全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·257·
药材与资源
怀区地黄遗传多样性的ISSR鉴定
周延清1’4，景建洲2’3，李振勇2，张宝华5，王天亮5，贾敬芬p
(1．西北大学生命科学学院，陕西西安710069；2．华美生物工程公司博士后工作站，河南洛阳471003；
3．清华大学生物科学与技术系，北京100084；4．河南师范大学生命科学学院，河南新乡453007；
5．温县农业科学研究所，河南温县454881)
摘 要：目的 利用ISSR标记技术对怀区地黄的8个品种和2个茎尖培养脱毒系进行了遗传多样性分析。方法
用44条ISSR引物进行初选，然后用其中适合的10个ISSR引物进行ISSR分析。结果10条ISSR引物共扩增
出110条带。基于这些条带，用SPSSl0．0软件分析，建立了遗传Jaccard相关系数矩阵，构建了分子树状图，将怀
区地黄的8个品种和2个组培系分为2类：其中一类群含有6个材料，包括组培85．5、大田85．5、组培9302、大田
9302、金状元和金白地黄；另一类群含有4个材料，包括北京1号、大红袍、地黄9104和野生地黄。而且主成分分析
结果支持上述的聚类分析结果；用POPGENE32软件分析知，多态性指数为0．3775，有效等位基因数为1．4037，
多态性比率为71．82％；用一个ISSR6引物建立了10个供试地黄样品的DNA指纹图谱并且能将其彼此区分出
来。结论ISSR标记适合于构建怀区地黄的DNA指纹图谱、品种鉴定和遗传多样性分析。
关键词：怀区地黄；ISSR；遗传多样性；遗传相似性
中图分类号：R282．71 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)02—0257—05
ISSRidentificationofgeneticd versityofRehmanniaglutinosainHuaizone
ZHOUYan—qin91’4，JINGJian～zhou2’3，LIZhen—yon92，ZHANGBao—hua5，
WANGTian—lian95，JIAJing—fenl
(1．CollegeofLifeScience，NorthwestUniver ity，Xi’an710069，China；2．PostdoctoralProgramme，Sino—American
BiotechnologyC mpany，Luoyang471003，China；3．DepartmentofBiologicalBioscienceandTechnology，
TsinghuaUniversity，Beijing100084，China；4．CollegeofLifeScience，HenanNormalU iversity，
Xinxiang453007，China；5．WenxianInstituteofAgriculturalScience，Wenxian454881，China)
Abstract：ObjectiveInordertocharacterizeeightcultivarsandtWOvirus—freelin smicro—propagated
bytiptissuecultureofRehmanniaglutinosainHuaizoneandtoassesstheirgeneticd versitiesbynter—
simplesequencerepeat(ISSR)technique．MethodsTenappropriateISSRprimerswereselectedfroma
totalof44ISSRonesforISSRPCRamplification．ResultsThtenprimerscouldamplifyonehundred
andtenbands．Basedonthem。aJaccard’Sgenetics milarityma rixandadendrogramfotheset nculti—
varswereestablishedu ingSPSS10．0software．Inthisdendrogram，theycouldbedividedintotWO
groups：group1c ntainedsixindividuals，sucha Zupei85．5，Datian85．5，Zupei9302，Datian9302，
