全 文 ：水飞蓟主要有效成分分离与分析方法概述
湖北 省药品检验所 (武汉 4 3 0 0 6 4 )
中国药品生物制 品检定所
中国药科 大学
定天明 紊
田硕九
张正行
施蕴华
孙曾培
水飞蓟 S i yl b u m m a r i a n u m L . G a e r t n . 又名水飞
难 , 是菊科水飞蓟属植物 , 原 产南欧 、 北非 , 以 民间草
药用于治疗肝 胆疾病 ,具有抗肝 胆中毒 , 保护肝 细胞
膜 , 改善 肝功 能的 生理 活性 l[, 2〕 。 我 国早在 50 年代
初 , 由英 国引人作观赏 , 70 年代初开始研究 其医药功
效 。 国 内外学 者对水飞蓟 的有效成分 进行 了大 量的
研究 , 并开 发出产 品益 肝灵 片及复方益 肝灵 片均 载
人部颁标准 , 国外也有利肝隆 ( L ge al o n) 片剂和胶 囊
剂 , 笔者就其主要化学成分 、 提取分离 及分析方法 作
一概述 。
1 化学成分
2 0 世纪 6 0~ 8 0 年代末 , 以 W a g n e r 为代表 的药
学工作 者从水飞蓟 中分离提取有效成 分称之为水 飞
蓟 素 ( s i ly m a r i n ) , 是一类 新型的具 有 C 。 取代基的黄
酮类 化合物 , 即以 二 氢黄酮 醇和 苯丙素 类衍生 物缩
合而成 的黄 酮木 脂 素类 ( fl a v o n o l ig n a n s ) , 主要 含水
飞蓟宾 ( s il y b i n o r s il y b i n i n ) 、 异水 飞蓟宾 ( i s o s il y b in
o r
i
s o s il y b i n i n )
、 水 飞蓟 宁 ( s i ly d ia n i n ) 和 水 飞 蓟 亭
( s il y e h r is t in ) 〔卜 ,〕 。
1 9 7 5 年竹本常松等川从水飞蓟种子 中除获 得 了
上述水 飞蓟宾等异构体外 , 并获得两种新的黄酮醇木
脂体 。 经红外 , 紫外及核磁共振等分析 , 确定它们的结
构分别 为 2 , 3一脱氢水飞 蓟宾 ( 2 , 3一 d e h y d r o s i ly b i n ) 和
2
,
3
一脱氢水飞蓟亭 ( 2 , 3一 d e h y d r o s il y e h r i s t in ) 。 B a n -
d o aP d h ay y 等固 曾从水飞蓟种子中分离得天然脱氢水
飞 蓟 宾 , 即 2 , 3 一脱 氢 水 飞 蓟 宾 。 1 9 7 9 年 M e r l in i
等 l0[ · ` ’ 〕分离得到异水飞蓟宾 i( s os ily b in ) , 并且推测水
飞蓟宾和异水飞蓟 宾可能分别 为两个非对映 体的混
合物 ( C : , C 3 是 同一结构 ; C Z , , C 3 是反式结构 ) , 它们成
为治疗肝胆疾病的主要有效成分 12[ 〕 。
2 有效成分的提 取分离
水 飞蓟素提取分离方法多采用有机溶媒渗波 和
热 回流 , 结合 国内外报道 l[ ’ 一 ` 6〕综合成 下述 方法 :
2
.
1 醋 酸 乙 醋 法 : 水 飞蓟种 子 粗粉 5 0 0 9 , 加 汽 油
l 0 0 0 m L
, 加热 回 流 3 h , 提取 3 次 , 得脱油 种 子粗
粉 , 水浴上减压蒸干残存汽油 , 用醋酸 乙醋 1 0 0 m L
回流 3 h , 提取 4 次 , 提取液加活性 炭 1 9 回流 l h , 滤
过 , 滤液加水 10 0 m L , 振摇 ,洗涤 4~ 5 次 , 减压 回收
溶 剂 至干 (如 有油 液应 倾去 ) , 用 90 % 乙 醇 2 0 m L
稍加溶 解 , 用 汽油 8 0 m L 振摇洗涤 4~ 5 次 , 醇液减
压 回收至干 , 加酷 酸乙 醋 20 0 m L 溶解 , 过滤 ,滤 液减
压 回收至干得水飞蓟素 。
2
.
