大鼠卵巢内 FSHR 水平明
显升高, 而 LHR 水平明显降低, 差异非常显著
( P< 0. 01) ;菟丝子黄酮高、低剂量组 FSHR 水平与
模型组比较差异无显著性 ( P> 0. 05) ,而菟丝子黄
酮高、低剂量组 LHR 水平与模型组比较差异显著
( P< 0. 01、0. 05)。说明高剂量菟丝子黄酮对上调卵
巢内 LHR 的表达作用显著, 但不能下调卵巢内
FSHR 的表达;调经促孕丸组 FSHR 和 LHR 水平
与模型组比较差异显著 ( P< 0. 05、0. 01) ;菟丝子黄
酮高剂量组 FSHR和 LHR与调经促孕丸比较差异
无显著性 ( P> 0. 05) , 而低剂量组 FSHR 和 LHR
水平与调经促孕丸组比较差异显著 ( P< 0. 05)。
表 1 菟丝子黄酮对心理应激大鼠海马、下丘脑
和垂体 ER 水平的影响 ( x±s)
Table 1 Effect of flavonoids f rom Semen Cuscutae
on ER level in hyppocampus, hypothala-
mus, and pituitary of rats exposed to
psychological stress ( x±s)
组 别
剂量/
(g·kg- 1)
动物 /
只
各部位 ER水平
海马 下丘脑 垂体
正常 - 9 22. 33±6. 97 32. 65± 4. 90 42. 45±7. 86
模型 - 8 13. 45±2. 87* 18. 19± 1. 12* 24. 44±6. 86* *
菟丝子黄酮 10 8 27. 03±2. 63△△▲▲34. 18± 6. 79△△▲▲28. 43±1. 66▲▲
20 9 37. 84±6. 99△△▲ 47. 65±15. 95△ 50. 24±2. 50△△
调经促孕丸 0. 9 8 49. 70±8. 47△△ 56. 48±19. 60△△ 45. 42±4. 64△△
与正常组比较: * P < 0. 05 * * P < 0. 01
与模型组比较: △P < 0. 05 △△P < 0. 01
与调经促孕丸组比较: ▲P < 0. 05 ▲▲P < 0. 01
* P < 0. 05 * * P < 0. 01 v s n or mal gr ou p
△P < 0. 05 △△P < 0. 01 v s m odel group
▲P < 0. 05 ▲▲P < 0. 01 v s T iaojingcu yun Pil l group
表 2 菟丝子黄酮对心理应激大鼠卵巢内 FSHR
和 LHR 水平的影响 ( x±s)
Table 2 Effect of flavonoids f rom Semen Cuscutae
on FSHR and LHR levels in ovary of rats
exposed to psychological stress ( x±s)
组 别 剂量/ ( g·kg- 1) 动物/只 F SHR LHR
正常 - 9 68. 97±16. 21 99. 16±12. 93
模型 - 9 102. 44± 8. 28* * 72. 03±10. 47* *
菟丝子黄酮 10 8 101. 90±13. 60▲ 84. 74±15. 07△▲
20 9 97. 89±15. 98 104. 31±16. 70△△
调经促孕丸 0. 9 8 86. 68±16. 71△ 101. 60±15. 40△△
与正常组比较: * * P < 0. 01; 与模型组比较: △P < 0. 05
△△P < 0. 01; 与调经促孕丸组比较: ▲P < 0. 05
* * P < 0. 01 v s normal group; △P < 0. 05 △△ P < 0. 01 v s
m odel group; ▲P < 0. 05 vs Tiaojingcuyun Pill group
4 讨论
本课题组对菟丝子的生殖内分泌调节作用进行
了较多研究。发现菟丝子对下丘脑-垂体-性腺轴功
能有多方面的作用[ 6] ,它能促进下丘脑-垂体促性腺
功能,提高垂体对促性腺激素释放激素的反应性, 促
进卵泡发育,对血浆 LH 水平虽无明显影响, 但能增
强卵巢 HCG/ LH 受体数目与功能; 菟丝子及菟丝