Jinzhuangyuan，andJinbaiD huang；group2consistedoffouronessuchasBeijingNo．1，Dahongpao，Di—
huang9104，andwildDihuang．Furthermore，principalcoordinateanalysis(PCA)supportedtheabove
clusteranalysis；Shannon’Sinf rmationindex(I)iS0．3775，effectivenumberofalleles(Ne)iS1．4037，
thepercentageofpolymorphiclocis71．82％bymeansofPOPGENE32software；aDNAfingerprintwas
developedwithasingleprimer，ISSR6，inwhicheachoftentestedindividualshaditsuniquefingerprint
patternandwasdistinguishedfromeachother．ConclusionTheresultsrevealthatISSRmethodissuit—
ableforDNAfingerprinting，identification，andgeneticd versitya alysisofR．glutinosainHuaizone
Keywords：RehmanniaglutinosaLibosch．inHuaizone；inter-simplesequencerepeat(ISSR)；genetic
diversity；geneticsimilarity
DNA分子标记为植物的遗传和物理图谱的建 立、基因的定位与克隆、数量性状位点的遗传分析、
收藕日期：2004—04—28
作者简介：周延清(1963一)，男，河南邓州人，副教授，在读博士，硕士生导师，主要从事植物细胞工程研究。
Tel：(0379)4338900—8601E—mail：luckyqin92003@yahoo．com．c“
*通讯作者 Tel：(029)88303484E—mail：WANGXL@nwu．edu．cn．
万方数据
·258· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
遗传多样性评估、物种起源和分子标记辅助育种等
遗传学研究提供了有价值的工具。在众多的DNA
分子标记中，简单重复间序列(ISSR)在植物遗传
多样性研究中获得了成功。ISSR是由Zietkiewicz
等发明的一种类似RAPD的分子标记技术[1]。它利
用重复锚定引物扩增SSR(简单重复序列)之间的
片段，具有重复性好、稳定性高、多态性丰富等优
点[2,33。它所使用的引物与基因组中的微卫星序列
(MS)互补，并且具有和基因组重复序列5’端或者
37端退火的短寡聚核苷酸锚定序列，长约17～22个
碱基。迄今，ISSR标记主要用于小麦、水稻等大田作
物和苹果、柑橘等果树的研究。在中药中ISSR标记
研究很少，仅见有关百合[4]和五味子[53品种鉴定的
研究报道。目前尚未见利用ISSR标记对地黄进行
上述诸方面研究的报道。
地黄为玄参科地黄属(RehmanniaLibosch．ex
Fisch．etM y．)植物，全世界共有6种。地黄是一
种中药材，根茎人药。生地黄味甘、苦，性寒，无毒，能
清热凉血、生津养阴；熟地黄味甘、微苦，性温，无毒，
能滋阴补肾、补血调经[6]。其年需求量高于1．5×107
kgc川。地黄全国各地均有栽培，但以河南怀地黄品质
佳、疗效好，享誉国内外。怀地黄Rehmanniagluti—
nosaLibosch．f．hueichingensis(ChaoetSchih)
Hsiao是驰名中外的四大怀药之一。因产于河南怀
庆府而得名。河南每年都有大量地黄产品销往国内
市场、出口东南亚和日本等国。地黄已经成为河南产
区重要的经济来源之一。所以，国内外市场对怀地黄
的品质、纯度和道地性提出更高要求。然而，目前市
场上地黄产品来源比较复杂，优劣品种}昆杂；仍采用
传统的形态特征和系谱来源对其分类研究和遗传分
析。为准确鉴定和使用怀地黄药材，克服传统鉴定方
法不易区分品种的不足，为其新品种选育和育种提
供分子依据，本实验利用ISSR分子标记技术对10
个怀区地黄材料进行了种质多样性鉴定。
1材料与方法
1．1 仪器与试剂：BeckmanAvantilMJ一25离心
机；TGl6一W微量高速离心机(长沙湘仪离心机仪
器有限公司)；BeckmanDu530DNA／ProteinAna—