2 乙醇 法 : 脱脂后 的水 飞蓟种 子粗粉 , 加人 工业
乙 醇 2 5 0 m L , 以后每次加 2 0 0 m L , 加热 回流 3 次 , 每
次 1 . s h , 合并 乙 醇液 , 回收 乙醇 得浓缩液 , 醋酸 乙酷
萃取液减压 回收至干 , 得浅黄色粉 末 , 加 3 倍 量石油
醚放 置 2 4 h 过滤 , 干燥 , 得水 飞蓟素 。
2
.
3 采 用 “ 罐组 成强制循环 逆流提取 ” 新工艺 : 结合
强 制循环 法和 逆流法 , 将提 取周 期 由渗 魏法 的 3 d ,
热 回 流法的 Z d 缩短到 16 h 。 经极差分析 , 认为影响
收 率的 主要因 素是液 固 比及循 环 时间 ,其次是循环
速度 。 实验证 明 , 最佳工艺条件是 液固 比为 5 : 1 , 每
次循环 3 . s h , 循 环速度 8~ 12 次 /小 时 。
3 主要有效成分分析方法
3
.
1 测 定水 飞蓟 总量采用 比色法 :称取 相当于水 飞
蓟素样 品 , 加 甲醇 溶解 , 作 为供试 品溶液 。 精密称取
7 0 m g 水 飞蓟宾 对照 品置 2 5 m L 容 量瓶 中 , 用 甲醇
溶 解并稀释 至刻度 ,作对照品溶 液 。 取供试 品溶液 、
对 照品溶液 、 甲醇各 l m L 置 10 m L 棕 色量瓶中 , 加
2
.
0 m L 二硝基苯脐硫 酸试液 , 盖塞 , 置 (5 O士 l) ℃加
热器 中放置 50 m in , 冷却后 , 甲醇稀释至 刻度 。 各取
2
.
0 m L 上述溶液置 10 0 m L 容量瓶中 , 加 3 . 0 m L 氢
氧 化 四 甲基胺 的 甲醇溶 液 , 用 甲醇稀 释至 刻 度 , 摇
匀 , 静 置 30 m in 后 , 在 490 n m 处测 定 吸收度 , 得水
飞蓟素 的含 量 。
3
.
2 水飞蓟素主要有效成分分离 测定方法
中命能馨制嚣瞿缭蔚雳凳篡黯矗狐絮 {翼 {谓黔鲁庸薯髯戮裂异罗霹奈雾尸药科大学张正行教授和
《中草药 》 1 9 9 9 年第 3 0 卷第 8 期 . 6 3 7 .
3
.
2
.
1双 波长 薄层 色谱 扫描 法 :昊 知行等 4 [ ]采 用
S C
一
9 10在 硅 胶G 一 0. 6% CM C板 上 以抓仿 一丙 酮一 甲
酸( 9 :2 :l ) 二次 展开 , 对水飞蓟宾及水溶性衍生物
和 制剂进行 分析 , 耘一 2 5 5 n m , 入R = 4 3 0 n m 。 每 1 m L
含水飞蓟 l m g 的无水 乙醇溶 液作对 照品溶液 , 计算
对 照品和样 品的峰 面积 与浓度 的 关系 , 即得供试品
中水飞蓟宾 的含量 。 罗 淑荣等 少〕采用 C S 一 93 0 对益肝
灵 片中活性 成分水 飞蓟 宾与水 飞蓟亭进行 了分离测
定 。 以展开剂 甲苯 一醋酸 乙醋 一冰醋酸 (2 : 1 , 0 . 5) 展
开 , 挥尽 溶剂 后显色 (0 . 4纬二氯氧错 的无水 乙醇溶
液 ) 。 入s = 3 0 0 n m , 从 ~ 3 6 5 n m , 反射锯齿扫描 , 由标
准 品水 飞蓟 宾和水 飞蓟亭 的斑点与供试品斑点 的吸
收峰面积与浓度之 比求得供试 品 中水飞蓟宾和 水飞
蓟亭 的含量 。
3
.
