全 文 ：·1028· 中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
sorptionresino separatendpurePanaxnotoginseng口]．
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罗布麻、绿茶及其配伍对活性氧清除能方的比较
徐仰仓
(天津科技大学海洋生物制品研究室，天津300457)
茶叶中含有多种对人体健康有益的物质，能有
效清除氧自由基和脂类自由基，预防脂质过氧化，提
高血清SOD酶的活性，延缓衰老[1]。罗布麻茶是近
年来常见的一种保健茶，具有清除过氧亚硝酸离
子‘2|，清除羟自由基‘3|，抑制脂质过氧化‘引，提高血
清中SOD、CAT和GSH—PX酶活性的作用[5]。罗布
麻和绿茶的抗氧化能力的差别以及将两者混合，实
现功能互补还未见研究报道。因此本实验考察了绿
茶和罗布麻抗氧化能力的差异以及两者混合后抗氧
化能力的改变。
1仪器与材料
AL204电子天平(梅特勒一托利多上海有限公
司)，752N紫外可见分光光度计(上海精密科学仪
器有限公司)，RE一52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化
仪器有限公司)，电热恒温水浴锅(天津市中环实验
电炉有限公司)。
芦丁、氮蓝四唑(NBT)为Sigma公司产品，核
黄素、血红蛋白为生化试剂，其他试剂均为分析纯，
实验用水为二次蒸馏水。
罗布麻干叶和绿茶干叶购自天津市中新药业药
店，产地均为云南。
2方法和结果
2．1样品溶液的制备：罗布麻干叶和绿茶干叶购回
后，以芦丁为对照，采用UV法测定其中黄酮的
量‘引，结果罗布麻干叶中的黄酮的质量分数为45．2
mg／g，茶叶中的黄酮的质量分数为79．6mg／g。将
i00％罗布麻、50％罗布麻+50％绿茶，100％绿茶3
种配伍样品以50％乙醇37℃水浴浸提24h，减压
浓缩至20mL，即得罗布麻、罗布麻+绿茶、绿茶醇
提液。
2．2 提取液对超氧阴离子(O≯)的清除作用：采用
核黄素一NBT还原法[7]测定。0．1mL醇提液、0．2
mL0．1mol／LEDTA，0．1mL1．5mmol／LNBT，
2．55mL磷酸缓冲液(pH7．8)，0．05mL0．12
mmol／L核黄素组成反应体系，25℃下光照lo
min，在560nm波长下测定样品组吸光度(A，)值，
同法以水为对照组成反应体系，测定对照组吸光度
(A。)值，计算清除率[清除率一(A。一A。)／A。×
100％]。结果茶叶、茶叶+罗布麻和罗布麻醇提液的
清除率分别为71．4％、52．3％、38．1％(以一3)。可见
茶叶醇提液的清除效果最好，茶叶+罗布麻醇提液
的清除效果次之，罗布麻醇提液的清除效果
最差。
2．3 对羟自由基(·OH)的清除作用：·OH自由
基由Fenton反应产生，采用水杨酸比色法测定·
OH自由基[7]。0．5mL10m ol／L水杨酸，样品组
采用2．8mL0．4mol／L磷酸缓冲液(pH7．4)+0．2
mL醇提液，对照组采用3．0mL0．4mol／L磷酸缓
冲液(pH7．4)，0．5mL3．8mmol／LFe2+_EDTA
溶液，1mL4mmol／LH202组成反应体系，25℃
反应90min后，用乙醚抽提2，3一二羟基苯甲酸，分
别在510nm波长处测定样品组吸光度(A。)和对照
组吸光度(A。)，计算清除率[清除率一(A。一A。)／
A：×100％]。结果茶叶、茶叶+罗布麻和罗布麻醇
提液的清除率分别为18．6％、48．8％、69．8％(一
3)。可见茶叶醇提液对·OH的清除效果最差，茶
叶+罗布麻醇提液的清除效果次之，罗布麻醇提液
的清除效果最好。
2．4对过氧化氢(H。0。)的清除作用：采用碘化钾
收稿日期：2006—09—19
基金项目：国家自然科学基金项目(30670493)；天津市高等学校科技发展基金项目(20040711)
作者简介：徐仰仓(1964一)，男，甘肃人，副教授，博士(后)，从事自由基研究，在该领域内发表论文20余篇，获省部级奖1项。
Tel：(022)60601458Fax：(022360600358E—mail：xuyc@tust．edu．cn
