全 文 ：·866· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月
顶空毛细管气相色谱法测定水飞蓟提取物中正已烷和醋酸乙酯残留量
张宏1，张祝君2
(1．四JII师范大学生命科学学院，四川成都610068；2．四川美大康药业集团技术研发中心．四川成都611731)
水飞蓟素为菊科植物水飞蓟Silybum
marianumGaertn，的果实经提取而得的混合物，具
有抗自由基、抗脂质过氧化、抗肿瘤和降血脂作用、
保护肝细胞膜、促进被损伤肝细胞合成DNA及结
构蛋白、免疫调节和抗肝纤维化等药理活性，在临床
上常将其作为抗肝损伤药物。一⋯。水飞蓟素在提取
过程中使用了正己烷和醋酸乙酯溶剂，根据我国新
药审批对天然产物中有机溶剂残留量的要求，必须
测定生产工艺中接触到的某些溶剂的残留量。残留
量的测定方法主要有气相色谱法、顶空气相色谱法、
毛细管顶空气相色谱法、固相萃取一气质联用法、毛
细管电泳法、反相高效液相色潜法、液相色谱质谱、
质谱等方法。””]。本实验采用顶空气相色谱法正已
烷和醋酸乙酯残留量进行测定，结果表明该法重现
性好，灵敏度高．操作简单、实用，结果准确可靠。
1仪器与试剂
Agilent6890GC，HP2694E顶空进样器，HP—
Chemstation。水飞蓟提取物由四川美大康药业集团
提供。正己烷、醋酸乙酯、二甲基甲酰胺(DMF)均为
分析纯。
2方法与结果
2．1 色谱条件和顶空进样器分析条件：色谱柱：英
毛细管柱，FFAT(2硝基对苯二甲酸封端的聚乙二
醇20M柱)(15m×0．53mm，1．0m)；载气：Nz，
F—1．9mI。／min，S一15cm／s；进样品温度：250℃，
顶空不分流进样；柱温：采用程序升温：40℃(保持5
rnin)以10℃／rain升温至150℃(保持4min)；监
测器温度：250℃(FID)，氢气：35mL／min，空气：
350mL／min，N2：32mL／min；柱压：4．8kPa；顶空
条件：瓶压：50kPa；瓶温：130℃，平衡30min，进样
环管温度140℃，传输管温度140℃；灵敏度：l
AUFS。在此色谱条件下得到的色谱图见图1。
2．2标准曲线的制备：分别精密量取正己烷和醋酸
乙酯适量，加DMF制成含正己烷0．58mg／mL和
醋酸乙酯0．92mg／mL的溶液，摇匀，作为对照品储
0 25 5，510128 151750 25 5 75 10125 151 7 5
t／min
1正已烷8醋酸乙酯
1一hexane2 ethylacetate
图l对照品【A)和水飞翦提取韧(B)的GC色谱图
Fig-1GCChromatogramofreferencesubstance(A)
andS．marianumextract(B)
备液。将正已烷对照品储备液精确稀释5倍。分别
准确移取正已烷稀释液和醋酸乙酯储备液各0．1、
0．5、1．0、2．0、4．0、8．0、10mL于10mL量瓶中，用
DMF稀释至刻度，摇匀。顶空进样量为1pL。在上
述色谱条件进行测定，每个质量浓度各测3次，以峰
面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，进行线性回归，
绘制标准曲线。正己烷：y--0．5378x一0．03398，
rm0．9998，线性范围：1．16～116btg／mL；醋酸乙
酯：Y一0．1982x一0．01l25，r一0．9996，线性范
围：9．2～920tlg／mL。精密量取上述质量浓度最小
的混合对照品溶液适量，加70％DMF溶液稀释
10、50、100、200倍后，顶空进样1pL，直到峰高约为
基线噪声的3倍，得最低检出量，正已烷：0．023
pg／mL，醋酸乙酯：0．0920p-g／mL。
2．3精密度试验：在上述色谱条件下，正己烷和醋
酸乙酯的质量浓度分别为1．16、36．8／Lg／mL时，连
续进样5次，结果正己烷和醋酸乙酸峰面积的RSD
分别为1．04％和0．23％。
2．4 稳定性试验：以水飞蓟素提取物样品(批号
040101)制备供试品溶液，室温下放置，在0、1、2、4、
6、8、10、12、24h分别进样1”L，进行测定。以峰面
积计的RSD分别为1．45％(正己烷)、0．28％(醋酸
乙酯)，表明在8h以内溶液稳定。
2．5重现性试验：分别准确称取水乜蓟素提取物样