子黄酮可明显增加幼年雄鼠睾丸及附睾质量 [ 7] ; 并
发现其本身具有类雌激素样活性。
菟丝子属于补益肝肾的中药,菟丝子有效部位
菟丝子黄酮对心理应激导致的卵巢内分泌功能降低
·91·中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 37 卷第 1 期 2006年 1月
具有明显的调节作用 [ 8] , 它能够显著提高心理应激
大鼠雌二醇 ( E2 )、黄体酮 ( P ) 的水平,同时也能提
高垂体 LH 的水平,下丘脑 -内啡肽 ( -EP) 的水
平,但并不影响垂体 FSH 水平。本研究发现心理应
激大鼠海马-下丘脑-垂体 ER 及卵巢 LHR 水平下
降,而卵巢 FSHR 水平升高, 菟丝子黄酮能上调模
型大鼠海马-下丘脑-垂体 ER 及卵巢 LHR 的表达,
但对卵巢 FSHR 表达的影响不明显, 可能是由于
FSHR 和 LHR 在卵巢分布的部位不同, 如 FSHR
主要分布在颗粒细胞表面, 而 LHR 主要分布在卵
泡内膜细胞表面,造成 FSHR 和 LHR 对菟丝子黄
酮作用的敏感程度不同,而且菟丝子黄酮对模型大
鼠海马-下丘脑-垂体 ER 及卵巢 LHR 表达的影响
呈现一定的量效关系。上调心理应激大鼠海马-下丘
脑-垂体 ER 及卵巢 LHR的表达是菟丝子黄酮调节
下丘脑-垂体-卵巢轴功能的部分机制,菟丝子黄酮
是治疗心理应激大鼠卵巢内分泌失调的较好药物。
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鲜姜有效部位对实验性高脂血症大鼠血脂和一氧化氮水平的影响
武彩霞1 ,程秀民2 ,丁 华1 ,魏欣冰1,孙 霞1,韩 梅1,宋 芸1
( 1. 山东大学医学院 药理学研究所,山东 济南 250012; 2. 山东大学药学院,山东 济南 250012)
鲜姜为姜科植物姜 Zingiber of f icinale Rosc.
的新鲜根茎, 作为药用已有悠久的历史。近年来有研
究报道鲜姜具有抗炎[ 1]、抗氧化 [ 2]、降低胆固醇、抗
动脉粥样硬化等作用[ 3、4] ,具有良好的开发应用前
景。但在鲜姜的成分中,其所含特色成分挥发油和姜
辣素的量太低, 直接食用鲜姜, 多有不便之处,如过
于辛辣、难以服用、难以控制用量等。这使其作为药
用受到很大限制。鲜姜现有的提取方法虽有多种,如
煎煮法、冷轧法、蒸馏法、渗滤法、超临界二氧化碳萃
取法等,但所得提取物不具有或不完全具有鲜姜的
天然特性,或不能同步实现固体化,皆不尽人意。目
前,根据鲜姜所含主要成分的性质,采用先进的提取
工艺, 已将鲜姜的特性成分挥发油及姜辣素合并提
取并处理加工为固体物质, 称之为鲜姜有效部位,此
物质性质稳定, 保留了鲜姜的天然活性和天然风味,
为开发鲜姜的药用价值提供了重要条件。本研究观
察了鲜姜有效部位对实验性高脂血症大鼠血脂和
NO 水平的影响。
1 材料与方法
1. 1 主要药品与试剂:鲜姜有效部位为山东莱芜产
鲜姜经液-固萃取法所得的粉末状物质,由山东大学
药学院提供, 批号 2004-04-06。制备过程: 取鲜姜,
洗净泥沙,晾干表面水分,用榨汁机榨取姜汁,滤过。
滤液中加入 -环糊精, 加热至 40 ℃,搅拌萃取 4 h,
静置沉淀。弃去上层液,收集沉淀,抽滤,得滤饼。滤
饼于 50 ℃ 烘干, 粉碎、过筛即得 (经测定, 提取物
中含总挥发油 6. 1%、总姜辣素 5. 2% )。洛伐他汀,
浙江海正药业生产, 批号 20040214。总胆固醇
·92· 中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 37 卷第 1 期 2006年 1月
收稿日期: 2005-04-13
基金项目: 国家自然科学基金项目 ( 30271584) ; 山东省自然科学基金项目 ( Y2000C13)作者简介: 武彩霞( 1973—) ,女, 山东沂水人,讲师,硕士研究生, 现工作单位山东医学高等专科学校,已发表论文 8篇, 主要从事心血管药理研究工作。T el:
13969936918 E-mail: wcx zzl@ eyou. com
* 通讯作者 丁 华 T el: ( 0531) 88382605 E-ma il: dinghua@ sdu. edu. cn