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月·1029·
比色法测定[7]。3mL反应体系中含有：50弘L0．5
mmol／LH202，2．0mL50mmol／LHCl，0．25mL
1．0mmol／L钼酸铵，0．25mL1．0mol／LKI，
0．25mL0．5mg／mL淀粉溶液，0．2mL醇提液或
者以水为对照组成反应体系，室温反应20min后，
分别在570nm波长处测定样品组吸光度(A，)和对
照组吸光度(A。)，计算清除率[清除率一(A：一A，)／
A。×100％]。结果茶叶、茶叶+罗布麻和罗布麻醇
提液的清除率分别为22．7％、26．7％、30．7％(咒一
3)。可见罗布麻醇提液的清除效果最好。相对对照
组来说，3种醇提液均有清除过氧化氢的作用，但它
们间的清除能力没有明显的差异。
2．5 对一氧化氮(NO)的清除作用：NO气体根据
Zhao的方法[83制备，NO在水溶液中的饱和浓度根
据Borutaite的方法凹3计算。采用血红蛋白法测定
NO[7]。2．3mL40mmol／L磷酸缓冲溶液(pH
7．7)，0．4mL1．6pmol／L氧合血红蛋白(Hb02)，
0．1mL1．0mmol／LNO溶液，0．2mL醇提液或
者以水为对照组成反应体系。分别在401、411nm
波长处测定吸光度值，以A。。。nm／A。，。nm表示NO
的相对水平。计算样品组中NO的相对水平(C。)和
对照组中NO的相对水平(C。)，得清除率[清除率一
(C。一C，)／c。×100％]。结果茶叶、茶叶+罗布麻和
罗布麻醇提液的清除率分别为24．7％、53．1％、
63．0％(挖=3)。可见罗布麻醇提液具有较高的清除
能力，而茶叶醇提液的清除效果则较低，茶叶+罗布
麻醇提液的清除能力解介于茶叶与罗布麻醇提液
之间。
2．6对亚油酸过氧化的影响：亚油酸过氧化程度的
测定参照闫祥华的方法[10|，略加改动。亚油酸过氧
化程度用硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)和共轭
双烯两个指标表示。1．6mL3．6mmol／L亚油酸，
0．2mL提取液，50弘L1．0mmol／LNO溶液，
50ffL0．5mmol／LH202，50肛L3．8mmol／LFe2+一
EDTA溶液，50弘L．12mmol／L核黄素组成反应
体系，混匀后25℃下光照45min。取500ffL与2．0
mL乙醇混匀，测定234nm处的吸光值(A。。。)，表示
反应体系中共轭双烯的相对水平。在剩余的1．5mL
反应液中加入2．0mL0．67％硫代巴比妥酸
(TBA)溶液，混匀，置沸水浴30min后取出，自来
水冷却5min，3000r／min离心5min，取上清液，
测定532nm处的吸光值(A跏)，表示反应体系中
TBARS的相对水平。TBARS是亚油酸过氧化的末
端产物MDA与TBA反应后的产物，当以它作为指
标时，茶叶+罗布麻醇提液对亚油酸过氧化的抑制
率为82．4％，罗布麻醇提液的抑制率是64．7％，茶
叶醇提液的抑制率为57．6％。共轭双烯是亚油酸过
氧化的中间产物，当以它为指标时，茶叶+罗布麻醇
提液对亚油酸过氧化的抑制率为75％，罗布麻醇提
液的抑制率是59．2％，茶叶醇提液的抑制率为
51．3％。
3讨论
在清除Of方面，罗布麻不如茶叶；在清除
·()Ht9由基方面，罗布麻明显强于茶叶；在清除
H：O。方面，罗布麻与茶叶没有统计意义上的差别，
而在在清除NO方面，罗布麻又好于茶叶。Oi和
·OH是生物体内主要的活性氧，能破坏细胞膜、损伤
细胞的大分子物质蛋白质、核酸等，最终导致细胞衰
老甚至死亡。因Of带负电荷，难以接近细胞膜、核
酸等带负电荷的物质，因而，它对细胞的伤害远不如
·OH自由基。因此，从活性氧的角度看，罗布麻对
细胞的保护作用要好于传统的茶叶。NO是近年来
发现的另一个重要的自由基，它也是一个“双刃剑”，
当它与细胞内的O。相互作用后便形成过氧亚硝
基，后者对细胞的破坏作用远远超过了Oi本身。因
此，清除多余的NO，同样能起到保护细胞免受自由
基损伤的作用。而罗布麻清除NO的功能强于传统
茶叶。因此，从活性氮的角度看，罗布麻对细胞的保
护作用也好于传统的茶叶。
不过传统茶叶毕竟有其优势，它清除Of的能