lyzer；立可得照相机(PolaroidMP一4LanCamera
和TransilluminatorUV)；DYY一1118A型稳压稳
流定时电泳仪(北京六一仪器厂)；JY2002上皿电
子天平(上海精密科学仪器有限公司)。
TaqDNA聚合酶(华美生物工程公司)；
dNTPs(Pharmacia公司)；引物(上海生工合成)；
Biowestagarose(ShanghaiYitoEnterpriseCom—
pany)；CTABBR0361／100g(华美生物工程公司，
进口分装)；EB(10mg／mL，华美生物工程公司)。
1．2材料：2003年5月20日在河南省温县农业科
学研究所地黄田采集8个地黄品种的幼叶，在其日
光温室内采集2个经过茎尖脱毒的地黄品种的幼
叶。名称为：①组培85—5，②大田85—5，③组培9302，
④大田9302，⑤9104，⑥金状元，⑦野生地黄，⑧北
京一号，⑨大红袍，⑩金白地黄。在每份材料的群体
中随机选取10株幼苗的幼叶，用自来水洗干净，晾
干，混匀，装入50mL干燥洁净的离心管中，置于装
有液氮的液氮罐内速冻。
1．3方法
1．3．1总DNA的提取和浓度的测定：称取3～5g
经液氮冷冻后捣碎的叶片粉末，用CTAB法[8]提取
DNA。分别用RNA酶A进行纯化，用Beckman
Du530DNA／ProteinAnalyzer测定DNA的紫外
吸光值，用0．8％琼脂糖凝胶电泳检查DNA的大
小和完整性。DNA分子量标准为ADNA／HindⅢ。
1．3．2ISSR及其产物检测：选取1份材料进行预
试验，从44个ISSR引物(根据BritishColumbia
大学公布的序列设计，由上海生工合成)中选出10
个能够获得清晰条带，反应稳定的ISSR引物(表
1)。PCR反应体系为25pL，包括1．5～1．0UTaq
DNA聚合酶，3．0mmol／LM92+，1×TaqDNA聚
合酶缓冲液(10mmol／LTris—HCl，50mmol／L
KCl，0．1％TrionX一100，pH9．0)，60ng模板
DNA，0．4tlmol／L引物，dATP、dGTP、dCTP和
dTTP各0．4mmol／L与2％去离子甲酰胺。PCR
反应在PE公司的9600PCR扩增仪上进行，扩增
程序为：94℃预变性7min一个循环；94℃、45S，
50℃or53℃or55℃、90S，72℃、120S，45个循
环；72℃延伸7min一个循环。反应产物以ADNA／
EcoRI+HindⅢDNAMarker或者100bpladder
为分子量标记，在含有0．5／-g／mLEB的1．4％琼
脂糖凝胶中电泳检测，在紫外光透射仪Transillu—
minatorUV下观察，用PolaroidMP一4LandCam—
era照相。
1．3．3数据统计与分析：ISSR扩增产物以0、1、9
统计建立ISSR数据库。每个可辨带代表1个变异，
在相同迁移位置，有带记为1，无带记为0，扩增失败
或缺失数据记为9。用SPSSl0．0分析软件的Jac—
card方法计算样品问的遗传相似系数(geneticsim—
ilarity，GS)，用Within—grouplinka e聚类分析，建
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·259·
立样品间的亲缘关系树系图。利用POPGENE32计
算ISSR扩增产物的Shannon多样性指数PIC
(polymorphisminformationcontent)。其中PIC=
1--Xpi2，pi为产物条带的表型；标记系统的有效等
位基因数(effectivenumberofalleles，NE)按公式
NE=1／Xpi2计算。
2结果和分析
2．1扩增产物的多态性：10个ISSR引物共扩增
出110条带。基于这些条带，用SPSSl0．0软件和
POPGENE32软件分析得：多态性指数为0．3775，
有效等位基因数为1．4037，多态性比率为71．82％
(表1)。扩增条带的分子量从2001 600bp不等
(图1～3)。
表1 ISSR引物及其碱基序列和多态性分析
Table1 ListofISSRprimersandtheirsequencesand
analysisofISSR—generatedbandingpatterns
B—C，G，T；D—A，G，T；R—A，G；Y=C，T；
一：因为加DNA标准分子量而缺失的DNA条带
～：indicatesmis edindividal’SbandsreplacedbyDNAstart—