2
.
2 H P L C 法 : M a r t i n e ll i 等 仁` 8〕采用 H P L C 法 定
量分析人体血浆 和尿液 中水 飞蓟宾 的含量 。 色谱条
件 : 正 相 柱 A . L ie h r o s o r b D io l ( 1 5 0 m m X 3 m m ,
id )
, 流动相 (正 己 烷一 乙 醇 一 70 , 30) 用 12 0 川 / L 的
8 5% 的磷酸 酸化 , 流速 0 . 8 m L /m in , 检 测 波长 2 14
n m
, 此方 法未 将水 飞蓟宾 与 异水 飞蓟宾分离 测定 。
9 0 年代 初 , M a s e h e r 等 〔` 9〕采用 R p 一H P L C 法对血 浆
中游离和 结合 的水 飞蓟 宾和异水 飞蓟宾进行分 离测
定 。 色谱条 件 : N u e le o s il 1 2 0 一 3 C : : ( 8 0 m m X 4 爪m
id )
, 流动 相 甲酸一 0 . 0 2 m o l / L 磷酸 ( 1 : 1 ) , 流 速 1 . 0
m L / m in
, 检测波长 28 5 n m , 水飞蓟宾 与异 水飞蓟宾
的保 留时间分别为 3 . 1 , 3 . 4 m in 。 此方 法较适用于水
飞 蓟素的药代动力 学等 的测定 。 iR o lr in g 等 20F 〕采用
柱 切换 电 化学检测 的 H P L C 法和 反 相 紫外 检 测的
H P L C 技术将血浆 中游离 的总 的水 飞蓟宾和 异水飞
蓟宾进行分 离测定 。 内标物质 为橙 皮素 ( 5 , 7 , 3 `一三经
基 一 4 ` 一甲氧基黄烷酮 , 1C 6 H , 4 0 。 ) 。 水飞蓟宾与异水 飞
蓟宾 的保 留时间分别为 28 . 8 和 32 . 2 m in , 内标保 留
时 间为 1 8 . 8 m in 。 最近 , 笔者采用 R p 一H P L C 法对水
飞蓟 素制 剂中水飞蓟 宾 、 异水 飞蓟宾 、 水飞蓟 宁和水
飞蓟亭进行分离测定 。 色谱条件 : 柱 S ih m 一 P ac k V P -
O D S
一
( 1 5 0 m m 又 4 . 6 m m id s 拼m ) , 流动 相 甲醇 与
混合溶剂 (水 一二 氧六环 ~ 9 : l) 按梯度洗脱 , 流 速为
1
.