力约为罗布麻的2倍。因此将两者混合，实现功能互
补。若按1：1混合，则发现混合物清除NO、·OH、
O歹、H。O：的能力始终介于罗布麻和茶叶之间，但它
抑制由NO、·OH、OF、H。O。共同引起的亚油酸过
氧化的能力却最强。因此，将不同功能的保健药物配
伍，能够较全面地清除体内自由基，保护细胞免受自
由基的氧化损伤。本实验结果表明，将罗布麻与传统
茶叶配伍，形成一种新的保健茶，其对自由基损伤的
保护作用更明显，保健功能更强。
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HPLC法测定障眼明片中盐酸小檗碱
丘文珍
(广州中一药业有限公司，广东广州 510000)
障眼明片由黄柏、山茱萸、黄芪、菊花、枸杞子、
熟地黄、密蒙花、黄精、党参等22味中药组成，能补
益肝肾，退翳明目，用于初期及中期老年性白内障。
黄柏在方中起了重要作用，而盐酸小檗碱是黄柏主
要成分。原标准是采用薄层扫描法进行质量控制，方
法的专属性比较差。因此，本实验建立HPLC法测
定盐酸小檗碱，以期能更好地对本品进行质量
控制。
1仪器与试药
HP一1100高效液相色谱仪，DAD检测器，HP
化学工作站。甲醇为分析纯，乙腈为色谱纯，水为超
纯水，盐酸小檗碱对照品(批号：110713—200208)由
中国药品生物制品检定所提供，障眼明片为本公司
产品。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱：汉邦科技Lichrospher
(250mm×4．6mm，5弘m)；流动相：乙腈一0．1％磷
酸溶液(50：50，每100mL混合液中加0．Ig十二
烷基磺酸钠‘13)；体积流量：1mL／min；检测波长：
265rlm；柱温：35℃。理论板数以盐酸小檗碱峰计算
不低于10000。
2．2溶液的制备
收稿日期：2006—1I-23
2．2．1对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对
照品适量，加甲醇溶解，使质量浓度为59．88pg／
mL。
2．2．2供试品溶液的制备：取本品20片，除去包薄
膜衣，研细，精密称取1g置三角瓶中，加人体积分
数为0．1％盐酸2mL，充分润湿后放置10min，加
甲醇100mL，超声处理30min，取出，静置过夜，摇
匀，滤过，加甲醇适量洗涤三角瓶，滤过，合并滤液，
水浴蒸干，残渣加水2mL充分润湿，加无水乙醇10
mL使溶解，上中性氧化铝柱(105℃活化1h，100～
200目，16g，内径2cm)，用250mL无水乙醇洗脱，
收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并定容至2
mL，摇匀，用0．45gm微孔滤膜滤过，即得。
2。2．3阴性对照溶液的制备：按处方制备不含黄柏
药材的样品，同法制成阴性对照溶液。
2．3方法可行性考察：取对照品溶液、阴性对照溶
液和供试品溶液，在上述色谱条件下进样10pL，结
果见图1。可见阴性对照对盐酸小檗碱测定无干扰。
2．4线性关系的考察：精密吸取59．88弘g／mL盐
酸小檗碱对照品溶液，各进样3、6、9、12、15FL，测
定峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得
回归方程y=3625．9X一2．4141，r=0．99996，线
万方数据
罗布麻、绿茶及其配伍对活性氧清除能力的比较
作者： 徐仰仓
作者单位： 天津科技大学,海洋生物制品研究室,天津,300457
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(7)
被引用次数： 3次

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2.徐仰仓.李飞飞.徐金 臭氧对药用植物活性物质含量的影响[期刊论文]-时珍国医国药 2011(12)
3.王静.许磊.张卫明.刘起棠.顾龚平.陆长梅 不同时期采集的罗布麻茶的品质比较[期刊论文]-安徽农业科学
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200707026.aspx