dardmolecularweightmarker。
1一大田85．52-组堵85．53-组培93024-大田9302
5-91046-金状元7一野生地黄8一北京1号
9一大红袍10一金白地黄
1-Datian85．52-Zupei85．53-Zupei93024-Datian9302
5-91046-Jinzhuangyuan7-wildDihuang8-BeijingNo．1
9-Dahongpao10一JinbaiDihuang
图1引物ISSR6对10个怀区地黄品种的扩增指纹图
Fig．1ISSRfingerprintsoftencultivarsofR．glutinosa
inHuMzonegeneratedbyPrimerISSR6
另外，基于ISSR扩增所产生的110条DNA
带，获得了10个怀地黄材料的Jaccard相似系数矩
阵(表2)。从表2可以看出，大田85．5与组培85．5
两个地黄品种之间的遗传相似系数最大，为0．979；
野生地黄和大田9302两品种之间的遗传相似系数
最小，为0．557，计算得出平均遗传相似系数为
0．665。
2．2 ISSR指纹图谱的建立：利用筛选得到的10
条ISSR引物分别对供试材料进行PCR扩增，建立
了相应的DNA指纹图谱(图2、3)。而且从这些引
物中筛选出一条ISSR6引物能够区分地黄的lo个
供试品种(系)，见图1。该引物扩增的10个怀区地
黄材料的DNA电泳图谱为鉴定品种的真实性及其
品种的苗期鉴定提供了科学依据。
2．3 品种间的ISSR聚类分析：10个怀区地黄品
种间的树状图见图4。从树状图可以看出，所有材料
表2 10个怀区地黄品种(系)的Jaccard相似系数矩阵
Table2 Jaccard’Ssimilarityma rixfortencultivarsofR．glutinosainHu izone
可以明显地划分为2组。第1组含有6个体，包括组
培85．5、大田85．5、组培9302、金白地黄、金状元和
大田9302。第2组含有4个体，包括北京1号、大红
袍、地黄9104和野生地黄。
2．4主成分分析：Kaiser—Meyer—OlkinMeasureof
SamplingAdequacy(KMO)检验表明，ISSR标记
的KMO为0．806，大于0．5，适合于主成分分析。
结果表明lo个材料的分组结果支持聚类分析的结
万方数据
·260· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
M l 2 3 4 5 6 7 8 9
l一大田85．52-组培93023-大田93024-金状元 5-9104
6一野生地黄7一北京1号8一大红袍9一金白地黄M—kDNA
EcoRI+HindⅢ标准分子量；引物大小(bp)：21227、5148、
4 973、4268、3530、2027、1904、1584、1375、947、831、564、125
(从上到下)
1一Datian85．5 2-Zupei93023-Datian93024-Jinzhuang—
yuan5-91046-wildDihuang7-BeijingNo．18-Dahongpao
9JinbaiD huangM—hDNAEcoRI+HindⅢfragmentsizes
(bp)：2127，5148，4973，4268，3530，2027，1904，
1584，1375，947，831，564，125(fromtoptObottom)
图2引物IsSR6对9个怀地黄品种的扩增指纹图
Fig．2ISSRfingerprintsofnineeultivarsofR．glutinosa
inHuaizonegeneratedbyPrimerISSR6
M 1 2。 ￡⋯～蔓～一王 6 I 8 2
1一大田85．52-组培85．53-大田93024-金状元5-9104
6一野生地黄 7一北京1号 8一大红袍 9一金白地黄M一100bp
Ladder，引物大小(bp)：1000、900、800、700、600、500、400、
300、200、100(从上到下)
1-Datian85．5 2-Zupei85．5 3-Datian93024-Jinzhuang—
yuan5-91046-wildDihuang7-BeijingNo．18-Dahongpao
9-JinbaiDihuangM一100bpLadder，primersizes(bp)：1000，
900，800，700，600，500，400，300，200，100
(fromtoptobottom)