5 m L /m in
, 检测波长 2 8 n m , 柱温 40 ℃ 。 样 品中水
飞蓟亭 、 水飞蓟宁 、 水飞蓟宾与异水 飞蓟宾的保留时
间为 8 , 1 0 , 2 3 和 2 7 m in 。
4 小 结
水 飞蓟素是 混合 黄酮类 化合物 , 且 以水 飞蓟 宾
的非对映体组成 。 因此 , 国内外许多药学工作者力 图
将 它们分 离测定 , 仅偶见 对水飞蓟 和异 水飞 蓟宾进
行了分离测定 的报 道 ,但对水飞蓟 宾的 其它非对映
体未见有分离测定 的报道 。 作者在查 阅大量文献资
料 时发现 国内外有些学 者将 水飞蓟素 (混 合物 )误作
为水飞蓟宾 (单体 ) , 应引起 注意 。
参 考 文 献
l 李晓玉 . 国外医 学一药学分册 , 1 9 75 , (2 ) : 2 43
2 刘笃宽 . 陕西中医 , 1 9 8 4 , 5 ( 4 ) : 3 7
3 W a g n e r H
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A r z n e im F o r s e h
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4 吴知行 , 等 . 南京药学院学报 , 19 81 , ( 2) : 2 8
5 A b r a h a m D J
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T e t r a h e d
r o n L e t t , 1 9 7 0
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6 常风 岗 , 等 . 南京药 学院学报 , 19 85 , 16 ( 4) : 12
7 W a g n e r H
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T e t r a h e d r o u l e t t
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8 竹本常松 , 等 药学 杂志 ( 日 ) , 19 75 , 9 5 ( 8 ) : 1 0 1 7
9 B a n d o r P e d h y a y M N
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In d i a n J
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12 国家 医药管理局 中草药情报 中心站 . 植物药有效成分
手册 . 北京 : 人民卫生 出版社 , 1 986 : , 58
1 3 H a lb a e h G
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P l a n t a M e d
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1 4 尹淑兰 , 等 . 中医药学报 , 1 9 9 3 , 2 : 2 95
1 5 张俊华 . 中国药学杂志 , 1 9 9 1 , 2 6 ( 8 ) : 4 9 0
1 6 江士恺 . 中成药研究 , 1 9 8 7 , 9 ( 9 ) : 5
1 7 罗淑章 , 等 . 中成药 , 1 9 8 8 , 1 0 ( 1 1 ) : 3 5
1 8 M a
r t i n e l l i E M
, e t a l
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J L iq u id C h r o m a t o g r
,
1 9 9 1
,
1 4
( 7 )
: 12 8 5
1 9 M a s e h e r H
, e t a l
.
J L iq
u id C h r o m a t o g r
,
1 9 9 3
, 1 6 ( 1 3 )
:
2 7 7 7
2 0 R i e k l i n g B
, e t a l
,
J C h
r o m a t o g r
,
1 9 9 5
,
B 2 6 7 6 70
( 1 9 9 9
一
0 3
一
1 9 收稿 )
(上接 第 6 2 7 页 )
提液 1 滴 于滤纸上 , 加 1 %茹三酮丙 酮溶 液 , 加 热后
即 显浅灰紫色 。 4) 取该 品粉 末少许 , 滴 加 硝酸 液 1
m L
, 显淡黄色 。
2
.
3
.
4 1) 取 木薯粉末 0 . 5 9 , 置试管中加 稀盐酸数
滴 , 试管中 悬挂 1 条 三硝 基 苯 酚试 纸 , 用 软木塞 塞
紧 , 置水浴中加热 10 m in 后 , 试纸呈砖红 色 。 2) 紫外
吸收光谱 :取本品粉末 2 9 , 加 10 m L 石油醚 ( 60 ℃一
9 0℃ )洗涤 1 次 ,再加 l m o l / L 氢氧化钠液 2 0 m L ,
振摇提取 , 滤过 , 滤液用 酸中和后 , 置分液漏斗中 , 以
.
6 3 8
-
2 0 m L 乙 醚提 取 , 提取液 照分 光光度 法测定 , 在 2 20
n m 和 2 5 6 n m 波长处有最大 吸收峰 。
3 小结
以 上是笔者在 基层 医院工作多 年积 累的一点经
验 。 方法简便 ,便于操作 。 在山药货源紧张时 , 更应对
其进行鉴别 。 山药的易混品 、 伪 品 , 质量 、 功效不及 山
药 , 特别是 木薯对人体有 毒副作用 , 不能 药用 , 应认
真识别 , 不可作 山药使用 。
( 1 9 9 9
一 0 1
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2 4 收稿 )