箨萋品霁：器05-宏10(119065)，女，重庆市人，副教授．博士，主要从事植物化学与药物分析的科研教学工作，发表相关文章蚯20篇
Tel：(028)81267211Fax：(028)84766126Email!zhanghon985@263．net
万方数据
中革菊ChineseTraditionalandHerbalDr gs第37卷第6期2006年6月·867·
品(批弓040101)1．5g，各6份，制备供试品溶液，
各进样lpL，测定样品中正己烷和醋酸乙酯的质量
分数，计算其RSD分别为2．8％、0．82％。
2．6加样同收率试验：分别准确称取一定量的样品
(批号040101，正己烷和醋酸乙酯的质量分数分别
为3．29×106，1．795×10_5于10mL量瓶中，分别
加入对照品储备液0．1、0．5、1．0mL，用DMF溶解
并定容。摇匀。顶空进样量为1pL，在卜述色谱条件
下进行分析，结果正己烷的平均回收率为99．82％，
RSD为0．421％．醋酸乙酯的平均回收率为
99．84％，RSD为0．418％(”一9)。
2．7样品中正己烷和醋酸乙酯残留量的测定：按照
所述色谱条件测定了水飞蓟素提取物中正己烷和醋
酸乙酯残留量，结果见表1。实验结果得出水飞蓟提
取物的正己烷和醋酸乙酯残留量限定在4×10“和
2×10“以内。
表1水飞葡提取物中正己烷和醋酸乙醋抽一3)
Table1 n—Hexanedthylacetateresidues
inS．mar／a／／／／mextracts“一3)
3讨论
3．1色谱柱的确定：由于在同一样品中同时检测正
己烷和醋酸乙酯，而正己烷和醋酸乙酯的极性差别
较大，在实验中考察了不同极性的毛细管桂。实验表
明极性较大的毛细管柱的分离效果最好，因此选用
了FFAP(2-硝基对苯二甲酸封端的聚乙二醇20M
柱)(15m×0．53mm×1．0pm)。
3．2柱温的选择：在实验中，选择了初始温度为40
℃，保持5min后．以10‘C／rain程序升温至150C
的柱温条件。在此条件下．有利于正己烷和醋酸乙酯
的良好分离，既不影响分离度又加快J’分析速度；同
时，在150c的柱温下再保持4min是将较长保留
的溶剂DMF冲洗出来，不干扰下一次进样分析。
3．3顶空条件的选择：顶空进样是将顶空瓶升温，
使挥发性组分的蒸汽压增高，被测组分在一定的蒸
汽压下能被检测。同时，使瓶内的蒸汽压高于载气压
力，挥发性组分可通过高压驱动迅速进入进样阀，被
检测。另外，高的瓶压还能抑制高沸点的大量溶剂进
入色谱柱，使得样品前处理简便易行，避免样品杂质
对色谱系统的干扰和色谱柱的严重污染。在实验中
确定的顶空条件是瓶压高于载气压力20～50kPa。
进样阀和样品传输管的温度只要略高于瓶温即可。
因为温度高些，来自顶空瓶的样品气不会冷凝。实验
中采用高于瓶温10c。
3．4溶剂的选择：由于被测样品有一定的檄性，同
时考虑到其他溶剂对被测组分有较强的干扰，根据
分析组分和色谱柱的选择．选择了溶解性能好且于
扰小的二}li基甲酰胺(DMF)作为溶剂。这样既能很
好地溶解样品又能使溶剂峰在所有被分析组分之后
出峰，避免了大量溶剂的干扰。
目li{f许多中成药足以中药材的提取物为原料而
制得的。为了更好地利用中药材的有效成分，在生产
工艺中，生产厂家根据有效成分的性质选择一定的
有机溶剂进行提取。为，保证药品的安全性，中药材
提取物中有机溶剂残留量的测定就成为研究者关注
的问题，也是药品质量的检测的重点关注的问题，对
这些溶剂的测定在《中国药典}2005版附录作原则
性规定。本实验采片j顶空进样毛细管气相色谱法对
水飞蓟提取物中正已烷和醋酸乙酯溶剂残留量进行
了测定，两组分质量分数均小于2×10，完全符合
有机溶剂残留量的测定的要求，保证jlj药的安全。
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顶空毛细管气相色谱法测定水飞蓟提取物中正己烷和醋酸乙
酯残留量
作者： 张宏， 张祝君
作者单位： 张宏(四川师范大学生命科学学院,四川,成都,610068)， 张祝君(四川美大康药业集团技术
研发中心,四川,成都,611731)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(6)
被引用次数： 6次
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