图3引物ISSR33对9个怀区地黄品种的扩增指纹图
Fig．3ISSRfingerprintsofninecultivars(1ines)
OfR．glutinosainHu izonegenerated
byPrimerISSR33
组堵855
大田855
组培9302
盘自地黄
金状儿
人田9302
北京I号
大红{乜
野乍地黄
0 5 10 15 20 25
一一⋯一一一⋯⋯一一一一一
图4 10个怀区地黄品种闻的ISSR聚类分析树状图
Fig．4Dendrogramofclusteranalysisfortencultivarsof
R．glutinosai HuMzonebasedonISSRmarkers
1．0
第0．5
2
i
0．0
成
分
一0．5
第l主成分 第3主成分
0
v1一组堵85．5v2一大田85．5v3一组堵9302
v4一大田9302v5一金状元v6—9104v7一野生地黄
v8一北京1号v9一大红袍v10一金白地黄
vl—Zupei85．5 v2一Datian85．5v3一Zupei9302v4一Datian
9302v5—-Jinzhuangyuanv6-9104v7—-wildDihuang
v8一BeijingNo．1v9一DahongpaovlO—JinbaiDihuang
图5怀区地黄样品基于ISSR标记的主要成分
分析(平均正交旋转法)
Fig．5PrincipalcoordinateanalysisusingISSRmarkers
andEquamax(componentplotinrotatedspace)
果。图5是利用每组分析中提取的前3个主成分得
出的分布图。
3讨论
3．1 在本研究聚类分析结构中，北京1号和大红袍
分在同一组，而且他们与85系列分在不同族类的结
果与以前报道的RAPD鉴定结果一致[4]。这说明
ISSR技术与RAPD技术的一致性。
3．2 ISSR对PCR反应的敏感性比RAPD低，但
是，它的稳定性仍然受到M92+浓度、引物浓度、退
火温度等因素的影响。因此，实验条件的优化[1叩和
采用统一的PCR反应条件是非常必要的。另外，IS—
SR引物含有重复序列，与它结合的基因组DNA内
的靶序列在DNA复制过程中存在滑动和不均等交
换现象，是它们在不同品种或个体之间的重复次数
差异较大，易引起引物结合位点和两结合位点之间
的片段长度差异E引。然而，这种滑动也容易引起
PCR产物电泳时背景模糊和条带拖尾。在ISSR—
PCR反应体系中加入2％去离子甲酰胺在一定程
度上能够降低模糊背景，使条带清晰。这与前人的研
究结果相似口川。
3．3 ISSR标记能够检测出更多的DNA多态性，
而且一套引物可以在多种植物中通用，提高了其利
用率，故在遗传关系研究方面有更广阔的应用前景。
Charters等用2个引物获得56个多态条带，可以区
分他们使用的12个油菜品种m]。Huang等E13]用15
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·261·
个引物对40个番薯植物品种扩增出2071个ISSR
片段，其中62．2％的片段为多态性的。本研究也揭
示了ISSR标记的多态性。在10个地黄品种中，用
10个ISSR引物扩增110条带，多态性比率为
71．82％。仅用一个引物ISSR6可以鉴别出本实验
所用的10个怀区地黄品种。
总之，ISSR技术是一种鉴定怀地黄种质的有效
和实用的工具。它能够检测到较高的多态性。用它
所得到的多态带对同物异名、同名异物地黄品种的
识别，对地黄生产育种组合亲本的选择；对杜绝生产
中假冒伪劣品种造成危害，以及对重要地黄种质的
利用都有很大指导意义。
致谢：本研究在华美生物工程公司完成，由河南
温县农业科学研究所张宝华所长提供实验材料，得
到了华美生物工程公司各级领导和全体员工以及在
博士后工作站进行研究的研究生们的大力支持与热
情帮助。
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药用植物青叶胆的组织培养
黄衡宇
(湖南吉首大学生态研究所，湖南吉首416000)
摘要：目的针对青叶胆野生资源受到严重破坏的情况，系统地探讨了通过组织培养为手段进行人工繁殖的方
法。方法 以幼茎和老叶为外植体，在MS培养基上添加不同的激素配比，改变培养方式。结果在所有实验方案
中，对叶片来说，较适宜诱导愈伤组织的激素组合是Zt0．5mg／L+NAA0．1mg／L+IBA0．1mg／L或BA0．5
mg／L+2，4一D0．1mg／L+IBA0．1mg／L，对幼茎来说，较适宜的诱导愈伤组织的激素组合则是BA0．02mg／L+
Kt0．04mg／L+IBA0．05mg／L；对于芽的增殖，较适宜的激素组合是BA2．0mg／L+NAA0．5mg／L或BA2．0
mg／L+IBA0．1mg／L；而根的诱导则在MS+Kt0．01mg／L+IBA0．5mg／L+NAA1．0mg／L培养基上进行。结
论采用组织培养方式可进行青叶胆的快速繁殖，为确保这一珍稀药用植物资源的保护和可持续利用提供有效
途径。
关键词：青叶胆；组织培养；愈伤组织；芽丛
中图分类号：R282．13 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)02—0261—05
收稿日期：2004一04—26
作者简介：黄衡宇(1970一)，男，江苏无锡人，博士，湖南吉首大学生物系讲师，从事植物发育生物学研究。
万方数据
怀区地黄遗传多样性的ISSR鉴定
作者： 周延清， 景建洲， 李振勇， 张宝华， 王天亮， 贾敬芬， ZHOU Yan-qing， JING Jian-
zhou， LI Zhen-yong， ZHANG Bao-hua， WANG Tian-liang， Jia Jing-fen
作者单位： 周延清,ZHOU Yan-qing(西北大学生命科学学院,陕西,西安,710069;河南师范大学生命科学
学院,河南,新乡,453007)， 景建洲,JING Jian-zhou(华美生物工程公司,博士后工作站,河
南,洛阳,471003;清华大学生物科学与技术系,北京,100084)， 李振勇,LI Zhen-yong(华美
生物工程公司,博士后工作站,河南,洛阳,471003)， 张宝华,王天亮,ZHANG Bao-hua,WANG
Tian-liang(温县农业科学研究所,河南,温县,454881)， 贾敬芬,Jia Jing-fen(西北大学生
命科学学院,陕西,西安,710069)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(2)
被引用次数： 34次

参考文献(13条)
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本文读者也读过(10条)
1. 王艳.李先恩.李学东.祁建军.孙鹏.周丽莉.WANG Yan.LI Xia-nen.LI Xue-dong.QI Jian-jun.SUN Peng.ZHOU
Li-li 野生地黄种内遗传多样性的RAPD,ISSR分析[期刊论文]-中国中药杂志2008,33(22)
2. 周延清.牛敬媛.田苗苗.李振勇.崔天星.邵大晓.李丙亮.冯艳铭.李智涛.李争.王天亮.范喜梅.李敏.申远 怀地
黄85-5品种内遗传多样性的RAPD和ISSR分析[期刊论文]-河南师范大学学报(自然科学版)2006,34(3)
3. 陈京荔.黄璐琦.邵爱娟.林淑芳 地黄不同品种的RAPD分析[期刊论文]-中国中药杂志2002,27(7)
4. 周延清.景建洲.李振勇.张宝华.贾敬芬 利用RAPD和ISSR分子标记分析地黄种质遗传多样性[期刊论文]-遗传
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5. 赵楠.李宏庆.Zhao Nan.Li Hongqing 地黄居群遗传多样性的ISSR分析[期刊论文]-河南科学2009,27(11)
6. 吴志刚.王敏.黄璐琦.刘红彦.王飞.袁庆军.WU Zhi-gang.WANG Min.HUANG Lu-qi.LIU Hong-yan.WANG Fei.
YUAN Qing-jun 地黄不同品种遗传关系的RAPD分析[期刊论文]-中国中药杂志2007,32(18)
7. 宋艳波.蔚露.吴国良 同工酶技术在果树方面的应用研究[期刊论文]-农业与技术2010,30(6)
8. 霍国琴.洪亮.高林.李枫.刘润妮.刘友贤 生地地膜栽培技术[期刊论文]-陕西农业科学2006(3)
9. 赵素霞.樊克峰.白雁 地黄资源状况分析[期刊论文]-中药研究与信息2003,5(5)
10. 李光河 怀药材的采收、加工与贮藏[期刊论文]-河南科技2004(20)

引证文献(34条)
1.思彬彬.王镇 ISSR-PCR分子标记法鉴别宁杞1号与雄性不育枸杞[期刊论文]-安徽农业科学 2011(14)
2.思彬彬.石巧层 藤三七ISSR-PCR反应体系的建立与优化[期刊论文]-安徽农业科学 2012(2)
3.卜静.王冬梅.李登武 不同产地野生玉竹种质资源多样性与亲缘关系的ISSR分析[期刊论文]-中草药 2012(9)
4.思彬彬.赵海燕.刘海涛 白花与紫花丁香ISSR-PCR鉴别研究[期刊论文]-安徽农业科学 2012(32)
5.思彬彬.张靠稳.刘国迪 采用ISSR-PCR分子标记法鉴别黑果枸杞与雄性不育枸杞[期刊论文]-安徽农业科学
2012(33)
6.思彬彬.刘明丽 桑叶ISSR-PCR反应体系的建立与优化[期刊论文]-安徽农业科学 2012(3)
7.思彬彬.赵海燕.热汗始·阿布都 宁夏枸杞ISSR-PCR反应体系的建立与优化[期刊论文]-江苏农业科学 2011(5)
8.杨旻.陈科力 基于ISSR标记的半夏种质资源遗传多样性分析[期刊论文]-中成药 2010(12)
9.赵楠.李宏庆 地黄居群遗传多样性的ISSR分析[期刊论文]-河南科学 2009(11)
10.廖丽.郭巧生 夏枯草ISSR分子标记技术的建立与体系优化[期刊论文]-中草药 2009(7)
11.周春娥.谷凤平.路淑霞.段红英.周延清 怀地黄SRAP分子标记优化体系的建立[期刊论文]-湖北农业科学
2009(3)
12.罗群.黄春萍.李洁 附子ISSR-PCR反应体系的建立[期刊论文]-四川食品与发酵 2008(3)
13.李建军.孙华.王太霞.张重义.高致明 怀地黄不同品种根部特征和有效成分含量比较[期刊论文]-河南师范大学
学报（自然科学版） 2007(3)
14.罗群.马丹炜.王跃华 川乌遗传多样性的ISSR鉴定[期刊论文]-中草药 2006(10)
15.高素霞.刘红彦.王飞 地黄资源遗传多样性分析[期刊论文]-中国中药杂志 2010(6)
16.马丽莎.郑光明.朱新平.刘毅辉.陈永乐.罗建仁 濒危平胸龟两个自然居群的ISSR分析[期刊论文]-动物学杂志
2007(6)
17.张红瑞.马彦秋.高致明.王文全 黄芩种质资源的ISSR分析[期刊论文]-河南农业大学学报 2012(4)
18.张艳玲.孙万慧.胡孔峰.尹健.夏至.高致明 猫爪草遗传多样性的ISSR分析[期刊论文]-河南农业科学 2010(9)
19.马保连 DNA分子标记在地黄研究中的应用[期刊论文]-医学信息（下旬刊） 2010(6)
20.高致明.孙寒.吴月红.张红瑞 裕丹参不同变异类型ISSR鉴定[期刊论文]-河南农业大学学报 2010(2)
21.王明明.宋振巧.王建华 ISSR标记技术及其在药用植物遗传育种中的应用[期刊论文]-中草药 2007(1)
22.张自强.刘宇杰.于卓.蒙美莲.樊明寿.周亚星.甘霖.李长青 马铃薯ISSR体系优化及其品种间遗传差异分析[期刊
论文]-内蒙古农业大学学报（自然科学版） 2010(3)
23.雷栗.王益.赵阿曼.朱培林.周世良 栀子道地药材遗传关系的ISSR证据[期刊论文]-中草药 2009(1)
24.黄小鸥.莫可元 简单重复序列间扩增分子标记技术在中药领域的应用[期刊论文]-广西中医学院学报 2009(2)
25.YANG Chunshan.BAI Xiujuan The Genetic Diversity Study of Wild Wusuli Raccoon Dog From Nenjiang
District[期刊论文]-东北农业大学学报（英文版） 2008(3)
26.郭宝林.刘万水.陈玉婷.朱曼萍.王丹红.王建辉 分子标记技术在中药分类及资源保护中的应用进展[期刊论文]-
时珍国医国药 2007(12)
27.雷栗.王益.赵阿曼.朱培林.周世良 栀子道地药材遗传关系的ISSR证据[期刊论文]-中草药 2009(1)
28.程远辉.张兴翠 分子标记技术在中药鉴定中的应用[期刊论文]-现代中药研究与实践 2006(2)
29.周春娥.谷凤平.路淑霞.段红英.周延清 怀地黄SRAP扩增体系的建立与引物的筛选[期刊论文]-广西植物
2010(2)
30.申彦晶.谭雪梅.赵翾.赵树进 白木香的遗传差异及ISSR分子鉴定[期刊论文]-解放军药学学报 2008(1)
31.雷栗.王益.赵阿曼.朱培林.周世良 栀子道地药材遗传关系的ISSR证据[期刊论文]-中草药 2009(1)
32.李力.徐永莉.张月云.赵成坚 DNA分子标记在中药鉴定中的应用及发展趋势分析[期刊论文]-时珍国医国药
2009(11)
33.刘万水 雷公藤植物遗传关系与遗传多样性分析[学位论文]硕士 2006
34.周佐斌.葛刚 中药材道地性的DNA分子鉴定[期刊论文]-江西科学 2008(3)


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